六味地黃湯對雌性致衰模型小鼠生殖器官影響的實驗研究

1、六味地黃湯對雌性致衰模型小鼠生殖器官影響的實驗研究<    【關鍵詞】   六味地黃湯； 卵巢早衰Abstract：ObjectiveTo observe the effects of Liuw Ei Dihuang Tang on causing senility to ovaria of mice. MethodsTo establish senility model through subcutaneous injection of D-galactogen into the neck and back of mice, which

2、 were subsequently treated with Liuw EI Dihuang Tang and ethylene cyclohexne. Meanwhile, to observe the effects of Liuwei Dihuang Tang on the content of -endorphin, sero-estrogen and progestogen, and on ovaria and uterine histomorphology. ResultsLiuwei Dihuang Tang could improve the content of -endo

3、rphin, increase the cornified and epithelial cell and epidermal cell in the vaginal exfoliated cell smear of mice. ConclusionLiuwei Dihuang Tang serves the same function as estrogen, which restores the normal functioning of ovaria by regulating the workings of subthalamus-hypophysis-ovarian axis.Key

4、 words：Liuwei Dihuang Tang;   POF    六味地黃湯（LW）是中醫(yī)滋補腎陰的代表方劑。由熟地、山茱萸、山藥、茯苓、澤瀉、牡丹皮6味藥組成,其特點是長于三陰(肝脾腎)并補而以補腎為主的方劑。長期 臨床 觀察此方有抗衰老功能，但從未看到抗衰老實驗室對小鼠生殖器官細胞、形態(tài)結構研究的報道。本研究通過把六味地黃湯用于實驗小鼠活體內對卵巢、子宮 組織 細胞、形態(tài)結構觀察，從而為六味地黃湯對卵巢早衰分子生物學研究提供較可靠的實驗依據。    卵巢早衰(premature ovarian fail

5、ure, POF)是指卵巢功能提前衰退，表現(xiàn)為婦女40歲之前非生理性的月經停止，伴有潮熱、原發(fā)及繼發(fā)不孕、全身和生殖器萎縮，卵泡刺激素(follicular stimulating homone,FSH)升高(FSH>40IU/L)及E2下降。目前病理機制不甚清楚，而建立POF動物模型對其病因的基礎研究以及指導臨床的診斷和治療有重要意義。由于半乳糖血癥患者常表現(xiàn)為原發(fā)性閉經或卵巢早衰，且有報道動物體內的半乳糖增多可引起類似與卵巢早衰的改變，故本課題組采用D -半乳糖建立小鼠卵巢早衰動物模型1，通過觀察LW對小鼠下丘腦垂體卵巢軸（HPO）的調節(jié)作用及對小鼠生殖器官形態(tài)學影響，探討LW對PO

6、F的治療機制，指導臨床診斷和治療。 1  材料與儀器 1.1   動物 雌性昆明種小鼠60只，812周齡，體質量25 30 g，由河南省南陽醫(yī)專實驗動物中心提供。飼養(yǎng) 環(huán)境 安靜，溫度2535，相對濕度為5060，自由進食、水。1.2 藥品與試劑六味地黃湯草藥藥材購于河南省南陽市醫(yī)藥公司，由南陽 醫(yī)學 高等專 科學 校藥理教研室按比例組方 ，經煎制、過濾、濃縮為1 g/ml (以生藥汁) 六味地黃湯口服液，高壓滅菌，O冰箱保存?zhèn)溆谩 - 半乳糖為上海恒信制藥廠產品，批號為20010218。 用滅菌生理鹽水配制成50 g/L,0冰箱保存?zhèn)溆?。乙烯雌酚由?/p>

7、海衡山藥業(yè)有限公司生產，批號為000201。雌二醇（E2）放射免疫藥盒購自天津德普公司；孕醇（P）放射免疫藥盒購自 中國 醫(yī)學科學院和醫(yī)學技術中心；-內啡肽（-EP）放射免疫藥盒購自海軍放免技術中心。其他制劑均為國產分析純。1.3 儀器和設備 (2/2)VI普通類B型脫水機，孝感宏業(yè)TS-12L；日本原裝進口（1/2）JVCTK-C921EC顯微鏡攝像機；日本原裝進口OLYMPUSCX31顯微鏡；德國原裝進口mICROMGMBH Hm200切片機；CS攤片機。 電子 體溫計，DT一ITB型;電子天平，JD2000 - 2 ;Y計數器，GAMMA -C120。 2 方法 2.1  衰老動物模型的建立 采用D-半乳糖亞急性衰老模型建立法。D -半乳糖按每只小鼠經背部皮下注射D - 半乳糖0.3 ml/（kg·d），注射42 d。2.2 實驗分組  將60只小鼠隨機分成正常對照組（A）、衰老模型組(B)、六味地黃湯治療1組(C)，六味地黃湯治療2組(D)，乙烯雌酚組(E)，每組12只。A組、B組各鼠每天灌胃生理鹽水20 g·kg-1，同時B組，C組，D組，E組各鼠每天經背部皮下注射D-半乳糖0.3 ml·kg-1，連續(xù)給藥42 d。從11天開始，C組，D組分別灌服六味地黃湯（原汁1 g/ml濃度）2