探析新生兒肺炎克雷伯菌的耐藥性

1、探析新生兒肺炎克雷伯菌的耐藥性摘要： 目的 分析我院新生兒科病區(qū)產(chǎn)ESBLs AmpC酶的肺炎克雷伯 菌的耐藥情況，指導臨床合理用藥。方法按CLSI推薦的超廣譜B內酰胺酶（ESBLs確證試驗,對肺炎克雷伯菌進行ESBLs檢測,并用三維試驗法、三維試驗 抑制試驗進行AmpC酶檢測。結果160株肺炎克雷伯菌中,檢到產(chǎn)ESBLs肺炎克雷伯菌84株，陽性率高達% 71株耐頭抱西丁菌株檢到23株產(chǎn)Amp（酶,其中 單產(chǎn)AmpC# 5株,產(chǎn)Ampc+ESBL菌株18株。AmpC#陽性率為（23/160）。結 論分離自我院新生兒科的肺炎克雷伯菌對 B -內酰胺類抗菌藥物耐藥嚴重，主要以產(chǎn)ESBLs和（或）A

2、mpC酶為主。給臨床抗感染治療帶來很大困難,是院內感 染的一大隱患。關鍵詞：超廣譜B -內酰胺酶 AmpC酶 肺炎克雷伯菌 三維試驗 三維抑制試驗AmpC酶是繼ESBLs之后，臨床上出現(xiàn)的腸桿菌科細菌的又一重要耐藥機 制，肺炎克雷伯菌作為條件致病菌是新生兒感染性肺炎的常見病原菌，也是重要的院內感染病原菌，在醫(yī)院感染分離率一直趨于首位。近年來，由于廣譜抗菌藥物 的廣泛大量應用,導致這些細菌出現(xiàn)高產(chǎn) AmpC#菌株。近年來,編碼AmpC#的基 因已轉移到質粒上，并在大腸埃希菌及肺炎克雷伯菌中出現(xiàn)，易在不同菌種間橫 向播散。所以監(jiān)測和檢測這類細菌產(chǎn) ESBLs和 AmpC#的情況,對指導臨床合理使

3、用抗菌藥物以及預防和控制院內感染的發(fā)生具有重要的意義。1 材料與方法材料菌株來源 肺炎克雷伯菌160株均分離自20XX年1月至20XX年12 月我院新生兒病區(qū)患兒呼吸道標本。一次性培養(yǎng)皿與藥敏紙片一次性培養(yǎng)皿為鄭州博賽產(chǎn)品；藥敏紙片 為英國OXOID公司產(chǎn)品。試劑克拉維酸（中國藥品生物制品檢定所）;鄰氯西林（上海四藥有限公司）。質控菌株ATCC25922, ATCC700603, 029, 029M。方法藥敏試驗按CLSI推薦的K-B紙片法進行測定,并按其制定的標準進行判讀超廣譜B -內酰胺酶（ESBLs）檢測 按CLSI推薦的確證試驗測定ESBLs產(chǎn)Amp（酶菌株初篩 采用K-B法,按照CL

4、SI推薦的方法進行,頭抱 西丁 （30卩g/片）抑菌環(huán)直徑w 17mm寸,提示對FOX中介或耐藥為疑產(chǎn)Amp（酶菌 株。B -內酰胺酶粗提取物的制備 取50卩麥氏單位菌液加入12ml 胰蛋白胨肉湯中,35 C恒溫搖床孵育6h,4000r/min,4 C離心20min,棄上清，將沉 淀物-70C反復凍融5次,加入pH的/L磷酸鹽緩沖液混勻,14000r/min,4 C離心 20min,取上清液即為酶粗提物，無菌試驗后-20°C保存。三維試驗對可疑菌株的酶提取物用頭抱西丁三維試驗方法進行AmpC酶確證。三維試驗抑制試驗在涂有ATCC25922菌液的M-H平皿中央貼1片30卩g頭抱曲松紙片

5、，垂直挖四個狹縫，分別加入40卩l(xiāng)的試驗菌株酶粗提取物、 36卩l(xiāng)酶粗提取物+4卩l(xiāng) 2mmol/L鄰氯西林、36卩l(xiāng)酶粗提取物+4卩l(xiāng) 2mmol/L 克拉維酸、36卩l(xiāng)酶粗提取物+4卩l(xiāng) 2mmol/L克拉維酸+4卩l(xiāng) 2mmol/L鄰氯西林,35 C培養(yǎng)24h,擴大生長區(qū)域消失為酶抑制實驗陽性。2 結果160株肺炎克雷伯菌耐藥現(xiàn)象較為嚴重，對16種抗菌藥物中的13種 均出現(xiàn)不同程度的耐藥，其中對青霉素類、一代至四代頭抱菌素的耐藥率均超過 60% ,經(jīng)ESBLs確證試驗測定產(chǎn)ESBLs有 84株，陽性率高達%對加酶抑制劑的 B內酰胺類復合制劑舒普深、特治星的敏感率僅為 % %，頭霉素類的頭

6、抱西丁敏 感率僅為，應引起臨床重視。尚未出現(xiàn)對碳青酶烯類耐藥的肺炎克雷伯菌菌株。經(jīng)產(chǎn)AmpC#菌株初篩試驗檢出可疑產(chǎn) AmpC#細菌71株，經(jīng)頭抱西丁 三維試驗方法確證產(chǎn) AmpCB細菌5株。經(jīng)三維抑制試驗確證單產(chǎn) AmpCB菌株5 株（與三維試驗相符）,單產(chǎn)ESBLs菌株84株（與ESBLs紙片確證試驗相符）。同時 產(chǎn)Ampc+ESBL菌株18株，即產(chǎn)超超廣譜B內酰胺酶（SSBLs）,耐藥情況非常嚴重, 對B-內酰胺類抗菌藥物（包括含酶抑制劑的復合制劑）全部耐藥,氨基糖苷類、 喹諾酮類耐藥率也有所提高，僅碳青酶烯類未出現(xiàn)耐藥。3 討論超廣譜B內酰胺酶（ESBLs）屬于Bush分類2be亞組,

7、分子分類中屬于A 類酶,ESBLs是目前腸桿菌科細菌（尤其是肺炎克雷伯菌）對廣譜頭抱菌素產(chǎn)生耐 藥的最主要原因，它由質粒介導，可使細菌對青霉素和一、二、三、四代頭抱菌素 以及單環(huán)菌素耐藥，但對頭霉素、碳青酶烯類及酶抑制劑（克拉維酸）敏感。Amp邙 內酰胺酶是由革蘭氏陰性桿菌產(chǎn)生的主要由染色體介導的絲氨 酸頭抱菌素酶組成的一個酶家族,屬于Bush分類中的I組(C類),能水解三代頭 抱,不被B內酰胺酶抑制劑克拉維酸所抑制。研究表明：B -內酰胺類抗菌藥物頭 抱西丁和碳青酶烯抗菌藥物亞胺培南是強有力的AmpCB誘導劑。如果用頭抱西丁或頭抱西丁聯(lián)合第三代頭抱菌素治療含有ampC基因的腸桿菌科細菌如肺炎

8、克雷伯菌、大腸埃希菌，那么在治療過程中會因為AmpC酶的大量產(chǎn)生而導致治療失 敗。理論上講,四代頭抱對產(chǎn)AmpC酶菌株敏感,但如果同時產(chǎn)ESBLs則四代頭抱 也將無效。實驗結果顯示，我院新生兒病區(qū)分離出的160株肺炎克雷伯菌耐藥情況 十分嚴重,僅對阿米卡星、亞胺培南、美羅培南尚未出現(xiàn)耐藥 ，其他16種抗菌藥 物均出現(xiàn)不同程度的耐藥，其中對新生兒適用的 B -內酰胺類抗菌藥物耐藥嚴重 一代至四代頭抱菌素耐藥率均超過 60%,舒普深、特治星敏感率也僅有呀口%產(chǎn) 超超廣譜B內酰胺酶(SSBLs)的肺炎克雷伯菌檢出率高達 (18/160),針對這類 細菌臨床用藥唯有選用亞胺培南、美羅培南,抗菌藥物可選范圍之局限令人擔憂。由于臨床大量廣泛使用三代頭抱、亞胺培南、美羅培南，在抗菌藥物的選擇壓力下我院新生兒科已篩選出持續(xù)高產(chǎn)型AmpC酶菌株,一旦處理不當，將持續(xù)在醫(yī)院環(huán)境內擴散。如果進一步出現(xiàn)質粒介導的 AmpC酶菌株,則對院內