實(shí)驗(yàn)常用試劑、緩沖液,培養(yǎng)基的配制方法-孤島顛人收藏

1、生物實(shí)驗(yàn)常用試劑、緩沖液，培養(yǎng)基的配制方法 孤島顛人收藏1、1M Tris-HCl組份濃度 1 M Tris-HCl （pH 7.4，7.6，8.0）配制量 1L配置方法1. 稱量121.1gTris置于1L燒杯中。2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 按下表量加入濃鹽酸調(diào)節(jié)所需要的pH值。pH值 濃HCl7.4 約70mL7.6 約60mL8.0 約42mL4. 將溶解定容至1L。5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差很大，溫度每升高1，溶液的pH值大約降低0.03個(gè)單位。2、1.5 M Tris-HCl

2、組份濃度 1.5 M Tris-HCl （pH8.8）配制量 1L配置方法稱取181.7gTris置于1L燒杯中。2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 用濃鹽酸調(diào)pH值至8.8。4. 將溶液定容至1L。5. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：應(yīng)使溶液冷卻至室溫后再調(diào)定pH值，因?yàn)門ris溶液的pH值隨溫度的變化差異很大，溫度每升高1，溶液 1的pH值大約降低0.03個(gè)單位。3、10×TE Buffer組份濃度 100 mM Tris-HCl，10 mM EDTA （pH 7.4，7.6，8.0）配制量 1L配置方法1. 量取下列溶液，置于1L燒杯中。1 M Tris-H

3、Cl Buffer（pH7.4，7.6，8.0） 100mL500 mM EDTA（pH8.0） 20mL2. 向燒杯中加入約800mL的去離子水，均勻混合。3. 將溶液定至1L后，高溫高壓滅菌。4. 室溫保存。4、3 M 醋酸鈉組份濃度 3 M 醋酸鈉 （pH5.2）配制量 100mL配置方法稱取40.8gNaOAc3H2O置于100200mL燒杯中，加入約40mL的去離子水?dāng)嚢枞芙?。加入冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至5.2。3. 加入去離子水將溶液定容至100mL。4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。5、 Buffer組份濃度 137 mM NaCl，2.7mM KCl，10 mM Na2HPO4，2 m

4、M KH2PO4配制量 1L配置方法稱量下列試劑，置于1L燒杯中。NaCl 8 gKCl 0.2gNa2HPO4 1.42 gKH2PO4 0.27g2. 向燒杯中加入約800 mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?。滴加HCl將pH值調(diào)節(jié)至7.4，然后加入去離子水將溶液定容至1L。4. 高溫高壓滅菌后，室溫保存。注意：上述PBS Buffer中無二價(jià)陽離子，如需要，可在配方中補(bǔ)充1mM CaCl2和0.5 mM MgCl2。 6、10 M醋酸銨組份濃度 10 M醋酸銨配制量 100mL配置方法1. 稱量77.1g醋酸銨置于100200 mL燒杯中，加入約30 mL的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?.加去離子水將溶

5、液定容至100mL。3.使用0.22m濾膜過濾除菌。4.密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓滅菌。7、Tris- HCl平衡苯酚配置方法使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應(yīng)避免使用。同時(shí)也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須在160對其進(jìn)行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)。操作注意：苯酚腐蝕性極強(qiáng)，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時(shí)應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。所有操作均應(yīng)在

6、通風(fēng)櫥中進(jìn)行，與苯酚接觸過的皮膚部位應(yīng)用大量水清洗，并用肥皂和水洗滌，忌用乙醇。3. 苯酚平衡：因?yàn)樵谒嵝詐H條件下DNA分配于有機(jī)相，因此使用苯酚前必須對苯酚進(jìn)行平衡使其pH值達(dá)到7.8以上，苯酚平衡操作方法如下： 液化苯酚應(yīng)貯存于-20，此時(shí)的苯酚呈現(xiàn)結(jié)晶狀態(tài)。從冰柜中取出的苯酚首先在室溫下放置使其達(dá)到室溫，然后在68水浴中使苯酚充分溶解。 加入羥基喹啉（8-Quinolinol）至終濃度0.1。該化合物是一種還原劑、RNA酶的不完全抑制劑及金屬離子的弱螯合劑，同時(shí)因其呈黃色。有助于方便識別有機(jī)相。 加入等體積的1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分

7、分層后，除去上層水相。 重復(fù)操作步驟。 加入等體積的0.1M Tris-HCl（pH8.0），使用磁力攪拌器攪拌15分鐘，靜置使其充分分層后，除去上層水相。 重復(fù)操作步驟，稍微殘留部分上層水相。 使用pH試紙確認(rèn)有機(jī)相的pH值大于7.8。 將苯酚置于棕色玻璃瓶中4避光保存。8、苯酚/氯仿/異戊醇配置方法說明：從核酸樣品中除去蛋白質(zhì)時(shí)常常使用苯/酚/氯仿/異戊醇（25：24：1）。氯仿可使蛋白（25 ：24 ：1） 質(zhì)變性并有助于液相與有機(jī)相的分離，而異戊醇則有助于消除抽提過程中出現(xiàn)的氣泡。2. 配置方法：將Tris-HCl平衡苯酚與等體積的氯仿/異戊醇（24：1）均勻混合后，移入棕色玻璃瓶中4

8、保存。9、10（W/V）SDS組份濃度 10（W/V）SDS配制量 100mL配置方法稱量10g高純度的SDS置于100200mL燒杯中，加入約80mL的去離子水，68加熱溶解。2. 滴加數(shù)滴濃鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.2。3. 將溶液定容至100mL后，室溫保存。10、2 N NaOH組份濃度 2N NaOH配制量 100mL配置方法量取80mL去離子水置于100200mL塑料燒杯中（NaOH溶解過程中大量放熱，有可能使玻璃燒杯炸裂）。 32. 稱取8g NaOH小心地逐漸加入到燒杯中，邊加邊攪拌。3. 待NaOH完全溶解后，用去離子水將溶液體積定容至100mL。4. 將溶液轉(zhuǎn)移至塑料容器中后，室

9、溫保存。11、2.5 N HCl組份濃度 2.5 N HCl配制量 100mL配置方法1. 在78.4mL的去離子水中加入21.6mL的濃鹽酸（11.6N），均勻混合。2. 室溫保存。12、5 M NaCl組份濃度 5 M NaCl配制量 1L配置方法稱取292.2g NaCl置于1L燒杯中，加入約800mL的去離子水后攪拌溶解。2. 加去離子水將溶液定容至1L后，適量分成小份。3. 高溫高壓滅菌后，4保存。13、20（W/V）Glucose組份濃度 20（W/V）Glucose配制量 100mL配置方法稱取20g Glucose置于100200mL燒杯中，加入約80mL的去離子水后，攪拌溶解

10、。 加去離子水將溶液定容至100mL。高溫高壓滅菌后，4保存。14、Solution I （質(zhì)粒提取用）組份濃度 25 mM Tris-HCl（pH8.0），10mM EDTA，50mM Glucose配制量 1L配置方法量取下列溶液，置于1L燒杯中。1M Tris-HCl（pH8.0） 25mL0.5 M EDTA（pH8.0） 20mL20Glucose（1.11M） 45mLdH2O 910mL2. 高溫高壓滅菌后，4保存。3. 使用前每50 mL的Soliution I中加入2mL的RNase A（20mg/mL）。15、Solution II （質(zhì)粒提取用）組份濃度 250mM Na

11、OH，1（W/V）SDS m配制量 500mL配置方法1.量取下列溶液置于500mL燒杯中。10SDS 50mL2N NaOH 50mL2. 加滅菌水定容至500mL，充分混勻。3. 室溫保存。此溶液保存時(shí)間最好不要超過一個(gè)月。注意：SDS易產(chǎn)生氣泡，不要劇烈攪拌。16、Solution III （質(zhì)粒提取用）組份濃度 3M KOAc，5M CH3COOH配制量 500mL配置方法1. 量取下列溶液置于500mL燒杯中。KOAc 147gCH3COOH 57.5mL2. 加入300mL去離子水后攪拌溶解。3. 加去離子水將溶液定容至500mL。4. 高溫高壓滅菌后，4保存。17、0.5M ED

12、TA組份濃度 0.5 M EDTA (pH8.0)配制量 1L配置方法1.稱取186.1g Na2EDTA2H2O，置于1L燒杯中。2.加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢琛?. 用NaOH調(diào)節(jié)pH值值8.0（約20g NaOH）。注意：pH值至8.0時(shí)，EDTA才能完全溶解。4. 加去離子水將溶液定容至1L。5. 適量分成小份后，高溫高壓滅菌。6. 室溫保存。18、1 M DTT組份濃度 1 M DTT配制量 20mL配置方法1. 稱取3.09g DTT，加入到50mL塑料離心管內(nèi)。2. 加20mL的0.01 M 的NaOAc（pH5.2），溶解后使用0.22m濾器過濾除菌。3. 適量分成小

13、份后，-20保存。19、10mM ATP組份濃度 10mM ATP配制量 20mL配置方法1.稱取121mg Na2ATP3H2O，加入到50mL塑料離心管內(nèi)。2. 加20mL的25mM Tris-HCl（pH8.0），攪拌溶解。3. 適量分成小份，-20保存。分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用培養(yǎng)基的配制方法1、Ampicillin組份濃度 100mg/ml Ampicillin （100mg/ml）配制量 50mL配置方法1. 稱量5g Ampicillin置于50mL離心管中。2. 加入40mL滅菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。3. 用0.22m濾膜過濾除菌。4. 小份分裝（1mL/份）后，-20

14、保存。2、IPTG組份濃度 24mg/mL IPTG （24mg/mL）配制量 50mL 配置方法1. 稱量1.2g IPTG置于50mL離心管中。2. 加入40mL滅菌水，充分混合溶解后，定容至50mL。3. 用0.22m濾膜過濾除菌。4. 小份分裝（1mL/份）后，-20保存。3、X- Gal組份濃度 20mg/mL X- Gal （20mg/mL）配制量 50mL配置方法1. 稱取1g X-Gal置于50mL離心管中。2. 加入40mL DMF（二甲基甲酰胺），充分混合溶解后，定容至50mL。3. 小份分裝（1mL/份）后，-20保存。4、LB培養(yǎng)基組份濃度 1（W/V）Tryptone

15、，0.5（W/V）Yeast Extract，1（W/V）NaCl配制量 1L配置方法1. 稱量下列試劑，置于1L燒杯中Tryptone 10gYeast Extract 5gNaCl 10g2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加5N NaOH（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。4. 高溫高壓滅菌后，4保存。5、LB/Amp培養(yǎng)基組份濃度1（W/V） Tryptone0.5（W/V） Yeast Extract1（W/V） NaCl0.1mg/mL Ampicillin配制量 1L配置方法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中Tryptone 10gYeast Extract

16、5gNaCl 10g2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻５渭?N NaOH（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。4. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L。5. 高溫高壓滅菌后，冷卻至室溫。6. 加入1mL Ampicillin（100mg/mL）后均勻混合。7. 4保存。6、TB培養(yǎng)基組份濃度 1.2（W/V） Tryptone2.4（W/V） Yeast Extract 0.4（V/V） Glycerol17mM KH2PO472mM K2HPO4配制量 1L配置方法1.配制磷酸鹽緩沖液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。2.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。

17、Tryptone 12g Yeast Extract 24gGlycerol 4mL3. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，高溫高壓滅菌。5. 待溶液冷卻至60以下時(shí)，加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液。6. 4保存。7、TB/Apm培養(yǎng)基組份濃度 1.2（W/V） Tryptone2.4（W/V） Yeast Extract0.4（V/V） Glycerol17mM KH2PO472mM K2HPO40.1mg/mL Ampicillin配制量 1L配置方法1. 配制磷酸鹽緩沖液（0.17M KH2PO4，0.72M K2HPO4）100mL。

18、溶解2.31g KH2PO4和2.54g K2HPO4于90mL的去離子水中，攪拌溶解后，加去離子水定容至100mL，高溫高壓滅菌。2. 稱取下列試劑，置于1L燒杯中。Tryptone 12gYeast Extract 24gGlycerol 4mL3. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 加去離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，高溫高壓滅菌。5. 待溶液冷卻至60以下時(shí)，加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液和1mL Ampicillin（100mg/mL）。6. 均勻混合后4保存。8、SOB培養(yǎng)基組份濃度 2（W/V） Tryptone0.5（W/V） Yeast Extract0.05

19、（W /V） NaCl2.5mM KCl10mM MgCl2配制量 1L配置方法1. 配制250mM KCl溶液。 在90mL的去離子水中溶解1.86g KCl后，定容至100mL。2. 配制2M MgCl2溶液。在90mL的去離子水中溶解19g MgCl2后，定容至100mL，高溫高壓滅菌。3. 稱取下列試劑，置于1L燒杯中。Tryptone 20gYeast Extract 5gNaCl 0.5g4. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻? 量取10mL 250 mM KCl溶液，加入到燒杯中。6. 滴加5N NaOH溶液（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。7. 加入去離子水將培養(yǎng)

20、基定容至1L。8. 高溫高壓滅菌后，4保存。9.使用前加入5mL滅菌的2M MgCl2溶液。9、SOC培養(yǎng)基組份濃度 2（W/V） Tryptone0.5（W/V） Yeast Extract0.05（W /V） NaCl2.5mM KCl10mM MgCl220mM 葡萄糖配制量 100mL配置方法1. 配制1M葡萄糖溶液。將18g葡萄糖溶于90mL去離子水中，充分溶解后定容至100mL，用0.22m濾膜過濾除菌。2. 向100mL SOB培養(yǎng)基中加入除菌的1M葡萄糖溶液2mL，均勻混合。3. 4保存。10、2×YT培養(yǎng)基組份濃度 1.6（W/V）Tryptone， 1（W/V）Y

21、east Extract，0.5（W/V）NaCl配制量 1L配置方法1. 稱取下列試劑，置于1L燒杯中。Tryptone 16gYeast Extract 10gNaCl 5g2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加1N KOH，調(diào)節(jié)pH值至7.0。4. .加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。5. 高溫高壓后，4保存。11、b×broth培養(yǎng)基組份濃度 2（W/V）Tryptone， 0.5（W/V）Yeast Extract，0.5（W/V）MgSO47H2O配制量 1L配置方法1.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。Tryptone 20gYeast Extract 5g

22、MgSO47H2O 5g2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.滴加1N KOH，調(diào)節(jié)pH值至7.5。4. .加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。5. 高溫高壓后，4保存。12、NZCYM培養(yǎng)基組份濃度 0.5（W/V） Yeast Extract0.1（W/V） Casamino Acid1（W /V） NZ胺0.5（W /V） NaCl0.2（W /V） MgSO47H2O配制量 1L配置方法1.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。Yeast Extract 5gCasamino Acid 1gNZ胺 10gNaCl 5gMgSO47H2O 2g2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞?/p>

23、解。3. 滴加5N NaOH溶液（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。4. .加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L。5. 高溫高壓后，4保存。13、NZYM培養(yǎng)基組份濃度 0.5（W/V） Yeast Extract1（W /V） NZ胺0.5（W /V） NaCl0.2（W /V） MgSO47H2O配置方法 NZYM培養(yǎng)基除不含Casamino Acid（酪蛋白氨基酸）外，其他成份與NZCYM培養(yǎng)基相同。14、NZM培養(yǎng)基組份濃度1（W /V） NZ胺0.5（W /V） NaCl0.2（W /V） MgSO47H2O配置方法NZM培養(yǎng)基除不含Yeast Extract（酵母提取物）外，其他成份與N

24、ZYM培養(yǎng)基相同。15、一般固體培養(yǎng)基的配制配置方法1. 按照液體培養(yǎng)基配方準(zhǔn)備好液體培養(yǎng)基，在高溫高壓滅菌前，加入下列試劑中的一種。Agar（瓊脂：鋪制平板用） 15g/LAgar（瓊脂：配制頂層瓊脂用） 7g/LAgarose（瓊脂糖：鋪制平板用） 15 g/LAgarose（瓊脂糖：配制頂層瓊脂用） 7g/L2.高溫高壓滅菌后，帶上手套取出培養(yǎng)基，搖動容器使瓊脂或瓊脂糖充分混勻（此時(shí)培養(yǎng)基溫度很高，小心燙傷）。3. 待培養(yǎng)基冷卻至5060時(shí)，加入熱不穩(wěn)定物質(zhì)（如抗生素），搖動容器充分混勻。4. .鋪制平板（3035mL培養(yǎng)基/90mm培養(yǎng)皿）。16、LB/Amp/X-Gal/IPTG 平

25、板培養(yǎng)基組份濃度 1（W /V） Tryptone0.5（W/V） Yeast Extract1（W/V） NaCl0.1mg/mL Ampicillin0.5（W /V） IPTG0.04mg/mL X-Gal1.5（W /V） Agar配制量 1L配置方法稱取下列試劑，置于1L燒杯中。Tryptone 10gYeast Extract 5gNaCl 10g2. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 滴加5N NaOH溶液（約0.2mL），調(diào)節(jié)pH值至7.0。4. 加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，加入15gAgar。5. 高溫高壓滅菌后，冷卻至60左右。6. 加入1mL Ampic

26、illin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均勻混合。7. 鋪制平板（3035mL培養(yǎng)基/90mm培養(yǎng)基）。8. 4保存平板。17、TB/Amp/X-Gal/IPTG 平板培養(yǎng)基組份濃度1.2（W /V） Tryptone2.4（W/V） Yeast Extract0.4（W/V） Glycerol17mM KH2PO472mM K2HPO40.1mg/mL Ampicillin0.024mg/mL IPTG0.04mg/mL X-Gal1.5（W /V） Agar配制量 1L配置方法1.配制磷酸鹽緩沖液（0.17M KH2PO4，

27、0.72M K2HPO4）100mL。2. 稱取下列試劑，置于1L燒杯中。Tryptone 12gYeast Extract 24gGlycerol 4mL3. 加入約800mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?. 加水離子水將培養(yǎng)基定容至1L后，加入15gAgar。5. 高溫高壓滅菌后，冷卻至60左右。6. 加入100mL的上述滅菌磷酸鹽緩沖液、1mL Ampicillin（100mg/mL）、1mL IPTG（24mg/mL）、2mL X-Gal（20mg/mL）后均勻混合。7. 鋪制平板（3035mL培養(yǎng)基/90mm培養(yǎng)基）。8. 4保存平板。生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)常用試劑的配制方法1、0.5mol/L

28、氫氧化鈉溶液組份濃度 0.5mol/L配制量 2L配置方法1.準(zhǔn)確稱取氫氧化鈉40g。2.用去離子水溶解并稀釋至2L。2、0.5mol/L鹽酸溶液組份濃度 0.5mol/L配制量 2L配置方法1. 準(zhǔn)確量取鹽酸83.4mL。2. 用去離子水稀釋至2L。3、0.2葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液組份濃度 0.2配制量 1L配置方法1. 稱取葡萄糖2.5g置于稱量瓶中，在70干燥2小時(shí)。2. 干燥器中冷卻至室溫，重復(fù)干燥，冷卻至恒重。3. 準(zhǔn)確稱取葡萄糖2.000g。4. 用去離子水溶解并定容至1L5. 于4保存。4、250g/mL牛血清 白蛋白標(biāo)準(zhǔn)液組份濃度 250g/mL配制量 2L配置方法1.準(zhǔn)確稱取250m

29、g標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白。2.用0.03mol/LpH7.8的磷酸緩沖液溶解并定容至1L。3.4保存。5、Folin試劑甲配置方法1.稱取10g氫氧化鈉溶于400mL去離子水中，加入50g無水碳酸鈉，溶解，待用。2.稱取0.5g酒石酸鉀鈉，溶于80mL去離子水中，加入0.25g硫酸銅5水，溶解。3.將1：2：去離子水按20：4：1的比例混合即可。4. 4保存，可用一周。6、Folin試劑乙配置方法1.在500mL的磨口回流裝置內(nèi)加入鎢酸鈉2水25.0359g，鉬酸鈉2水6.2526g，去離子水175mL，85磷酸12.5mL，濃鹽酸25mL，充分混合。2.回流10小時(shí)，再加硫酸鋰37.5g，去離子水

30、12.5mL及數(shù)滴溴。3.然后開口沸騰15min，以驅(qū)除過量的溴，冷卻后定容到250mL。4.于棕色瓶中保存，可使用多年注意：上述制備地Folin試劑乙地貯備液濃度一般在2mol/L左 右，幾種操作方案都是把Folin試劑乙稀釋至1mol/L的 濃度作為應(yīng)用液，我們這時(shí)是把貯備液于使用前稀釋18 倍，使之濃度為0.1mol/L略高。這種稀釋18倍后的Folin 試劑乙就是上文稱之為的“應(yīng)用液”。Folin試劑乙貯備 液濃度的標(biāo)定，一般是以酚酞為指示劑。用Folin試劑乙去滴定1mol/L左右的標(biāo)準(zhǔn)氫氧化鈉溶液，當(dāng)溶液顏色由紅變?yōu)樽匣?，再突然變成墨綠即為終點(diǎn)，如果用氫氧化鈉去滴定Folin試劑乙

31、，終點(diǎn)不太好掌握，溶液地顏色是由淺黃變?yōu)闇\綠，再變?yōu)榛易仙珵榻K點(diǎn)。7、DNS試劑配置方法1.取3，5-二硝基水楊酸10g,加入2mol/L氫氧化鈉溶液200mL。 （3，5-二硝基水楊酸試劑）2.將3，5-二硝基水楊酸溶解，然后加入酒石酸鉀鈉300g。3. 待其完全溶解，用去離子水稀釋至2000mL，棕色瓶保存。8、5蔗糖溶液組份濃度 5配制量 1L配置方法 稱取蔗糖50g，用去離子水溶解定容至1L。9、0.1mol/L蔗糖溶液組份濃度 0.1mol/L配制量 1L配置方法 稱取蔗糖34.230g，用去離子水溶解并定容至1L。10、20乙酸溶液組份濃度 20配制量 1.2L配置方法 量取冰乙酸

32、300mL，用去離子水稀釋至1200mL。11、30（W/V）Acrylamide組份濃度 30（W/V）Acrylamide 0.05配制量 1L配置方法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中Acrylamide 290gBIS 10g2.向燒杯中加入約600mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?.加入去離子水將溶液定容至1L，用0.45m濾膜濾去雜質(zhì)。4.于棕色瓶中4保存。注意：丙稀銑胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性，并可通過皮膚吸收，其作用有積累性，配制時(shí)應(yīng)戴手套等。聚丙烯酰胺無毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因?yàn)橛锌赡芎猩倭康奈淳酆铣煞荨?2、40（W/V）Acrylamide組份濃度 40（W/V）Acrylamide

33、 0.05配制量 1L配置方法1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中Acrylamide 380gBIS 20g2.向燒杯中加入約600mL的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙?.加入去離子水將溶液定容至1L，用0.45m濾膜濾去雜質(zhì)。4.于棕色瓶中4保存。注意：丙稀銑胺具有很強(qiáng)的神經(jīng)毒性，并可通過皮膚吸收， 其作用有積累性，配制時(shí)應(yīng)戴手套等。聚丙烯酰胺無 毒，但也應(yīng)謹(jǐn)慎操作，因?yàn)橛锌赡芎猩倭康奈淳酆铣煞荨?3、10（W/V）過硫酸銨組份濃度 10（W/V）過硫酸銨配制量 10mL配置方法稱取1g過硫酸銨。2.加入10mL的去離子水后攪拌溶解。3.貯存于4。注意：10過硫酸胺溶液在4保存時(shí)間可使用2周左右，

34、超過期限會失去催化作用。14、考馬斯亮藍(lán)R-250染色液組份濃度 0.1（W/V）考馬斯亮藍(lán)R-250，25%（V/V）異丙醇，10（V/V）冰醋酸配制量 1L配置方法1.稱取1g考馬斯亮藍(lán)R-250,置于1L燒杯中。2.量取250mL的異丙醇加入上述燒杯中，攪拌溶解。3.加入100mL的冰乙醋酸，均勻攪拌。4.加入650mL的去離子水，均勻攪拌。5.用濾紙出去顆粒物質(zhì)后，室溫保存。15、考馬斯亮藍(lán)染色脫色液組份濃度 10（V/V）醋酸，5（V/V）乙醇配制量 1L配置方法1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。醋酸 100mL乙醇 50mLdH2O 850mL2.充分混合后使用。16、凝膠固定液(

35、SDS-PAGE銀氨染色用)組份濃度 50（V/V）甲醇，10（V/V）醋酸配制量 100L配置方法量取下列溶液，置于1L燒杯中。甲醇 500mL醋酸 100mLdH2O 400mL2.均勻混合后室溫保存。17、凝膠處理液(SDS-PAGE銀氨染色用)組份濃度 50（V/V）甲醇，10（V/V）戊二醛配制量 1L配置方法1.量取下列溶液，置于1L燒杯中。甲醇 50mL戊二醛 10mLdH2O 40mL2. 均勻混合后室溫保存。18、凝膠染色液 (SDS-PAGE銀氨染色用)組份濃度 0.4（W/V）硝酸銀，1（V/V）濃氨水，0.04（W/V）氫氧化鈉配制量 100L配置方法1.量取下列試劑，

36、加入100200mL試劑瓶中。20硝酸銀 2mL濃氨水 1mL4氫氧化鈉 1mLdH2O 96mL2.均勻混合。該溶液應(yīng)為無色透明狀。如氨水濃度過低時(shí)溶液會呈現(xiàn)混濁狀，此時(shí)應(yīng)補(bǔ)加濃氨水，直至透明。3.本染色液應(yīng)現(xiàn)用現(xiàn)配，不宜保存。19、顯影液 (SDS-PAGE銀氨染色用)組份濃度 0.005（V/V）檸檬酸，0.02（V/V）甲醛配制量 1L配置方法 1.稱取下列試劑，置于1L試劑瓶中。檸檬酸 50mg甲醛 0.2mL2.加入1L去離子水后，搖動混合后溶解。3.室溫保存。20、45乙醇溶液組份濃度 45配制量 1L配置方法 量取無水乙醇450mL，加入去離子水550mL，混勻。21、5的十二

37、烷基硫酸鈉溶液組份濃度 5 （W/V）配制量 0.1L配置方法:稱取5.0g十二烷基硫酸鈉,溶于100mL4的乙醇溶液中。22、三氯甲烷-異戊醇混合試劑配置方法:取500mL三氯甲烷試劑，加入21mL異戊醇試劑，混勻。 23、1.6乙醛溶液組份濃度 1.6配制量 0.1L配置方法 取47乙醛3.4mL，用去離子水定容至100mL。24、二苯胺試劑配置方法1.稱取二苯胺試劑0.8g，溶解于180mL冰乙酸中，2.再加入8mL高氯酸混勻。3. 臨用前加入0.8mL 1.6乙醛溶液。注意：配制完成后試劑應(yīng)為無色。25、15三氯乙酸溶液組份濃度 15配制量 2L配置方法 稱取三氯乙酸300g，用去離子

38、水溶解定容至2000mL。26、1谷氨酸溶液組份濃度 1配制量 0.5L配置方法1. 稱取5g谷氨酸，先用適量得用去離子水溶解。2. 再用氫氧化鉀溶液中和至中性。3. 最后用去離子水定容至0.5L。27、1丙酮酸溶液組份濃度 1配制量 0.5L配置方法1. 稱取5g丙氨酸，先用適量得用去離子水溶解。2. 再用氫氧化鉀溶液中和至中性。3. 最后用去離子水定容至0.5L。28、0.1的碳酸氫鉀溶液組份濃度 0.1配制量 0.5L配置方法 稱取碳酸氫鉀0.5g，用去離子水溶解定容至0.5L。29、0.05的碘乙酸溶液組份濃度 0.05配制量 0.25L配置方法 稱取0.125g碘乙酸，用去離子水溶解

39、定容至0.25L。30、Locke氏溶液配制量 2L配置方法 稱取18g氯化鈉,0.84g氯化鉀, 48g氯化鈣,0.3g碳酸氫鈉，2g葡萄糖，用去離子水溶解定容至2000mL。31、0.2mol/L的丁酸溶液組份濃度 0.2mol/L配制量 1L配置方法1.量取18mL正丁酸試劑。2.用1mol/L的氫氧化鈉中和。3.再用去離子水定容至1L。32、0.1mol/L的硫代硫酸鈉溶液組份濃度 0.1mol/L配制量 10L配置方法 稱248.17g硫代硫酸鈉，用去離子水溶解并定至10L。33、0.1mol/L的碘溶液組份濃度 0.1mol/L配制量 1L配置方法1.稱取碘12.7g和碘化鉀25g

40、。2.用去離子水溶解并定容至1L。3.用0.1mol/L的硫代硫酸鈉標(biāo)定。34、10氫氧化鈉溶液組份濃度 10配制量 2L配置方法 稱取200g氫氧化鈉，用去離子水溶解并定容至2L。35、10鹽酸溶液組份濃度 10配制量 0.2L配置方法 量取濃鹽酸49.3mL，用去離子水定至0.2mL。36、0.1標(biāo)準(zhǔn)丙氨酸溶液組份濃度 0.1配制量 0.5L配置方法 稱取丙氨酸0.5g，用去離子水溶解并定容至0.5mL。37、0.1標(biāo)準(zhǔn)谷氨酸溶液配制量 0.5L配置方法 稱取谷氨酸0.5g，用去離子水溶解并定容至500mL。38、0.1水合茚三酮乙醇溶液組份濃度 0.1配制量 1L配置方法 稱取1g水合茚

41、三酮試劑，溶于1000mL無水乙醇中。39、酚溶液配置方法 在大燒杯中加入80mL去離子水，再加入300g 苯酚，在水 浴中加熱攪拌、混合至苯酚完全溶解。將該溶液倒入盛有200mL去離子水的1000mL分液漏斗內(nèi)，輕輕振蕩混合，使其成為乳狀液。靜止710小時(shí)，乳狀液變成兩層透明溶液，下層為被水飽和的酚溶液，放出下層，貯存于棕色瓶中備用。40、0.5淀粉溶液組份濃度 0.5配制量 0.1L配置方法 稱取淀粉0.5g，用去離子水溶解定容至0.1L。41、對羥基聯(lián)苯試劑配置方法 稱取對羥基聯(lián)苯1.5g，溶于100mL0.5氫氧化鈉溶液中， 配制成1.5的溶液。若對羥基聯(lián)苯顏色較深，應(yīng)用丙酮或無水乙醇

42、重結(jié)晶，放置時(shí)間較長后，會出項(xiàng)針狀結(jié)晶，應(yīng)搖勻后使用。生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)常用緩沖液的配制方法1、0.2 mol/L 磷酸緩沖液 （pH 6.0）組份濃度 0.2mol/L配制量 1L配置方法1. 稱取磷酸氫二鈉12水 8.82 g。2. 稱取磷酸二氫鈉2水 27.34g。3. 用去離子水溶解并定容至1L。室溫保存。注意：此為母液，使用時(shí)稀釋40倍使用。2、洗脫液 （含0.15mol/L氯化鈉的0.005mol/L pH 6.0的磷酸緩沖液）組份濃度 0.15mol/L配制量 10L配置方法1. 稱取氯化鈉87.66g。2. 用0.2mol/L pH6.0的 磷酸緩沖液250mL溶解。3. 用去離子水

43、稀釋至10 L。室溫保存。3、0.3mol/L磷酸緩沖液 （pH7.8）組份濃度 0.3mol/L配制量 0.5L配置方法1.準(zhǔn)確稱取磷酸氫二鈉12水49.150g。2.磷酸二氫鈉2水2.000g。3. 用去離子水溶解并定容至0.5L。室溫保存。注意：此為母液，使用時(shí)稀釋10倍使用。4、0.2mol/L乙酸緩沖液 （pH4.6）組份濃度 0.2mol/L配制量 2L配置方法1.準(zhǔn)確稱取乙酸鈉3水54.44g。2. 加入23mL冰乙酸，溶解。3. 用去離子水溶解并定容至2L。4保存。5、0.2mol/L磷酸-檸檬酸 緩沖液 （pH 2.6、4.6、6.6） 組份濃度 0.2mol/L配制量 各1

44、L配置方法1. 母液A（0.2mol/L的Na2HPO4溶液）：稱取Na2HPO412水143.256g， 用去離子水定容至2L。2. 母液B（0.1mol/L的檸檬酸溶液）：稱取檸檬酸1水42.028g 用去離子水溶解定容至2L。3. pH2.6、4.6、6.6的三種緩沖液如下表配制：pH值 A（mL） B（mL）2.6 109.0 891.04.6 467.5 532.56.6 727.5 272.54. 按上表混勻后，4保存。6、20×SSC 緩沖液 （pH7.0）配制量 1L配置方法1.準(zhǔn)確稱取175.2g氯化鈉。2.準(zhǔn)確稱取88.2g檸檬酸鈉2水。3.溶解于800mL去離子

45、水中。4.加入數(shù)滴10mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至7.0。5.加去離子水定容至1L。注意：按實(shí)驗(yàn)需要可分裝后高壓滅菌。10×SSC、5×SSC、1×SSC可由20×SSC做相應(yīng)稀釋得到。7、0.15mol/L氯化鈉- 乙二胺四乙酸二鈉 緩沖液 （pH8.0） 組份濃度 0.15mol/L配制量 1L配置方法1.準(zhǔn)確稱取氯化鈉8.77g。2. 稱取乙二胺四乙酸二鈉37.2g。3. 溶于800mL去離子水中。4.用固體的氫氧化鈉調(diào)pH值為8.0。5.加去離子水定容至1L。8、1/15mol/L的磷酸鹽 緩沖液 （pH7.6）組份濃度 0.15mol/L

46、配制量 1L配置方法1. 甲（1/15mol/L的KH2PO4溶液）：稱取KH2PO4 9.078g，用去離子水溶解定容至1L。2. 溶液乙(1/15mol/L的Na2HPO4溶液):稱取Na2HPO4 2水11.876g（或磷酸氫二鈉12水23.894g）用去離子水溶解定容至1L。3.pH7.6磷酸鹽緩沖液：將和按1.4：8.6比例混合即可。9、5×Tris-GlycineBuffer （SDS-PAGE電泳緩沖液）組份濃度 0.125M Tris，1.25M Glycine，0.5（w/v）SDS配制量 1L配置方法1.稱取下列試劑，置于1L燒杯中。Tris 15.1gGlyci

47、ne 94gSDS 5.0g2.加入約800mL的去離子水，攪拌溶解。3.加去離子水將溶液定容至1L后，室溫保存。10、5×SDS-PAGE Loading Buffer組份濃度 250mM Tris-HCl（pH6.8）10（W/V） SDS0.5（W/V） BPB50（V/V） 甘油5（W/V） -巰基乙醇配制量 5mL配置方法1.量取下列試劑，置于10mL塑料離心管中。1M Tris-HCl 1.25mLSDS 0.5gBPB 25mg甘油 2.5mL2.加入去離子水溶解后定容至5mL。4.使用前將25l的2-ME加到每小份中。5.加入2-ME的Loading Buffer可在

48、室溫下保存一個(gè)月左右生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)常用柱料數(shù)據(jù)及性質(zhì)1、DEAE陰離子交換纖維素（1）纖維素的處理取纖維素干品用蒸餾水浸泡，充分溶漲并攪拌均勻，過夜。次日再攪勻，靜止30min留下沉集部分（重復(fù)3次），用真空泵抽干。然后用適量的0.5mol/L的氫氧化鈉溶液浸泡30min，抽干，蒸餾水洗至中性；再用適量的0.5mol/L的鹽酸溶液浸泡30min，抽干，蒸餾水洗至中性；重復(fù)用0.5mol/L的氫氧化鈉溶液浸泡30min，抽干，蒸餾水洗至中性。最后用0.005mol/L pH6.0的磷酸緩沖液浸泡待用。（2）纖維素的重生回收的纖維素先用0.5mol/L氯化鈉-0.5mol/L氫氧化鈉溶液浸泡，再按上

49、述（1）操作處理，即可再次投入使用。（3）纖維素的保存回收后，用0.5mol/L氫氧化鈉溶液浸泡30min后，蒸餾水洗至中性，抽干，于鼓風(fēng)干燥箱中60烘干后，保存。2、SephadexG型葡聚糖凝膠（1）凝膠的特性要點(diǎn)葡聚糖G后面的數(shù)字代表不同的交聯(lián)度，數(shù)值越大交聯(lián)度越小，吸水量越大。其數(shù)值大致為吸水量X的10倍。Sephadex對堿和弱酸穩(wěn)定（在0.1mol/L鹽酸中可以浸泡12小時(shí)）。在中性時(shí)可以高壓滅菌。不同型號中又有顆粒粗細(xì)之分。顆粒粗的分離效果差，流速快。顆粒越細(xì)分離效果越好，但流速也越慢。交聯(lián)葡聚糖工作時(shí)的pH穩(wěn)定在211的范圍內(nèi)。葡聚糖G型凝膠分離的分子量分級范圍為7008

50、15;105。SephadexG型葡聚糖凝膠的數(shù)據(jù)見下表。 21*本表數(shù)值取自Pharmacia Biotech Biodirectory 1996。 *為2.6×30cm層析柱在25用蒸餾水測定之值。 DDarcys law(2)凝膠的溶脹*G系交聯(lián)葡聚糖凝膠親水性強(qiáng)，只能在水中溶脹（僅有少量的有機(jī)溶劑也可以使之溶脹），有機(jī)溶劑或含有有機(jī)溶劑較多的水溶液會改變其孔隙，使之收縮失去或降低凝膠的分離能力。在水中溶脹時(shí)如在室溫則需要較長時(shí)間，才能達(dá)到充分溶脹的程度，但可煮沸到100，以縮短其溶脹時(shí)間。見下表Sephadex G型葡聚糖凝膠溶脹所需時(shí)間*溶脹時(shí)要將凝膠浸泡在過量的水或緩沖液

51、中。在整個(gè)溶脹過程中應(yīng)避免劇烈地?cái)嚢?，尤其不能使用電磁攪拌，以免破壞了它的顆粒結(jié)構(gòu)，以及產(chǎn)生許多碎末而影響洗脫時(shí)的流速。（3）凝膠的回收與保存凝膠的再生最好不要在柱上進(jìn)行（有些凝膠可以在位清洗），可將凝膠在0.5mol/L氯化鈉及0.5mol/L氫氧化鈉的混合溶液中浸泡；一般約需30分鐘以上。然后用蒸餾水洗至中性，最后用緩沖液平衡即可恢復(fù)使用。 經(jīng)常使用的凝膠，一般加入一些抗菌劑放在普通冰箱中，即可保存較長的時(shí)間。如確切在相當(dāng)長的時(shí)間里不準(zhǔn)備使用時(shí)，則以保存干凝膠為好。處理時(shí)可先用較濃的氯化鈉浸泡（如0.5mol/L）,在用0.5mol/L的氫氧化鈉處理并用蒸餾水洗至中性，然后用遞增百分比濃度

52、的乙醇分多次作脫水處理。一般可從30的乙醇開始；每次均應(yīng)讓凝膠在乙醇中多浸泡一些時(shí)間。在無水乙醇處理后，最后再用乙醚處理一次以加速乙醇的揮發(fā)。處理后的凝膠宜在80以下的溫度烘干。在進(jìn)行凝膠的回收時(shí)，如在每一步操作時(shí)，均使用布氏漏斗抽濾可大大地加快整個(gè)回收過程?！咀⒁狻縜凝膠在氫氧化鈉溶液中浸泡的時(shí)間不要太長。b不要圖快過早地使用百分濃度太大地乙醇，以免凝膠顆粒收縮太快，破壞了它地結(jié)構(gòu)，因而影響了它地分離能力。 c在乙醚未充分揮發(fā)完以前，切不可將含有多量乙醚地凝膠放入烘箱，以免發(fā)生危險(xiǎn)。d溶脹了地凝膠不可放入低溫冰箱中凍結(jié)，以免其球形結(jié)構(gòu)被破壞。微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)常用培養(yǎng)基的配制1、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基

53、（培養(yǎng)細(xì)菌用）牛肉膏 蛋白胨 氯化鈉 瓊脂 pH 水 3g 5g 10g 1520g 7.07.2 1000mL121滅菌20min。2、高氏（Gause）1號培養(yǎng)基（培養(yǎng)放線菌用）可溶性淀粉 硝酸鉀 氯化鈉 磷酸氫二鉀 硫酸鎂 硫酸亞鐵 20g 1g 0.5g 0.5g 0.5g 0.01g 23瓊脂水pH 20g 1000mL 7.27.4配制時(shí)，先用少量冷水將淀粉調(diào)成糊狀，倒入煮沸的水中，在火上加熱，邊攪拌邊加入其他成分，溶化后，補(bǔ)足水分至1000mL。121滅菌20min。3、查氏（Czapek）培養(yǎng)基（培養(yǎng)霉菌用）硝酸鈉 磷酸氫二鉀 氯化鉀 硫酸鎂 硫酸亞鐵 蔗糖 瓊脂 水 pH 2g 1g 0.5g 0.5g 0.01g 30g 1520g 1000mL 自然121滅菌20min。4、馬丁氏（Martin）瓊脂培養(yǎng)基（分離真菌用）葡萄糖 蛋白胨 磷酸二氫鉀 七水合硫酸鎂 1/3000孟加拉紅（rose bengal，玫瑰紅水溶液）瓊脂pH蒸餾水 10g 5g 1g 0.5g 100mL 15