好氧反硝化細(xì)菌培養(yǎng)基配制

1、好氧反硝化細(xì)菌培養(yǎng)基配制以及實(shí)驗(yàn)方法一、好氧反硝化培養(yǎng)基（液體）醋酸鈉/ 0.5 g ; KNO3 / 0.1 g ; K2HPO4 / 0.01g ;MgCl2/ 0. 02 g ;CaCl2/ 0. 01g ; H2O/ 1 000 ml ;p H 77. 5.好氧反硝化培養(yǎng)基（固體）醋酸鈉/ 0.5g ; KNO3/ 0.05g ; Na2HPO4 .7H2O/ 0. 5 g ;NaNO2/0.01g;MgSO4 ·7H2O/ 0. 1 g ;瓊脂18 g ;p H 77. 5.富集分離：取樣品泥樣置于上述液體培養(yǎng)基中，經(jīng)過每天24小時(shí)曝氣富集10天。之后，取1毫升底泥與10毫

2、升去離子水混合，之后進(jìn)行107倍稀釋，在上述固體培養(yǎng)基上進(jìn)行平板劃線分離。細(xì)菌初篩：將分離得到的細(xì)菌接種到上述液體培養(yǎng)基中，然后在30攝氏度環(huán)境下進(jìn)行24小時(shí)的搖瓶培養(yǎng)，用紫外分光光度法檢測硝態(tài)氮含量，重復(fù)2次，取降低最多的樣品繼續(xù)進(jìn)行平板劃線，再重復(fù)上述操作，得到單一菌落。（驗(yàn)證所得菌落是否單一：將所得菌落接種在牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基上，進(jìn)行無菌培養(yǎng)，檢測菌落是否單一。）細(xì)菌復(fù)篩：將初篩得到的單一菌落，進(jìn)行實(shí)際污水測試，測試其實(shí)際降解硝態(tài)氮的能力。二、BTB 初篩培養(yǎng)基：瓊脂20 g、KNO3 1 g、KH2PO41 g、FeCl2·6H2O 0.5 g、CaCl2·7H2O

3、 0.2 g、MgSO4·7H2O 1 g、琥珀酸鈉8.5 g、溴百里酚藍(lán)(BTB)(1%乙醇溶液)1 mL，用1 mol/L 的NaOH 調(diào)節(jié)pH 至7.07.3，121 滅菌20 minLB 液體培養(yǎng)基(/L)：KNO3 1 g、KH2PO41 g、FeCl2·6H2O 0.05 g、CaCl2·7H2O 0.02 g、MgSO4·7H2O 1 g、琥珀酸鈉8.5 g，121 滅菌20 minDM 反硝化培養(yǎng)基(/L)：KNO3 0.72 g、KH2PO41g、MgSO4·7H2O 1 g、琥珀酸鈉2.8 g，121 滅菌20 min采用梯

4、度稀釋法將污泥樣品稀釋至適當(dāng)濃度，取0.1 mL 均勻涂布于BTB 培養(yǎng)基表面，置入恒溫培養(yǎng)箱，30 下培養(yǎng)23 d 后，用接種環(huán)挑取使周圍培養(yǎng)基出現(xiàn)藍(lán)色暈圈的單菌落，進(jìn)行分離純化即為初篩菌株。接種初篩菌株至LB 培養(yǎng)基，在30 、160 r/min 條件下進(jìn)行液體培養(yǎng)24 h 后，以10%的接種量接種到反硝化培養(yǎng)基(DM 培養(yǎng)基)中，30 、160 r/min 條件下進(jìn)行搖瓶發(fā)酵，間隔一定時(shí)間取樣。測定發(fā)酵液中硝基氮濃度(NO-3-N)和亞硝基氮濃度(NO-2-N)，通過分析其NO3-N 和TIN(NO-N+NO-2 -N)去除率，考察所篩菌株的反硝化性能。NO-3 -N：用紫外分光光度法測定；NO-2 -N：用N-(1-萘基)-乙二胺分光光度法測定4。菌體量：光密度法，用721 型分光光度計(jì)在600 nm 處測定吸光度值。微量元素溶液:EDTA(乙二胺四乙酸) 50.0 g ,ZnSO4 2.2 g , CaCl2 5.5 g , MnCl2·4H2O 5.06 g , FeSO4·7H2O 5.0 g ,