常用緩沖液及培養(yǎng)基配方

1、常用緩沖液及培養(yǎng)基配方LB 液體培養(yǎng)基Bacto- 蛋白胨10g酵母抽提物5g氯化鈉10g加 950ml 蒸餾水溶解，用 5N 氫氧化鈉調(diào) pH 至，定容至 1000ml ，高壓滅菌后保存。 LB 固體培養(yǎng)基 ：每升 LB 液體培養(yǎng)基中參加 12g 瓊脂粉，高壓滅菌后保存。SOB液體培養(yǎng)基20g5gBacto-蛋白胨酵母抽提物NaCl加950 ml水溶解，參加250mmol/L KCI溶液10ml,用5 N NaOH調(diào)pH至，定容至1000 ml, 高壓滅菌后保存。使用前參加 5ml經(jīng)滅菌的2mol/LMgCl 2。SOC液體培養(yǎng)基SOB中參加經(jīng)滅菌的葡萄糖溶液至終濃度為20mmol/L。麥康

2、凱固體培養(yǎng)基每 1000ml 水中加 52g 培養(yǎng)基粉，煮沸溶解后分裝，高壓滅菌。 NA 固體培養(yǎng)基牛肉浸膏3g酵母浸膏1g蛋白胨5g蔗糖10g瓊脂粉15g加950ml蒸餾水溶解，調(diào) pH至，定容至1000ml，高壓滅菌后保存。TB 培養(yǎng)基 ：將以下組分溶解在 0.9L 水中：Bacto-蛋白胨酵母抽提物甘油各組分溶解后高壓滅菌12g24g4ml冷卻到 60 C , 再力口 100ml 滅菌的170mmol/L KH 2PO4 mol/L K 2HPO4的溶液。高壓滅菌或用 溶液I葡萄糖 g1mol/L Tris CI(pH8.0)6.25ml0.5mol/L EDTA(pH8.0) 5ml調(diào)

3、pH至后，用水定容至250 ml，高壓滅菌后保存。溶液n0.22um 的濾膜過濾除菌。50mmol/L20mmol/L10mmol/L10 mol/L NaOH2ml10% SDS10ml用水定容至100 ml，現(xiàn)配現(xiàn)用。溶液川5 mol/L 醋酸鉀60ml冰醋酸水高壓滅菌后保存。高鹽 TE 緩沖液10mmol/L Tris.Cl, pH 8.0*0.1mmol/L EDTA, pH 8.0*1mol/L NaCl 于室溫保存可在幾年內(nèi)保持穩(wěn)定CTAB 抽提液2%w/vCTAB( 古立烷基三乙基溴化銨 )100mmol/L Tris.Cl,pH 8.0 *于室溫保存可在幾年內(nèi)保持穩(wěn)定CTAB/

4、NaCl 溶液 10% CTAB/0.7mol/L NaCl 在 80ml H 2O 中溶解 4.1g NaCl, 緩慢參加 10 一 CTAB 十六烷基三乙基溴化銨 ，同時加 熱并攪拌。如果需要，可加熱至65C溶解。定容終體積至 100ml.CTAB 沉淀液1%w/v CTABPBS 緩沖液：十二水磷酸氫二鈉15g磷酸二氫鉀1g氯化鈉40g氯化鉀1g定容至 5000ml, 調(diào) pH 至。ELISA 包被液 ：碳酸鈉碳酸氫鈉定容至 1000ml ，調(diào) pH 至。ELISA 洗滌液 ( PBST) ：5000ml PBS 中加吐溫 -20顯色液底物溶液 -鄰苯二胺溶液 ：pH5.0 磷酸鹽-檸檬

5、酸緩沖液： 0.1 M 檸檬酸 19.2 g/L 24.3 ml、0.2 M Na 2HPO 4 (28.4g/L) 25.7 ml、臨用時取上述溶液10 ml,加鄰苯二胺OPD4 mg，溶解后參加30 % H2O2 15 山終止液 ：2 M H2SO4TE 緩沖液 (pH8.0)：Tris HCI(pH8.0)10mmol/LEDTA(pH8.0)1mmol/L高壓滅菌。10% SDS ：10g十二烷基硫酸鈉溶于 90ml水中，加熱至68C溶解，加幾滴濃鹽酸調(diào)pH至，定容至 100ml ，過濾除菌。50 X TAE緩沖液Tris242 g冰醋酸 ml100 ml54g20mlmol/L ED

6、TA(pH8.0)用水定容至 1000 ml ，用時稀釋 50倍。5X TBE 緩沖液 ：Tris 堿 *硼酸0.5mol/L EDTA(pH8.0)加水定容至1000ml ,x使用。6X DNA 上樣緩沖液 ：0.25% 溴酚藍(lán) *0.25% 二甲苯青 FF*30%甘油 甲醛凝膠加樣緩沖液 (DEPC 處理水配制 )：50%甘油1mmol/L EDTA(pH8.0) 溴酚藍(lán) * 二甲苯青 FF*適量溴化乙錠 *20X SSC：氯化鈉檸檬酸鈉蒸餾水900ml溶解后用 5N 氫氧化鈉調(diào) pH 至，定容至 1000ml ，高壓滅菌保存。 預(yù)雜交液 ：6X SSC5 X Denhardt 試劑0.5

7、% SDS100ug/ml 經(jīng)變性并斷裂成片段的鮭精 DNA5X甲醛凝膠電泳緩沖液：0.1mol/L MOPS(pH7.0)*40mmol/L 乙酸鈉5mmol/L EDTA(pH8.0)*甲醛變性凝膠配方 ：參加0.7 g瓊脂糖到49.7 ml DEPC-H2O中，用煮沸法溶解瓊脂糖，待溶液冷卻至 55C 同時參加 7 ml 10 XMOPS0.2 mol/L MOPS pH7.0, 20 m mol/L 乙酸鈉， 10 m mol/L EDTA pH8.0電泳緩沖液和13.3 ml甲醛，搖勻，制板待用。134 g Na2HPO4, 4 ml 85% H3PO4, 用水定容至 1L。 探針標(biāo)

8、記中的逆轉(zhuǎn)錄終止液 1 X TEN40 m mol/L Tris-Cl (PH 7.5),1 m mol/L EDTA (PH 8.0),150 m mol/L NaCl 。洗膜液 I2X SSC, 0.1 % mNSDS洗膜液 n X SSC,0.1 % mNSDSSDS-PAGE電泳分析所用的試劑：30%丙烯酰胺：29g丙烯酰胺和1g N , N '亞甲基雙丙烯酰胺，參加 60ml ddH2O，完 全溶解后定容至100ml，過濾，置棕色瓶中備用。Tris-甘氨酸電泳緩沖液：Tris，甘氨酸，SDS 1g，調(diào)pH至8.3，用水定容至1L。12%別離膠：ddH2，30%丙烯酰胺4ml，

9、Tris-HCl，10%過硫酸銨，。 5%濃縮膠：ddH2，30%丙烯酰胺，Tris-HCl，10%過硫酸銨，?？捡R斯亮藍(lán)染色液：乙醇450ml，冰醋酸100ml，ddHzO 450ml，考馬斯亮藍(lán)。 脫色液1L丨：乙醇450ml，冰醋酸100ml，ddH2O 450ml。2X上樣緩沖液：100mmol/L Tris-HCl 丨，200mmol/L 二硫蘇糖醇DTT，4% SDS， 0.2%溴酚藍(lán)，20%甘油。蛋白純化所需的緩沖液：100 mM NaH 2PO4、100 mM NaH 2PO4、100 mM NaH 2PO4、100 mM NaH 2PO4、10mM Tris-Cl10mM T

10、ris-Cl10mM Tris-Cl10mM Tris-Cl3gBuffer B(pH 8.0) : 8M urea、Buffer C(pH 6.3) : 8M urea、Buffer D(pH 5.9) : 8M urea、Buffer E(pH 4.5) : 8M urea、 電洗脫緩沖液：SDSTris-Base甘氨酸定容至1000ml蛋白提取緩沖液：Tris-HClSDS-疏基乙醇尿素50mmol/L4.5%7.5%9mol/L電轉(zhuǎn)移緩沖液:Tris-Base，甘氨酸，SDS 1g，甲醇 200ml，調(diào)pH至8.3，用水定容至1L。Western blot所用試劑：1 XPBS(pH7

11、.4) ： NaCl 8 g，KCl 0.2 g，KH2PO4 0.24 g，Na2HPO4，用蒸餾水溶解至 1 L1 XPBST : 5L 1 采BS 中參加 2.5ml Tween-20封閉液：100ml PBS緩沖液中參加5克脫脂奶粉植物根本培養(yǎng)基溶液大量元素 1L 七水硫酸鎂370mg磷酸二氫鉀170mg硝酸鉀1900mg硝酸氨1650mg二水氯化鈣440mg微量元素 1L)硼酸一水硫酸錳七水硫酸鋅二水鉬酸鈉五水硫酸銅六水氯化鈷碘化鉀七水硫酸亞鐵乙二銨二乙酸二鈉有機(jī) (1L)鹽酸硫胺素鹽酸吡哆辛煙酸肌醇100mgMSs 培養(yǎng)基10X大量100ml100 X微量10ml100 X鐵鹽10

12、ml500X B5 有機(jī)2ml6-BA1mg蔗糖30g瓊脂0.8%調(diào)并加水定容至 1LMsr 1L10 X大量兀素100ml100 X微量兀素10ml100X Fe 鹽10ml500X B5 有機(jī)2ml蔗糖3g葡萄糖7g瓊脂0.8%加水定容至 1L水稻轉(zhuǎn)化用培養(yǎng)基培養(yǎng)基成分NB根本培養(yǎng)基劉巧泉等,1998Nbi愈傷誘導(dǎo)和繼代培養(yǎng)基咼滲培養(yǎng)基NBs篩選培養(yǎng)基MS再生培養(yǎng)基NBr再生培養(yǎng)基1/2MS生根培養(yǎng)基N6大量元素營養(yǎng)液、EDTA-Fe營養(yǎng)液、B5微量元素營養(yǎng)液、 B5 維生素營養(yǎng)液NB、g/L谷氨酰胺、g/L脯氨酸、g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、2mg/L 2,4-D、gNbi、47g

13、/L 山梨醇、47gNB、g/L谷氨酰胺、g/L脯氨酸、g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、2mg/L 2,4-D、40mg/L Hyg第二次篩選用量為 50mg/L、gMS大量元素營養(yǎng)液、EDTA-Fe營養(yǎng)液、MS微量元素營養(yǎng)液、B5維生素營養(yǎng)液、2g/L水解酪蛋白、30g/L蔗糖、30ggg/L NAA、30mg/L Hyg、gNB、2g/L 水解酪蛋白、30g/L 蔗糖、30ggg/L NAA、30mg/L Hyg、g1/2MS大量元素營養(yǎng)液+EDTA-Fe營養(yǎng)液+ MS微量元素營養(yǎng)液 卜B5維生素營養(yǎng)液、3g/L蔗糖、7g/L葡萄糖、40mg/L Hyg、g水稻轉(zhuǎn)化用激素和化合物的配制1 2,4-D1mg/ml:稱取100mg 2