發(fā)酵工程中的消毒培訓材料(一)

1、發(fā)酵工程中的消毒培訓材料1、什么叫染菌？發(fā)酵生產過程中污染了生產菌株以外的菌稱為雜菌。2、發(fā)酵污染雜菌的主要是哪一類微生物？發(fā)酵染菌主要污染細菌。包括球菌、桿菌、芽孢桿菌、此外還有放線菌、霉菌、酵母菌和病毒主要是噬菌體等。3、細菌的形態(tài)特征？細菌主要在固體培養(yǎng)基外表生長的菌落形態(tài)大多為圓形、外表光滑粘稠、呈黃色、白色等各種色澤，在顯微鏡下觀察細菌的個體很小，約2m*右，形狀有圓球形、長桿狀、短桿形等。4、什么是芽孢？芽孢是某些細菌的休眠體，又稱內生孢子，某些細菌如芽孢桿菌到一定的生長階段或是遇熱、酸堿等不良環(huán)境時，在細胞內形成一個圓形或橢圓形的芽孢，芽孢有厚壁，孢內含水量低，具有嗜熱性的酶，因

2、此能抵御不良環(huán)境，能在不良條件下繼續(xù)生長。5、染菌罐批應如何繼續(xù)運轉？染菌罐批應當在剛發(fā)現(xiàn)時立即補入適量殺菌劑或凈化劑，殺滅部分雜菌，抑制雜菌的繁殖，另外依據(jù)生產菌的生理條件改變培養(yǎng)條件來抑制雜菌的生長速度，以利于生產菌株的生長，有的品種在前期染菌后可以采取重新消毒或補種的方法挽回損失。6、雜菌存在于哪些方面？微生物廣泛存在于水中、空氣中、工農業(yè)產品中和一切物體的外表。7、發(fā)酵染菌的來源有哪幾個方面？設備的滲漏，如冷卻蛇管滲漏易污染水中的微生物，閥門或連接處，罐體滲漏會污染空氣中的微生物，無菌空氣系統(tǒng)過濾失效或減效則會污染大量積于過濾介質上的霉菌、酵母菌和細菌。培養(yǎng)基滅菌不徹底可以污染混雜在原

3、材料中的大量雜菌，罐體及管道無菌不徹底就能污染大量隱藏于死角中的芽孢桿菌，種子系統(tǒng)帶菌至下一代。8、造成發(fā)酵染菌的因素有哪些？造成發(fā)酵染菌的因素很多，主要因素有設備檢修質量不好，設備泄漏使運轉過程和補料過程污染雜菌；操作質量差也是發(fā)酵染菌的重要因素，例如消毒工沒有嚴格按照工藝規(guī)程操作，培養(yǎng)基和罐體管道滅菌不徹底；看罐工缺乏高度的工作責任心，泡沫控制不好造成頂罐逃液都容易導致染菌，蒸汽質量不好蒸汽壓力低也會導致滅菌不徹底而染菌，防染制度、防染措施不健全、不完善都能造成染菌。9、補料過程中有哪些因素容易導致染菌？很多工廠的補料系統(tǒng)是公用系統(tǒng)，只有一根補料管道兼管所有發(fā)酵的補料.因此補料管道滅菌不徹

4、底常導致染菌。尤其是有的操作圖方便，管道消毒后間隔時間太長。有的在管道滅菌后忘記用蒸汽保壓或者掉零后繼續(xù)照常補料。此外補料入罐管道的小排氣伐設有及時檢修墊漏沙眼等在補料過程中補料液的流速很大，就有可能將外界空氣中的染菌經由小排氣閥的漏點處抽入罐內造成染菌。10、無菌補料罐的特點是連續(xù)使用，長時間物料滿罐因此在平時應加強管理。1定期對罐內蛇管，夾層進行試漏，防止大面積染菌。2定期冼罐。下罐檢查，消毒滅菌，防止死角及腐蝕穿孔。3平時消料體積不能過大，防止倒流。4罐內壓力表應經常檢查，防止失靈。5操作記錄應完整無缺，便于查找故障原因。11、補料計量罐在接料操作中應注意什么？1各計量罐應制定定期滅菌制

5、度.2計量罐在接料時罐壓應保持在0.03mpa嚴禁掉0.3計量罐接料體積不宜過大防止倒流。4要有完整的操作記錄12補料專用管線在補料過程中應注意什么-?1) 補料管線不能用物料保壓,更不能長時間充滿物料2) 補料管線必須定期滅菌,在不壓料時采用蒸汽保護3) 專用管線上各閥門法蘭應保持高度嚴密不漏13、怎樣防止補加氨水過程中污染雜菌？氨水必須經過除濾才可使用，否則會造成發(fā)酵污染產堿短桿，氨水儲罐?氨水過濾器?無菌氨水儲罐?無菌氨水計量罐，無菌氨水儲罐和氨水計量罐應定時消毒滅菌14、跑沫頂罐為什么容易導致染菌？泡沫頂罐致使染菌的原因有兩個：一是攪拌軸封不嚴密，跑沫頂罐時由于罐壓高于大氣壓，故嚴重時

6、跑沫會冒出軸封外，污染了含雜菌的機油、油垢，跑沫回落時便將污染物帶回發(fā)酵液中而致使染菌。另一個原因是跑沫頂罐時接觸排氣閥，排氣閥又連通下水道，當泡沫上升下降的反復過程形成一定壓力波動，使下水道污染物倒流，導致染菌。15、什么是種子帶菌？由于種子染菌而使發(fā)酵染菌的稱種子帶菌時發(fā)酵液所染的菌形必須與種子所帶的菌形一致。16、種子帶菌的原因有那些？子染菌的原因為操作失誤，環(huán)境不潔凈和用品滅菌不徹底三個方面。17、什么是滅菌？是一種微生物基本技術，用物理或化學方法殺死或除掉培養(yǎng)基中和有關區(qū)域中一切微生物的繁殖體和芽孢稱之為滅菌。18、發(fā)酵污染噬菌體的危害是什么？噬菌體是一種寄生性微生物，具有單一性，生

7、產菌一旦染之與之親和的噬菌體，便被侵入細胞體內，開始生長繁殖最終使寄生細胞破裂死亡，而噬菌體得以釋放被繼續(xù)繁殖，因此發(fā)酵污染噬菌體以后危害極大，速度極快、蔓延面積極大使整個生產受損。19、發(fā)酵污染噬菌體應如何防治？發(fā)酵污染噬菌體后的防治措施應當消除污染源和對環(huán)境和污染系統(tǒng)進行徹底清洗消毒，必要時選育抗噬菌體菌株，污染噬菌體的發(fā)酵液必須加熱滅菌后放下水道，至少用蒸汽加熱至100-120，維持30-45min，以免擴大污染，放罐后的罐體設備經清洗后還應該用甲醛熏罐滅菌，有關的管道和下水道以及廠房環(huán)境區(qū)用甲醛和漂白粉噴灑消毒。種子室化驗室的接觸用具一律用消毒液浸泡滅菌，還需要樹立防大于治的觀念，平時

8、重視環(huán)境衛(wèi)生和設備檢修，易污染雜菌的菌絲濾渣、廢料等應消除干凈以消滅污染源，還要特別重視種子的無菌管理，如果發(fā)現(xiàn)菌種污染噬菌體則要消滅投產之前，必要時開展抗噬菌體菌株的篩選，以確保生產。20、染菌嚴重的罐批應如何進行空罐處理？染菌嚴重的罐批在下批進罐之前除了要對空罐清洗檢修消毒以外，還應用甲醛熏，以消滅罐內設備附件死角中殘留的芽孢桿菌，方法是加入罐容積萬分之一的甲醛加少量水，進蒸汽加熱110c排汽10min,再自然熏消30min,清洗干凈，等待空消。21、什么叫對數(shù)殘留定律？在滅菌過程中，微生物的受熱死亡遵循分子反應速度理論，微生物數(shù)量由于受到溫度的影響而隨著時間的增長逐漸減少是以對數(shù)的速率在

9、減少，也即菌的減少速率與任何一瞬間殘留的菌數(shù)成正比。22、為什么要把芽孢桿菌作為研究滅菌的主要對象？由于芽孢桿菌有其獨特的生理生化特性，具有很大的熱阻和抗熱性，往往在滅菌操作失誤時會導致染芽孢桿菌，所以必須把芽孢作為研究滅菌的主要對象，把芽孢桿菌的的死亡作為滅菌徹底的主要標志。23、滅菌前為什么要對設備嚴密度進行試漏？大多數(shù)發(fā)酵是一個無菌培養(yǎng)過程必須在密閉的設備條件下進行，發(fā)酵過程中還必須進行接種補加料、加壓等工藝操作，發(fā)酵罐內雖然保持正壓，但是一旦遇到停電、停空氣、泡沫頂罐等，如果設備滲漏，將導致負壓抽吸使發(fā)酵染菌，因此設備嚴密度是防止染菌的基本條件，作好嚴密度的試漏是滅菌操作中必不可少的重

10、要環(huán)節(jié)。24、設備嚴密度試漏應包括哪些方面？1罐體：軸封，進出料閥、補料閥、移種閥、空氣閥、進蒸汽閥、取樣閥、視鏡墊以及小排汽閥。2冷卻水閥、夾套3各焊口及各閥盤根25、使用蒸汽前為什么必須排盡蒸汽管道內的冷卻水？蒸汽管道內的冷凝水夾帶著少量鐵銹及雜物，如不將其排盡，在通蒸汽時會直接引入罐內，引起閥門開啟失靈，另外還會使消后體積不準，尤其是消空氣濾芯更應排盡水。26、培養(yǎng)基實罐為什么要做到過篩入罐？在培養(yǎng)基配置過程中往往混入雜物，如繩子、紙片、塑料袋，另外有的培養(yǎng)基配置過程中出現(xiàn)了結塊、結團，有這些東西進入罐內會影響蒸汽穿透效果，所以必須經過5-6mm篩孔過濾，以利滅菌。27為什么在滅菌過程中

11、要控制好培養(yǎng)基的泡沫？滅菌時，隨著罐溫的升高，培養(yǎng)基中的有機氮源因配比、品種、裝量的差異，或者由于用氣不當會興盛大量的泡沫，這些泡沫內部是空氣，由于空氣的比熱大，液體的比熱小，泡沫便成行為隔熱層，蒸汽熱量難以穿透，雜菌不易被殺死，尤其是發(fā)生頂罐、逃液更為染菌增加28. 為什么要重視培養(yǎng)基成分對滅菌的影響？1培養(yǎng)基中不能有結團塊和泡沫產生的物料會影響熱的傳導所以要注意培養(yǎng)基的配制質量2固體含量不能超過15%3物料之間不能或不可能發(fā)生化學反應.29. 濕熱滅菌時為什么對滅菌溫度和滅菌時間進行嚴格的控制？濕熱滅菌控制的溫度和時間是綜合培養(yǎng)基中耐熱芽孢桿菌的完全滅死和培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分破壞降到最低程度來

12、加以確定的，當滅菌溫度確定以后，滅菌時間是指物料顆粒的熱穿透時間，耐熱菌的熱死亡時間和安全時間之和，根據(jù)生產實踐實消在120121度30分鐘，連消126132度57分鐘為宜，如果片面地認為溫度越高越時間越長滅菌越徹底必將使培養(yǎng)基中有效成分破壞殆盡，甚至可能產生有害物質，使發(fā)酵水平下降30如何對發(fā)酵染菌進行原因分析？導師發(fā)酵染菌的原因錯綜復雜，但不外乎菌種、物料污染所帶入，設備泄露和死角所造成，空氣過濾失效及滅菌操作失誤等因素1從染菌的范圍來分析，單罐染菌應從單體設備的、清潔和滅菌操作上找原因，相同時間內同時出現(xiàn)幾個發(fā)酵罐染菌應該沖空氣系統(tǒng)、補料系統(tǒng)、排氣系統(tǒng)找原因單罐連續(xù)或間斷性染菌應從該罐的

13、清潔、試漏、死角或設備不合理方面找原因2從染菌的時間來分析，尚未補加料之前發(fā)生的前期染菌，一般染菌量大，應從物料滅菌不透、種子帶菌、泡沫頂罐、軸封滲漏等方面找原因，發(fā)酵的中后期染菌應從設備嚴密、空氣系統(tǒng)、補料系統(tǒng)以及中間工藝控制上找原因3從染菌的菌型來分析，染酵母菌、霉菌，由于起不抗熱，可從無菌室的消潔情況、倒瓶、并瓶時菌落數(shù)以及設備泄露上找原因染球菌、桿菌等不抗熱雜菌應從空氣過濾介質的破損失效、設備滲漏、培養(yǎng)基倒流等方面找原因染芽孢桿菌等抗熱雜菌時應從設備的死角、罐內的清潔、不合理的設備裝置以及滅菌操作上找原因31 .滅菌操作中為什么要以溫度為主，壓力為輔進行控制？控制加熱溫度是滅菌操作的主

14、要條件，控制罐壓是因為蒸汽壓力與溫度有一定的對應關系，一般情況下，滅菌時到達一定罐壓即表示溫度也到了，但是假設僅控制罐壓，則并不安全可靠，因操作不當可能會出現(xiàn)虛假罐壓，所以熱滅菌操作中必須要以溫度為主，壓力為輔進行控制32 .為什么培養(yǎng)基的常規(guī)工藝定為121度30分鐘？培養(yǎng)基的滅菌要到達兩個目的，一是盡可能殺死全部雜菌，尤其是芽孢，二是最大限度的保留培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分，目前認為最耐熱的嗜熱脂肪芽孢桿菌的芽孢作為研究對象，其結果是十分可靠的通過計算從理論上要殺死全部芽孢，需要無窮長的時間或上升到極高溫度，這樣就會使培養(yǎng)基成分幾乎全部被破壞，實際上要同時到達上述兩個目的，可以設定允許1/1000個細

15、菌存活，即1000批允許一批，在這個前提下，通過計算，結果為121度30分鐘.33為什么連續(xù)滅菌時培養(yǎng)基流速不能太快也不能太慢？連續(xù)滅菌的優(yōu)點是滅菌的時間短，培養(yǎng)基成分破壞少，連續(xù)滅菌時應注意控制打料溫度的均勻一致，防止忽快忽慢，因為培養(yǎng)基流速太快，在威勢罐內停留時間太短，滅菌不徹底，培養(yǎng)基流速過慢則培養(yǎng)基成分破壞就會增加，影響發(fā)酵單位的增加34連續(xù)滅菌方法的理論根據(jù)是什么？根據(jù)實驗，高溫快速滅菌的原則用細菌的芽孢和維生素在高溫下加熱后得出實驗數(shù)據(jù)如下：I、15分118度99,99%10%II、5分128度99.99%5%35設備造成染菌的原因？1空氣分布管安裝不合理2排氣與排污管道相互串聯(lián)在

16、一起.3補料管道安裝不合理造成死角.4總蒸汽與分蒸汽不合適，滅菌時“短路.5管道中的閥門和法蘭、絲扣等滲漏.6管壁穿孔罐內冷卻管穿孔.7軸封漏.36.連續(xù)染芽孢桿菌后為什么要堿水煮罐和浸泡管道？由于細菌芽孢比大腸桿菌對溫度的抵抗力大的多，故發(fā)酵罐染桿菌不易殺滅，在罐垢層中的芽孢桿菌更不易溶出殺滅，加入稀堿水浸煮后，可將芽孢桿菌在垢層中溶出，是芽孢破裂然后再加熱滅菌使易被殺滅37什么是消毒？用物理和化學的方法殺滅物體上的病原微生物使之不能成為傳染源，即為消毒38工業(yè)生產中常用的滅菌方法有那些？化學滅菌法、熱滅菌、射線滅菌、介質除菌39什么是細菌的致死時間和致死溫度？指在一定溫度下，殺死細菌所需要

17、的最短時間為致死時間在一定時間內，殺死細菌所需要的最低溫度為致死溫度40什么是濕熱滅菌法，它的原理是什么？根據(jù)滅菌物品的性質不同，選擇不同溫度的濕熱蒸汽進行滅菌的一種方法，原理是通過蒸汽加熱，溫度上升到細菌的致死范圍，使細菌體蛋白及酶類變化，凝固而死亡41什么是消毒滅菌的安全系數(shù)？消毒滅菌的安全系數(shù)是殺死芽抱桿菌的致死時間為依據(jù)，然后再增加50%,就等于消毒滅菌保溫時間42滅菌工藝控制點選擇的依據(jù)是什么？是雜菌的含量尤其是芽孢桿菌的含量，被滅菌物料的性質、設備結構及死角、物料的體積、細菌的致死范圍、總蒸汽的使用量及壓力、消后營養(yǎng)成分的破壞以及上述幾方面的綜合考慮43.為什么培養(yǎng)基中蛋白質含量越

18、高越不容易消透？蛋白質在加熱時會凝固在菌體外部形成一層膜，從而增強了菌體對外界不良條件的抵抗力，使雜菌不容易被殺滅，所以要嚴格控制時間和溫度44消毒溫度過高能使培養(yǎng)基產生那些有毒有害物質？蒸汽滅菌時間越長，溫度越高，對培養(yǎng)基營養(yǎng)成分破壞也越大，葡萄糖高溫滅菌分解生成的醛氨化合物是有毒物質，不僅影響菌種的生長、繁殖，嚴重是造成代謝異常，無機鹽類霉菌溫度過高也產生毒副作用CaCO3+KH2PO4-Ca(PO4)245消毒前空罐的準備包括那些內容？1罐內外設備的檢查，罐內轉動設備、罐內管路有無穿孔、堵塞、斷裂.罐外設備、管路檢查無泄露、堵塞、閥門換墊2罐內死角的消除.3罐體焊縫、閥門、法蘭、三通的嚴

19、密度檢查，防止泄露.46實罐消毒滅菌的物理性質是什么？原理是什么？實罐消毒滅菌的物理性質是熱傳遞的傳導過程及對流過程它的原理是伴隨著物質大量分子是定向運動，氣體和液體受熱的部分嚴密度較小會產生上升運動，較冷部分密度較大，會產生下降的運動從而引起對流這種對流是靠直接蒸汽加速熱傳遞的全過程，所以這種對流應當叫受迫對流47實消過程中罐壓上升緩慢是什么原因？實消過程中加熱升溫升壓的時間一般控制在30左右，即可使蒸汽壓力到達0.1MPa,溫度到達118-120讀，這是正常的控制范圍，如果超出以上時間，仍然達不到要求，需進行如下檢查：1總蒸汽壓力是否低于0.2MPa.2罐上夾層或蛇行管進水閥、回水閥是否泄

20、露.3夾層或蛇管內冷水能否暢通排除.4:進汽支管及閥門有無堵塞.5罐上壓力表是否靈敏.6各支管進汽量控制是否適當.48.實消過程中泡沫頂罐，無法控制進汽怎么辦？實消過程中泡沫頂罐，各支管無法進汽，罐壓升高，是造成染菌的重要原因，除忘加消沫劑原因以外，當發(fā)生以上異常情況時可采取如下措施：1關閉所有進汽閥門，關閉排氣閥悶罐.2利用攪拌的作用把泡沫壓下去.3幾分鐘后，適當減低罐壓重新組織進汽.4注意控制進汽量與排汽量的餓平衡.5升溫升壓時間不能過快和過短，主蒸汽開關要適度合理.49實消過程中罐壓與罐溫不一致怎么辦？實消過程中壓力與溫度是對應的關系，一旦發(fā)生不一致時應重點檢查：1進汽量與排汽的控制，是

21、否形成假壓力，如果操作不當應重新組織合理進汽排除假壓力，如無假壓力產生的跡象，再進行副下檢查2罐上壓力表是否失靈或堵塞，可進行更換或疏通.3罐上玻璃溫度計是否失靈或溫度計套管內有無導熱劑，可進行溫度計更換，或在溫度計套管內加導熱劑50假壓力產生的原因是什么？如何防止假壓力？實消過程中，熱傳遞的對流進行不迅速，不充分，即升溫的時間很短，物料沒有到達均勻的滅菌溫度，而罐內及物料內的低溫氣體又沒有充分排出，并且還在繼續(xù)產生，這就是產生假壓力的主要原因防止假壓力的正確操作是：1進汽量分主次.2注意排汽，調節(jié)進汽量和排汽量.3用手感檢查各支管傳熱情況.51.實消過程中的主要因素是什么？1發(fā)酵罐及附屬閥門

22、管線無泄露、無死角、無堵塞.2滅菌時夾層或蛇管內冷水徹底排盡.3滅菌時做到進汽量分主次，以加速熱傳遞的對流防止假壓力.52連消過程中，物料總管路在準備滅菌時應注意什么？連續(xù)消毒系統(tǒng)設備中，物料總管路是一條無菌管路，他的特點是支管多，閥門多，管線長，因此，為確保滅菌徹底應進行如下準備：1總管路上確保無泄露，無堵塞，無死角，打料總閥定期檢查.2物料支管各閥門應防止物料粘結，焦化物堵塞而泄露，并定期檢查閥門頭，但凡帶熱閥門應定期換熱檢查1. 總管路滅菌時應注意壓力變化及傳熱情況，防止焦化物堵塞而造成滅菌不徹底53連消塔及維持罐的工作原理是什么？連消塔只起到給物料加熱升溫的作用，它只給了細菌的致死溫度，并不能殺死耐熱的芽孢桿菌，因為連消塔在給細菌致死溫度的同時，物料是在有流速的狀態(tài)下進行的由連消塔打入維持罐的高溫物料，在維持罐內自下而上的層流，排出后進入冷卻器，這個層流的過程就是物料保溫滅菌的維持過程54. 怎樣才能保證連消過程中溫度控制平穩(wěn)及流速的控制均勻？連消過程中嚴格要求控制打料溫度的平穩(wěn)，打料流速的均勻是消滅雜菌的重要一環(huán)，要做到這一點，必須控制好以下幾個方面：1總蒸汽壓力要穩(wěn)定，0.4MPa減少波動最好自控.2培養(yǎng)基配后溫度應控制在75度左右，無太大波動.3打料泵無泄露，泵壓穩(wěn)定.4打料泵前過濾器做到批批清洗.5連消