魚類毒性實驗論文牛浩

1、吉林化工學院環(huán)境科學與工程專業(yè)環(huán)境生物學設計性實驗 院系:資源與環(huán)境工程學院 班級：環(huán)境科學與工程1301 姓名：牛浩 指導老師：鄒繼穎 學號：1310338102海飛絲去屑洗發(fā)水對吉林市土生小江魚急性毒性實驗（吉林，吉林，吉林化工學院，牛浩，132022）摘要：半數(shù)致死濃度，是衡量存在于水中的毒物對水生動物和存在于空氣中的毒物對哺乳動物乃至人類的毒性大小的重要參數(shù),毒物的致死效應與受試動物暴露時間有密切關(guān)系。本實驗探究不同濃度下海飛絲去屑洗發(fā)水處理下對小江魚的毒性，并推導出其半致死濃度，通過觀察在不同受試物濃度處理下，魚的急性中毒表現(xiàn)和經(jīng)過，測定毒物的半數(shù)致死劑量/濃度 （LD50

2、/LC50），并探究與魚類半致死濃度相關(guān)的因素，而且通過魚類急性毒性試驗可以評價受試物對水生生物可能產(chǎn)生的影響，以短期暴露效應表明受試物的毒害性。關(guān)鍵詞：半致死濃度；急性毒性試驗；洗發(fā)水；小江魚Head and shoulders anti-dandruff shampoo for Jilin native fish acute toxicity experiment(Jilin, Jilin, Jilin institute of chemical industry, NiuHao, 131022)Abstract: median lethal concentration, is measu

3、red in the toxins in the water to aquatic animals, and exist in mammals and human toxic poisons in the air to the size of important parameters, the lethal effect of poison has close relationship with exposure time in animals. The experiments to explore the different concentration under the head and

4、shoulders anti-dandruff shampoo treatment for jiang fish toxicity, and deduced its lethal concentration, through the observation under the different concentration of processing subjects, fish performance and after acute poisoning, determination of poison median lethal dose (LD50 / LC50)/concentratio

5、n, and to explore the factors associated with fish half lethal concentration, and by fish acute toxicity test subjects for assessment can be possible effects to aquatic organisms, with short-term exposure effect showed that the toxicity of.Keywords: half lethal concentration, acute toxicity test, sh

6、ampoo, or fish前言：我國化學品管理法規(guī)要求，魚類急性毒性實驗是必須在中國境內(nèi)完成的測試項目之一1。通過實驗可獲得化學品對中國受試生物的急性毒性數(shù)據(jù)，并為后續(xù)毒性實驗的設計和觀察提供依據(jù)。同時，由于急性毒性實驗時間短，易操作，實驗條件便于控制且在國家管理體系中屬于基礎數(shù)據(jù)要求等特點，成為我國法規(guī)要求的生態(tài)毒性實驗中應用頻次最高的一種方法2。魚類對水環(huán)境的變化反應十分靈敏，魚類毒性試驗在研究水污染及水環(huán)境質(zhì)量中占重要地位。當水體中的污染物達到一定程度時，就會引起一系列中毒反應，例如行為異常、生理功能紊亂、組織細胞病變、直至死亡。在規(guī)定的條件下，使魚接觸含不同濃度受試物的水溶液，實驗至

7、少進行24h，最好以96h為一個實驗周期，在24 h、48 h、72h、96 h時記錄實驗魚的死亡率，確定魚類死亡50時的受試物濃度，半數(shù)致死濃度用24h LC50、48h LC50、72h LC50和96h LC50表示，并記錄無死亡的最大濃度和導致魚類全部死亡的最小實驗濃度。魚類急性毒性試驗不僅用于測定化學物質(zhì)毒性強度、測定水體污染程度、檢查廢水處理的有效程度，也為制定水質(zhì)標準、評價環(huán)境質(zhì)量和管理廢水排放提供環(huán)境依。1材料方法1.1實驗生物 OECD、ISO、USEPA 等組織機構(gòu) 關(guān) 于 化 學 品 的 毒 性 測 試

8、 方 法 都 涉 及 了 魚類3-10，同時為了實驗數(shù)據(jù)的可靠性、可比性和通用性，這些方法也推薦了一些通用的實驗魚種，如: 斑馬 魚 ( Danio rerio ) 、黑 頭 軟 口 鰷 ( Pimephalespromelas) 以及日本青鳉( Oryzias latipes) 等。斑馬魚是原國家環(huán)?？偩只瘜W品測試方法魚類急性毒性試驗中推薦的種類，考慮到本地沒有斑馬魚市場以及經(jīng)濟問題等因素，本實驗選取魚種在吉林市火車站附近的花鳥市場所購買的柳葉魚苗，體長3cm±1cm。開始試驗前對實驗魚先進性了7天的馴養(yǎng)，馴養(yǎng)中及時清除受傷、體色異常、畸形、離群游泳、行動呆滯的個體，馴養(yǎng)期間每天換

9、水，所換水為頭一天接的自來水，經(jīng)過一天的放置，其目的是用以曝氣，七天之內(nèi)魚的死亡率小魚5%。期間喂魚3次，正式實驗前24h停止喂食，整個試驗期間禁止喂食。1.2實驗用水 養(yǎng)魚用水考慮到實驗室整體設備的局限性，該次實驗為現(xiàn)場接的自來水，經(jīng)過短暫的曝氣處理，其目的用于除去水中的余氯。水溫15°C左右，水質(zhì)近乎中性，試驗水的硬度等均符合要求。因為所選魚種為冷水魚，經(jīng)試驗測定實驗用水的溶解氧DO值大于5mg/L,因此實驗用水符合該實驗測定條件。1.3實驗材料 2000ml燒瓶、袋裝海飛絲（水，月桂醇硫酸酯鈉，月桂醇聚醚硫酸酯鈉，氯化鈉，乙二醇二硬脂酸酯，聚二甲基硅氧烷，碳酸鋅，二苯磺酸鈉，香

10、精， 吡硫鎓鋅，椰油酰胺丙基甜菜堿，鹽酸，苯甲酸鈉，瓜兒膠羥丙基三甲基氯化銨，堿式碳酸鎂，丙二醇，香櫞果提取物，cl19140，甲基氯異噻唑啉酮 ，甲基異噻唑啉酮，cl142090）1.4實驗方法 按最大濃度和最小濃度進行預試驗，觀察魚苗活動及存活情況。實驗中采用靜水式試驗，周期為96h，水溫控制在15°C左右，實驗容器為2L燒杯，經(jīng)過充分洗滌燒杯，確保每個燒杯的燒杯壁無藥品等的殘留，盡量不用洗滌用品刷洗，再根據(jù)之前設置5個梯度濃度及一個對照實驗(表1)。將試驗海飛絲配成母液，再按比例稀釋成所需濃度。在每個容器依次加入等量海飛絲稀釋液，最后定容到2000mL，輕微

11、的攪拌溶液，使其混合均勻，再將魚苗從低濃度到高濃度逐個放入。，每升水中魚的質(zhì)量不超過2g，同時設置空白對照組，空白對照組采用不加海飛絲的自來水，經(jīng)過短時間的曝氣處理。實驗時隨機撈取魚類個體放入燒杯中，整個放魚過程在10分鐘內(nèi)完成，8h后觀察魚的生理狀況，符合實驗要求，繼續(xù)觀察，在24h，48h，96h分別記錄魚死亡數(shù)，用玻璃棒觸尾部無反應即可認為該魚已死亡，將死亡的魚苗及時撈出，5 min 不動為死亡，觀察內(nèi)容包括試驗魚苗的異常行動，體表變化等。表一 實驗用劑濃度實驗用劑1組2組3組4組5組海飛絲洗發(fā)水（mg/l）0.2250.150.11250.090.0752數(shù)據(jù)處理 本次試驗采用體積分數(shù)

12、表示的海飛絲濃度分別為4.5%，3%，2.25%，1.8%，1.5%，同時做一個空白對照組，空白組所用水為經(jīng)過短暫曝氣處理過的自來水，不加海飛絲。試驗統(tǒng)計結(jié)果見表2表二 數(shù)據(jù)記錄 時間 濃度%4.50%3%2.25%1.80%1.50%024h10101010101048h-1096h-10由表二和實驗觀察可知，在不到24h的時間內(nèi)，5個濃度梯度燒瓶內(nèi)的小魚全部死亡，而2濃度為2.25%的燒瓶中，在加入溶液30min左右出現(xiàn)第一條死魚。3數(shù)據(jù)分析 在不到24h的時間內(nèi)，5個燒杯中的魚全部死亡，類比別的組做的預實驗，可知是由于所配制的海飛絲洗發(fā)水的濃度過高，超過了魚類的耐受濃度，導致魚類全部死亡

13、。經(jīng)分析認為可能是以下原因造成了實驗的失?。?. 在實驗初始階段沒有做預實驗，大致確定一定范圍濃度的海飛絲溶液，導致加入的溶液濃度過高，魚類全部死亡。2. 海飛絲中含有的表面活性劑會破壞魚的口腔黏膜，甚至呼吸系統(tǒng)，魚類在此溶液中，由于呼系統(tǒng)和消化系統(tǒng)被破壞，很快就死亡。3海飛絲去屑洗發(fā)水運用吡硫鎓鋅（ZPT）成分達到去屑功能，去屑洗發(fā)水致力于讓更多的ZPT成分留在頭皮表面，再加上ZPT本身難以被水清洗，也不易被皮膚吸收，所以ZPT可以在頭皮停留較長時間。而在歐盟分類中，ZPT屬于劇毒（T+)。雖然ZPT能以不超過1.5%的含量加入洗發(fā)水（普通海飛絲中ZPT有效成分含量為1%）等日用化學品，但是

14、大劑量接觸或食用可能會有致命危險。2009年有研究指出，ZPT可能導致人類角質(zhì)形成細胞和黑素細胞的熱休克并引起DNA損傷。1999年日本茨城(Ibaraki)筑波(Tsukuba)Onogawa16-2號國家環(huán)境研究所區(qū)域環(huán)境處的實驗證明，含ZPT的洗發(fā)水對斑馬魚和日本青鳉幼體有顯著致畸作用。所以小江魚在此高濃度的溶液中，存活時間短。4. 在實驗中加入的洗發(fā)水濃度高，起的泡沫覆蓋在燒瓶表面和加入的洗發(fā)水中含有的物質(zhì)都阻礙了魚類的呼吸。3結(jié)論 做實驗的時候，要謹記實驗步驟不能遺漏任何一步，否則都可能導致實驗失敗。做有關(guān)毒性試驗的時候，要進行預實驗，觀察0-24h，以確定大概的濃度范圍，而且通過實

15、驗更加直觀的了解到洗發(fā)水之類的洗漱用品直接排放到江河湖泊中對水域生物造成的損害，所以要堅持廢水的處理，保護本地生物。參考文獻1.國家環(huán)境保護總局 新化學物質(zhì)環(huán)境管理辦法Z.北京，20032.張京佶，殷浩文，趙華清.稀有鮈鯽對重鉻酸鉀和 3，4-二氯苯胺急性毒性研究J.2014,22(2):57-61.3 OECD Guidelines for Testing of Chemicals，203: Fish，AcuteToxicity Test S 19924 OECD Guidelines for Testing of Chemicals，204: Fish，Pro-longed Toxicit

16、y Test: 14-Day Study S.19845 OECD Guidelines for Testing of Chemicals，210: Fish，Early-Life Stage Toxicity Test S.19926 OECD Guidelines for Testing of Chemicals，212: Fish，Short-term Toxicity Test on Embryo and Sac-Fry Stages S.19987 OECD Guidelines for Testing of Chemicals，215: Fish，JuvenileGrowth Test S .20008 ISO Water quality-determination of the acute lethal toxicity ofsubstances to a freshwater fish Brachydanio rerio Hamilton-Buchanan ( Teleostei，Cyprinidae) -Part 1: Static method Part2: Semi-static method Part 3: Flow-through method Geneva:International Standard