常量肉湯稀釋法

1、常量肉湯稀釋法抗菌藥物貯存液制備抗菌藥物貯存液濃度不應低于1000g/ml( 如 1280 g/ml) 或 10 倍于最高測定濃度。 溶解度低的抗菌藥物可稍低于上述濃度。 抗菌藥物直接購自廠商或相關機構。所需抗菌藥物溶液量或粉劑量可公式進行計算。例如：需配制 100 ml 濃度為 1280g/ml 的抗生素貯存液，所用抗生素為粉劑，其藥物的有效力為 750 g/mg。用分析天平精確稱取抗生素粉劑的量為 mg。根據(jù)公式計算所需稀釋劑用量為：（ mg×750 g/ml ） /1280 g/ml= ，然后將 mg抗生素粉劑溶解于稀釋劑中。制備抗菌藥物貯存液所用的溶劑和稀釋劑見表5。配制好的

2、抗菌藥物貯存液應貯存于 -60 以下環(huán)境，保存期不超過 6 個月。藥敏試驗用抗菌藥物濃度范圍 根據(jù) NCCLS抗菌藥物敏感性試驗操作標準，藥物濃度范圍應包含耐藥、中介和敏感分界點值，特殊情況例外。培養(yǎng)基 NCCLS推薦使用 Mueller-Hinton （MH）肉湯， 。需氧菌及兼性厭氧菌在此培養(yǎng)基中生長良好。 在測試葡萄球菌對苯唑西林的敏感性時， 應在肉湯中加入 2%（ W/V）氯化鈉，按制造廠家的要求配制需要量的 MH肉湯。嗜血桿菌屬菌使用 HTM肉湯，肺炎鏈球菌和其它鏈球菌使用含 2%5%溶解馬血的 MH肉湯。接種物的制備 有 2 種方法配制接種物，一是細菌生長方法，用接種環(huán)挑取形態(tài)相似

3、待檢菌落 3-5 個，接種于 4-5ml 的水解酪蛋白（ MH）肉湯中，35孵育 2-6h 。增菌后的對數(shù)生長期菌液用生理鹽水或 MH肉湯校正濃度至麥氏比濁標準，約含12× 108CFU/ml。二是直接菌落懸液配制法，對某些苛養(yǎng)菌，如流感嗜血桿菌、淋病奈瑟菌和鏈球菌及甲氧西林耐藥的葡萄球菌等菌株，推薦直接取培養(yǎng)1824h 的菌落調配成麥氏比濁標準的菌懸液。用MH肉湯將上述菌懸液進行1100 稀釋后備用。注意應在15 分鐘內接種完配制好的接種物，并取一份接種物在非選擇性瓊脂平板上傳代培養(yǎng)，以檢查接種物純度。稀釋抗菌藥物的制備及菌液接種取無菌試管（ 13×100mm）13 支，

4、排成一排，除第 1 管加入肉湯外，其余每管加入 MH肉湯 1ml，在第 1 管加入抗菌藥物原液（如 1280g/ml ） 混勻，然后吸取 1ml 至第 2 管，混勻后再吸取 1ml 至第 3 管，如此連續(xù)倍比稀釋至第 11 管，并從第 11 管中吸取 1ml 棄去，第 12 管為不含藥物的生長對照。此時各管藥物濃度依次為256、128、64、32、16、8、4、2、1、 g/ml 。然后在每管內加入上述制備好的接種物各 1ml，使每管最終菌液濃度約為 5×105CFU/ml。第 1 管至第 11 管藥物濃度分別為 128、64、32、16、8、4、2、1、05、 g/ml 。孵育 將

5、接種好的稀釋管塞好塞子， 置 35普通空氣孵箱中孵育1620h；嗜血桿菌和鏈球菌在普通空氣孵箱中孵育2024h；對可能的耐甲氧西林葡萄球菌和耐萬古霉素腸球菌應持續(xù)孵育滿24h。結果判斷與解釋在讀取和報告所測試菌株的MIC 前，應檢查生長對照管的細菌生長情況是否良好， 同時還應檢查接種物的傳代培養(yǎng)情況以確定其是否污染，質控菌株的 MIC值是否處于質控范圍。以肉眼觀察，藥物最低濃度管無細菌生長者，即為受試菌的 MIC。甲氧芐胺嘧啶或磺胺藥物的肉湯稀釋法終點判斷，與陽性生長對照管比較抑制80%細菌生長管藥物濃度為受試菌MIC。根據(jù) NCCLS推薦的分界點值標準，判斷耐藥（resistant,R）、敏感 (susceptible,S) 或中介（ intermediate, I ）。 S 表示被測菌株所引起的感染可以用該抗菌藥物的常用劑量治療有效，禁忌癥除外。 R 指該菌不能被抗菌藥物的常用劑量在組織液內或血液中所達到的濃度所抑制，或屬于具有特定耐藥機理（如 - 內酰胺酶），所以臨床治療效果不佳。 I 是指 MIC接近藥物的血液或組織液濃度，療效低于敏感菌。 還表示被測