心喘膠囊對犬實(shí)驗(yàn)性心力衰竭時(shí)神經(jīng)內(nèi)分泌過度激活的調(diào)節(jié)作用研究

1、心喘膠囊對犬實(shí)驗(yàn)性心力衰竭時(shí)神經(jīng)內(nèi)分泌過度激心喘膠囊對犬實(shí)驗(yàn)性心力衰竭時(shí)神經(jīng)內(nèi)分泌過度激活的調(diào)節(jié)作用研究活的調(diào)節(jié)作用研究作者：楊志旭,李潔,尚曉泓,李春生作者單位：中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院,北京 100091 國家自然科學(xué)基金資助(39400175)【摘要】目的 研究心喘膠囊對心力衰竭時(shí)神經(jīng)內(nèi)分泌過度激活的調(diào)節(jié)作用。方法 采用靜脈泵入戊巴比妥鈉復(fù)制犬心力衰竭動物模型,十二指腸給予心喘膠囊水提取液,觀察各組神經(jīng)內(nèi)分泌過度激活相關(guān)指標(biāo)的變化。結(jié)果 心喘膠囊具有明顯提高衰竭心臟心肌細(xì)胞受體密度,降低血漿去甲腎上腺素、腎上腺素水平的作用；還具有明顯降低血漿血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性的作用,這方面作用與陽性對照

2、藥倍他樂克加開博通作用相似。結(jié)論 心喘膠囊對心力衰竭時(shí)神經(jīng)內(nèi)分泌過度激活具有調(diào)節(jié)作用。提出中醫(yī)對心力衰竭的治療,除了針對“心主血脈”功能失調(diào)進(jìn)行治療外,還應(yīng)針對“心藏神”功能失調(diào),即心神不寧進(jìn)行調(diào)治?！娟P(guān)鍵詞】心喘膠囊；心力衰竭；神經(jīng)內(nèi)分泌；犬Study on the Regulatory Effect of Xinchuan Capsules on theExcessive Aactivation of Neuroendocrine of Dogs with ExperimentalHeart Failure YANG Zhi-xu, LI Jie, SHANG Xiao-hong, et

3、alXiyuanHospital, China Academy of Chinese Medical Sciences, Beijing 100091,ChinaAbstract：Objective To investigate the regulatory effect ofXinchuan capsules on the excessive activation of neuroendocrine withheart failure. Methods The heart failure animal model was built upusing dogs by intravenous p

4、umping of sodium pentobarbital. Waterextract of Xinchuan capsules was given through duodenum. Indicatorsrelating to the excessive activation of neuroendocrine changes ofeach group were observed. Results Xinchuan capsules couldsignificantly increase the density of beta receptors of failuremyocardial

5、cells and lower the level of plasma norepinephrine andepinephrine, and remarkbly decrease the activity of plasmaangiotensin converting enzyme. This played the similar role as thepositive control drug metoprolol plus captopril. Conclusion Xinchuancapsules have the regulatory effect on the excessive a

6、ctivation ofneuroendocrine with heart failure. TCM treatment for heart failureshould not only target the functional disorder of the heartdominating blood circulation and vessels, but also the functionaldisorder of the heart stores the spirit, that is uneasy mental state.Key words：Xinchuan capsules；h

7、eart failure；neuroendocrine；dog心力衰竭是一種復(fù)雜的臨床綜合征,臨床常見而危害嚴(yán)重。20 世紀(jì) 80年代以來,隨著對心力衰竭基礎(chǔ)和臨床研究的不斷深入,認(rèn)為心力衰竭已不是單純的血流動力學(xué)障礙,更重要的是多種神經(jīng)體液因子的參與,從而促使心衰持續(xù)發(fā)展。心力衰竭時(shí),作為代償機(jī)制的神經(jīng)內(nèi)分泌激活常有過度,反而對心血管系統(tǒng)有害。為此,筆者進(jìn)行心喘膠囊水提取液對犬實(shí)驗(yàn)性心力衰竭時(shí)神經(jīng)內(nèi)分泌過度激活的調(diào)節(jié)作用研究。1實(shí)驗(yàn)材料1.1動物健康成年雜種犬 20 只,體重(14.812.45)kg,雌雄兼用,北京實(shí)驗(yàn)動物養(yǎng)殖調(diào)劑中心,合格證號：京幼管犬字(96)第 030 號。1.2藥物

8、心喘膠囊水提取液,l g 原藥材/mL,中國中醫(yī)科學(xué)院西苑醫(yī)院制劑研究室提供；美托洛爾,25 mg/片,阿斯特拉無錫制藥有限公司生產(chǎn)；卡托普利片,25mg/片,常州制藥廠生產(chǎn)；戊巴比妥鈉,上?；瘜W(xué)試劑采購供應(yīng)站分裝；肝素鈉注射液,12 500 U/支,上海生物化學(xué)制藥廠生產(chǎn)。2實(shí)驗(yàn)方法2.1造模實(shí)驗(yàn)動物經(jīng)戊巴比妥鈉(30 mg/kg)靜脈麻醉,氣管插管,連接電動人工呼吸機(jī)；分離右側(cè)股靜脈,連接恒速蠕動泵,以備輸入戊巴比妥鈉；分離右側(cè)股動脈插管,測量動脈血壓(BP)；左側(cè)第 4 肋間開胸,暴露心臟,剪開心包,做心包床；分離主動脈,測量心輸出量(CO)；左心室尖部插管,測定左室內(nèi)壓峰值(LVP),

9、左室舒張末期壓(LVEDP),左心室內(nèi)壓變化速率最大值(dp/dtmax)；記錄標(biāo)準(zhǔn)導(dǎo)心電圖(ECG),根據(jù)心電圖 R 波峰判斷心室開始收縮的起點(diǎn)至 dp/dtmax 的間隔時(shí)間(R-dp/dtmax)；測定心率(HR)并描記變化曲線；在左心室表面縱向放置心肌張力換能器測量左室心肌收縮力(LVMCF)。上述各項(xiàng)指標(biāo)同步記錄于多道生理記錄儀。施腹部手術(shù),十二指腸插管,以備給予所試藥物。靜脈推注肝素注射液(125 U/kg)進(jìn)行肝素化,30 min 后,記錄各項(xiàng)指標(biāo), 作為心衰前基礎(chǔ)值。經(jīng)蠕動泵恒速輸入 2%戊巴比妥鈉,造成心力衰竭動物模型,記錄各項(xiàng)心衰后指標(biāo)(藥前值)。經(jīng)十二指腸給入所試藥物。分

10、別于造模前、給藥前以及給藥后 60、120、180 min 抽血,放低溫離心機(jī)離心 10 min 后,取血漿置入-20 冰箱保存?zhèn)錂z。180 min 后處死動物并立即取出犬左心室心肌組織一塊,用紗布包裹后放置于95%O25%CO2 飽和的冷 Krebs 液中備用。2.2分組及給藥將 20 只成年雜種犬隨機(jī)分為 4 組,每組 5 只?？瞻讓φ战M給生理鹽水 3mL/kg；心喘膠囊小劑量組給 2 g 原藥材/kg；心喘膠囊大劑量組給 4 g 原藥材/kg；陽性對照組給倍他樂克 0.2 mg/kg,加開博通 2.8 mg/kg。上述實(shí)驗(yàn)藥物均在實(shí)驗(yàn)前用生理鹽水配制成等體積(3 mL/kg),經(jīng)十二指腸

11、給藥。2.3觀察指標(biāo)及方法2.3.1心肌細(xì)胞受體密度測定采用放射配體結(jié)合實(shí)驗(yàn)。將犬左心室心肌組織在 20 mL 含 NaCl 154mmol/L 的 20 mmol/L 磷酸鈉鹽緩沖液(PBS)中制備勻漿,經(jīng)過濾,離心處理后制成粗制細(xì)胞膜標(biāo)本,保存于冰浴中備用。膜標(biāo)本分別用 PE 10 mol/L,PE5-MU 1 mmol/L 溫育 l0 min,或 CEC 20 mmol/L 預(yù)處理后加 PE 溫育 10 min,然后做 125I 吲哚洛爾(pindolol,Pin)的結(jié)合飽和實(shí)驗(yàn),125I Pin 濃度范圍為20590 pmol/L,經(jīng) Scatchard 分析,求出配體解離常數(shù)(Kd)

12、和最大結(jié)合容量(Bmax)1。2.3.2血漿去甲腎上腺素、腎上腺素含量測定用高效液相色譜電化學(xué)法測定血漿去甲腎上腺素(NE)、腎上腺素(E)含量。2.3.3血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性測定按馬尿酰甘氨酰甘氮酸合成法,使用紫外分光光度計(jì)測定血清血管緊張素轉(zhuǎn)換酶(ACE)活性2。2.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用 xs 表示,以 t 檢驗(yàn)判斷其顯著性。3結(jié)果3.1犬心力衰竭動物模型的血流動力學(xué)變化戊巴比妥鈉造成犬實(shí)驗(yàn)性心力衰竭后,血流動力學(xué)指標(biāo)發(fā)生明顯變化,20只犬實(shí)驗(yàn)結(jié)果統(tǒng)計(jì)顯示：LVP 由(115.4325.10)mm Hg 降至(48.0011.80)mmHg,下降(58.0412.37)%；dp/dtma

13、x 由(2 938.1898.6)mm Hg/s 降至(750.0200.0)mm Hg/s,下降(73.119.17)%；BP 由(128.3825.48)mm Hg 降至(56.1919.36)mm Hg,下降(54.9016.41)%；LVEDP 由(10.192.71)mm Hg升至(15.343.27)mm Hg,上升(54.5527.04)%；R-dp/dtmax 由(72.009.38)ms 增至(83.629.37)ms,增加(17.0612.33)%；HR 由(171.2924.11)次/min 減慢至(127.8117.80)次/min,減慢(24.5411.50)%；CO

14、 由(1.470.50)L/min 下降至(0.830.38)L/min,下降(43.4822.15)%；LVMCF 由(16.592.00)mm 減至(10.322.66)mm,下降(37.6614.99)%。結(jié)果表明,靜脈恒速輸入一定濃度戊巴比妥鈉,麻醉犬出現(xiàn)典型的心力衰竭,持續(xù)時(shí)間達(dá) 3 h 以上。3.2心喘膠囊水提液對犬心肌細(xì)胞受體密度的影響(見表 1)表 1心喘膠囊水提液對犬心肌細(xì)胞受體密度的影響(略)注：與空白對照組比較,P0.05；與心衰模前組比較,P0.05。3.3心喘膠囊水提液對犬血漿去甲腎上腺素的影響(見表 2)表 2心喘膠囊水提液對犬血漿 NE 的影響(略)注：與空白對照

15、組比較,P0.05；與本組藥前比較,*P0.05。3.4心喘膠囊水提液對犬血漿腎上腺素的影響(見表 3)表 3心喘膠囊水提液對犬血漿 E 的影響(略)注：與空白對照組比較,P0.01。3.5心喘膠囊水提液對犬血漿血管緊張素轉(zhuǎn)換酶活性的影響(見表 4)表 4心喘膠囊水提液對犬血漿 ACE 活性的影響(略)注：與空白對照組比較,P0.05；與陽性對照組比較,P0.05；與本組藥前比較,*P0.01。4討論中醫(yī)認(rèn)為心力衰竭乃本虛標(biāo)實(shí)之證,心氣心陽虧虛是其病理基礎(chǔ)。由于心氣虛,心陽不振,鼓動力減弱,影響血脈運(yùn)行,久之則致血瘀水停而產(chǎn)生。因而,目前中醫(yī)對心力衰竭的治療主要集中在益氣、溫陽、活血、利水范圍

16、,這與西醫(yī)傳統(tǒng)的強(qiáng)心、利尿、擴(kuò)血管、減輕心臟前后負(fù)荷的治療原則相似。但是,中醫(yī)認(rèn)為心的生理功能主要有 2 個：一是“心主血脈”,一是“心藏神”,兩者密切相關(guān),互為因果,功能失調(diào)時(shí)也相互影響。心喘膠囊系以本院已故著名老中醫(yī)岳美中教授和著名中西醫(yī)結(jié)合專家陳可冀院士的經(jīng)驗(yàn)方“人參三七琥珀末”為基礎(chǔ),結(jié)合本院老中醫(yī)李春生教授的臨床體會研制而成,具有益氣活血、寧心安神之功效,臨床長期用于治療心力衰竭,療效滿意。本實(shí)驗(yàn)表明,心喘膠囊具有明顯提高犬心力衰竭模型中衰竭心臟心肌細(xì)胞受體密度,降低血漿 NE、E 水平的作用；心喘膠囊還具有明顯降低血漿ACE 活性的作用,與受體阻滯劑倍他樂克加血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑開博通作用相似。交感神經(jīng)過度緊張可使腎上腺素能神經(jīng)末梢釋放 NE 增多,同時(shí),可激活交感-腎上腺系統(tǒng),促進(jìn) NE、E 的合成與釋放。交感神經(jīng)過度緊張,一方面可引起心肌細(xì)胞受體下調(diào),另一方面可激活腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(RAAS),而RAAS 激活后,血管緊張素在 ACE 轉(zhuǎn)換酶的活化作用下轉(zhuǎn)化為血管緊張素,后者