高效液相色譜法測定復(fù)脈定顆粒劑中黃芪甲苷的含量

1、收稿日期 :2002-01-24; 修訂日期 :2002-03-06作者簡介 :雷 曦 (1963- , 女 (漢族 , 四川崇州人 , 現(xiàn)任重慶市中藥研 究院 制藥廠主管中藥師 , 主要從事藥品檢驗與質(zhì)量管理工作 .高效液相色譜法測定復(fù)脈定顆粒劑中黃芪甲苷的含量雷曦 , 秦劍(重慶市中藥研究院 400065摘要 :目的 :測定復(fù)脈定顆粒劑中黃芪甲苷的含量。 方法 :高效液相色譜法 , Diam onsil T M (4. 6mm ×200mm, 5 m ; 流動相 :乙腈水 (32 68 ; 檢測波長 :203nm 。 結(jié)果 :平均回收率 為 99. 25%, RSD 為 2. 6

2、4%, 線性范圍 0. 471. 64 g , r =0. 9999。 結(jié)論 :方法準(zhǔn)確、 可靠 , 可用于該藥質(zhì) 量控制。關(guān)鍵詞 :高效液相色譜 ; 復(fù)脈定顆粒劑 ; 黃芪甲苷中圖分類號 :R 284. 2 文獻標(biāo)識碼 :B 文章編號 :1008-0805(2002 07-0402-01復(fù)脈定顆粒劑為我院研制并生產(chǎn)的 中藥三類新藥 , 由黃芪等 多味中藥組成 , 用于怔忡、 心悸、 脈結(jié)代、 心律失常等癥。 該制劑中 的黃芪為君藥 , 約占主方的 23%。 黃芪甲苷是黃芪的主要活性成 分之一。 目前 , 該顆粒劑中黃芪甲苷的測 定方法為薄層掃描法 , 但操作繁瑣 , 影響重現(xiàn)性的因素較多。

3、為保 證有效地控制藥品質(zhì)量。 筆 者采用 高效液 相色譜 (HPL C 法測定 復(fù)脈定 顆粒 劑中黃 芪甲 苷的含量 , 為建立其質(zhì)量提供依據(jù)。 1儀器與試藥1. 1儀器 GI LSON 高效 液相 色譜 儀 (法國吉 爾森 公司 。 U ni-point V 2. 10色譜工作站。 SB 2200超聲 波清洗器 (上海必能信超 聲有限公司 。 L D 4-2離心機 (北京醫(yī)用離心機廠 。1.2 試 藥 復(fù) 脈 定 顆 粒 劑 (重 慶 市 中 藥 研 究 院 制 藥 廠 , 批 號 010803、 010904、 011105 。黃芪 甲苷對 照品 (中國 生物制品 檢定所 。化學(xué)試劑均為分

4、析純。 HP LC 用乙腈為色譜純。2方法與結(jié)果2. 1 色 譜條 件 色 譜 柱 D iamonsil TM C 18(4. 6mm ×200mm , 5 m ; 流 動相 :乙腈 -水 (32 68 ; 流 速 1. 0ml/min; 柱溫 30 ; 檢測波長 203nm 。2. 2 供試液的制備 精密稱取干燥至恒重的本品 2g , 一式 3份 , 分別加甲醇溶液超聲處理 3次。 第 1次 30ml , 第 2、 3次分別 為 20ml, 20min/次 , 離心。吸取上清液 , 合 并 3次提取液 , 于水浴上揮 干 , 殘渣加蒸 餾水 15ml 微 熱使溶解 并轉(zhuǎn)移 至分液漏

5、 斗中 , 用乙醚提取 3次。第 1次 30ml, 第 2、 3次各 20ml, 棄去乙醚 , 水液蒸 干 , 殘渣用飽和鹽水 15ml 溶解 , 用 水飽和的正丁醇提 取 3次 , 30ml/次。合并正丁醇液 , 用氨試液洗滌 2次 , 40ml/次 , 棄去 氨液 , 正丁 醇液揮干 , 殘渣用 甲醇溶解并 轉(zhuǎn)移至 5ml 容量瓶 中 , 定 容 , 取此液適量 , 用 0. 45 m 濾膜過濾 , 濾液作 為供試品溶液。2. 3線性關(guān)系 考察 精 密稱取干 燥至恒重的 黃芪甲苷 對照品適 量 , 加甲醇制成 0. 1172mg /ml 的對照品試液。精密吸取 4, 6, 8, 10, 1

6、2, 14 l 進樣 , 按上述色譜條件測定 , 以峰面積 (Y 為縱 坐標(biāo) ,進 樣量 ( g 為橫坐標(biāo) , 求得回歸 方程 (n =3 為 :Y =-18314. 3X +814712, r =0. 9999。 結(jié)果表明 , 黃芪甲苷在 0. 46881. 6408 g 范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。2. 4穩(wěn)定性 試驗 供試品溶液 在室溫下 放置 , 按 上述色譜 條件 , 每隔 3h 測定 1次 , 共測定 5次 , 進樣量 15 l/次 , 求得 峰面積積分 值相對標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD 為 1. 28%, 結(jié)果樣 品 15h 內(nèi)穩(wěn)定性較好。2. 5精密 度試驗 精密吸取 上述黃 芪甲苷 對照品

7、溶液 10 l, 按 上述 色譜條件 , 重復(fù)進 樣 6次 , 求得峰面積 積分值相 對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD 為 0. 19%, 說明儀器的精密度較高。2. 6重現(xiàn)性試驗 取同一批號的復(fù)脈定顆粒 劑內(nèi)容物共 6份 , 每 份約 2g, 精密稱定 , 按 “ 2. 2” 項下方法制備 , 按上述 色譜條件各取 15 l 測定 , 求得峰面積積 分值相對標(biāo) 準(zhǔn)偏差 (RSD 為 2. 3%, 重現(xiàn)性較好。2. 7回收率試驗 取上述已 知含量的復(fù)脈定顆粒 劑內(nèi)容物 , 共 5份 , 每份約 1g , 精密稱定 , 每份 各精密加入 黃芪甲苷 對照品溶液 5ml(0. 02184mg /ml , 按“ 2

8、. 2” 項下方 法制備供試 液 , 按 上述色 譜條件 , 測定其中黃芪甲苷含量 , 計 算回收率。結(jié)果見表 1。表 1復(fù)脈定顆粒劑中黃芪甲苷的回收率樣品量 C /mg 測得量 C /mg 回收率 (% 平均回收 率 (%RS D (%0. 10920. 2198101. 280. 11360. 219497. 010. 11680. 222496. 9299. 252. 640. 10660. 2187102. 720. 11460. 221998. 34注 :加入對照品量為 0. 1092mg2. 8樣品測定 分別精密吸取不同批號的供 試品溶液 15 l, 共 3份。按上述色譜條件測定黃

9、芪甲苷 含量。結(jié) 果見表 2。 表 2復(fù)脈定顆粒劑中黃芪甲苷含量批號 平均含量 C /mg g -1RS D (% 0108030. 10911. 790109040. 20242. 510111050. 15972. 33 n =32. 9空白樣品的測定 按處方自配不含黃芪 的復(fù)脈定顆粒劑 , 按“ 2. 2” 項下方法制備空白溶液。 按上述色譜條件測定 , 結(jié)果證明其 它藥材不干擾黃芪甲苷的 測定。黃 芪甲苷對照品、 樣品及陰性對 照液的色譜見圖 1, 圖 2, 圖 3。 3小結(jié)復(fù) 脈定顆粒劑 為中藥復(fù)方 制劑 , 所含成分復(fù) 雜 , 群 藥對測定 黃芪中所含黃芪甲苷成分 干擾大 , 因而

10、樣品溶液的前處理為本方 法的 技術(shù)關(guān)鍵 , 本實驗 參考有關(guān) 文獻資料 1, 2, 從 提取純化 方法、 溶劑等 方面進行試驗 , 比較了用氨試 液和 1%氫 氧化鈉洗正丁醇 提 取液及 用水與 飽和鹽 水溶 解殘渣 等 , 結(jié)果 以乙醚 除去 脂類物時珍國醫(yī)國藥 2002年第 13卷第 7期 LISHIZHEN M EDICINE AND M AT ERIA M EDICA RES EARCH 2002VOL. 13NO. 7質(zhì) , 氨試液洗滌 正丁醇提取 液以除去 黃芪等藥材 中所含色 素 , 氨 基酸等成 分 , 減 少干擾 , 不需要上 大孔吸附樹 脂就得到 了較好的 分離提取效果 ,

11、 大大簡化了操作步驟。圖 3 陰性對照品 HPLC 圖譜在用 HPL C 法 測定 黃芪甲 苷含 量時 , 因黃 芪甲 苷吸收 波長 位于紫外 末端 , 一般認(rèn)為用 紫外檢測 器檢測較為 困難 , 近來有較多文獻報道 3, 4用蒸發(fā)光散射檢測器來分析 , 達到良好的分離。 我 們發(fā)現(xiàn)只要選擇合適的色 譜條件 , 用紫外檢測器同樣能獲得良好 的分離效果。黃芪甲苷的含量常因 產(chǎn)地的不同而異 , 以致不同批號復(fù)脈定 顆粒劑中黃芪甲苷含量有 差異 , 故還需要控制黃芪藥材的來源以 保證產(chǎn)品質(zhì)量。HPL C 法 測定復(fù)脈定 顆粒劑 中黃芪甲 苷含量 精密度 與重現(xiàn) 性均較高 , 更適合于復(fù)脈定顆粒劑的質(zhì)

12、量控制。參考文獻 :1中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會 . 中 國藥典 , 部 , 第 1版 S. 北京 :化學(xué)工業(yè)出版社 , 2000:249-249.2唐得時 . 中藥化 學(xué) , 第 1版 M . 北京 :人民衛(wèi) 生出版 社 , 1992:117-122.3楊國紅 , 方穎 , 厲進忠 . 高效液 相色譜法蒸發(fā)光散射檢測器測定黃芪和制劑中黃芪甲 苷的含 量 J . 藥物 分析雜 志 , 2000, 20(3 :199-199.4周春玲 , 魯靜 . 高效液相 色譜 -蒸發(fā)光散射檢測測定黃芪中黃芪甲苷的含量 J. 中國中藥雜志 , 2000, 25(3 :166-166.臨床報道赤芍湯退黃 1

13、00例潘啟學(xué)(湖北省羅田縣人民醫(yī)院 438600關(guān)鍵詞 :黃疸 ; 肝炎 ; 赤芍湯中圖分類號 :R259 文獻標(biāo)識碼 :C 文章編號 :1008-0805(2002 07-0403-01黃疸是中醫(yī)內(nèi)科常見證候 , 常出現(xiàn)于各類肝病之中。如急慢 性肝炎、 肝硬化等。一般情況下消退并不困難。但如遇郁膽型肝 炎、 亞重肝等出現(xiàn)高膽紅素血癥 , 則消退較困難。 筆者用赤芍湯退 黃 , 療效較好。茲介紹如下 :1病例資料本組 100例均為 1998年以來 筆者所經(jīng)治的住院病人。其中 男 52例 , 女 48例 ; 年齡 870歲 ; 屬急性黃 疸肝炎者 50例 , 慢性 活動 型肝炎有黃 疸者 25例

14、 , 郁 膽型肝炎 15例 , 亞急性重 癥肝炎 4例 , 肝硬化 6例。膽紅質(zhì) (血 高于 171 mol/L 者 26例。 2治療方法本 組病例均以 赤芍湯為 主治療。納食很 差者輸液加 能量合 劑 ; 病情嚴(yán)重者配合西藥保肝治療。赤芍湯 組成 :赤芍 3080g, 郁金 1040g, 茵陳蒿 30g , 梔 子 620g , 大黃 420g , 炒白術(shù) 15g , 茯苓 1030g , 內(nèi)金 615g , 豬苓 15g , 佩蘭 6g 。加減 :遇 寒濕重 者 , 減 梔子、 大黃、 加桂枝 15g , 黃芪 1530g 。3療效觀察3. 1 判定標(biāo)準(zhǔn) 血膽紅質(zhì)恢復(fù)正常 , 肝功能基本恢

15、復(fù) , 為治 愈 ; 血 膽紅 質(zhì)基本 恢復(fù)正 常 , 或 下降 50%以上 , 為有效 ; 達 不到有 效標(biāo) 準(zhǔn)者 , 為無效。收稿日期 :2002-02-25; 修訂日期 :2002-04-053. 2結(jié)果 上述病例經(jīng) 560劑中藥治療 , 臨床治愈 80例 , 有效 20例 , 總有效率 100%。 4典型病例瞿 某某 , 男 , 33歲 , 系湖 北羅田 駱駝坳 鎮(zhèn)學(xué) 堂村農(nóng) 民。住院 號 :中 980595。于 1996-10-01入院 , 訴脅痛乏力 3a 余 , 加重 20d 余。 伴目黃 , 身黃 , 小便黃。 曾在當(dāng)?shù)匦l(wèi)生院滴注茵梔黃注射液等 效 果不顯 , 查 皮膚鞏 膜重

16、 度黃 染 , 腹 膨隆 , 腹 部叩診 有移 動性濁 音。 病人 入院 時查 血膽 紅質(zhì) 444. 6 mol/L , GPT 800u, 總 蛋白 66. 9g /L , 白蛋白 29. 0g /L , 球蛋白 37. 6g /L , HBsAg (+ 。 彩色 多普勒 超聲檢查提示 :肝臟縮小 , 肝邊呈鋸齒狀 , 脾厚 5. 8cm , 報 為肝硬化腹水。 經(jīng)上方中藥治療 , 并靜脈滴注能量合劑 , 口服利尿藥。于 1996-10-10查膽紅質(zhì) 205. 2 mol/L, 腹水基本消退。 遂停 用利 尿藥。至 1996-10-23, 查血膽紅 質(zhì) 81. 5 mol/L, GP T 12u, 總蛋白 71. 9g /L , A 37. 9g /L , G 34. 0g /L 。 未見腹水 , 病人亦未訴 其它明顯不適 , 因經(jīng)濟不力要求出院。 后以該方調(diào)治月余 , 膽紅質(zhì) 及肝功能都完全恢復(fù) , 隨訪年余未再