生物選修一知識點(diǎn)總結(jié)背誦

1、選彳1基礎(chǔ)知識點(diǎn)背誦 專題一傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用 課題1果酒和果醋和制作 一'、果酒制作1 .原理：菌種 酵母菌,屬于 真 核生物、新陳代謝類型 異於，有氧時，呼吸的反應(yīng)式為：C6H12O6+O2 / CO2+H2O+能量 ；無氧時，呼吸的反應(yīng)式為：C6H12O6-C2H5OH+CO2+能量。酵母菌在有氧和無氧的條件下都能生活：在有氧時，酵母菌大量繁殖，但是不起到發(fā)酵效果；在無氧時，繁殖速度減慢，但是此時可以進(jìn)行發(fā)酵。2 .條件：繁殖最適溫度18 c25C,酒精發(fā)酵一般控制在20 Co發(fā)酵液：缺氧呈酸性（傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)所使用的酵母菌的來源）3 菌種來源.自然發(fā)酵：附著于葡萄皮上的野生 型酵

2、母菌。不 、. 人工培養(yǎng)：分離獲得得純凈的酵母 菌菌種?，F(xiàn)在工廠化生產(chǎn)果酒，為提高果酒的品質(zhì)，更好地抑制其它微生物的生長，采取的措施是對原料和設(shè)備進(jìn)行消毒和滅菌，并接入合適的菌種 。4 .實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)流程圖挑選葡萄一沖洗一榨汁一酒精發(fā)酵一醋酸發(fā)酵果酒果醋5 .實(shí)驗(yàn)步驟： .對發(fā)酵瓶、紗布、榨汁機(jī)、盛葡萄汁的器皿等實(shí)驗(yàn)用具進(jìn)行清洗并消毒。先用溫水 反復(fù)沖洗幾次，再用體積分?jǐn)?shù)為75%的酒精擦拭消毒，晾干待用。 取葡萄500 g,去除枝梗和腐爛的子粒。 用清水沖洗葡萄12遍除去污物，注意不要反復(fù)多次沖洗。 用榨汁機(jī)榨取葡萄汁后，將其裝入發(fā)酵瓶中或?qū)⑵咸汛虺蓾{后， 用潔凈的紗布過濾 至發(fā)酵瓶中，蓋好瓶蓋。

3、如果沒有合適的發(fā)酵裝置，可以用 500 mL的塑料瓶替代， 但注入的果汁量不要超過塑料瓶總體積的 2/3。 將發(fā)酵瓶置于適宜的溫度下發(fā)酵。由于發(fā)酵旺盛期CO2的產(chǎn)量非常大，因此需要及時排氣，防止發(fā)酵瓶爆裂。如果使用簡易的發(fā)酵裝置，如瓶子（最好選用塑料瓶），每天要擰松瓶蓋24次，進(jìn)行排氣。10 d以后，可以開始進(jìn)行取樣檢驗(yàn)工作。例如，可以檢驗(yàn)酒味、酒精的含量、進(jìn)行 酵母菌的鏡檢等工作。6 .根據(jù)教材P4操作提示設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟及裝置。充氣口作用:充氣口是在醋酸發(fā)酵時I車接充氣泵進(jìn)行的；NE氣口作用:排氣口是在酒精發(fā)酵時用來排出 CO2勺; 出料口作用:出料口是用來取樣的。排氣口要通過一個長而彎曲的膠

4、管與瓶身連接，具目的是防止空氣中微生物的污染。使用該裝置制灑時，應(yīng)該關(guān)閉充氣口;制醋時，應(yīng)將充氣口連接氣泵：通入氧氣。實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析與評價：可通過嗅覺和品嘗初步鑒定，并用 _酸性的重銘酸鉀_檢驗(yàn)酒精存在?？捎^察到的現(xiàn)象為一二、果醋的制作：1 .原理：菌種： 醋酸菌,屬于 原 核生物，新陳代謝類為 異養(yǎng)需氧型 醋酸生成反應(yīng)式是 當(dāng)缺少糖源時和n深件下，可將乙醇（酒精）氧化成醋酸。表達(dá) 式為：C2H5OH-CH3COOH+H2O;當(dāng)氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖 分解成醋酸。2 .條件：最適合溫度為 30-35C ,需要充足的 氧氣。3 .設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)流程及操作步驟：果酒制成以后，在發(fā)酵液中加

5、入 醋酸菌菌種 或醋曲，然后將裝置轉(zhuǎn)移至30-35C條件下發(fā)酵、適時向發(fā)酵液中通入空氣 。如果沒有充氣裝置，可以將瓶蓋打開，在瓶蓋上紗布，以減少空氣中塵土污染?！疽呻y點(diǎn)撥】1、認(rèn)為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？答：應(yīng)該先沖洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗時引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機(jī)會。2、認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？答：需要從發(fā)酵制作的過程進(jìn)行全面的考慮，因?yàn)椴僮鞯拿恳徊蕉伎赡芑烊腚s菌。例如：榨汁 機(jī)、發(fā)酵裝置要清洗干凈；每次排氣時只需擰松瓶蓋、不要完全揭開瓶蓋等。3 .制葡萄酒時，為什么要將溫度控制在1825 C?制葡萄醋時，為什么要將溫度控制在30 -35 C?答：

6、溫度是酵母菌生長和發(fā)酵的重要條件。20 C左右最適合酵母菌繁殖。因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌，最適生長溫度為3035 C,因此要將溫度控制 在3035 C。4 .制葡萄醋時，為什么要適時通過充氣口充氣？答：醋酸菌是好氧菌，在將酒精變?yōu)榇姿釙r需要氧的參與，因此要適時向發(fā)酵液中充氣。課題2腐乳的制作一、腐乳制作的原理1 .腐乳的發(fā)酵有多種微生物的協(xié)同作用，如 毛霉、 曲霉、青霉、酵母菌等,其中起 主要作用的是毛霉。它是一種絲狀真菌，常見于土壤、水果、蔬菜、谷物上。新陳代謝類型是異養(yǎng)需氧型。2 .半霉 等微牛物產(chǎn)牛的重白酶可以將豆腐中的重白質(zhì) 分解成小分子的肽 和 氨基酸；

7、脂肪酶可以將脂肪水解成 甘油和 脂肪酸。3 .現(xiàn)代的腐乳生產(chǎn)是在嚴(yán)格的 無菌 條件下、將優(yōu)良 毛霉 菌種直接接種在豆腐上、這樣可 以避免其他菌種的污染：保證產(chǎn)品的質(zhì)量。二、腐乳制作的實(shí)驗(yàn)流程：讓豆腐長出毛霉一 加鹽腌制 - 加鹵湯裝瓶-密封腌制。三、實(shí)驗(yàn)材料含水量70%的豆腐，粽葉，盤子，鹽，黃酒，米酒，糖，香辛料等，廣口玻璃瓶，高壓鍋四、實(shí)驗(yàn)步驟1 .豆腐切塊，放在籠屜內(nèi)，溫度控制在15-18C ,約48h后，毛霉逐漸生長，大約5d后,豆腐表面叢生直立菌絲。2 .長滿毛霉的豆腐塊（以下稱毛坯）分層擺放，分層加鹽，并逐層增加鹽量，在瓶口表面鹽要鋪厚些，約腌制8do3 .將黃酒、米酒和糖、香辛料

8、等混合制成鹵湯。鹵湯 酒精含量控制在12%為官。4 .將腐乳成坯擺入瓶中，加入鹵湯和輔料后，將瓶口用酒精燈加熱滅菌，用膠條密封，常溫 下，六個月即可以成熟?！疽呻y點(diǎn)撥】1 .王致和為什么要撒許多鹽，將長毛的豆腐腌起來？答：鹽能防止雜菌污染，避免豆腐腐敗。2 .配制鹵湯時，一般將酒精含量控制在 12%左右，過高過低都不行，為什么？（酒精的作用是調(diào)節(jié)風(fēng)味和殺菌防腐）答：酒精含量的高低與腐乳后期發(fā)酵時間的長短有很大關(guān)系。酒精含量過高，會使腐乳成熟期延長；過低則不能抑制雜菌生長，使腐乳腐敗變質(zhì)。3 .豆腐坯用食鹽腌制，其作用是什么？答：使豆腐析水變硬；鹽能抑制多種微生物的生長，防止腐敗變質(zhì)。4 .鹵湯

9、中香辛料的作用是什么？調(diào)味促進(jìn)發(fā)酵殺菌防腐解釋：（香辛料如花椒、大蒜、茴香中含有花椒酰胺、蒜辣素、茴香醴及茴香醛等，有極強(qiáng)的 殺菌力；又有良好的調(diào)味功能；香辛料成分參與發(fā)酵過程，合成復(fù)雜的酯類，使腐乳形成特有 色、香、味。）5 .你能利用所學(xué)的生物學(xué)知識，解釋豆腐長白毛是怎么一回事？答：豆腐上生長的白毛是毛霉的白色菌絲。嚴(yán)格地說是直立菌絲，在豆腐中還有匍匐菌絲。6 .我們平常吃的豆腐，哪種適合用來做腐乳？答：含水量為70%左右的豆腐適于作腐乳。用含水量過高的豆腐制腐乳，不易成形。7 .吃腐乳時，你會發(fā)現(xiàn)腐乳外部有一層致密的“皮”。這層“皮”是怎樣形成的呢？它對人體 有害嗎？它的作用是什么？答：

10、“皮”是前期發(fā)酵時在豆腐表面上生長的菌絲（匍匐菌絲），它能形成腐乳的“體”， 使腐乳成形?！捌ぁ睂θ梭w無害。課題3制作泡菜一、原理1 .制作泡菜所用微生物是乳酸菌，常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。乳酸桿菌常用于 生產(chǎn)酸奶。其代謝類型是 異養(yǎng)厭氧 型。在無氧條件下，降糖分解為乳酸 。酶2 .反應(yīng)式為：C6H12O62c3H6O3+量【備注】：含抗生素牛奶不能生產(chǎn)酸奶的原因是抗生素殺死乳酸菌3 .亞硝酸鹽為白色粉末，易溶于水，在食品生產(chǎn)中用作食品添加劑。 人體攝入量達(dá)到0.3-0.5g 時引起中毒，達(dá)到3g時，引起死亡。衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，肉制品中亞硝酸鹽殘留不得超過30mg/kg, 醬腌菜中不得超

11、過20mg/kg,嬰兒奶粉中不得超過2mg/kg。亞硝酸鹽被吸收后隨尿液排出體外， 但在適宜pH、溫度和一定微生物作用下形成致癌物質(zhì)亞硝胺。二、亞硝酸鹽的檢測 一般在腌制10天后亞硝酸鹽含量開始降低，故 在10天之后食用最好。檢測方法：比色法檢測原理：在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對 氨基苯磺酸 發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-蔡基乙二 胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標(biāo) 準(zhǔn)顯色液目測比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量。專題二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題1微生物的實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)一、培養(yǎng)基：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)，是進(jìn) 行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。1、【分類】(1)培養(yǎng)

12、基按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基 半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。具體用途如下：固體培養(yǎng)基中加入了凝固劑，一般是瓊脂。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可以形成肉眼 可見的菌落。根據(jù)菌落的特征可以判斷是哪一種菌。液體培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn)，固體培養(yǎng)基應(yīng)用于微生物的分離和鑒定，半固體培養(yǎng) 基則常用于觀察微生物的運(yùn)動及菌種保藏等。(2)按照成分培養(yǎng)基可分為人工合成培養(yǎng)基 和天然培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基是用成分已知的化學(xué) 物質(zhì)配制而成，其中成分的種類比例明確，常用于微生物的分離鑒定。天然培養(yǎng)基是用化學(xué)成 分不明的天然物質(zhì)配制而成，常用于實(shí)際工業(yè)生產(chǎn)。(3)按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選擇

13、培養(yǎng)基是指在培養(yǎng) 基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長。鑒別培養(yǎng) 基是根據(jù)微生物的特點(diǎn)，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的， 用以鑒別不同類 別的微生物。2、【培養(yǎng)基的成分】水、無機(jī)鹽、碳源、氮源、生長因子等。止匕外，培養(yǎng)基還要滿足微生物生長對 PH特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。二、無菌技術(shù)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵，要注意以下幾個方面：對實(shí)驗(yàn)操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實(shí)驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。實(shí)驗(yàn)操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材

14、料用具與周圍的物品相接觸。無菌技術(shù)除了用來防止實(shí)驗(yàn)室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。1、【消毒與滅菌的區(qū)別】消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物(不包括芽抱和抱子)。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法(對于一些不耐高溫的液體) 還有化學(xué)藥劑(如酒精、氯氣、石炭酸等)消毒、 紫外線消毒。滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽抱和抱子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。滅菌方法：接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是

15、干熱滅菌箱培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。比較 項(xiàng)理化因素的作用 強(qiáng)度消滅微生物的數(shù)量芽抱和抱子能否被 消滅較為溫和部分生活狀態(tài)的微 生物不能火菌強(qiáng)烈全部微生物能3、【制作牛肉膏蛋白豚固體培養(yǎng)基】(1)方法步驟：計(jì)算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。(2)倒平板操作的步驟：將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過火焰。用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基(約1020mD倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。等待平板冷

16、卻凝固，大約需510min。然后，將平板倒過來放置，使培養(yǎng)皿蓋在下、皿 底在上。倒平板操作的討論1 .培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到 50c左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計(jì)培養(yǎng)基的 溫度？提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶， 感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。2 .為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3 .平板冷凝后，為什么要將平板倒置？答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高， 將平板倒置， 既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。4 .在倒平板的過程中，

17、如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。4、【純化大腸桿菌】(1)微生物接種的方法最常用的是 平板劃線法和稀釋涂布平板法。(2)平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。常用于菌種的分離和純化。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的 肉眼可見的子細(xì)胞群體，這就是菌 落。(3)稀釋涂布平板法 是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到 瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作

18、和涂布平板操作兩步。常用于菌種的分 離、純化和計(jì)數(shù)(4)用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的 目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落，以便于純化菌種。平板劃線操作的討論1 .為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后， 接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán) 上的菌種直接來源于上次劃線的末端， 從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐 漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種

19、環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌 污染環(huán)境和感染操作者。2 .在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。3 .在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能 使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。涂布平板操作的討論涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？提示：應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證 無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不 要

20、接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。5、【菌種的保存】(1)對于頻繁使用的菌種，可以采用 臨時保藏的方法。臨時保藏方法將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長成后，將試管放 入4c的冰箱中保藏。以后每36個月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng) 基上。缺點(diǎn)：這種方法保存的時間不長，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。(2)對于需要長期保存的菌種，可以采用 甘油管藏的方法。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在 -20C的冷凍箱中保存。6、派【疑難解答】X(1)生物的營養(yǎng)營養(yǎng)是指生物攝取、利用營養(yǎng)物質(zhì)的過程。營養(yǎng)物質(zhì)是指維持機(jī)體生命活動，保證

21、發(fā)育、 生殖所需的外源物質(zhì)。(2)確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫 12天，無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的， 否則需要重新制備。課題2【土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)】尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素， 是因?yàn)樗麄兡芎铣?月尿酶一、篩選菌株(1)實(shí)驗(yàn)室中微生物的篩選應(yīng)用的原理人為提供有利于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時抑制或阻止其他微 生物生長。(2)選擇性培養(yǎng)基在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的

22、培 養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基0(3)配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點(diǎn)加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。例如，培養(yǎng)基中不 加入有機(jī)物可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng)能固氮的微生物； 加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。例如，本實(shí)驗(yàn)選擇尿素為唯一氮源的選擇培 養(yǎng)基，使只有能分解尿素的細(xì)菌才能在其上生長。二、統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)目(1)測定微生物數(shù)量的常用方法有 稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計(jì)數(shù)。(2)稀釋涂布平板法統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目的原理當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。 通過統(tǒng)計(jì)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約

23、含有多少活細(xì)菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置35個平板，選擇菌落數(shù)在30300的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，并取平均值。統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往 比活菌的實(shí)際數(shù)目低，因此，統(tǒng)計(jì)結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。三、設(shè)置對照設(shè)置對照的主要目的是排除實(shí)驗(yàn)組中非測試因素對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可信度。對照實(shí)驗(yàn)是指除了被測試的條件以外，其他條件都相同的實(shí)驗(yàn)，其作用是比照試驗(yàn)組，排 除任何其他可能原因的干擾，證明確實(shí)是所測試的條件引起相應(yīng)的結(jié)果。四、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)包括實(shí)驗(yàn)方案，所需儀器、材料、用具和藥品，具體的實(shí)施步驟以及時間安排等 的綜合考慮和安排。4 1) 土壤取樣：同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物，數(shù)量最大

24、，種類最多。在富含有機(jī)質(zhì)的土壤表層，有更多的微生物生長。從富含有機(jī)物、潮濕、pH-7的土壤中取樣。鏟去表層土，在距地表約38cm的土壤層取樣。(2)樣品的稀釋：樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長的菌落數(shù)目。在實(shí)際操作中，通常 選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30300之間、適于計(jì)數(shù)的平板。測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用 104 105 106 測定放線菌的數(shù)量，一般選用103 104 105測定真菌的數(shù)量，一般選用102 103104(3)微生物的培養(yǎng)與觀察不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。細(xì)菌3037c 12天，放線菌 2528 c 57天 霉菌 252

25、8 c 34 天每隔24小時統(tǒng)計(jì)一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng) 時間不足而導(dǎo)致一樓菌落的數(shù)目。一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下(相同的培養(yǎng)基、唯獨(dú)及培 養(yǎng)時間)，同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。形狀、大小、隆起程度、顏色 五、疑難解答(1)如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？統(tǒng)計(jì)某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計(jì) 3個平板，計(jì)算出平板菌落數(shù)的平均值每克樣品中的菌落數(shù)=(C/V) *M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積(ml), M代表稀釋倍數(shù)(2)為什么統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低？答：因?yàn)楫?dāng)兩

26、個細(xì)胞沒有分離時，長成的菌落是1個。課題3【分解纖維素的微生物的分離】纖維素，一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。 一、纖維素與纖維素酶(1)棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，木材、作物秸稈等也富含纖維素。(2)纖維素酶是一種復(fù)合酶,一般認(rèn)為它至少 包括三種組分，即Ci酶、Cx酶和葡萄糖甘酶, 前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖 。纖維素最終被水解 成葡萄糖，為微生物的生長提供營養(yǎng)。二、纖維素分解菌的篩選(1)篩選方法：剛果紅染色法。能夠通過顏色反應(yīng)直接對微生物進(jìn)行篩選。(2)剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理剛果紅是一種染

27、料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成 紅色復(fù)合物，但并不和水解后 的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時，剛果紅能 與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。 當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅-纖維素的復(fù)合物 就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的 透明圈。這樣，我們就可以通過是否產(chǎn) 生透明圈來篩選纖維素分解菌。三、分離分解纖維素的微生物的實(shí)驗(yàn)流程流程：土壤取樣一選擇培養(yǎng)(此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定) 一梯度稀釋一將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上 一挑選產(chǎn)生透明圈的菌落5 1) 土壤采集 選擇富含纖維素的環(huán)境。(2)剛果紅染色

28、法分離纖維素分解菌的步驟：倒平板操作、制備菌懸液、涂布平板(3)剛果紅染色法種類一種是先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)，另一種是在倒平板時就加入剛果紅。注意事項(xiàng)：該實(shí)驗(yàn)中選擇培養(yǎng)環(huán)節(jié)使用的 選擇培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基，纖維素分解菌并不是 其中的唯一微生物，該環(huán)節(jié)的作用是提高纖維素分解菌的濃度。四、課題延伸對分解纖維素的微生物進(jìn)行了初步的篩選后，只是分離純化的第一步，為確定得到的是纖 維素分解菌，還需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實(shí)驗(yàn)， 纖維素酶的發(fā)酵方法有 液體發(fā)酵和固體發(fā)酵 兩種。纖維素酶的測定方法，一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定 量的測定。五、疑難解答(1)為什么要在富含

29、纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對提高， 因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。(2)將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集， 實(shí)際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適 宜環(huán)境。一般應(yīng)將紙埋于深約10cm左右腐殖土壤中。(3)兩種剛果紅染色法的比較方法一是傳統(tǒng)的方法，缺點(diǎn)是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜；具優(yōu)點(diǎn) 是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。方法二的優(yōu)點(diǎn)是操作簡便，不存在菌落混雜問題，缺點(diǎn)是由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有

30、淀粉類物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶 的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊，因?yàn)榕囵B(yǎng)基中纖維素占主要地位，因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。 方法二的另一缺點(diǎn)是：有些 微生物具有降解色素的能力，它們在長時間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅形成明顯的透明圈，與纖 維素分解菌不易區(qū)分。（4）為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些 不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。專題四酶的研究與應(yīng)用課題1果膠酶在果汁生產(chǎn)中的作用、原理:1、果膠是植物細(xì)胞壁以及胞間層的主要組成成

31、分之一,果膠酶能將果膠分解成可溶性的 半乳醛酸瓦解植物的細(xì)胞jb及血間層取果汁變得澄清。2、果膠酶是一類而總稱，包括果卮叫、松辛半乳糖醛酸酶、邛膠怖酶等。一3、酶的活性是指酶中化一定化學(xué)質(zhì)應(yīng)的情力。酶活性的高低可以用在一定條件下,酶所 催化的某一化學(xué)反應(yīng)的速度來展示。在M學(xué)研究與工業(yè)生產(chǎn)中,酶反應(yīng)速度用單位時間 內(nèi)、單位阿中用!物仙減小量告生阿中加量來表示。4、影響酶活性的因素包括w度 、Ph酶的抑制劑咻。二、探究溫度和PH對酶活性的影響在探究溫度對酶活性的影響的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中，自變量是尸 根據(jù)I單一變量原則,應(yīng)確保各實(shí)驗(yàn)組相同的變量（控制無關(guān)變量）有：底卵量及濃n耐用量和濃度、混合物 的PH、水

32、浴叵實(shí)驗(yàn)器材等等。只有這樣才能保證只有亞匚個變量對果膠酶的活性產(chǎn)生 影響。冰在實(shí)驗(yàn)中將果研邛膠j研裝在不同的試管中恒溫處理,保證了底物和叵園時匚 的溫度是相同的。5 .在探究PH對酶活性的影響的實(shí)驗(yàn)中，只須將上述實(shí)驗(yàn)的溫改成RH梯度，并選定一個電1的溫度進(jìn)行水浴加熱。 反應(yīng)液中的pH可以通過體積分?jǐn)?shù)為0.1%的蘇晶皈 網(wǎng)容液進(jìn)行調(diào)節(jié)。此實(shí)驗(yàn)中不回匚pH梯度之間進(jìn)行相互對照。6 .在探究果膠酶的用量的實(shí)驗(yàn)中，果膠酶的用量是建立在最雨衣和最適pH基礎(chǔ)之上的。此時研究的變量是果I膠酶的用品邙他因素都應(yīng)保持不變。實(shí)正時可以配制不同濃忙 的果膠酶溶液，也可以只配制一種濃度的'膠酶溶液,然后使用不

33、同的體積叵q為什么果汁體積可以反映果膠酶的活性高低？答：果膠酶將果膠分解為可以通過濾I可、分子物質(zhì)，因此蘋果）的體積大小里應(yīng)了果 膠酶的催化分解果膠的能力。（在不同的溫度和pH下，果膠酶的后麻大，蘋仙汁的體麗 越大。）課題2探討加酶洗衣粉的洗滌效果一、基礎(chǔ)知識1 .加酶洗衣粉是指 含有酶制劑的洗衣粉，目前常用的酶制劑有四類： 蛋白酶、脂肪酶、 淀粉酶和纖維素酶，其中，應(yīng)用最廣泛、效果最明顯的是 堿性蛋白酶和堿性脂肪酶。2 .堿性蛋白酶能將血漬、奶漬等含有的大分子蛋白質(zhì)水解成可溶性的氨基酸或小分子的 肽，使污跡從衣物上脫落。脂肪酶、淀粉酶和纖維素酶也能分別將大分子的脂肪、淀粉和纖維 素水解為小分

34、子物質(zhì)，使洗衣粉具有更好的去污能力。3 .在本課題中，我們主要探究有關(guān)加酶洗衣粉的三個問題：一是普通洗衣粉和加酶洗衣 粉對衣物污漬的洗滌效果有什么不同； 二是在什么溫度下使用加酶洗衣粉效果最好， 三是添加 不同種類的酶的的洗衣粉，其洗劑效果有哪些區(qū)別。二、實(shí)驗(yàn)操作1 .探究普通洗衣粉和加酶洗衣粉對衣物污漬的洗滌效果(1)實(shí)驗(yàn)遵循的原則：實(shí)驗(yàn)變量為洗滌劑，設(shè)計(jì)時應(yīng)遵循單一變量原則、對照原則,有效地控制其他變量，如水的用量、污染物的量、所用實(shí)驗(yàn)用布的質(zhì)地大小、兩種洗衣粉的用量， 攪拌及洗滌時間。(2)實(shí)驗(yàn)過程取兩只大燒杯并 標(biāo)記A、B,用量筒分別量500mL蒸儲水放入其中，放入400C的水浴鍋保

35、溫。將制好的污染布和洗衣粉(一組為 和,另一組為和)分別放入兩只燒杯中。用玻璃棒同時充分?jǐn)嚢?相同的 時間，一段時間后攪拌可重復(fù)進(jìn)行。過相同的時間后觀察洗滌效果，探究加酶洗衣粉使用時的最適溫度。2 .不同種類的酶洗衣粉對同一污漬的洗滌效果(1)實(shí)驗(yàn)原理：不同種類的加酶洗衣粉所加的酶不同，而酶具有專一性，所以對不同污漬的洗滌效果不同。(2)實(shí)驗(yàn)過程：根據(jù)表格設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)步驟 略【疑難點(diǎn)撥】1 .普通洗衣粉中包含哪些化學(xué)成分？ 提示：普通洗衣粉中通常包含有：表面活性劑、水軟化劑、堿劑、漂白劑等成分，有的洗衣粉中還含有增白劑、香精和色素，以及填充劑等。2 .在本課題中你打算使用什么方法和標(biāo)準(zhǔn)判斷洗滌效果

36、？提示：可在洗滌后比較污物的殘留狀況，如：已消失、顏色變淺、面積縮小等，3 .含有蛋白酶的洗衣粉的洗劑效果好，可以用絲綢作為實(shí)驗(yàn)材料嗎？不能。因?yàn)榻z綢的主要成分是蛋白質(zhì)，它會被加酶洗衣粉中的蛋白酶分解，損壞衣物。 課題3酵母細(xì)胞的固定化一、基礎(chǔ)知識闿：優(yōu)點(diǎn)：催化效率高，低耗能、低污染，大規(guī)模地應(yīng)用于食品、化工等各個領(lǐng)域。 實(shí)際問題：對環(huán)境條件敏感，易失活；溶液中的酶很難回收，不能再次利用，提高了生產(chǎn).成本；反應(yīng)后的酶會混合在產(chǎn)物中，如不除去，會影響產(chǎn)品質(zhì)量。設(shè)想：將酶固定在不溶于水的載體上、使酶既能與反應(yīng)物接觸又能與產(chǎn)物分離均定化酶：優(yōu)點(diǎn)易于產(chǎn)物分離，可反復(fù)利用實(shí)際問題：一種酶只能催化一種化學(xué)

37、反應(yīng)，而在生產(chǎn)實(shí)踐中，很多產(chǎn)物的形成 都.是通過一系列的酶促反應(yīng)才能得到的設(shè)想：將合成酶的細(xì)胞直接固岸固定化細(xì)胞：優(yōu)點(diǎn) 成本低，操作容易，能催化一系列反應(yīng)二、固定化酶的應(yīng)用實(shí)例高果糖漿是指果糖含量為42%左右的糖漿能將葡萄糖轉(zhuǎn)化為果糖的酶是 葡萄糖異構(gòu)酶。使用固定化酶技術(shù)，將這種酶固定在一種 顆粒狀載體上，再將這些酶顆粒裝到一個反應(yīng)柱內(nèi).柱子底端裝上分布著許多小孔的。酶顆粒無法通過.篩板的小孔.而反應(yīng)溶液卻可以自由出入。生產(chǎn)過程中.將葡萄糖溶 液從反應(yīng)柱的上端注入，使葡萄糖溶液流過反應(yīng)柱，與固定化葡萄糖異構(gòu)酶接觸.轉(zhuǎn)化成果糖，從反應(yīng)柱的下端流出。反應(yīng)柱能連續(xù)使用半年，大大降低了生產(chǎn)成本，提高了

38、果糖的 產(chǎn)量和質(zhì)量。三、固定化細(xì)胞技術(shù)固定化酶和固定化細(xì)胞是利用物理或化學(xué)方法將酶或細(xì)胞固定在一定空間內(nèi)的技術(shù)，而五埋法、化學(xué)結(jié)合法 和 吸附法。一般來說，酶更適合采用化學(xué)結(jié)合法 和 吸附法固定,而細(xì)胞多采用包埋法固定化。這是 因?yàn)榧?xì)胞個大，而酶分子很??；個大的細(xì)胞難以被 吸附或 結(jié)合，而個小的酶容易從 包埋 材料中漏出。包埋法法固定化細(xì)胞即將微生物細(xì)胞 均勻地包埋在不溶于水的 多孔性載體 中。常用的載體有明膠、瓊脂糖、海藻酸鈉、醋酸纖維素和聚丙烯酰胺等。四、實(shí)驗(yàn)操作（一）制備固定化酵母細(xì)胞1 .酵母菌的活化活化就是處于休眠狀態(tài)的微生物重新恢復(fù)正常的生活狀態(tài)。2 .配制物質(zhì)的量嘗試為0.05m

39、ol/L的CaCl2溶液3 .配制海藻酸鈉溶液加熱溶化海藻酸鈉時要注意：海藻酸鈉在水中溶解速度較慢， 要加熱促進(jìn)其溶解。溶解海藻酸鈉，最好采用小火間斷加熱的方法。4 .海藻酸鈉溶液與酵母菌細(xì)胞混合5 .固定化酵母細(xì)胞以恒定的速度緩慢地將注射器中的溶液滴加到配制好的CaCl2溶液中,并浸泡 30min（時間）。（二）用固定化酵母細(xì)胞發(fā)酵1 .將固定好的酵母細(xì)胞用 蒸儲水 沖洗2-3次。2 .發(fā)酵時的溫度就為25 c ,時間 24h。五、結(jié)果分析與評價（一）觀察凝膠珠的顏色和形狀如果制作的凝膠珠顏色過淺、呈白色，說明海藻酸鈉含量過低，固定的酵母菌細(xì)胞過少；如果形成的凝膠珠不是圓形或橢圓形，則說明海

40、藻酸鈉含量過高，制作失敗，需要再作嘗試。（二）觀察發(fā)酵的葡萄糖溶液利用固定的酵母細(xì)胞發(fā)酵產(chǎn)生酒精，可以看到產(chǎn)生了很多氣泡,同時會聞到酒味補(bǔ)充：直接使用酶、固定化酶和固定化細(xì)胞催化的優(yōu)缺點(diǎn):優(yōu)點(diǎn)不足直接使用酶催化效率高，低耗能、低污 染等。對環(huán)境條件非常敏感，容易失活；溶液 中的酶很難回收，不能被再次利用，提 局J生產(chǎn)成本；反應(yīng)后酶會混在產(chǎn)物 中，可能影響產(chǎn)品質(zhì)量。司定化酶酶既能與反應(yīng)物接觸，又能 與產(chǎn)物分離，同時，固定在 載體上的酶還可以被反復(fù)利 用。一種酶只能催化一種化學(xué)反應(yīng)，而在生 產(chǎn)實(shí)踐中，很多產(chǎn)物的形成都通過一系 列的酶促反應(yīng)才能得到的。司定化細(xì)胞成本低，操作更容易。固定后的酶或細(xì)胞與

41、反應(yīng)物不容易接 近，可能導(dǎo)致反應(yīng)效果下降等?！疽呻y點(diǎn)撥】1 .細(xì)胞的活化。答：在缺水的狀態(tài)下，微生物會處于休眠狀態(tài)?；罨褪亲屘幱谛菝郀顟B(tài)的微生物重新恢復(fù)正常的生活狀態(tài)。酵母細(xì)胞所需要的活化時間較短，一般需要0.51小時。2 .如何檢驗(yàn)?zāi)z珠的質(zhì)量是否合格。提示：檢驗(yàn)?zāi)z珠的質(zhì)量是否合格，可以采用以下方法。一是用銀子夾起一個凝膠珠放在實(shí)驗(yàn) 桌上用手?jǐn)D壓，如果凝膠珠不破裂，沒有液體流出，就表明凝膠珠的制作成功。二是在實(shí)驗(yàn)桌 上用力摔打凝膠珠，如果凝膠珠很容易彈起，也表明制備的凝膠珠是成功的。3 .酶和細(xì)胞分別適應(yīng)哪種固定方法？提示：一般來說，酶更適合采用化學(xué)結(jié)合和物理吸附法固定，而細(xì)胞多采用包埋

42、法固定化。這 是因?yàn)榧?xì)胞個大，而酶分子很??；個大的難以被吸附或結(jié)合，而個小的酶容易從包埋材料中漏 出。【典例解析】酶和細(xì)胞分別適應(yīng)哪種固定方法？提示：一般來說，酶更適合采用化學(xué)結(jié)合和物理吸附法固定，而細(xì)胞多采用包埋法 固定化。這是因?yàn)榧?xì)胞個大，而酶分子很小；個大的難以被吸附或結(jié)合，而個小的酶容易從包 埋材料中漏出。專題五課題3血紅蛋白的提取和分離基礎(chǔ)知識1 .凝膠色譜法凝膠色譜法也稱做 分配色譜法，是根據(jù) 相對分子質(zhì)量大小分離蛋白質(zhì)的有效方法。凝膠實(shí)際上是一些由 多糖類化合物 構(gòu)成的多孔球體,在小球體內(nèi)部有許多貫穿的通道，相 對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子通過凝膠時速度不同，相對分子質(zhì)量較小的蛋白

43、質(zhì) 容易 進(jìn)入凝膠內(nèi)部的通道，路程 較長，移動速度 較短；而相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)則相反。故相 對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)分子因此得以分離。2 .緩沖溶液緩沖溶液的作用是 抵制外界的酸和堿對溶液 PH的影響。緩沖溶液通常由 1-2種緩沖劑 溶解于水中配制而成的。生物體內(nèi)進(jìn)行的各種生物化學(xué)反應(yīng)都是在一定的pH下進(jìn)行的，例如：血漿的pH是7.35-7.45 ,要在實(shí)驗(yàn)條件下準(zhǔn)確模擬生物體內(nèi)的過程，必須保持體外 的pH與體內(nèi)的基本一致。3 .電泳電泳是指帶電粒子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程。許多重要的生物大分子，如多肽、 核酸等都具有可解離的基團(tuán)，在一定的 pH下，這些基團(tuán)會帶上 正電或負(fù)電。在電場的

44、作用 下，這些帶電分子會向著與其所帶電荷 相反 的電極移動。電泳利用了待分離樣品中各分子 電性質(zhì)的差異 以及分子本身的 大小、形狀 的不同.使帶電分子產(chǎn)牛不同的 遷移速.度. 從而實(shí)現(xiàn)樣品中各種分子的分離。兩種常用的電泳方法是 瓊脂糖凝膠電泳 和 聚丙烯酰胺凝膠電泳 、在測定蛋白質(zhì)分子 量時通常使用SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳。蛋白質(zhì)在聚丙烯酰胺凝膠中的遷移率取決于 蛋 白質(zhì)分子的大小 以及 電荷量 等因素。4 .蛋白質(zhì)的提取和分離蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：樣品處理、粗分離 、純化和 純度鑒定。5 .樣品處理血液由血漿和 血細(xì)胞 組成.其中紅細(xì)胞最多。紅細(xì)胞具有 無細(xì)胞核、無細(xì)胞器 的特點(diǎn)

45、。 紅細(xì)胞中有一種非常重要的蛋白質(zhì) 血紅蛋白 、其作用是 運(yùn)輸氧氣或二氧化碳、血紅蛋白有2個肽鏈組成,包括a -肽鏈和B -肽鏈其中每條肽鏈環(huán)繞一個 亞鐵血紅素基因 ，此基團(tuán)可攜帶 一分子氧氣或一分子二氧化碳 。血紅蛋白因含有 血紅素 呈現(xiàn)紅色。紅細(xì)胞的瀛洗滌紅細(xì)胞的目的是 除去雜蛋白 ，采集的血樣要及時采用 低速短時 離心 分離紅細(xì)胞，然后用膠頭吸管吸出上層透明的 黃色血漿 ，將下層暗紅色的 紅細(xì)胞 倒入燒杯,再加入 五倍體積的生理鹽水，緩慢攪拌10min ,低速短時間離心， 如此重復(fù)洗滌三次,直至上清液不再呈現(xiàn)黃色，表明紅細(xì)胞已洗滌干凈。血紅蛋白的釋放在 蒸儲水 和 甲苯 作用下,紅細(xì)胞破

46、裂釋放出血紅蛋白。分離血紅蛋白溶液將攪拌好的混合溶液離心后,試管中的溶液分為4層。第一層為無色透明的 甲苯層，第2層為白色薄層固體，是 脂溶性物質(zhì)，第3層是紅色透明液體，這 是 血紅蛋白，第4層是其他雜質(zhì)的暗紅色沉淀物。將試管中的液體用濾紙過濾，除去之溶 性沉淀層，于分液漏斗中靜置片刻后，分出下層的紅色透明液體。透析 取1mL的血紅蛋白溶液裝入 透析袋 中,將透析袋放入盛有300mL的物質(zhì)的 量的濃度為20mmol/L的磷酸緩沖液（ph=7.0）中,透析12h。透析可以去除樣品中 分子量 較小 的雜質(zhì),或用于更換樣品的 緩沖液。6 .凝膠色譜操作第一步要制作凝膠色譜柱，第二步要裝填凝膠色譜柱，

47、因?yàn)楦傻哪z和用緩沖液平衡 好的凝膠體積差別很大，所以裝柱前需要根據(jù)色譜柱的內(nèi)體積計(jì)算所需要的凝膠量。在裝填凝膠柱時，不得有 氣泡 存在。因?yàn)闅馀輹噥y洗脫液中蛋白質(zhì)的洗脫次序，降低分離效果。第三步是樣品的加入和洗脫 。疑難點(diǎn)撥1 .與其他真核細(xì)胞相比，紅細(xì)胞的特點(diǎn)及這一特點(diǎn)對進(jìn)行蛋白質(zhì)的分離的意義哺乳動物及人的成熟的紅細(xì)胞是雙面凹圓餅狀， 沒有細(xì)胞核和細(xì)胞器。其含有的血紅蛋白是有 色蛋白，因此在凝膠色譜分離時可以通過觀察顏色來判斷什么時候應(yīng)該收集脫液。 這使血紅蛋 白的分離過程非常直觀，大大簡化了實(shí)驗(yàn)操作。2 .電泳的作用及其原理電泳是指帶電粒子在電場的作用下發(fā)生遷移的過程。許多重要的生物大

48、分子，如氨基酸、多肽、 蛋白質(zhì)、核甘酸、核酸等都具有可解離基團(tuán)，它們在某個特定的 pH下會帶上正電或負(fù)電；在 電場的作用下，這些帶電分子會向著與其所帶電荷相反的電極方向移動。 電泳技術(shù)就是在電場 的作用下，利用待分離樣品中各種分子帶電性質(zhì)以及分子本身大小、 形狀等性質(zhì)的差異，使帶 電分子產(chǎn)生不同的遷移速度，從而達(dá)到對樣品進(jìn)行分離、鑒定或提純的目的。3 .你能從凝膠色譜的分離原理分析為什么凝膠的裝填要緊密、均勻嗎？答：凝膠實(shí)際上是一些微小的多孔球體， 小球體內(nèi)部有許多貫穿的通道。相對分子質(zhì)量較大的 蛋白質(zhì)分子不能進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部，只能分布在顆粒之間，通過的路程較短，移動速度較快； 相對分子質(zhì)量較

49、小的蛋白質(zhì)分子比較容易進(jìn)入凝膠內(nèi)的通道，通過的路程較長，移動速度較慢。因此，樣品中相對分子質(zhì)量較大的蛋白質(zhì)先流出， 相對分子質(zhì)量中等的分子后流出，相對分子 質(zhì)量最小的分子最后流出，從而使各種相對分子質(zhì)量不同的分子得以分離。如果凝膠裝填得不夠緊密、均勻，就會在色譜柱內(nèi)形成無效的空隙， 使本該進(jìn)入凝膠內(nèi)部的樣品分子從這些空隙 中通過，攪亂洗脫液的流動次序，影響分離的效果。專題六植物有效成分的提取課題1植物芳香油的提取天然香料的來源：植物、動物不同植物的根、莖、葉、花、果實(shí)、種子都可以提取芳香油。芳香油的提取方法：蒸儲、壓榨、萃取等。芳香油的性質(zhì)：揮發(fā)性強(qiáng)，成分復(fù)雜，以菇類化合物及其衍生物為主。水蒸

50、氣蒸儲法：原理：水蒸汽可將揮發(fā)性較強(qiáng)的芳香油攜帶出來形成油水混合物，冷卻后水油分層。方法：水中蒸儲：原料放在沸水中加熱蒸儲。水上蒸儲：原料隔放在沸水上加熱蒸儲。水汽蒸儲：利用外來高溫水蒸氣加熱蒸儲。不足：有些原料不適宜于水中蒸儲，如柑橘、檸檬等易焦糊，有效成分容易水解。通常 用壓榨法（通過機(jī)械壓縮力將液相物從液固兩相混合物中分離出來的一種簡單操作） 萃取法：原理：芳香油易溶于有機(jī)溶劑，溶劑揮發(fā)后得到芳香油。如石油醴、酒精、乙醴等。方法：原料浸泡在溶劑中一得到浸泡液一有機(jī)溶劑揮發(fā)一芳香油。不足：有機(jī)溶劑中的雜質(zhì)影響芳香油的品質(zhì)蒸儲裝置見下圖：玫瑰精油的提取 0.1g/mL氯化鈉溶液：促使油水混合物（乳濁液）中油和水的分離。無水硫酸鈉：吸收油層 中的水分。實(shí)驗(yàn)步驟：采集玫瑰花：采集盛花期（5月中上旬）的玫瑰花，清水清洗瀝干。裝入蒸儲原料：稱取50g玫瑰花放入蒸儲瓶，添加200mL蒸儲水。安裝蒸儲裝置：按照從左向右、自下到上次序安裝水蒸氣蒸儲裝置。加熱蒸儲：控制蒸儲時間和速度（12滴/秒