二磷酸胞苷發(fā)酵液直接上陰離子交換柱分離

1、    二磷酸胞苷發(fā)酵液直接上陰離子交換柱分離        摘要為提高二磷酸胞苷的收率，對(duì)原生產(chǎn)工藝進(jìn)行改革，將二磷酸胞苷發(fā)酵液預(yù)先處理，然后直接上201×8陰離子交換樹脂柱分離，革除了一步上活性炭柱純化分離。二磷酸胞苷產(chǎn)品的質(zhì)量符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，收率比原工藝提高10%以上。關(guān)鍵詞二磷酸胞苷； 201×8陰離子交換樹脂中分類號(hào)：Q524+3文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B文章編號(hào)：1005-8915(2000)03-0164-02 Separation of CDP from

2、 Ferment Liquid by Anion Exchange ChromatographyJiang Keguang，Xu Jiancheng，Huang Kaijun，Li Xiaofeng(Zhejiang Wan Ma Pharmaceutical Co. Ltd.，Hangzhou 310011)Abstract In order to improve the recovery rate of CDP，we have reformed the former technique. First，pretreat the ferment liquid，and then，directly

3、 separate it by means of anion exchange column chromatography. Thus，the active carbon column can be omitted. The purity of CDP reached the standard of enterprise and the output increased at a rate of 10%.Key WordsCytidine diphosphate，Anion resin二磷酸胞苷（CDP）是生產(chǎn)聚肌胞重要原料，它是由一磷酸胞苷（CMP）通過(guò)啤酒酵母內(nèi)氧化磷酸化酶系發(fā)酵而制備的。

4、由于發(fā)酵液內(nèi)含有大量雜蛋白及其他無(wú)機(jī)物，很難直接吸附于陰離子交換樹脂，必須先經(jīng)活性炭柱純化后再上陰樹脂分離。經(jīng)過(guò)二根柱的分離，CDP收率只有30%40%，采用新方法后，即上一根柱分離，收率可以達(dá)到50%左右。1材料與方法1.1材料CMP，日本進(jìn)口；啤酒酵母，杭州啤酒廠；葡萄糖（口服），上海葡萄糖廠；磷酸二氫鉀（化學(xué)純），湖州化學(xué)試劑廠；氯化鎂（化學(xué)純），上海試劑一廠；LXJ-I離心沉淀機(jī)，上海醫(yī)械專機(jī)廠；FD201穩(wěn)壓穩(wěn)流電泳儀，上海醫(yī)用分析儀器廠；紫外檢測(cè)儀，上海顧村電光器廠。1.2方法12*6H22陰離子交換樹脂預(yù)先用酸堿分別處理并用水洗至中性備用，將以上離心上清液加水稀釋，控制紫外吸收值

5、A280 1.0(該溶液稀釋500倍)左右，然后上柱吸附分離，流速為0.3ml/min*cm2。待流出口A280nm吸收值等于上柱液一半，停止上柱，用0.01mol/L HCl水溶液淋洗，直到洗滌液為pH2時(shí)，電泳跟蹤顯示CMP時(shí)，棄去流出液，當(dāng)電泳示大量CDP而極少量CMP時(shí)，洗脫液改為0.05 mol/L NaCl 0.01mol/L HCl溶液洗脫，同時(shí)收集流出液，直至出口A280nm讀數(shù)小于1.0(該溶液稀釋50倍)時(shí)，停止洗脫。合并流出液，將其濃縮至A280nm 1.0(該溶液稀釋1000倍)以上，加3倍體積95%冷乙醇沉淀，制備成CDP干粉。2結(jié)果我廠CMP轉(zhuǎn)化成CDP的收率要求&

6、gt;30%，我車間近年來(lái)生產(chǎn)實(shí)際水平為97年37.38%，98年36.97%。采用新方法試制3批CDP，共投料CMP 17 kg，得CDP8.851kg，收率為52.06%。兩種方法收率的比較見表1。Tab 1Comparison of two methodsNumber offermentationAddedCMP(kg)RecoveryCDP(kg)Recorery rateCDP/CMP(%)Oldmethod9702029703199711174441.4841.4271.55037.1235.6838.75Newmethod98032398042398100534101.2272.

7、0045.62040.9050.1056.203討論 CDP發(fā)酵液經(jīng)過(guò)預(yù)處理去除部分雜質(zhì)，是完全可以直接被陰樹脂吸附再分離。我們采用在發(fā)酵上清液中加氨水及MgCl2和乙醇沉淀以除去PO43-及大量雜蛋白。這樣免去1次上炭柱純化分離，使收率大大提高，根據(jù)3批試制收率分別為40.9%、50.1%、56.2%、平均為52.06%，比97年的3批平均收率37.18%，高14.88%。在生產(chǎn)周期方面?；钚蕴糠蛛x周期約15d，預(yù)處理需35d兩者相加可以縮短10d左右。在質(zhì)量方面，新方法生產(chǎn)的CDP，含量>75%，比值A(chǔ)250/260=0.46±0.05，A280/260=2.07±0.05，完全符合企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)，可以作為生產(chǎn)聚肌胞的中間體原料。CDP中間體價(jià)格每千克達(dá)萬(wàn)元以上，采用新方法對(duì)降低生產(chǎn)成本，縮短周期提高效益是顯而易見的。江克光（浙江萬(wàn)馬藥業(yè)有限公司， 杭州310011）徐建成（浙江萬(wàn)馬藥業(yè)有限公司， 杭州310011）黃開君（浙江萬(wàn)馬藥業(yè)有限公司， 杭州310011）李曉