蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)實(shí)驗(yàn)

1、蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng) 一、目的要求一、目的要求：v了解沉淀蛋白質(zhì)的幾種方法及其實(shí)用意義二、實(shí)驗(yàn)原理：v在水溶液中的蛋白質(zhì)分子由于表面生成水化層和雙電層而成為穩(wěn)定的親水膠體顆粒，在一定的理化因素影響下，蛋白質(zhì)顆?？梢蚴ル姾珊兔撍踔磷冃?，則以固體形式從溶液中析出，這個過程稱為蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)。v蛋白質(zhì)的沉淀反應(yīng)可分為兩類。v（1）可逆的沉淀反應(yīng) 蛋白質(zhì)雖然沉淀析出，但蛋白質(zhì)分子的結(jié)構(gòu)尚未發(fā)生顯著變化，除去引起沉淀的因素后，蛋白質(zhì)的沉淀仍能溶解于原來溶劑中，并保持其天然性質(zhì)而不變性。屬于這類反應(yīng)的有；蛋白質(zhì)的鹽析作用或在低溫下用乙醇（或丙酮）短時間作用于蛋白質(zhì)。提純蛋白質(zhì)時，常利用此類反應(yīng)。v（2

2、）不可逆沉淀反應(yīng) 此時蛋白質(zhì)分子內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生重大改變，蛋白質(zhì)常變性而沉淀，不再溶于原來溶劑中。加熱、重金屬鹽、過酸、過堿、震蕩、超聲波或某些有機(jī)酸都能使蛋白質(zhì)發(fā)生不可逆沉淀反應(yīng)。v蛋白質(zhì)變性后，有時由于維持溶液穩(wěn)定的條件仍然存在（如電荷），并不析出。因此變性蛋白質(zhì)并不一定都表現(xiàn)為沉淀，而沉淀的蛋白質(zhì)也未必都已變性三、實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備三、實(shí)驗(yàn)材料與設(shè)備：v（一）材料v5ml鮮雞蛋清，用蒸餾水稀釋至100ml，攪拌后用4-8層紗布過濾，新鮮配制。（二）試劑v蛋白質(zhì)溶液 取10ml蛋清，用蒸餾水稀釋至100ml，攪拌均勻后，用紗布過濾v濃蛋白溶液 雞蛋清稀釋2倍（1:1）方法同上v飽和硫酸銨，2%硝酸

3、銀，0.5%醋酸鉛溶液v濃鹽酸，濃硫酸，濃硝酸，v1%硫酸銅，0.1%醋酸，10%醋酸，v飽和氯化鈉溶液，10%NaOH溶液，1%醋酸v10%鞣酸，飽和苦味酸溶液，0.01%NaOH（三）設(shè)備v水浴鍋 v濾紙，漏斗v吸管 v試管及試管架v玻棒四、實(shí)驗(yàn)步驟：四、實(shí)驗(yàn)步驟：v（一）蛋白質(zhì)的可逆沉淀v蛋白質(zhì)的鹽析過濾2ml蛋白質(zhì)濃溶液等體積飽和濃硫酸溶液沉淀清夜硫酸銨粉末沉淀加水觀察現(xiàn)象（二）蛋白質(zhì)的不可逆沉淀v1.重金屬離子沉淀蛋白質(zhì) 重金屬離子與蛋白質(zhì)結(jié)合成不溶于水的復(fù)合物。v取3支試管，加入蛋白質(zhì)溶液1mL，加入0.01%NaOH，再加2%硝酸銀溶液1滴、0.5%乙酸鉛1滴和1%硫酸銅1滴，振

4、蕩試管，觀察生成沉淀的顏色和量。放置片刻，傾去上清液，向沉淀中加入少量的水，沉淀是否溶解？為什么？v2.強(qiáng)酸沉淀蛋白質(zhì) v取3支試管，各加入10滴蛋白質(zhì)溶液，分別沿管壁加入等量濃鹽酸，濃硫酸和濃硝酸10滴。觀察兩溶液界面處白色環(huán)狀蛋白質(zhì)沉淀的生成。然后搖動試管，蛋白質(zhì)沉淀應(yīng)在過量的鹽酸和硫酸中溶解，在含硝酸的試管中蛋白質(zhì)沉淀不會溶解。（磷酸不能使蛋白質(zhì)沉淀，無機(jī)酸沉淀蛋白質(zhì)的原因可能是蛋白質(zhì)顆粒脫水的結(jié)果，過量的無機(jī)酸可使沉淀在溶解） v3 生物堿試劑沉淀蛋白質(zhì)v取2支試管，各加2ml蛋白質(zhì)溶液，加1%的醋酸45滴，分別滴加鞣酸和苦味酸溶液數(shù)滴，觀察結(jié)果。v4.加熱沉淀蛋白質(zhì)v v注意事項(xiàng)v實(shí)驗(yàn)要求各種試劑的濃度和加入量必須相當(dāng)準(zhǔn)確。 v作業(yè)v列表說明各實(shí)驗(yàn)的顏色變化，說明原因。v思考題思考題:v1.為什么蛋清可作為重