食源性生物活性肽抗小鼠運(yùn)動(dòng)性疲勞的研究

1、食源性生物活性肽抗小鼠運(yùn)動(dòng)性疲勞的研究    摘要：探討了食源性生物活性肽對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間、血清尿素氮、肝糖原和血乳酸含量等的影響.結(jié)果表明：相對(duì)于對(duì)照組，該食源性生物活性肽能顯著延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間(P<0.05)，顯著提高肝糖原含量（P<0.05），顯著降低血清尿素氮含量和血乳酸含量（P<0.05）.說(shuō)明該食源性生物活性肽具有抗小鼠運(yùn)動(dòng)性疲勞的作用，為其在運(yùn)動(dòng)食品中的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù).關(guān)鍵詞：抗疲勞；運(yùn)動(dòng)性疲勞；食源性生物活性肽；小鼠0前言運(yùn)動(dòng)性疲勞是由于運(yùn)動(dòng)引起機(jī)體生理生化改變而導(dǎo)致機(jī)體運(yùn)動(dòng)能力暫時(shí)降低的現(xiàn)象1. 疲勞是在機(jī)體出

2、現(xiàn)威脅生命的過(guò)度機(jī)能衰竭時(shí)產(chǎn)生的一種保護(hù)性反應(yīng)，它的產(chǎn)生提醒工作者應(yīng)減低工作強(qiáng)度或終止運(yùn)動(dòng)以免機(jī)體受到損傷2.目前，隨著人們工作壓力的加大和生活節(jié)奏的加快，疲勞已成為當(dāng)今世界一種間接損壞身體甚至直接導(dǎo)致許多疾病產(chǎn)生的誘因，疲勞更是被美國(guó)國(guó)家疾病控制和預(yù)防中心視為“21 世紀(jì)人類的最大敵人”3. 當(dāng)今世界各國(guó)均十分重視抗疲勞及提高運(yùn)動(dòng)能力的食品的研究開(kāi)發(fā)，而且將此類運(yùn)動(dòng)食品稍加改造，還可發(fā)展為適應(yīng)多種特殊職業(yè)的食品如適用于高原地區(qū)作業(yè)人員、高溫作業(yè)人員或軍事活動(dòng)人員等的專用食品.為了觀察和探討食源性生物活性肽對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)性疲勞的調(diào)節(jié)作用，作者按照衛(wèi)生部發(fā)布的保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊(cè)4對(duì)食

3、源性生物活性肽對(duì)小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)、肝糖原、血清尿素氮和血乳酸含量的影響進(jìn)行了研究，旨在為食源性活性肽在運(yùn)動(dòng)食品中的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù).1材料和方法1.1 材料1.1.1試驗(yàn)動(dòng)物二級(jí)昆明種雄性小鼠，體重 1822 g，購(gòu)自第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心.1.1.2樣品與試劑食源性生物活性肽：通過(guò)復(fù)合酶解大豆蛋白、乳清蛋白、新鮮雞蛋、牛奶等混合原料制備，淡黃色粉末，由上海弭陽(yáng)生物技術(shù)有限公司提供. 人體推薦用量為 1.20 g /（人·d）. 用蒸餾水配制各劑量濃度.血清尿素氮試劑盒：中生北控生物科技股份有限公司；肝糖原、血乳酸試劑盒：南京建成生物工程研究所；其他試劑為國(guó)產(chǎn)色譜純或分析純.1.2

4、儀器游泳箱：自制；紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)：上海美譜達(dá)儀器有限公司；全自動(dòng)生化分析儀：美國(guó) AGII；TGL16B 臺(tái)式離心機(jī)：上海安亭科學(xué)儀器廠；旋渦混合器：上海滬西分析儀器廠；鉛箔、手術(shù)器械、微量加樣器等.1.3 方法1.3.1 試驗(yàn)方法將小鼠隨機(jī)分組，組間體重?zé)o顯著差異. 將食源性生物活性肽設(shè)計(jì)為高、中、低 3 個(gè)劑量，分別為 0.40、0.20、0.10 g/（kg·bw），另設(shè)一個(gè)溶劑對(duì)照組（蒸餾水）.負(fù)重游泳試驗(yàn)、血清尿素氮測(cè)定、血乳酸測(cè)定、肝糖原測(cè)定 4 項(xiàng)試驗(yàn)均設(shè)上述 3 個(gè)劑量組和1個(gè)溶劑對(duì)照組，每組10只小鼠. 4項(xiàng)試驗(yàn)各劑量組均按上 述劑量 每天經(jīng)口給予 受 試 物1

5、次（0.2 mL/（10g·bw）灌胃容量），溶劑對(duì)照組給予等容量蒸餾水. 連續(xù) 30 d 后，分別進(jìn)行各項(xiàng)指標(biāo)的測(cè)定.1.3.2測(cè)定方法41.3.2.1負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)經(jīng)預(yù)游泳，選姿勢(shì)正確小鼠稱重、隨機(jī)分組末次給予受試物后30 min，小鼠于水溫（25±1）下作負(fù)重(5%體重鉛箔)游泳試驗(yàn)，記錄各組小鼠游泳時(shí)間，計(jì)算各組平均游泳時(shí)間.1.3.2.2血清尿素氮測(cè)定末次給予受試物30 min后，小鼠不負(fù)重游泳90 min，休息60 min，擦干拔眼球采血，按血清尿素氮試劑盒要求進(jìn)行血清尿素氮測(cè)定.1.3.2.3肝糖原測(cè)定末次給予受試物30 min后，處死小鼠，解剖取肝臟，準(zhǔn)確稱取

6、 100 mg / 鼠，按肝糖原試劑盒要求進(jìn)行肝糖原含量測(cè)定.1.3.2.4 血乳酸測(cè)定末次給予受試物后30 min，小鼠在水中不負(fù)重游泳 10 min. 于游泳前、游泳后不休息及游泳后休息 20 min，分別內(nèi)眥采血，測(cè)定全血血乳酸含量.1.3.3統(tǒng)計(jì)分析方法試驗(yàn)結(jié)果表示方式為“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)偏差”，采用SPSS 13 軟件進(jìn)行方差分析和顯著性檢驗(yàn).2 結(jié)果與分析2.1 食源性生物活性肽對(duì)小鼠體重的影響經(jīng)口給予小鼠不同劑量的受試物 30 d 后，各劑量組小鼠體重與溶劑對(duì)照組之間差異均無(wú)顯著性（P>0.05），表明該受試物對(duì)小鼠的體重增長(zhǎng)無(wú)不良影響.2.2 小鼠負(fù)重游泳試驗(yàn)結(jié)果（表

7、 1）由表1可見(jiàn)，高、中、低劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間均較溶劑對(duì)照組明顯延長(zhǎng)，游泳時(shí)間分別提高了 66%、55%和 36%. 經(jīng)方差分析，高、中劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間較溶劑對(duì)照組有顯著性提高（P<0.05），低劑量組與溶劑對(duì)照組間差異無(wú)顯著性（P>0.05），表明該食源性生物活性肽具有延長(zhǎng)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的作用.2.3食源性生物活性肽對(duì)小鼠血清尿素氮含量的影響（表2）由表 2 可見(jiàn)，各劑量組小鼠血清尿素氮含量均較溶劑對(duì)照組明顯降低. 經(jīng)方差分析，高劑量組小鼠血清尿素氮含量較溶劑對(duì)照組有顯著性降低（P<0.05），中、低劑量組與溶劑對(duì)照組間差異不顯著性（P>0.05），表明該

8、食源性生物活性肽能顯著減少疲勞小鼠血清尿素氮的產(chǎn)生.2.4食源性生物活性肽對(duì)小鼠肝糖原含量的影響（表 3）由表 3 可見(jiàn)，高、中、低劑量組小鼠的肝糖原含量均明顯高于溶劑對(duì)照組，分別提高了 33%、17%和 12%，其中高劑量組小鼠的肝糖原含量較溶劑對(duì)照組有顯著性升高（P<0.05），表明該食源性生物活性肽具有促進(jìn)小鼠的肝糖原儲(chǔ)備的作用.2.5 食源性生物活性肽對(duì)小鼠血乳酸水平的影響（表 4）由表4可見(jiàn)，高、中劑量組小鼠血乳酸產(chǎn)生速率明顯低于溶劑對(duì)照組；中、低劑量組小鼠血乳酸清除速率均明顯高于溶劑對(duì)照組，其中中劑量組小鼠血乳酸清除速率達(dá)溶劑對(duì)照的 1.2 倍；高劑量組小鼠3個(gè)時(shí)間點(diǎn)血乳酸曲

9、線下面積明顯小于溶劑對(duì)照組，且差異有顯著性（P<0.05）.3 結(jié)論小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的長(zhǎng)短反映了小鼠運(yùn)動(dòng)耐力的高低. 小鼠服用該食源性生物活性肽 30 d 后,高、中劑量組小鼠負(fù)重游泳時(shí)間較溶劑對(duì)照組有顯著性提高（P<0.05），說(shuō)明小鼠運(yùn)動(dòng)耐力水平得到有效提高，而耐力水平的提高則是機(jī)體抗疲勞能力增強(qiáng)的最有力表觀5.從生化角度來(lái)說(shuō)，高強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)后, 機(jī)體血尿素氮含量會(huì)明顯升高、肝糖原含量明顯下降. 而本次試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)高劑量組小鼠血清尿素氮含量較溶劑對(duì)照組有顯著性降低（P<0.05），說(shuō)明該食源性生物活性肽可加大機(jī)體自身能量供給，從而減少了通過(guò)蛋白質(zhì)等含氮化合物的分解代謝供能，使血清

10、尿素氮含量相對(duì)降低，從而起到了抗疲勞的作用；同時(shí)還發(fā)現(xiàn)高劑量組小鼠肝糖原含量較溶劑對(duì)照組有顯著性升高（P<0.05），說(shuō)明可以提高肝糖原的合成速度，促進(jìn)肝糖原的積累. 而肝糖原是運(yùn)動(dòng)中所消耗血糖的來(lái)源，肝糖原儲(chǔ)備的增加，就可為機(jī)體提供更多的能量以提高運(yùn)動(dòng)耐力達(dá)到抗疲勞的目的6.乳酸是在無(wú)氧條件下機(jī)體糖酵解供能體系的終產(chǎn)物，乳酸的增加將導(dǎo)致肌肉中 H+濃度上升，pH 值下降，進(jìn)而引起一系列生化變化，是導(dǎo)致運(yùn)動(dòng)性疲勞產(chǎn)生的重要原因. 乳酸在肌肉中堆積越多，疲勞的程度就越嚴(yán)重7. 機(jī)體中乳酸積累的程度取決于乳酸產(chǎn)生與清除的速率，那么運(yùn)動(dòng)性疲勞程度即與乳酸產(chǎn)生與清除的速率直接相關(guān). 乳酸在體內(nèi)消

11、除的代謝去路主要是在骨骼肌、心肌中氧化為丙酮酸，最終通過(guò)三羧酸循環(huán)氧化為二氧化碳和水8. 所以，運(yùn)動(dòng)后血乳酸的消除速率可以反映機(jī)體有氧代謝能力，即血乳酸消除速率越快表示機(jī)體有氧代謝能力越強(qiáng). 中、低劑量組小鼠血乳酸清除速率均明顯高于溶劑對(duì)照組，其中中劑量組小鼠血乳酸清除速率達(dá)溶劑對(duì)照的1.2倍；高劑量組小鼠 3 個(gè)時(shí)間點(diǎn)血乳酸曲線下面積明顯小于溶劑對(duì)照組，且差異有顯著性（P<0.05）. 說(shuō)明該食源性生物活性肽可以提高小鼠有氧代謝能力，減少了乳酸在機(jī)體內(nèi)的積累程度，從而達(dá)到抗疲勞的作用.根據(jù)保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范實(shí)施手冊(cè)中判定標(biāo)準(zhǔn)：“負(fù)重游泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果陽(yáng)性，且血乳酸、血清尿素氮、肝糖原 3 項(xiàng)指標(biāo)中任意 2 項(xiàng)陽(yáng)性，可判定該受試樣品具有緩解體力疲勞功能的作用”4.結(jié)合試驗(yàn)結(jié)果，4項(xiàng)指標(biāo)均為陽(yáng)性，可以判定該食源性生物活性肽具有抗小鼠運(yùn)動(dòng)性疲勞的作用. 本研究為食源性生物活性肽在功能性食品（運(yùn)動(dòng)食品、運(yùn)動(dòng)飲料等）中的應(yīng)用提供試驗(yàn)依據(jù)，對(duì)促進(jìn)人類體能恢復(fù)、身體健康具有積極的意義.參考