第二章柱、紙色譜4hppt課件

1、l第一節(jié)第一節(jié) 柱上色譜法柱上色譜法l柱上色譜可分為柱上色譜可分為: : 柱上吸附色柱上吸附色譜法、譜法、l 柱上離子交柱上離子交換色譜法、換色譜法、l 柱上分配色柱上分配色譜法、譜法、l 柱上凝膠色柱上凝膠色譜法。譜法。l。柱上色譜法是比較古老的柱上色譜法是比較古老的1903年，年，Tswett提出來）。由提出來）。由于此法分離效率低，速度慢，因之在五十年代以前為主要于此法分離效率低，速度慢，因之在五十年代以前為主要的分離技術(shù)，但五十年代后，由于其它色譜技術(shù)薄層色的分離技術(shù)，但五十年代后，由于其它色譜技術(shù)薄層色譜、氣相色譜的出現(xiàn)，其應(yīng)用受到很大限制。譜、氣相色譜的出現(xiàn)，其應(yīng)用受到很大限制。但

2、是由于此種方法所用設(shè)備和操作方法都比較簡單，可處但是由于此種方法所用設(shè)備和操作方法都比較簡單，可處理大量樣品，在有機分析中，主要可用于有機樣品的提純理大量樣品，在有機分析中，主要可用于有機樣品的提純脫脂、脫色、脫膠、脫水），初步分離或制備純樣品等，脫脂、脫色、脫膠、脫水），初步分離或制備純樣品等，因之該法仍然為人們所采用。因之該法仍然為人們所采用。此外，隨著天然產(chǎn)物化學(xué)的發(fā)展，許多天然有機物的應(yīng)用此外，隨著天然產(chǎn)物化學(xué)的發(fā)展，許多天然有機物的應(yīng)用價值日益提高，而這些化合物往往又難于合成，因之從天價值日益提高，而這些化合物往往又難于合成，因之從天然界提取就成了唯一來源，這就必須采用制備型柱色譜技

3、然界提取就成了唯一來源，這就必須采用制備型柱色譜技術(shù)。故柱色譜也是植物化學(xué)工作的主要技術(shù)之一。術(shù)。故柱色譜也是植物化學(xué)工作的主要技術(shù)之一。l1柱上吸附色譜法柱上吸附色譜法l原理：原理：l按照各組分在吸附劑上的吸附能力大小來分按照各組分在吸附劑上的吸附能力大小來分離的。離的。l吸附劑的選擇憑經(jīng)驗決定吸附劑的選擇憑經(jīng)驗決定 ）：）：l一種合適的吸附劑應(yīng)該具備這樣一些條件：一種合適的吸附劑應(yīng)該具備這樣一些條件：l（1它能夠可逆地吸附待層析的物質(zhì)；它能夠可逆地吸附待層析的物質(zhì)；l（2它不會引起被吸附物質(zhì)的化學(xué)變化；它不會引起被吸附物質(zhì)的化學(xué)變化；l（3它的粒度大小應(yīng)該能使顯層劑以合適的它的粒度大小應(yīng)該

4、能使顯層劑以合適的速率流過；速率流過；l（4吸附劑最好是白色的或淺色的，以便于吸附劑最好是白色的或淺色的，以便于對色層帶進(jìn)行觀察；對色層帶進(jìn)行觀察；l（5顆粒具有一定的機械強度，操作時不易顆粒具有一定的機械強度，操作時不易破碎；破碎；l（6不能與待分離物質(zhì)及流動相產(chǎn)生化學(xué)反不能與待分離物質(zhì)及流動相產(chǎn)生化學(xué)反應(yīng)，也不應(yīng)相互溶解。應(yīng)，也不應(yīng)相互溶解。l一般弱極性溶質(zhì)宜選用強極性吸附劑，而強一般弱極性溶質(zhì)宜選用強極性吸附劑，而強極性溶質(zhì)宜用弱極性吸附劑。極性溶質(zhì)宜用弱極性吸附劑。l最常用的吸附劑：氧化鋁和硅膠。它們能符最常用的吸附劑：氧化鋁和硅膠。它們能符合上述要求，并且經(jīng)過不同處理可以隨意得合上述

5、要求，并且經(jīng)過不同處理可以隨意得到不同的活度。例如，氧化鋁可以在不同溫到不同的活度。例如，氧化鋁可以在不同溫度烘干達(dá)到各種不同的活度。度烘干達(dá)到各種不同的活度。l必須指出，活性大的吸附劑用于色譜法并不必須指出，活性大的吸附劑用于色譜法并不一定最合適，因為活性太大，物質(zhì)被吸附得一定最合適，因為活性太大，物質(zhì)被吸附得太牢，以致不易被洗脫下來。太牢，以致不易被洗脫下來。l其他較常用的吸附劑有：其他較常用的吸附劑有：l氧化鎂用于吸附烴、醇、酮、醚及硝基物氧化鎂用于吸附烴、醇、酮、醚及硝基物等），碳酸鈣用于吸附葉綠素）等），碳酸鈣用于吸附葉綠素）l硫酸鈣用于吸附花色苷、維生素硫酸鈣用于吸附花色苷、維生素

6、K1K1），氧），氧化鈣、氧化鈦、碳酸鋇、硫酸鎂、無水碳酸化鈣、氧化鈦、碳酸鋇、硫酸鎂、無水碳酸鈉應(yīng)用于吸附葉綠素），滑石粉用于吸鈉應(yīng)用于吸附葉綠素），滑石粉用于吸附有機酸、酚類、附有機酸、酚類、2,4-2,4-二硝基苯腙），硅藻二硝基苯腙），硅藻土、蔗糖用于吸附葉綠素及淀粉等。土、蔗糖用于吸附葉綠素及淀粉等。l許多吸附劑遇水即失去活性，這時只能用無許多吸附劑遇水即失去活性，這時只能用無水溶劑。水溶劑。 l實驗技術(shù)實驗技術(shù)l吸附劑的粒度及用量：一般在吸附劑的粒度及用量：一般在8030080300目目間變動。粒度細(xì)，分離效果好，但速度間變動。粒度細(xì)，分離效果好，但速度太慢。吸附劑的用量，一般為樣

7、品的太慢。吸附劑的用量，一般為樣品的30503050倍，有時達(dá)倍，有時達(dá)100100倍。倍。l色譜柱：很簡單，只需要一支適當(dāng)長度、色譜柱：很簡單，只需要一支適當(dāng)長度、適當(dāng)口徑的玻璃管，管下口做一緊縮處適當(dāng)口徑的玻璃管，管下口做一緊縮處及一斜口，再連一個吸濾瓶即可。柱長及一斜口，再連一個吸濾瓶即可。柱長與內(nèi)徑之比在與內(nèi)徑之比在10 10 1 4 1 4 1 1間較好。間較好。l裝柱方法有兩種：干法裝柱，將吸附劑由柱口裝入，裝柱方法有兩種：干法裝柱，將吸附劑由柱口裝入，邊裝邊輕敲打，以使吸附劑裝填密實均勻。吸附劑裝完邊裝邊輕敲打，以使吸附劑裝填密實均勻。吸附劑裝完后，把淋洗劑沿管壁輕輕加入，使之浸

8、潤吸附劑，淋洗后，把淋洗劑沿管壁輕輕加入，使之浸潤吸附劑，淋洗劑加入后發(fā)現(xiàn)柱內(nèi)有氣泡時，可敲打柱體或施加適當(dāng)壓劑加入后發(fā)現(xiàn)柱內(nèi)有氣泡時，可敲打柱體或施加適當(dāng)壓力以壓縮氣泡，使氣泡隨淋洗劑一起排出。濕法裝柱，力以壓縮氣泡，使氣泡隨淋洗劑一起排出。濕法裝柱，有兩種操作方法：方法有兩種操作方法：方法：先將柱體下端活塞擰死，向：先將柱體下端活塞擰死，向柱內(nèi)加入一定高度之淋洗劑，然后將吸附劑自上端慢慢柱內(nèi)加入一定高度之淋洗劑，然后將吸附劑自上端慢慢加入，淋洗劑的液面一定要高出吸附劑層。吸附劑加完加入，淋洗劑的液面一定要高出吸附劑層。吸附劑加完后，打開活塞，放出淋洗劑，直至吸附劑層不在沉降為后，打開活塞，

9、放出淋洗劑，直至吸附劑層不在沉降為止。方法止。方法：將吸附劑用淋洗劑調(diào)成糊狀，慢慢倒入柱：將吸附劑用淋洗劑調(diào)成糊狀，慢慢倒入柱中，在保證淋洗劑液面略高于吸附層條件下，讓淋洗劑中，在保證淋洗劑液面略高于吸附層條件下，讓淋洗劑自柱中慢慢流出，直至吸附劑沉降不在變動為止。不論自柱中慢慢流出，直至吸附劑沉降不在變動為止。不論何種方法裝柱，要求裝好之柱體密實均勻，無氣泡，在何種方法裝柱，要求裝好之柱體密實均勻，無氣泡，在淋洗過程中無裂紋出現(xiàn)，一般濕法裝柱比干法好。淋洗過程中無裂紋出現(xiàn)，一般濕法裝柱比干法好。l被分離樣品的準(zhǔn)備：柱色譜所用樣品溶液一般配成較濃的溶被分離樣品的準(zhǔn)備：柱色譜所用樣品溶液一般配成

10、較濃的溶液，最好為飽和液，這樣樣品加到柱頂集中，分離效果好，液，最好為飽和液，這樣樣品加到柱頂集中，分離效果好，配制樣品所用的溶劑極性要小，以利于樣品立即被吸附劑吸配制樣品所用的溶劑極性要小，以利于樣品立即被吸附劑吸附。如果樣品在低級性的溶劑中溶解度很低，最好將樣品用附。如果樣品在低級性的溶劑中溶解度很低，最好將樣品用一合適的溶劑溶解，再與吸附劑相拌，低溫烘干待上樣。一合適的溶劑溶解，再與吸附劑相拌，低溫烘干待上樣。l上樣：樣品溶液配好后可開始加樣，方法為當(dāng)柱內(nèi)淋洗劑流上樣：樣品溶液配好后可開始加樣，方法為當(dāng)柱內(nèi)淋洗劑流至液面與吸附劑面相平時，將樣品溶液沿管壁加入柱內(nèi)，注至液面與吸附劑面相平時

11、，將樣品溶液沿管壁加入柱內(nèi)，注意不要讓樣品溶液自由落下而打亂柱頂吸附劑層。當(dāng)樣品液意不要讓樣品溶液自由落下而打亂柱頂吸附劑層。當(dāng)樣品液面和吸附劑面相平時，用樣品溶劑數(shù)滴沿管壁加入，以洗凈面和吸附劑面相平時，用樣品溶劑數(shù)滴沿管壁加入，以洗凈管壁上的樣品液，當(dāng)液面與吸附劑面再次相平時，加入顯層管壁上的樣品液，當(dāng)液面與吸附劑面再次相平時，加入顯層劑進(jìn)行顯層。如果是和吸附劑相拌的樣品，將柱內(nèi)淋洗劑不劑進(jìn)行顯層。如果是和吸附劑相拌的樣品，將柱內(nèi)淋洗劑不要流至與吸附劑面相平，要保持一定的淋洗劑高度，將樣品要流至與吸附劑面相平，要保持一定的淋洗劑高度，將樣品粉末緩緩地加入，并輕輕敲擊柱子使氣泡充分地排除，加

12、完粉末緩緩地加入，并輕輕敲擊柱子使氣泡充分地排除，加完樣品后，讓淋洗劑流至與吸附劑表面相平，用樣品溶劑數(shù)滴樣品后，讓淋洗劑流至與吸附劑表面相平，用樣品溶劑數(shù)滴沿管壁加入，以洗凈管壁上的樣品液，當(dāng)液面與吸附劑面再沿管壁加入，以洗凈管壁上的樣品液，當(dāng)液面與吸附劑面再次相平時，加入顯層劑進(jìn)行顯層。次相平時，加入顯層劑進(jìn)行顯層。 顯層顯層: 使樣品各組分在柱內(nèi)進(jìn)行分離的過程叫顯層，此過使樣品各組分在柱內(nèi)進(jìn)行分離的過程叫顯層，此過程中所用的溶劑叫顯層劑。程中所用的溶劑叫顯層劑。顯層劑的選擇顯層劑的選擇 :一般來說，顯層劑的極性比樣品極性小些。一般來說，顯層劑的極性比樣品極性小些。常用的顯層劑有石油醚，二

13、硫化碳，苯，四氯化碳，氯仿常用的顯層劑有石油醚，二硫化碳，苯，四氯化碳，氯仿代表弱極性顯層劑），乙醚，異丙醚中等顯層劑），代表弱極性顯層劑），乙醚，異丙醚中等顯層劑），低分子量的醇、酮強顯層劑等，一般可用單一種，也低分子量的醇、酮強顯層劑等，一般可用單一種，也可用混合劑，一般先試之，最后確定出合適之顯層劑來?？捎没旌蟿?，一般先試之，最后確定出合適之顯層劑來。顯層方法：待柱上樣品液面與吸附劑面相平后，加入顯層劑，顯層方法：待柱上樣品液面與吸附劑面相平后，加入顯層劑，并始終保持顯層劑面高出吸附劑面，待第一個組分估計由并始終保持顯層劑面高出吸附劑面，待第一個組分估計由柱下端開始流出時，停止加顯色劑，

14、顯層結(jié)束。柱下端開始流出時，停止加顯色劑，顯層結(jié)束。留意：留意： 有機物自吸附劑上被洗提出來的先后次序一般是：飽有機物自吸附劑上被洗提出來的先后次序一般是：飽和烴，烯烴，雙烯烴，芳烴，醚，酯，酮，醇，二元醇及和烴，烯烴，雙烯烴，芳烴，醚，酯，酮，醇，二元醇及羧酸。羧酸。l色層的分離方法：色層的分離方法：l（1 1推出法：將吸附劑自吸附管中推出，用小刀將各色推出法：將吸附劑自吸附管中推出，用小刀將各色層帶切開，分別用適當(dāng)溶劑提取，濾去吸附劑，將濾液濃縮層帶切開，分別用適當(dāng)溶劑提取，濾去吸附劑，將濾液濃縮就可以得到各組分。當(dāng)用這種辦法分離時，吸附柱玻璃管不就可以得到各組分。當(dāng)用這種辦法分離時，吸附

15、柱玻璃管不能用下口緊縮的，而必須是兩頭都開的。能用下口緊縮的，而必須是兩頭都開的。l（2 2洗提法：待顯層后，用一種極性較強、吸附力較大洗提法：待顯層后，用一種極性較強、吸附力較大的溶劑將各組分依次頂替下來，用幾個接收器分別接收流出的溶劑將各組分依次頂替下來，用幾個接收器分別接收流出的各個組分。這一步驟常稱為的各個組分。這一步驟常稱為“洗提洗提”。洗提用的溶劑稱為。洗提用的溶劑稱為洗提劑。將各分洗提液分別濃縮即得到各組分。洗提劑。將各分洗提液分別濃縮即得到各組分。l無色物質(zhì)層析時找出色層帶的方法：無色物質(zhì)層析時找出色層帶的方法：l將吸附柱系統(tǒng)地切斷，將各段逐一用溶液洗提，鑒定各洗將吸附柱系統(tǒng)地

16、切斷，將各段逐一用溶液洗提，鑒定各洗提液中的物質(zhì)。提液中的物質(zhì)。l連續(xù)地洗提吸附柱，分別用接收器接收一定量的洗提液，連續(xù)地洗提吸附柱，分別用接收器接收一定量的洗提液，然后鑒定各洗提液中的物質(zhì)。然后鑒定各洗提液中的物質(zhì)。l層析完畢后，用顯色劑顯色。（常用的顯色劑下表）。層析完畢后，用顯色劑顯色。（常用的顯色劑下表）。l用紫外光照射，使能發(fā)熒光的物質(zhì)發(fā)生熒光。對于不發(fā)熒用紫外光照射，使能發(fā)熒光的物質(zhì)發(fā)生熒光。對于不發(fā)熒光的無色物質(zhì)，可以用發(fā)熒光的吸附劑。就是在普通吸附劑光的無色物質(zhì)，可以用發(fā)熒光的吸附劑。就是在普通吸附劑中加入某種能在在紫外光照射下發(fā)熒光的無機物如硫酸鋅中加入某種能在在紫外光照射下

17、發(fā)熒光的無機物如硫酸鋅或有機染料。該熒光染料不致降低吸附劑的活性，且在給定或有機染料。該熒光染料不致降低吸附劑的活性，且在給定的吸附條件下又不會被洗提出來為宜。這時在柱上形成的色的吸附條件下又不會被洗提出來為宜。這時在柱上形成的色層帶相應(yīng)地改變了吸附劑原來的熒光的強度，借這種改變可層帶相應(yīng)地改變了吸附劑原來的熒光的強度，借這種改變可以了解色層帶的位置。常用的熒光染料如桑色素以了解色層帶的位置。常用的熒光染料如桑色素morinmorin用于三氧化鋁柱，小檗堿用于三氧化鋁柱，小檗堿berberineberberine用于硅膠柱，二苯用于硅膠柱，二苯基熒光吲啶磺酸基熒光吲啶磺酸diphenylflu

18、orin-dine sulfone diphenylfluorin-dine sulfone sulfonic acidsulfonic acid及桑色素用于氧化鎂或氫氧化鈣柱。及桑色素用于氧化鎂或氫氧化鈣柱。l制備有色衍生物，然后進(jìn)行色譜分析。制備有色衍生物，然后進(jìn)行色譜分析。 l柱上層析常用的各種顯色劑柱上層析常用的各種顯色劑* * l化合物化合物 顯色劑顯色劑 l烯烯 烴烴 先用先用3mg3mg藏紅溶于藏紅溶于25 mL25 mL水的溶液處理，然后用水的溶液處理，然后用0.1mol/LKI0.1mol/LKI溶液加有溶液加有4545滴處置，藏滴處置，藏l 紅的原來顏色被漂白，但當(dāng)含有不飽

19、和烴、砜、二芳基胺或三芳基胺存在時，色層帶上紅的原來顏色被漂白，但當(dāng)含有不飽和烴、砜、二芳基胺或三芳基胺存在時，色層帶上l 紅色重新出現(xiàn)。紅色重新出現(xiàn)。 l醇類醇類 四個碳原子以上的醇可先用每升含四個碳原子以上的醇可先用每升含200200至至300mg300mg釩酸銨溶液處理，再用釩酸銨溶液處理，再用8-8-羥基喹啉溶于羥基喹啉溶于l 6% 6%的乙酸所成的的乙酸所成的2.5%2.5%的溶液處理。色層帶在暗綠色背景上顯橙棕色。的溶液處理。色層帶在暗綠色背景上顯橙棕色。l酚類酚類 1 1香草醛溶于濃硫酸所成香草醛溶于濃硫酸所成1%1%的溶液，色層帶顯淡紅至紅色。的溶液，色層帶顯淡紅至紅色。l 2

20、 2重氮鹽溶液，色層帶顯黃至紅色。重氮鹽溶液，色層帶顯黃至紅色。l醛與酮類醛與酮類 用用2,4-2,4-二硝基苯肼飽和的二硝基苯肼飽和的2mol/L2mol/L溶液，色層帶顯黃色，醛用希夫試劑處理，顯紫紅溶液，色層帶顯黃色，醛用希夫試劑處理，顯紫紅色。色。l 胺胺 1 1四氯對醌在四氯對醌在1,4-1,4-二氧六環(huán)中的飽和溶液是對脂肪胺的最好顯色劑，在橙色二氧六環(huán)中的飽和溶液是對脂肪胺的最好顯色劑，在橙色背景上色層背景上色層l 帶顯綠色。帶顯綠色。l 2 21%1%氟硼酸對硝基亞氮鹽水溶液是檢出芳胺色層帶的很有效顯色劑。色氟硼酸對硝基亞氮鹽水溶液是檢出芳胺色層帶的很有效顯色劑。色層帶呈橙至紅層

21、帶呈橙至紅 l 色，酚類也有同樣反應(yīng)。色，酚類也有同樣反應(yīng)。l 硫醇硫醇 于于7.5gNaOH7.5gNaOH在在40mL40mL水內(nèi)所形成的溶液中加入水內(nèi)所形成的溶液中加入1.25gPbO1.25gPbO作為顯色劑，如有黃色的色層帶作為顯色劑，如有黃色的色層帶出現(xiàn)，出現(xiàn)，l 表示有硫醇存在，這時如再用硫在苯中的飽和溶液處理，色層帶即轉(zhuǎn)變?yōu)榛疑梁谏?。表示有硫醇存在，這時如再用硫在苯中的飽和溶液處理，色層帶即轉(zhuǎn)變?yōu)榛疑梁谏?。l 硫醚硫醚 以以0.5gKI0.5gKI溶于溶于25mL25mL水中，再加入兩滴水中，再加入兩滴2M2M氯化金溶液，作顯色劑，硫醚色層帶在粉紅色氯化金溶液，作顯色劑，硫

22、醚色層帶在粉紅色背景背景l(fā) 上顯棕至黑色，胺有同樣反應(yīng)，但胺的吸附力強，留在柱的上端，因此得與硫醚區(qū)別。上顯棕至黑色，胺有同樣反應(yīng)，但胺的吸附力強，留在柱的上端，因此得與硫醚區(qū)別。l 芳環(huán)芳環(huán) 將將10mL10mL濃硫酸與濃硫酸與0.2mL37%0.2mL37%的甲醛溶液混合作顯色劑，單環(huán)芳烴顯紅的色帶。一般說來，的甲醛溶液混合作顯色劑，單環(huán)芳烴顯紅的色帶。一般說來，雙環(huán)或多環(huán)芳雙環(huán)或多環(huán)芳 l 烴顯綠色或藍(lán)綠色色層帶，此種溶液必須當(dāng)天配制。烴顯綠色或藍(lán)綠色色層帶，此種溶液必須當(dāng)天配制。l * *本表所列各顯色劑是在以苯作為顯層劑，以硅膠作為吸附劑的情況下使用的，本表中各試劑的本表所列各顯色劑

23、是在以苯作為顯層劑，以硅膠作為吸附劑的情況下使用的，本表中各試劑的百分百分l濃度，均指重量百分比。濃度，均指重量百分比。l2柱上離子交換色譜法柱上離子交換色譜法 l1離子交換樹脂離子交換樹脂 l柱上離子交換色譜主要用來除去樣品中微量電柱上離子交換色譜主要用來除去樣品中微量電介質(zhì)雜質(zhì)。其裝置與柱上吸附色譜相同。固定介質(zhì)雜質(zhì)。其裝置與柱上吸附色譜相同。固定相為離子交換樹脂。相為離子交換樹脂。l離子交換樹脂的種類很多，但可分為兩大類型：離子交換樹脂的種類很多，但可分為兩大類型：陰離子交換樹脂和陽離子交換樹脂。均為高分陰離子交換樹脂和陽離子交換樹脂。均為高分子化合物。子化合物。 陽離子交換樹脂一般為陽

24、離子交換樹脂一般為Na型高分子鈉鹽）。使用前要用稀型高分子鈉鹽）。使用前要用稀鹽酸浸泡處理為鹽酸浸泡處理為H型，然后進(jìn)行交換，以磺化交聯(lián)聚苯乙烯型，然后進(jìn)行交換，以磺化交聯(lián)聚苯乙烯為例，再生和交換原理如下表示：為例，再生和交換原理如下表示：此外還有交聯(lián)丙烯酸鹽或磷酸鹽等陽離子交換樹脂。此外還有交聯(lián)丙烯酸鹽或磷酸鹽等陽離子交換樹脂。 CH CH2CH2CHCHCHCH2CH2SO3- Na+Mg+Ca+固定相+HCl再生交換液相CH CH2CH2CHCHCHCH2CH2SO3H+Mg+Na+Ca+固定相液相 陰離子交換樹脂一般為高分子的氯化季銨鹽化合物，稱陰離子交換樹脂一般為高分子的氯化季銨鹽化

25、合物，稱ClCl型，型，使用前要用稀堿處理為使用前要用稀堿處理為OHOH型，然后交換，以交聯(lián)聚苯乙烯氯化型，然后交換，以交聯(lián)聚苯乙烯氯化季銨鹽為例，其再生和交換如下：季銨鹽為例，其再生和交換如下： 此外，其它類型陰離子交換樹脂還有交聯(lián)丙烯酸仲銨型、叔銨此外，其它類型陰離子交換樹脂還有交聯(lián)丙烯酸仲銨型、叔銨型或季銨型。型或季銨型。 液相SO42-Cl-Ac-+液相固定相CH2N+(CH3)3OH-CHCH2交換再生NaOH+固定相SO42-Ac-CH2N+(CH3)3Cl-CHCH22） 裝柱：取一支裝柱：取一支400mm10mm滴定管，下端放少許玻滴定管，下端放少許玻璃棉，關(guān)閉活塞，將處理好的

26、樹脂倒入至璃棉，關(guān)閉活塞，將處理好的樹脂倒入至150200mm高度高度即可。即可。 由于每種樹脂都有一定的交換能力，一般每毫克干樹脂由于每種樹脂都有一定的交換能力，一般每毫克干樹脂約可交換約可交換19mmol離子，但一般操作中，只需交換二分之離子，但一般操作中，只需交換二分之一最大量即可。據(jù)此就可算出樹脂的用量及柱體的大小。一最大量即可。據(jù)此就可算出樹脂的用量及柱體的大小。3交換：將待測樣品液由裝好的柱上部倒入，由交換：將待測樣品液由裝好的柱上部倒入，由柱下部放出，或由下部加入而由上部排出。但流速柱下部放出，或由下部加入而由上部排出。但流速應(yīng)以待處理溶液在柱內(nèi)有一定停留時間為準(zhǔn)。應(yīng)以待處理溶液

27、在柱內(nèi)有一定停留時間為準(zhǔn)。4洗提：樣品液處理完后，用另一種電解質(zhì)通入洗提：樣品液處理完后，用另一種電解質(zhì)通入柱內(nèi)，將已交換于柱上的離子用新的離子頂替出來，柱內(nèi)，將已交換于柱上的離子用新的離子頂替出來，從而達(dá)到分離或提取目的。從而達(dá)到分離或提取目的。5再生：再生是樹脂恢復(fù)為再生：再生是樹脂恢復(fù)為H型或型或OH型的操作，型的操作，此步可與洗提為同步，也可不同步，不同步時，即此步可與洗提為同步，也可不同步，不同步時，即用酸或堿浸泡樹脂即可。用酸或堿浸泡樹脂即可。l6舉例：舉例：lA 糖中除酸葡萄糖中除糖中除酸葡萄糖中除去檸檬酸）去檸檬酸）l向陰離子交換柱中通入糖向陰離子交換柱中通入糖液，則檸檬酸負(fù)離

28、子被交液，則檸檬酸負(fù)離子被交換于樹脂上，排出糖液，換于樹脂上，排出糖液，則達(dá)到分離目的。樹脂用則達(dá)到分離目的。樹脂用碳酸銨液洗提，則得檸檬碳酸銨液洗提，則得檸檬酸銨溶液。然后樹脂再用酸銨溶液。然后樹脂再用NaOH液再生。液再生。B 除去羰基化合物除去羰基化合物異丙醇中除去少量丙酮。異丙醇中除去少量丙酮。向陰離子交換柱中加入亞硫酸氫鈉液，則亞硫酸氫根負(fù)離向陰離子交換柱中加入亞硫酸氫鈉液，則亞硫酸氫根負(fù)離子交換于樹脂上，用水洗至無堿性，然后通入異丙醇丙酮子交換于樹脂上，用水洗至無堿性，然后通入異丙醇丙酮樣品，則丙酮與交換于柱上之亞硫酸氫根負(fù)離子加成而留樣品，則丙酮與交換于柱上之亞硫酸氫根負(fù)離子加成

29、而留于樹脂上，而余下之異丙醇則流出，從而達(dá)到分離目的。于樹脂上，而余下之異丙醇則流出，從而達(dá)到分離目的。然后向柱中再通入稀然后向柱中再通入稀NaCl液，則氯離子頂替出亞硫酸氫鈉液，則氯離子頂替出亞硫酸氫鈉和丙酮，完成洗滌任務(wù)，最后樹脂再于堿液中再生。和丙酮，完成洗滌任務(wù)，最后樹脂再于堿液中再生。離子交換色譜交換物質(zhì)量很小，只適于半微量樣品離子交換色譜交換物質(zhì)量很小，只適于半微量樣品中微量雜質(zhì)的除去。另外一般要求樣品為水溶液時中微量雜質(zhì)的除去。另外一般要求樣品為水溶液時才好交換，而且交換下來的洗提液都很稀，組分回才好交換，而且交換下來的洗提液都很稀，組分回收困難，故對于樣品已處于很稀溶液時而且再

30、無更收困難，故對于樣品已處于很稀溶液時而且再無更好分離方法時才用此法。好分離方法時才用此法。除了上述吸附柱色譜和離子交換柱色譜外，除了上述吸附柱色譜和離子交換柱色譜外，還有凝膠柱色譜和分配柱色譜。還有凝膠柱色譜和分配柱色譜。 紙上色譜法是分配色譜法中較常用的。紙上色譜法是分配色譜法中較常用的。最簡單操作之一是取一條濾紙，懸掛在一個支架上，使它的底最簡單操作之一是取一條濾紙，懸掛在一個支架上，使它的底端浸入一盛有溶劑的淺皿中。在紙下端剛好高出液面部分端浸入一盛有溶劑的淺皿中。在紙下端剛好高出液面部分用毛細(xì)管滴上一滴試液。將支架置于密閉容器內(nèi)，使紙周用毛細(xì)管滴上一滴試液。將支架置于密閉容器內(nèi)，使紙

31、周圍為溶劑蒸汽所飽和，靜置數(shù)小時，在這期間，溶劑由于圍為溶劑蒸汽所飽和，靜置數(shù)小時，在這期間，溶劑由于紙上毛細(xì)管作用而沿濾紙上升。當(dāng)溶劑前沿升到快近紙條紙上毛細(xì)管作用而沿濾紙上升。當(dāng)溶劑前沿升到快近紙條上端時，取下濾紙使之干燥。如果試液中的化合物是有顏上端時，取下濾紙使之干燥。如果試液中的化合物是有顏色的，則紙上會顯出各組分斑點。較常見的情況是，層析色的，則紙上會顯出各組分斑點。較常見的情況是，層析的化合物是無色的，那么，待紙干燥后，于紙上噴以顯色的化合物是無色的，那么，待紙干燥后，于紙上噴以顯色劑而使化合物斑點顯色。上法為上行紙上色譜法。劑而使化合物斑點顯色。上法為上行紙上色譜法。第二節(jié)第二

32、節(jié) 紙上色譜法紙上色譜法同理也有下行紙上色譜法。上行法一般需時間較多，同理也有下行紙上色譜法。上行法一般需時間較多，但溶質(zhì)在兩相中的分配較易達(dá)到平衡。所以產(chǎn)生的斑但溶質(zhì)在兩相中的分配較易達(dá)到平衡。所以產(chǎn)生的斑點面積緊湊園整。組分易于分開。下行法快，省時間，點面積緊湊園整。組分易于分開。下行法快，省時間，對易分離化合物最好采用下行法。此外也可采用雙向?qū)σ追蛛x化合物最好采用下行法。此外也可采用雙向紙上色譜法。紙上色譜法。紙上色譜法的紙上色譜法的Rf值，通常要受到下列因素的影響：（值，通常要受到下列因素的影響：（1紙的質(zhì)量；（紙的質(zhì)量；（2溫度；（溫度；（3化合物取量；（化合物取量；（4溶劑；溶劑；

33、（5試樣原點與溶劑液面之間的距離。試樣原點與溶劑液面之間的距離。l利用紙上色譜法的利用紙上色譜法的Rf值作為鑒定有機化合物的憑據(jù)時，最好用值作為鑒定有機化合物的憑據(jù)時，最好用已知標(biāo)準(zhǔn)樣品在相同實驗條件下，平行對照層析。如果兩者已知標(biāo)準(zhǔn)樣品在相同實驗條件下，平行對照層析。如果兩者Rf值相同，方可斷定是同一物質(zhì)。值相同，方可斷定是同一物質(zhì)。l為了使紙上色譜法得到正確結(jié)果，必須注意下列事項：為了使紙上色譜法得到正確結(jié)果，必須注意下列事項：l不要用手指直接接觸層析部分的濾紙，以防手上油漬染污濾不要用手指直接接觸層析部分的濾紙，以防手上油漬染污濾紙。紙。l濾紙必須剪平整。濾紙必須剪平整。l濾紙周圍必須被

34、溶劑蒸氣所飽和。否則就有可能當(dāng)顯層劑達(dá)濾紙周圍必須被溶劑蒸氣所飽和。否則就有可能當(dāng)顯層劑達(dá)到紙上某一處時，它的蒸發(fā)速度大于毛細(xì)管吸引速度，致使已到紙上某一處時，它的蒸發(fā)速度大于毛細(xì)管吸引速度，致使已經(jīng)分開的各組分重新在這里聚集。隨溶劑蒸氣壓的大小不同和經(jīng)分開的各組分重新在這里聚集。隨溶劑蒸氣壓的大小不同和層析缸的大小不同，使容器中充滿溶劑飽和蒸氣的時間可以由層析缸的大小不同，使容器中充滿溶劑飽和蒸氣的時間可以由幾分鐘至數(shù)小時。幾分鐘至數(shù)小時。l 所用有機溶劑一般需要事先用水飽和，以便當(dāng)它在紙面所用有機溶劑一般需要事先用水飽和，以便當(dāng)它在紙面上移動時，有足夠水分供給濾紙吸附。不過溶劑中水分不上移

35、動時，有足夠水分供給濾紙吸附。不過溶劑中水分不能太多，否則層析時，得不到良好分離。一般含水量不超能太多，否則層析時，得不到良好分離。一般含水量不超過過1020%（重量百分比）。（重量百分比）。此外使用蒸氣壓太低的溶劑有時不太合適。因為它們很難此外使用蒸氣壓太低的溶劑有時不太合適。因為它們很難干燥除去，以致影響顯色反應(yīng)。使用蒸氣壓太高的溶劑要干燥除去，以致影響顯色反應(yīng)。使用蒸氣壓太高的溶劑要注意它們對溫度的變化很敏感。容易在紙上蒸發(fā)逸去，以注意它們對溫度的變化很敏感。容易在紙上蒸發(fā)逸去，以致當(dāng)溫度控制不嚴(yán)時，往往引起液相的不規(guī)則變化。致當(dāng)溫度控制不嚴(yán)時，往往引起液相的不規(guī)則變化。進(jìn)行紙上色譜時，

36、往往采用混合溶劑。下表中列舉了一些進(jìn)行紙上色譜時，往往采用混合溶劑。下表中列舉了一些有機化合物進(jìn)行紙上色譜分析法所常用的溶劑和顯色劑。有機化合物進(jìn)行紙上色譜分析法所常用的溶劑和顯色劑。l某些有機化合物紙上層析所常用的溶劑和顯色劑某些有機化合物紙上層析所常用的溶劑和顯色劑l化合物化合物 溶劑系統(tǒng)溶劑系統(tǒng) 斑點顯色劑斑點顯色劑l有機酸有機酸 甲酸與下列溶劑混合：乙醇、丙醇甲酸與下列溶劑混合：乙醇、丙醇-2， 溴甲酚綠或溴酚藍(lán)在乙醇中的溶液。溴甲酚綠或溴酚藍(lán)在乙醇中的溶液。 l 正丁醇及其它醇或酮正丁醇及其它醇或酮l酸的酰肼酸的酰肼 丙酮飽和的丙酮飽和的pH11.6的緩沖液的緩沖液 化合物本身有色化合物本身有色l羥基及羰基酸羥基及羰基酸 甲苯甲苯-乙