生產(chǎn)環(huán)境采樣與測試確認報告

1、一次性使用衛(wèi)生用品衛(wèi)生標準 （附錄E） 生產(chǎn)環(huán)境采樣與測試方法方法確認報告1.目的： 為了確保檢測技術和方法的有規(guī)范，結果的準確可靠性，通過測定試驗觀察檢測結果和生化特性的方式來確保試驗結果的準確可靠性，方法的準確可行性。2.檢測依據(jù): GB159792002（附錄E）3.設備耗材3.1儀器設備：顯微鏡，恒溫培養(yǎng)箱，冰箱，電子天平，無菌吸管，無菌錐形瓶，無菌試管，無菌平皿，棉拭子，PH試紙，革蘭氏染色有關器具。3.2培養(yǎng)基和試劑：生理鹽水，營養(yǎng)瓊脂，乳糖膽鹽，伊紅美蘭瓊脂，SCDLP培養(yǎng)液，十六烷三甲基溴化銨瓊脂，綠膿菌素測定用培養(yǎng)基，硝酸鹽胨水培養(yǎng)基，明膠培養(yǎng)基，血瓊脂培養(yǎng)基，甘露醇培養(yǎng)液，

2、凍干血漿，葡萄糖肉湯，鏈激酶，桿菌肽。4.方法：4.1 空氣采樣與測試方法4.1.1樣品采集在動態(tài)下進行。 室內(nèi)面積不超過30m2，在對角線上設里、中、外三點，里、外點位置距墻1m；室內(nèi)面積超過30m2，設東、西、南、北、中5點，周圍4點距墻1m. 采樣時，將含營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基的平板（直徑9cm）置采樣點（約桌面高度），打開平皿蓋，使平板在空氣中暴露5min. 4.1.2細菌培養(yǎng)在采樣前將準備好的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基置352培養(yǎng)24h，取出檢查有無污染，將污染培養(yǎng)基剔除。 將已采集的培養(yǎng)基在6h內(nèi)送實驗室，于352培養(yǎng)48h觀察結果，計數(shù)平板上細菌菌落數(shù)（cfu/m）。 4.1.3菌落計算式中：y1空

3、氣中細菌菌落總數(shù)，cfu/m3； A平板上平均細菌菌落數(shù)； S1平板面積，cm2； t暴露時間，min. 4.2工作臺表面與工人手表面采樣與測試方法4.2.1樣品采集工作臺：將經(jīng)滅菌的內(nèi)徑為5cm5cm的滅菌規(guī)格板放在被檢物體表面，用一浸有滅菌生理鹽水的棉簽在其內(nèi)涂抹10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。 工人手：被檢人五指并攏，用一浸濕生理鹽水的棉簽在右手指曲面，從指尖到指端來回涂擦10次，然后剪去手接觸部分棉棒，將棉簽放入含10mL滅菌生理鹽水的采樣管內(nèi)送檢。4.2.2細菌菌落總數(shù)檢測將已采集的樣品在6h內(nèi)送實驗室，每支采樣管充分混勻后取1mL樣液

4、，放入滅菌平皿內(nèi)，傾注營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，每個樣品平行接種兩塊平皿，置352培養(yǎng)48h，計數(shù)平板上細菌菌落數(shù)，工作臺（cfu/cm）,工人手（cfu/只手）。4.2.3菌落計算式中：y2工作臺表面細菌菌落總數(shù)，cfu/cm2； A平板上平均細菌菌落數(shù)； S2平板面積，cm2； y3工人手表面細菌菌落總數(shù)，cfu/只手。4.2.4致病菌檢測 4.2.4.1大腸菌群檢測：取樣液5ml樣液接種50ml乳糖膽鹽發(fā)酵管，置352培養(yǎng)24h,如不產(chǎn)酸也不產(chǎn)氣，則報告為大腸菌群陰性。如產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則劃線接種伊紅美藍瓊脂平板，置352培養(yǎng)1824h，取疑似菌落進行染色鏡檢，同時接種乳糖發(fā)酵管，置352培養(yǎng)24h。凡

5、乳糖膽鹽發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，乳糖發(fā)酵管產(chǎn)酸產(chǎn)氣，在伊紅美藍平板上有典型大腸菌落，革蘭氏染色為陰性無芽胞桿菌，可報告被檢樣品檢出大腸桿菌。4.2.4.2綠膿桿菌檢測：取樣液5ml，加入到50mlSCDLP培養(yǎng)液中，充分混勻，置352培養(yǎng)24h，然后劃線接種十六烷在甲基溴化銨瓊脂平板，挑取可疑菌落進行革蘭氏染色、氧化酶試驗、綠膿菌素試驗、硝酸鹽還原試驗、明膠液化試驗、42生長試驗。如樣品證實為革蘭氏陰性桿菌，氧化酶及綠膿桿菌試驗均為陽性者，即可報告被檢樣品檢出綠膿桿菌。如綠膿菌素試驗陰性而液化明膠、硝酸鹽還原產(chǎn)氣和42生長試驗三者皆為陽性時，仍可報告被檢樣品中檢出綠膿桿菌。4.2.4.3金黃色葡萄球菌

6、檢測：取樣液5ml，加入到50mlSCDLP培養(yǎng)液中，充分混勻，置352培養(yǎng)24h，挑取典型菌落進行革蘭氏染色，甘露醇發(fā)酵試驗、血漿凝固酶試驗（同時各取陽性與陰性菌株肉湯作對照試驗）。如鏡檢為陽性葡萄球菌，并能發(fā)酵甘露醇產(chǎn)酸，血漿凝固酶試驗陽性者，可報告被檢樣品檢出金黃色葡萄球菌。4.2.4.4溶血性鏈球菌檢測：取樣液5ml，加入到50ml葡萄糖肉湯，352培養(yǎng)24h,然后劃線接種血瓊脂平板，352培養(yǎng)24h。挑取可疑菌落進行革蘭氏染色鏡檢，陽性呈鏈狀排列的球菌，進行鏈激酶試驗、桿菌肽敏感試驗（同時用陽性菌株進行對照試驗），如鏡檢為革蘭氏陽性鏈狀排列球菌，血平板上呈現(xiàn)溶血圈，鏈酶和桿菌肽試驗陽性，可報告被檢樣品檢出溶血性鏈球菌。5.檢測記錄及報告：見附錄生產(chǎn)環(huán)境測試原始記錄GDCTC/F412。6.結論： 經(jīng)對本中心微生物菌檢室對生產(chǎn)環(huán)境采樣與測試，比較兩次測試檢驗結果,結果均符合標準要求，檢測數(shù)值接近?？梢源_定檢測人員對檢測方法及檢測儀器運用熟練，檢測記錄表格和檢測報告設計合理、格式