慢性丙型肝炎患者血清病毒負(fù)荷與肝損傷及干擾素應(yīng)答的關(guān)系

1、    慢性丙型肝炎患者血清病毒負(fù)荷與肝損傷及干擾素應(yīng)答的關(guān)系         丙型肝炎病毒(HCV)定量檢測對(duì)于研究病毒致病及機(jī)體抗病毒免疫機(jī)制，評(píng)價(jià)和指導(dǎo)抗 病毒治療具有重要意義。本研究選擇一組慢性丙型肝炎干擾素治療患者對(duì)其治療前后血清HC V含量進(jìn)行檢測，以評(píng)價(jià)血清病毒負(fù)荷與肝組織損傷及干擾素應(yīng)答的關(guān)系。材料和方法一、病例及治療29例患者均為有輸血史且血清抗HCV和HCV RNA陽性，丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)升高，病史6個(gè)月以 上，排除乙型肝炎 及其它已知原因的慢性肝病、

2、失代償性肝病或肝硬化。男15例，女14例，年齡2360(平均3 6 .5)歲。給予干擾素(Roferon,羅氏制藥有限公司產(chǎn)品)300萬或重組復(fù)合干擾素(CIFN，AMGEN 公司生 產(chǎn))900萬或1 500萬單位肌內(nèi)注射，每周3次，治療6個(gè)月，停藥后隨訪6個(gè)月(24周)。治療前 行肝穿刺活 組織檢查，按Knodell方法1計(jì)算組織活動(dòng)度(HAI)，治療及隨訪中定期檢測血清H CV RNA和ALT。所有檢查均經(jīng)患者知情同意，按以上標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)治療結(jié)束時(shí)的近期療效及治 療 結(jié)束后隨訪6個(gè)月的遠(yuǎn)期療效。生化應(yīng)答：血清ALT恢復(fù)至正常水平；病毒應(yīng)答：血清HCV RN A滴度1×104 拷貝/m

3、l；完全應(yīng)答：同時(shí)表現(xiàn)生化和病毒應(yīng)答。二、血清HCV含量檢測采用Ampilsensor熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法2，AG-9600熒光定量PCR分析 檢測系統(tǒng)和RT- Ampilsensor HCV RNA定量檢測試劑盒由美國Biotronic Technologies公司生產(chǎn)，操作按說 明進(jìn)行。為比較檢測結(jié)果的可靠性，隨機(jī)選擇一份標(biāo)本進(jìn)行多復(fù)孔和稀釋后檢測。三、統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用2檢驗(yàn)和相關(guān)分析。結(jié)果一、HCV RNA定量檢測的重復(fù)性和敏感性比較同一份標(biāo)本三復(fù)孔檢測，測值分別為：孔1：284×103,孔2：248×103,孔3：253×10 3 拷貝/ml，

4、孔間差異介于3.3%7.4%；將該標(biāo)本作10倍和50倍稀釋后檢測，結(jié)果分別為3 2.5×103和6.12×103拷貝/ml，基本與預(yù)計(jì)值一致。二、血清HCV定量檢測結(jié)果見表1。表129例患者治療前后血清病毒含量檢測結(jié)果(拷貝/ml)1×1071×1061×1051×1041×104平均值(×105)治療前4799055.13±116.01治療停止時(shí)1147165.87±22.36停藥后24周0258141.76±4.80     三、血清病毒含量

5、與肝組織損傷的關(guān)系29例患者血清ALT水平71841(188.69±1887.72)U/L，肝組織炎癥活動(dòng)度指數(shù)(IAI)313(6 .82±2.85)，纖維化指數(shù)(FI)14(2.21±1.49)，總HAI為515(9.07±2.85)。將治療前血 清病 毒含量進(jìn)行對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后分析其與ALT水平、肝組織病理損傷程度結(jié)果均無明顯相關(guān)(P均 0.05)。四、治療前血清病毒負(fù)荷與干擾素應(yīng)答間的關(guān)系29例接受干擾素治療的慢性丙型肝炎患者應(yīng)答狀況見表2。治療前血清病毒含量106拷 貝 /ml者其近遠(yuǎn)期的生化、病毒及完全應(yīng)答率均較病毒含量低于1×106拷貝

6、/ml者低， 但均未 達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義水平；如以1×105拷貝/ml為界，則停藥后24周的病毒及完 全應(yīng)答率差別達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義水平，見表2。 討論迄今已有數(shù)種定量方法用于病毒含量的檢測，包括競爭PCR，支鏈DNA探針檢測(bDNA)系統(tǒng)， 結(jié)合RT-PCR檢測方法等。各種方法檢測結(jié)果存在一定誤差3，我們應(yīng)用Amplisen sor熒光定量PCR方法對(duì)一組慢性丙型肝炎患者干擾素治療前后血清病毒含量進(jìn)行檢測，同一 份標(biāo) 本多復(fù)孔檢測的孔間誤差較小(小于3.3%7.4%)，稀釋后的檢測結(jié)果與預(yù)計(jì)值也比較吻合， 表明其重復(fù)性和敏感性均較好。此外，該方法操作較簡便，抽提后全部檢測過程可在5小時(shí)

7、左右完成。表2血清HCV含量與干擾素應(yīng)答病毒含量(拷貝/ml)例數(shù)治療24周(%)停藥24周(%)ALT應(yīng)答病毒應(yīng)答完全應(yīng)答ALT應(yīng)答病毒應(yīng)答*完全應(yīng)答*1×10599(100.0)7(77.8)7(77.8)8(88.9)7(77.8)7(77.8)1×1052014(70.0)9(45.0)9(45.0)13(65.0)7(35.5)7(3 5.5)共計(jì)2923(79.3)16(55.2)16(55.2)21(72.4)14(48.3)14(48.3)*:P0.036 我們分析了血清病毒含量與血清ALT水平及肝組織病理損傷程度的關(guān)系，未發(fā)現(xiàn)它們之間存 在顯著相關(guān)。此與其

8、他作者報(bào)道相符4，提示HCV致肝組織損傷的機(jī)制與病毒含 量增加無關(guān)，特異和非特異抗病毒免疫與HCV致病的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。本組病例中，治療前血清病毒含量介于104107拷貝/ml，經(jīng)24周治療后病毒含量 顯著 下降且大多數(shù)患者停藥后24周仍維持療效。分析血清病毒含量與干擾素應(yīng)答間的關(guān)系，我們 發(fā)現(xiàn)病毒含量較低者其對(duì)干擾素的生化和病毒應(yīng)答率均較高。我們的結(jié)果支持干擾素應(yīng)答與 病毒含量相關(guān)的觀點(diǎn)5,6。 作者單位：趙西平（430030武漢，同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院）王寶菊（430030武漢，同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院）沈漢馨（430030武漢，同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院）鄭昕（430030武漢，同濟(jì)

9、醫(yī)科大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院）汪由坤（430030武漢，同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院）楊東亮（430030武漢，同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院）郝連杰（430030武漢，同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)附屬同濟(jì)醫(yī)院）參考文獻(xiàn)1，Knodell RG, Ishak KG, Black WC, et al. Formulation and application of a numerical scoring system for assessing histological activity in asymptomatic chronic active hepatitis. Hepatology, 1981,1:431-435.2，W

10、ang CN, Wu K, Wang HT. Quantitative PCR using the Amplisensor assay. In PCR primer. A laboratory manual. ed. Dieffenbarch CW and Dvekster GS. Cold Spr ing Harbor, NY, 1995.193-202.3，Shiratori Y, Kato N, Yokosuka O, et al. Quantitative assays for hepatitis C v irus in serum as predictors of the long-

11、term response to interferon. J Hepatolo gy, 1997,27:437-444.4，McGuinness PH, Bishop GA, Painter DM, et al. Intrahepatic hepatitis C RNA lev els do not correlate with degree of liver injury in patients with chronic hepati tis C. Hepatology, 1996,23:676-687.5，Yamada G, Takatani M, Kishi F, et al. Efficacy of interferon alfa therapy in chronic hepatitis C patients depends primarily on hepatitis C virus RNA level. H epatology, 1995,22:1351-135