毛細(xì)管區(qū)帶電泳分離和檢測(cè)利多卡因方法的研究

1、毛細(xì)管區(qū)帶電泳分離和檢測(cè)利多卡因方法的研究                              作者；馬漢祥，劉 紅，呂 淞，高改莉，施偉忠，李 鋒【摘要】  目的  建立毛細(xì)管電泳分離和檢測(cè)利多卡因的方法。方法  毛細(xì)管區(qū)帶電泳分離利多卡因，電泳分離條件：30mmol/L

2、 NaH2PO4-H3PO4（pH=5.0）緩沖液。先采用壓力（20psi）進(jìn)水5s，隨后電動(dòng)進(jìn)樣（8kV，5s），檢測(cè)波長200nm，運(yùn)行電壓30kV，溫度20，運(yùn)行時(shí)間5min。結(jié)果  在0.112.5g/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系和重現(xiàn)性（R2=0.9998，n=5），回收率96.80%105.8%，日內(nèi)及日間精密度(RSD)均小于6%。方法的檢測(cè)限10ng/ml。結(jié)論  本方法簡便、快速、靈敏，為利多卡因的定量測(cè)定提供了新的、更為理想的方法學(xué)手段。        【關(guān)鍵詞】  毛細(xì)管區(qū)帶電泳；分離

3、；利多卡因        【Abstract】  Objective  To establish capillary zone electrophoresis method for the determination and separation of lidocaine.Methods  Determination and separation of lidocaine by capillary zone electrophoresis (CZE) and electrophoresis co

4、nditions were as following：buffer was 30mmol/L NaH2PO4-H3PO4 solution (pH=5.0)，the working voltage at 30kV，temperature at 20，UV detection at 200nm，sampling injected 5 seconds with voltage at 8kV.Results  The established method had a good linearity and precision within the concentration range of

5、 0.112.5g/ml(R2=0.9998). The range of recovery was 96.8%105.8%，and relative standard deviations of inter-day and intra-day were less than 6%. The detection limit was 10ng/ml.Conclusion This assay was simple，rapid and sensitive. It is a new and ideal analytical means for the determination of lid

6、ocaine.        【Key words】  CZE； lidocaine； separation        利多卡因?qū)儆邗０奉愔行Ь致樗?，具有起效快、彌散廣、穿透性強(qiáng)、安全范圍較大、無擴(kuò)張血管作用及對(duì)組織無刺激等特點(diǎn)，可用于多種形式的局部麻醉，也是抗心律失常的常用藥物之一。硬膜外阻滯用量為400mg，其血藥濃度達(dá)24g/ml。當(dāng)血藥濃度超過5g/ml時(shí)出現(xiàn)中毒癥狀，超過7g/ml時(shí)出現(xiàn)驚厥1，因此其血藥濃度監(jiān)測(cè)具有重要的臨床意義。以往多采用酶免疫分析

7、法2、氣相和高效液相色譜法3。但成本高，操作繁瑣，干擾多，色譜柱易受污染等。而毛細(xì)管電泳（Capillary electrophoresis， CE）是20世紀(jì)90年代以來迅速發(fā)展起來的一種新型的分離檢測(cè)手段，具有分離效率高、分析速度快、樣品用量少、運(yùn)行成本低、預(yù)處理簡單以及應(yīng)用范圍廣等技術(shù)優(yōu)勢(shì)，已在生物醫(yī)藥領(lǐng)域獲得了許多成功的應(yīng)用4。本研究結(jié)合利多卡因的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，選用毛細(xì)管區(qū)帶電泳（CZE）分離模式，優(yōu)化緩沖體系、pH值、檢測(cè)波長、分離電壓和溫度等條件，建立了適合利多卡因定量測(cè)定的CZE方法。        1  材料與方

8、法        1.1  儀器與試劑  毛細(xì)管電泳儀：美國Beckman公司P/ACE5000型配有紫外吸收（UV）、二極管陣列（PDA）和Beckman工作站；毛細(xì)管為涂層石英毛細(xì)管，57cm×75m（河北永年光纖廠），有效長度50cm；PHS-3B精密pH計(jì)（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；SB2200T超聲波洗滌裝置（必能超聲上海有限公司）。        利多卡因（針劑，0.1g/5ml，山東兗州益健制藥有限公司批號(hào)：0407182）；利多

9、卡因標(biāo)準(zhǔn)品（寧夏醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院制劑中心 批號(hào)：030408）。NaH2PO4、H3PO4 、HCI和NaOH等試劑均為國產(chǎn)分析純，水為自制雙蒸去離子水。        1.2  樣品溶液和緩沖液的制備        1.2.1  標(biāo)準(zhǔn)品及樣品溶液的配制  準(zhǔn)確稱取利多卡因標(biāo)準(zhǔn)品10mg，用雙蒸去離子水溶解至100ml。分別配制濃度為12.5、6.25、2.5、0.5和0.1g/ml標(biāo)準(zhǔn)溶液，用雙蒸去離子配制不同濃度的利多卡因樣品。用0.45m微孔

10、過濾器過濾，超聲波脫氣5min后備用。        1.2.2  運(yùn)行緩沖液的配制  精密稱取NaH2PO4適量，加水制成1540mmol/L NaH2PO4。用H3PO4和NaOH將其pH值分別調(diào)為4.4、4.6、4.8、5.0和5.2低溫貯備。        1.3  實(shí)驗(yàn)條件的選擇  開機(jī)后，以1mol/L HCI、0.1mol/L NaOH溶液、水及NaH2PO4-H3PO4緩沖液沖洗毛細(xì)管各3min，兩次進(jìn)樣之間以0.1mo

11、l/L NaOH溶液、水及緩沖液沖洗毛細(xì)管3min后進(jìn)樣：先采用壓力（20psi）進(jìn)水5s，隨后電動(dòng)進(jìn)樣（8kV，5s），運(yùn)行時(shí)間5min。以遷移時(shí)間、峰高、峰面積的重現(xiàn)性和峰形的對(duì)稱性作為分離效果的判斷依據(jù)，綜合上述參數(shù)優(yōu)化實(shí)驗(yàn)條件。        1.3.1  緩沖體系  根據(jù)利多卡因的理化性質(zhì)及緩沖液的選擇原則，選擇NaH2PO4-H3PO4為實(shí)驗(yàn)的緩沖體系。再以1.2.2項(xiàng)配制的緩沖液選擇最佳運(yùn)行緩沖液濃度和pH值。        1.3.2  檢測(cè)波長及進(jìn)樣條件  根據(jù)利多卡因的理化性質(zhì)，以PDA檢測(cè)器進(jìn)行掃描。在200nm有較大吸收峰。因此，確定采用200nm作為UV檢測(cè)波長；先采用壓力（20psi）進(jìn)水5s，隨后電動(dòng)（8kV，5s