食源性致病菌血清學(xué)診斷技術(shù)

1、食源性致病菌血清學(xué)診斷技術(shù)食源性致病菌血清學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)福建省疾病預(yù)防控制中心福建省疾病預(yù)防控制中心內(nèi)容內(nèi)容一、血清學(xué)檢驗(yàn)的概念一、血清學(xué)檢驗(yàn)的概念二、血清學(xué)檢驗(yàn)的類型二、血清學(xué)檢驗(yàn)的類型三、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)使用的血清學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)三、國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)使用的血清學(xué)檢驗(yàn)技術(shù)四、血清學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量控制四、血清學(xué)檢驗(yàn)質(zhì)量控制基本概念：血清基本概念：血清 血液凝固析出的淡黃色透明液體。血液放入試管中，不血液凝固析出的淡黃色透明液體。血液放入試管中，不加抗凝劑，則血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，加抗凝劑，則血液迅速凝固，形成膠凍。凝血塊收縮，其周圍析出血清，也可于凝血后經(jīng)離心取得。在凝血過(guò)其周圍析出血清，也可于凝血后經(jīng)離心取得

2、。在凝血過(guò)程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無(wú)纖程中，纖維蛋白原轉(zhuǎn)變成纖維蛋白塊，所以血清中無(wú)纖維蛋白原，這一點(diǎn)是與血漿最大的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)維蛋白原，這一點(diǎn)是與血漿最大的區(qū)別。而在凝血反應(yīng)中，血小板釋放出許多物質(zhì)，各凝血因子也都發(fā)生了變中，血小板釋放出許多物質(zhì)，各凝血因子也都發(fā)生了變化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化，如凝血酶化。這些成分都留在血清中并繼續(xù)發(fā)生變化，如凝血酶原變成凝血酶，并隨血清存放時(shí)間逐漸減少以至消失。原變成凝血酶，并隨血清存放時(shí)間逐漸減少以至消失。這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應(yīng)的這些也都是與血漿區(qū)別之處。但大量未參加凝血反應(yīng)的物質(zhì)則與血漿基

3、本相同。物質(zhì)則與血漿基本相同。血清蛋白血清蛋白 為避免抗凝劑為避免抗凝劑的干擾，血液的干擾，血液中許多化學(xué)成中許多化學(xué)成分的分析，都分的分析，都以血清為樣品。以血清為樣品。 血清學(xué)檢驗(yàn)的概念血清學(xué)檢驗(yàn)的概念 利用抗原利用抗原-抗體反應(yīng)的抗體反應(yīng)的顯著特異性，進(jìn)行細(xì)顯著特異性，進(jìn)行細(xì)菌的鑒別和血清學(xué)定菌的鑒別和血清學(xué)定型，已有半個(gè)多世紀(jì)型，已有半個(gè)多世紀(jì)的歷史。細(xì)菌菌體或的歷史。細(xì)菌菌體或鞭毛等抗原的特異性鞭毛等抗原的特異性抗體的存在，使得人抗體的存在，使得人們可以建立一些快速們可以建立一些快速方法來(lái)檢測(cè)以食品為方法來(lái)檢測(cè)以食品為載體的病原。載體的病原。 血清學(xué)檢驗(yàn)的概念血清學(xué)檢驗(yàn)的概念 體外抗

4、原抗體反應(yīng)中的抗體主要來(lái)源于體外抗原抗體反應(yīng)中的抗體主要來(lái)源于血清，其檢測(cè)多以血清為實(shí)驗(yàn)材料，故血清，其檢測(cè)多以血清為實(shí)驗(yàn)材料，故體外抗原抗體反應(yīng)亦稱為體外抗原抗體反應(yīng)亦稱為血清學(xué)反應(yīng)血清學(xué)反應(yīng)（serologic reaction）或血清學(xué)試驗(yàn)、或血清學(xué)試驗(yàn)、血清學(xué)檢驗(yàn)血清學(xué)檢驗(yàn)。血清學(xué)檢驗(yàn)的概念血清學(xué)檢驗(yàn)的概念 血清學(xué)檢驗(yàn)指根據(jù)抗原與相應(yīng)的抗體在適血清學(xué)檢驗(yàn)指根據(jù)抗原與相應(yīng)的抗體在適宜的條件下，能在體外發(fā)生特異性結(jié)合的宜的條件下，能在體外發(fā)生特異性結(jié)合的原理，在體外用已知抗體（或抗原）檢測(cè)原理，在體外用已知抗體（或抗原）檢測(cè)抗原（或抗體）?？乖ɑ蚩贵w）。 血清學(xué)檢驗(yàn)是微生物學(xué)檢驗(yàn)的重要方

5、法之血清學(xué)檢驗(yàn)是微生物學(xué)檢驗(yàn)的重要方法之一。也是細(xì)菌、病毒性疾病診斷和病原菌一。也是細(xì)菌、病毒性疾病診斷和病原菌鑒定的重要手段之一。鑒定的重要手段之一。血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)血清學(xué)反應(yīng)的一般特點(diǎn)（1）抗原與抗體的結(jié)合具有高度特異性，但當(dāng)兩種不同抗原分）抗原與抗體的結(jié)合具有高度特異性，但當(dāng)兩種不同抗原分子上有共同抗原決定簇存在時(shí)，則與抗體結(jié)合時(shí)可出現(xiàn)交叉反應(yīng)。子上有共同抗原決定簇存在時(shí)，則與抗體結(jié)合時(shí)可出現(xiàn)交叉反應(yīng)。（2）抗原與抗體結(jié)合是分子表面的結(jié)合。兩者的結(jié)合相當(dāng)穩(wěn)定，）抗原與抗體結(jié)合是分子表面的結(jié)合。兩者的結(jié)合相當(dāng)穩(wěn)定，但是可逆的，在一定條件下可發(fā)生解離，解離后的抗原、抗體性質(zhì)但是可逆的，在

6、一定條件下可發(fā)生解離，解離后的抗原、抗體性質(zhì)不變。不變。（3）抗原、抗體的結(jié)合按一定比例，只有在比例適當(dāng)時(shí)才會(huì)）抗原、抗體的結(jié)合按一定比例，只有在比例適當(dāng)時(shí)才會(huì)出現(xiàn)可見反應(yīng)。若抗原、抗體比例不合適，就會(huì)有未結(jié)合的抗出現(xiàn)可見反應(yīng)。若抗原、抗體比例不合適，就會(huì)有未結(jié)合的抗原或抗體游離于上清液中，不能形成大塊免疫復(fù)合物，故不能原或抗體游離于上清液中，不能形成大塊免疫復(fù)合物，故不能呈現(xiàn)可見反應(yīng)。呈現(xiàn)可見反應(yīng)。（4）血清學(xué)反應(yīng)可分兩個(gè)階段進(jìn)行，但其間無(wú)嚴(yán)格界限。在第一）血清學(xué)反應(yīng)可分兩個(gè)階段進(jìn)行，但其間無(wú)嚴(yán)格界限。在第一階段，抗原和抗體特異性結(jié)合，此階段反應(yīng)很快，幾秒鐘或幾分鐘階段，抗原和抗體特異性結(jié)合

7、，此階段反應(yīng)很快，幾秒鐘或幾分鐘即可完成，但無(wú)可見反應(yīng)；在第二階段，反應(yīng)進(jìn)入可見階段，反應(yīng)即可完成，但無(wú)可見反應(yīng)；在第二階段，反應(yīng)進(jìn)入可見階段，反應(yīng)進(jìn)行的很慢，往往需幾分鐘甚至幾十分鐘以至數(shù)日方可完成。而且進(jìn)行的很慢，往往需幾分鐘甚至幾十分鐘以至數(shù)日方可完成。而且常受電介質(zhì)、溫度、常受電介質(zhì)、溫度、pH等諸多外界因素的影響。等諸多外界因素的影響。 血清學(xué)檢驗(yàn)的類型血清學(xué)檢驗(yàn)的類型 血清學(xué)試驗(yàn)可分為血清學(xué)鑒定和血清學(xué)診斷兩部分。血清學(xué)試驗(yàn)可分為血清學(xué)鑒定和血清學(xué)診斷兩部分。血清學(xué)試驗(yàn)既可定性，又可定量。血清學(xué)試驗(yàn)既可定性，又可定量。 用已知抗體（即含特異抗體的免疫血清或單克隆抗體用已知抗體（即含

8、特異抗體的免疫血清或單克隆抗體等）檢測(cè)標(biāo)本中或分離培養(yǎng)物中未知細(xì)菌的種、型或等）檢測(cè)標(biāo)本中或分離培養(yǎng)物中未知細(xì)菌的種、型或細(xì)菌抗原，稱為血清學(xué)鑒定；細(xì)菌抗原，稱為血清學(xué)鑒定； 而用已知細(xì)菌或特異性抗原檢測(cè)患者血清中有無(wú)相而用已知細(xì)菌或特異性抗原檢測(cè)患者血清中有無(wú)相應(yīng)抗體及其效價(jià)的動(dòng)態(tài)變化，作為某些感染性疾病應(yīng)抗體及其效價(jià)的動(dòng)態(tài)變化，作為某些感染性疾病的輔助診斷，稱為血清學(xué)診斷。的輔助診斷，稱為血清學(xué)診斷。血清學(xué)鑒定血清學(xué)鑒定 血清學(xué)鑒定常用的血清學(xué)試驗(yàn)是凝血清學(xué)鑒定常用的血清學(xué)試驗(yàn)是凝集試驗(yàn)（直接凝集試驗(yàn)和間接凝集集試驗(yàn)（直接凝集試驗(yàn)和間接凝集試驗(yàn)）、沉淀試驗(yàn)、莢膜腫脹試驗(yàn)試驗(yàn)）、沉淀試驗(yàn)、莢

9、膜腫脹試驗(yàn)和毒素和毒素-抗毒素中和試驗(yàn)等?？苟舅刂泻驮囼?yàn)等。凝集反應(yīng)凝集反應(yīng)一、直接凝集反應(yīng)一、直接凝集反應(yīng)二、間接凝集反應(yīng)二、間接凝集反應(yīng) 1、正向間接凝集反應(yīng)、正向間接凝集反應(yīng) 2、反向間接凝集反應(yīng)、反向間接凝集反應(yīng) 3、凝集抑制反應(yīng)、凝集抑制反應(yīng) 4、協(xié)同凝集反應(yīng)、協(xié)同凝集反應(yīng)顆粒性抗原顆粒性抗原凝集素凝集素直接凝集反應(yīng)直接凝集反應(yīng) 直接凝集反應(yīng)指顆粒性抗原與相應(yīng)抗體直接直接凝集反應(yīng)指顆粒性抗原與相應(yīng)抗體直接結(jié)合出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。結(jié)合出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象。（一）玻片凝集試驗(yàn)（一）玻片凝集試驗(yàn) 一種常規(guī)的定性試驗(yàn)方法。原理是用已知抗體來(lái)檢測(cè)未知抗一種常規(guī)的定性試驗(yàn)方法。原理是用已知抗體來(lái)檢測(cè)未知抗

10、原。常用于鑒定菌種、血型。取已知抗體（診斷血清）滴加原。常用于鑒定菌種、血型。取已知抗體（診斷血清）滴加在載玻片上，直接從培養(yǎng)基上刮取待檢菌混勻于診斷血清中，在載玻片上，直接從培養(yǎng)基上刮取待檢菌混勻于診斷血清中，數(shù)分鐘后，如出現(xiàn)細(xì)菌凝集成塊或肉眼可見的顆粒，即為陽(yáng)數(shù)分鐘后，如出現(xiàn)細(xì)菌凝集成塊或肉眼可見的顆粒，即為陽(yáng)性。方法簡(jiǎn)便、快速、特異性強(qiáng)，現(xiàn)行國(guó)標(biāo)用于沙門氏菌、性。方法簡(jiǎn)便、快速、特異性強(qiáng)，現(xiàn)行國(guó)標(biāo)用于沙門氏菌、志賀氏菌、致病性大腸埃希氏菌等的鑒定，但不能進(jìn)行定量志賀氏菌、致病性大腸埃希氏菌等的鑒定，但不能進(jìn)行定量測(cè)定。測(cè)定。 （一）玻片凝集試驗(yàn)（一）玻片凝集試驗(yàn) 如將含有沙門氏菌抗體的血

11、清與待檢菌液各如將含有沙門氏菌抗體的血清與待檢菌液各一滴，在玻片上混勻，數(shù)分種后若出現(xiàn)肉眼一滴，在玻片上混勻，數(shù)分種后若出現(xiàn)肉眼可見的凝集塊，即為陽(yáng)性反應(yīng)，證明該菌是可見的凝集塊，即為陽(yáng)性反應(yīng)，證明該菌是沙門氏菌。沙門氏菌。（一）玻片凝集試驗(yàn)（一）玻片凝集試驗(yàn) 自臨床初分離的細(xì)菌中，有些細(xì)菌表面含自臨床初分離的細(xì)菌中，有些細(xì)菌表面含有某種表面抗原有某種表面抗原(如傷寒沙門氏菌的如傷寒沙門氏菌的Vi抗原抗原和志賀氏菌屬的和志賀氏菌屬的K抗原等抗原等)，這些抗原能阻，這些抗原能阻止菌體抗原止菌體抗原(O抗原抗原)與相應(yīng)抗體發(fā)生凝集反與相應(yīng)抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，從而導(dǎo)致錯(cuò)誤的判定。此時(shí)應(yīng)將菌懸應(yīng)，從而導(dǎo)

12、致錯(cuò)誤的判定。此時(shí)應(yīng)將菌懸液于液于100中隔水煮沸中隔水煮沸(Vi抗原抗原10030 min、K抗原抗原1001 h)，待細(xì)菌表面抗原破壞后，待細(xì)菌表面抗原破壞后，再進(jìn)行試驗(yàn)。再進(jìn)行試驗(yàn)。（一）玻片凝集試驗(yàn)（一）玻片凝集試驗(yàn)用于鑒定細(xì)菌的診斷血清有以下幾類：用于鑒定細(xì)菌的診斷血清有以下幾類：1、多價(jià)診斷血清：即混合診斷血清，血清、多價(jià)診斷血清：即混合診斷血清，血清中含有兩種以上細(xì)菌的相應(yīng)抗體。一般用中含有兩種以上細(xì)菌的相應(yīng)抗體。一般用于細(xì)菌定屬或群。于細(xì)菌定屬或群。2、單價(jià)診斷血清：僅含一種、單價(jià)診斷血清：僅含一種(或型或型)細(xì)菌的細(xì)菌的相應(yīng)抗體?？捎糜诩?xì)菌的定種相應(yīng)抗體?？捎糜诩?xì)菌的定種(或

13、型或型)。3、因子診斷血清：僅含一種細(xì)菌的型特異、因子診斷血清：僅含一種細(xì)菌的型特異性抗體的診斷血清稱為因子血清。可用于性抗體的診斷血清稱為因子血清。可用于細(xì)菌分型。細(xì)菌分型。 玻片凝集玻片凝集結(jié)果觀察結(jié)果觀察沙門氏菌的生物學(xué)性狀沙門氏菌的生物學(xué)性狀 目前根據(jù)對(duì)某一特定目前根據(jù)對(duì)某一特定O抗原共同具有的抗原共同具有的標(biāo)準(zhǔn)，將沙門氏菌屬分為標(biāo)準(zhǔn)，將沙門氏菌屬分為AZ和和O51 O67共共42個(gè)個(gè)O群，群，58種種O抗原，抗原，63種種H抗抗原。原。 到到1987年底為止，已有年底為止，已有2213個(gè)血清型。個(gè)血清型。 我國(guó)已發(fā)現(xiàn)我國(guó)已發(fā)現(xiàn)26個(gè)菌群、個(gè)菌群、161個(gè)血清型。個(gè)血清型。沙門氏菌的血

14、清分型沙門氏菌的血清分型 沙門氏菌主要有沙門氏菌主要有O和和H兩種抗原。少數(shù)菌具有表面兩種抗原。少數(shù)菌具有表面抗原抗原Vi。 在這些菌群中，對(duì)人致病的沙門氏菌，通常為屬于在這些菌群中，對(duì)人致病的沙門氏菌，通常為屬于AF各各O群的常見菌型。群的常見菌型。 故用故用AF多價(jià)多價(jià)O血清對(duì)沙門氏菌進(jìn)行的菌型鑒定，血清對(duì)沙門氏菌進(jìn)行的菌型鑒定，只是對(duì)于只是對(duì)于O抗原的第一步鑒定?？乖牡谝徊借b定。 若待測(cè)菌型不屬于若待測(cè)菌型不屬于A到到F群，仍要繼續(xù)使用其他沙門氏菌群，仍要繼續(xù)使用其他沙門氏菌因子血清中的多價(jià)因子血清中的多價(jià)O血清繼續(xù)鑒定。而在確定了所屬血清繼續(xù)鑒定。而在確定了所屬O群群之后，還要進(jìn)行之

15、后，還要進(jìn)行H抗原的鑒定。必要時(shí)，還需進(jìn)行抗原的鑒定。必要時(shí)，還需進(jìn)行Vi抗原抗原的鑒定。的鑒定。 沙門氏菌血清試驗(yàn)沙門氏菌血清試驗(yàn)致病性的沙門氏菌絕大多數(shù)血清歸在致病性的沙門氏菌絕大多數(shù)血清歸在A-F群內(nèi)，所以檢出疑似菌株應(yīng)先凝集群內(nèi)，所以檢出疑似菌株應(yīng)先凝集A-F群群O多價(jià)多價(jià)血清，若凝集可按常見血清，若凝集可按常見O因子檢出頻率，按照因子檢出頻率，按照O4O10O9O7O8O19O2O11順順序凝集，可節(jié)省時(shí)間。序凝集，可節(jié)省時(shí)間。H抗原抗原可先凝集可先凝集H多價(jià)多價(jià)1H多價(jià)多價(jià)4，再逐個(gè)凝集某個(gè)再逐個(gè)凝集某個(gè)H多價(jià)凝集多價(jià)凝集所含的所含的H單因子血清。傷寒單因子血清。傷寒和丙型副傷寒桿

16、菌在和丙型副傷寒桿菌在A-F群群多價(jià)血清不凝集情況下，還多價(jià)血清不凝集情況下，還應(yīng)做應(yīng)做Vi血清凝集。血清凝集。沙門氏菌血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果觀察沙門氏菌血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果觀察（二）試管凝集法（二）試管凝集法 一種定量試驗(yàn)方法。多用已知抗原來(lái)檢測(cè)一種定量試驗(yàn)方法。多用已知抗原來(lái)檢測(cè)血清中有無(wú)相應(yīng)抗體及其含量。常用于協(xié)血清中有無(wú)相應(yīng)抗體及其含量。常用于協(xié)助診斷某些傳染病及進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。助診斷某些傳染病及進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查。如肥達(dá)氏反應(yīng)就是診斷傷寒、副傷寒的試如肥達(dá)氏反應(yīng)就是診斷傷寒、副傷寒的試管凝集試驗(yàn)。因?yàn)橐獪y(cè)定抗體的含量，故管凝集試驗(yàn)。因?yàn)橐獪y(cè)定抗體的含量，故將待檢查的血清用等滲鹽水倍比稀釋成不將待檢

17、查的血清用等滲鹽水倍比稀釋成不同濃度，然后加入等量抗原，同濃度，然后加入等量抗原，37或或56，24 h觀察，血清最高稀釋度仍有明顯凝集觀察，血清最高稀釋度仍有明顯凝集現(xiàn)象的，為該抗血清的凝集效價(jià)。現(xiàn)象的，為該抗血清的凝集效價(jià)。 間接凝集反應(yīng)間接凝集反應(yīng) 是將可溶性抗原或抗體吸附于某種與免疫是將可溶性抗原或抗體吸附于某種與免疫無(wú)關(guān)一定大小的顆粒載體表面，制成致敏無(wú)關(guān)一定大小的顆粒載體表面，制成致敏載體，再與相應(yīng)抗體或抗原作用，在電解載體，再與相應(yīng)抗體或抗原作用，在電解質(zhì)存在的適宜條件下，被動(dòng)地使致敏載體質(zhì)存在的適宜條件下，被動(dòng)地使致敏載體凝集，稱為間接（或被動(dòng)）凝集反應(yīng)。凝集，稱為間接（或被動(dòng)

18、）凝集反應(yīng)。 根據(jù)載體不同，還可以分為乳膠凝集、血根據(jù)載體不同，還可以分為乳膠凝集、血球凝集、炭凝集、球凝集、炭凝集、SPA協(xié)同凝集等。協(xié)同凝集等。間接血凝試驗(yàn)示意圖間接血凝試驗(yàn)示意圖：紅細(xì)胞沉積于孔底；：紅細(xì)胞沉積于孔底；：紅細(xì)胞沉積于孔底，周圍有散在少量凝集；：紅細(xì)胞沉積于孔底，周圍有散在少量凝集；：紅細(xì)胞形成層凝集，邊緣較松散；：紅細(xì)胞形成層凝集，邊緣較松散；：紅細(xì)胞形成片層凝集，面積略大；：紅細(xì)胞形成片層凝集，面積略大；：紅細(xì)胞形成片層凝集，均勻布滿孔底，或邊：紅細(xì)胞形成片層凝集，均勻布滿孔底，或邊緣皺縮如花邊狀緣皺縮如花邊狀凝集凝集反應(yīng)反應(yīng)可溶性抗原可溶性抗原載體顆粒載體顆粒正向間接

19、凝集反應(yīng)正向間接凝集反應(yīng) 即將已知可溶性抗原吸附于載體顆粒上，然后與相應(yīng)抗即將已知可溶性抗原吸附于載體顆粒上，然后與相應(yīng)抗體結(jié)合產(chǎn)生顆粒凝集現(xiàn)象，用以檢測(cè)未知抗體。體結(jié)合產(chǎn)生顆粒凝集現(xiàn)象，用以檢測(cè)未知抗體。 抗體抗體可溶性抗原可溶性抗原載體顆粒載體顆粒反向間接凝集反應(yīng)反向間接凝集反應(yīng) 是將已知抗體吸附于載體顆粒表面，以檢測(cè)相應(yīng)可溶是將已知抗體吸附于載體顆粒表面，以檢測(cè)相應(yīng)可溶性抗原的凝集反應(yīng)。性抗原的凝集反應(yīng)。 空腸彎曲菌的間接血凝試驗(yàn)空腸彎曲菌的間接血凝試驗(yàn)間接血凝試驗(yàn)（間接血凝試驗(yàn)（IHA）是將抗）是將抗原（或抗體）包被于紅細(xì)胞表面，原（或抗體）包被于紅細(xì)胞表面，成為致敏的載體，然后與相應(yīng)

20、的成為致敏的載體，然后與相應(yīng)的抗體（或抗原）結(jié)合，從而使紅抗體（或抗原）結(jié)合，從而使紅細(xì)胞聚集在一起，出現(xiàn)可見的凝細(xì)胞聚集在一起，出現(xiàn)可見的凝集反應(yīng)。集反應(yīng)。 葡萄球菌腸毒素的乳膠凝集試驗(yàn)葡萄球菌腸毒素的乳膠凝集試驗(yàn)乳膠敏化抗體加鹽水，再加等體積乳膠制劑，混勻乳膠敏化抗體加鹽水，再加等體積乳膠制劑，混勻孵育，然后加牛血清白蛋白。孵育，然后加牛血清白蛋白。 待檢菌液制備瓊脂上挑取待檢菌落，制成菌懸液，離待檢菌液制備瓊脂上挑取待檢菌落，制成菌懸液，離心沉淀細(xì)胞，上清液待檢。心沉淀細(xì)胞，上清液待檢。 正式試驗(yàn)正式試驗(yàn) 在玻片上加待檢上清和致敏乳膠，混勻，在玻片上加待檢上清和致敏乳膠，混勻，輕輕搖動(dòng)輕

21、輕搖動(dòng)3min，在斜射光下觀察結(jié)果，判定標(biāo)準(zhǔn)同一，在斜射光下觀察結(jié)果，判定標(biāo)準(zhǔn)同一般凝集試驗(yàn)。靈敏度高，且無(wú)假陽(yáng)性結(jié)果。般凝集試驗(yàn)。靈敏度高，且無(wú)假陽(yáng)性結(jié)果。間接凝集抑制反應(yīng)間接凝集抑制反應(yīng) 是將已知抗體或可溶性抗原先與被測(cè)的抗是將已知抗體或可溶性抗原先與被測(cè)的抗原或抗體混合，然后加入有關(guān)抗原或抗體原或抗體混合，然后加入有關(guān)抗原或抗體致敏的載體顆粒，如已知抗體或可溶性抗致敏的載體顆粒，如已知抗體或可溶性抗原與被測(cè)的抗原或抗體相結(jié)合，則不出現(xiàn)原與被測(cè)的抗原或抗體相結(jié)合，則不出現(xiàn)顆粒凝集現(xiàn)象。故也可稱為正向間接凝集顆粒凝集現(xiàn)象。故也可稱為正向間接凝集抑制試驗(yàn)或反向間接凝集抑制試驗(yàn)。抑制試驗(yàn)或反向間

22、接凝集抑制試驗(yàn)。 凝集凝集凝集抑制凝集抑制待檢樣品待檢樣品待檢樣品待檢樣品間接凝集抑制反應(yīng)間接凝集抑制反應(yīng)協(xié)同凝集試驗(yàn)協(xié)同凝集試驗(yàn) 使用載體是含使用載體是含SPA（葡萄球菌（葡萄球菌A蛋白）金黃色葡萄球菌。蛋白）金黃色葡萄球菌。SPA能與人及多種哺乳動(dòng)物血清中能與人及多種哺乳動(dòng)物血清中IgG類抗體的類抗體的Fc段結(jié)段結(jié)合，合，IgG的的Fc段與段與SPA結(jié)合后，結(jié)合后，IgG的兩個(gè)的兩個(gè)Fab段暴露于段暴露于葡萄球菌菌體的表面，并仍保持正常的抗體活性，當(dāng)結(jié)葡萄球菌菌體的表面，并仍保持正常的抗體活性，當(dāng)結(jié)合于葡萄球菌表面的已知抗體與相應(yīng)細(xì)菌、病毒或毒素合于葡萄球菌表面的已知抗體與相應(yīng)細(xì)菌、病毒或

23、毒素抗原接觸時(shí)，則出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。方法簡(jiǎn)便、抗原接觸時(shí)，則出現(xiàn)肉眼可見的凝集現(xiàn)象。方法簡(jiǎn)便、快速、敏感性高，易于觀察結(jié)果，已廣泛用于細(xì)菌的快快速、敏感性高，易于觀察結(jié)果，已廣泛用于細(xì)菌的快速鑒定和分群（型），如腦膜炎奈瑟菌、銅綠假單胞菌、速鑒定和分群（型），如腦膜炎奈瑟菌、銅綠假單胞菌、肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌、布魯氏菌、沙門氏菌及志肺炎鏈球菌、溶血性鏈球菌、布魯氏菌、沙門氏菌及志賀氏菌等。賀氏菌等。 沉淀反應(yīng)沉淀反應(yīng) 可溶性抗原（如細(xì)菌的培養(yǎng)濾液、含細(xì)菌可溶性抗原（如細(xì)菌的培養(yǎng)濾液、含細(xì)菌的患者血清、腦脊液及組織浸出液等）與的患者血清、腦脊液及組織浸出液等）與相應(yīng)抗體相混合，在比例適

24、合和適量電解相應(yīng)抗體相混合，在比例適合和適量電解質(zhì)的存在等條件下，形成肉眼可見的沉淀質(zhì)的存在等條件下，形成肉眼可見的沉淀物，稱沉淀反應(yīng)。利用沉淀反應(yīng)進(jìn)行血清物，稱沉淀反應(yīng)。利用沉淀反應(yīng)進(jìn)行血清學(xué)試驗(yàn)的方法稱為沉淀試驗(yàn)。沉淀反應(yīng)有學(xué)試驗(yàn)的方法稱為沉淀試驗(yàn)。沉淀反應(yīng)有環(huán)狀、絮狀和瓊脂擴(kuò)散法環(huán)狀、絮狀和瓊脂擴(kuò)散法3種基本類型。種基本類型。抗血清抗血清抗原抗原絮狀沉淀反應(yīng)絮狀沉淀反應(yīng) 指可溶性抗原與抗體指可溶性抗原與抗體在試管內(nèi)以適當(dāng)比例在試管內(nèi)以適當(dāng)比例混合后，在電解質(zhì)存混合后，在電解質(zhì)存在的條件下，出現(xiàn)絮在的條件下，出現(xiàn)絮狀的沉淀物。狀的沉淀物。 將已知抗原與抗體在試將已知抗原與抗體在試管（如凹玻

25、片）內(nèi)混勻，管（如凹玻片）內(nèi)混勻，如抗原抗體對(duì)應(yīng)，而又如抗原抗體對(duì)應(yīng)，而又二者比例適當(dāng)時(shí)，會(huì)出二者比例適當(dāng)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)肉眼可見的絮狀沉淀，現(xiàn)肉眼可見的絮狀沉淀，此為陽(yáng)性反應(yīng)。此為陽(yáng)性反應(yīng)。 抗原抗原抗體抗體環(huán)狀沉淀反應(yīng)環(huán)狀沉淀反應(yīng) 將已知的抗血清加于將已知的抗血清加于細(xì)管中，然后沿管壁細(xì)管中，然后沿管壁徐徐加入已適當(dāng)稀釋徐徐加入已適當(dāng)稀釋的待測(cè)抗原溶液，使的待測(cè)抗原溶液，使成為分界清晰的二層，成為分界清晰的二層，孵育孵育530 min后，后，如在兩液面交界處形如在兩液面交界處形成肉眼可見的白色環(huán)成肉眼可見的白色環(huán)狀沉淀物為陽(yáng)性反應(yīng)。狀沉淀物為陽(yáng)性反應(yīng)。瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) 用瓊脂制成半固體的

26、凝膠，使抗原和抗體在凝膠用瓊脂制成半固體的凝膠，使抗原和抗體在凝膠中擴(kuò)散，若兩者比例適當(dāng)，則在相遇處形成肉眼中擴(kuò)散，若兩者比例適當(dāng)，則在相遇處形成肉眼可見的白色沉淀物（線或環(huán)），為陽(yáng)性反應(yīng)。每可見的白色沉淀物（線或環(huán)），為陽(yáng)性反應(yīng)。每對(duì)抗原抗體可形成一條沉淀線。有幾對(duì)抗原抗體，對(duì)抗原抗體可形成一條沉淀線。有幾對(duì)抗原抗體，就可分別形成幾條沉淀線。由于方法簡(jiǎn)便易行，就可分別形成幾條沉淀線。由于方法簡(jiǎn)便易行，常用于測(cè)定分析和鑒定復(fù)雜的抗原成分。常用于測(cè)定分析和鑒定復(fù)雜的抗原成分。 (1)單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)單向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) (2)雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)雙向瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn) (3)對(duì)流免疫電泳對(duì)流免疫電泳 (4)免

27、疫電泳免疫電泳 免疫擴(kuò)散技術(shù)免疫擴(kuò)散技術(shù)免疫電泳技術(shù)免疫電泳技術(shù)單向擴(kuò)散試驗(yàn)單向擴(kuò)散試驗(yàn)雙向擴(kuò)散試驗(yàn)雙向擴(kuò)散試驗(yàn)火箭電泳火箭電泳對(duì)流電泳對(duì)流電泳免疫電泳免疫電泳擴(kuò)散試驗(yàn)擴(kuò)散試驗(yàn) 單向擴(kuò)散試驗(yàn)是一種定量試驗(yàn)單向擴(kuò)散試驗(yàn)是一種定量試驗(yàn) 雙向擴(kuò)散試驗(yàn)多用于定性試驗(yàn)。雙向擴(kuò)散試驗(yàn)多用于定性試驗(yàn)。單向擴(kuò)散試驗(yàn)單向擴(kuò)散試驗(yàn) 將抗體預(yù)先在將抗體預(yù)先在瓊脂中混勻，瓊脂中混勻，制成凝膠板，制成凝膠板，凝固后在瓊脂凝固后在瓊脂上打孔，孔中上打孔，孔中加入待試抗原，加入待試抗原，經(jīng)一定時(shí)間擴(kuò)經(jīng)一定時(shí)間擴(kuò)散后，若抗原散后，若抗原與抗體對(duì)應(yīng)，與抗體對(duì)應(yīng)，則在孔周圍比則在孔周圍比例適當(dāng)處形成例適當(dāng)處形成白色沉淀環(huán)。白色沉

28、淀環(huán)。 雙向擴(kuò)散試驗(yàn)雙向擴(kuò)散試驗(yàn) 先制備瓊脂凝膠板，待凝固后，根據(jù)需要先制備瓊脂凝膠板，待凝固后，根據(jù)需要在其上面多少個(gè)孔，孔間保持一定距離，在其上面多少個(gè)孔，孔間保持一定距離，然后將抗原和抗體分別注入小孔中，使兩然后將抗原和抗體分別注入小孔中，使兩者相互擴(kuò)散。如抗原與抗體相對(duì)應(yīng)，濃度者相互擴(kuò)散。如抗原與抗體相對(duì)應(yīng)，濃度比例適當(dāng)，經(jīng)一定時(shí)間擴(kuò)散后，在抗原抗比例適當(dāng)，經(jīng)一定時(shí)間擴(kuò)散后，在抗原抗體孔之間出現(xiàn)清晰的白色沉淀線。一對(duì)相體孔之間出現(xiàn)清晰的白色沉淀線。一對(duì)相應(yīng)的抗原抗體只能形成一條線。應(yīng)的抗原抗體只能形成一條線。雙向擴(kuò)散試驗(yàn)雙向擴(kuò)散試驗(yàn) 因此，根據(jù)沉淀線的數(shù)目即可推測(cè)抗原液因此，根據(jù)沉淀線

29、的數(shù)目即可推測(cè)抗原液中有多少種抗原成分，根據(jù)沉淀線融合與中有多少種抗原成分，根據(jù)沉淀線融合與否及交叉關(guān)系，還可鑒定兩種抗原是否完否及交叉關(guān)系，還可鑒定兩種抗原是否完全相同，還是部分相同。本法可用于檢測(cè)全相同，還是部分相同。本法可用于檢測(cè)未知抗原或抗體、分析未知抗原或抗體、分析和鑒定抗原成分、檢測(cè)和鑒定抗原成分、檢測(cè)抗體或抗原的純度、滴抗體或抗原的純度、滴定抗血清的效價(jià)等。缺定抗血清的效價(jià)等。缺點(diǎn)是需時(shí)長(zhǎng)，敏感性差。點(diǎn)是需時(shí)長(zhǎng)，敏感性差。 抗原分子量抗體分子量抗原分子量抗體分子量抗原分子量抗體分子量抗原分子量抗體分子量抗原分子量抗體分子量抗原分子量抗體分子量抗原、抗體相對(duì)含量測(cè)定抗原、抗體相對(duì)含

30、量測(cè)定抗原、抗體相對(duì)分子量分析抗原、抗體相對(duì)分子量分析抗原性質(zhì)分析抗原性質(zhì)分析 耐熱，經(jīng)耐熱，經(jīng)100煮沸煮沸30 min不被破壞，也不受胰不被破壞，也不受胰蛋白酶的影響。食物中蛋白酶的影響。食物中的腸毒素耐熱性更強(qiáng)，的腸毒素耐熱性更強(qiáng)，一般烹調(diào)溫度不能將其一般烹調(diào)溫度不能將其破壞。破壞。218248的油的油中需中需30 min才能被破壞。才能被破壞?？梢鸺毙晕改c炎。以可引起急性胃腸炎。以劇烈嘔吐為特征。劇烈嘔吐為特征。 根據(jù)腸毒素的血清型，可根據(jù)腸毒素的血清型，可分分A、B、C（C1、C2）、）、D、E 5 個(gè)型。個(gè)型。A型腸毒素型腸毒素引起的食物中毒較多，約引起的食物中毒較多，約占占50%左右。其他依次為左右。其他依次為D、C、B和和E型。也有型。也有AD、AB、AC、BC等。等。 該方法也用在該方法也用在GB/T 4789.62003腸毒素檢驗(yàn)。腸毒素檢驗(yàn)。溶血反應(yīng)與補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)溶血反應(yīng)與補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)一、溶血反應(yīng)一、溶血反應(yīng)溶血反應(yīng)與補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)溶血反應(yīng)與補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)二、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是一種在補(bǔ)體參與下，二、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)是一種在補(bǔ)體參與下，以綿羊紅細(xì)胞和溶血素為指示系統(tǒng)的抗原抗以綿羊紅細(xì)胞和溶血素為指示系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng)。體反應(yīng)。 血清學(xué)診斷血清學(xué)診斷 血清學(xué)診斷是指用已知抗原或已知抗體檢測(cè)患者血清血清學(xué)診斷是指用已知