2022年細(xì)胞周期的流式檢測方法

1、細(xì)胞周期的流式檢測方法細(xì)胞周期cell cycle是指細(xì)胞從一次分裂完成開場到下一次分裂完畢所經(jīng)歷的全過程，分為G0/G1期、S期、G2/M期。在科研實(shí)踐中，很多實(shí)驗(yàn)具有對(duì)細(xì)胞群體的周期分布進(jìn)展檢測的需求。細(xì)胞群體周期測定的方法有很多種，最常用的是PI碘化丙啶滲入DNA進(jìn)展染色，然后通過流式細(xì)胞儀檢測PI從而測定細(xì)胞群體的周期分布。因此，下面筆者主要通過BDBectonDickinson公司生產(chǎn)的BD FACSCalibur流式細(xì)胞儀測定PI標(biāo)記的細(xì)胞群體為例，對(duì)細(xì)胞周期的流式檢測方法進(jìn)展闡述。1、 PI染色步驟概略1、單細(xì)胞懸液離心，1500rpm , 5min，棄上清。2、PBS 1ml離

2、心，棄上清。3、70%酒精2ml，4，30min，離心，棄上清液。4、PBS 1ml離心，棄上清。5、RNase A的PBS溶液 (20ug/ml)，500ul，37，30min，離心棄上清。6、PBS 1ml離心，棄上清。 7、PI的PBS溶液(50ug/ml)，500ul，室溫避光孵育30min。8、吹打混勻，300目篩網(wǎng)過濾至流式管中，4保存，待測。2、 Calibur儀器設(shè)置及數(shù)據(jù)收集1、 依次翻開Calibur機(jī)器電源、電腦開關(guān)和CellQuest Pro軟件，按快捷鍵Command+B連機(jī)，按快捷鍵Command+1、2、3、4調(diào)出Detectors/Amps面板、Threshol

3、d面板、Compensation面板和Status面板，軟件的操作界面如圖1所示。圖1. Cell Quest Pro軟件操作界面2、 建立實(shí)驗(yàn)?zāi)０?，包括FSC/SSC散點(diǎn)圖、FL2-W/FL2-A散點(diǎn)圖和FL2-A直方圖。因?yàn)镻I在Calibur上是由488nm的激光器激發(fā)，530/30濾光片收集信號(hào)，所以選擇FL2通道進(jìn)展檢測。細(xì)胞周期是2N和4N的循環(huán)，所以FL2通道的Mode參數(shù)應(yīng)設(shè)置為Lin模式，同時(shí)閾值Threshold的Primary Param參數(shù)設(shè)置為FL2-H，F(xiàn)our Color DDM Param參數(shù)設(shè)置為FL2，如圖2、圖3所示。圖2. Detectors/Amps面

4、板 圖3. Threshold面板3、 設(shè)置細(xì)胞的收集數(shù)目，數(shù)據(jù)保存的路徑和名稱，如圖4、圖5所示。圖4. AcquisitionStorage面板圖5. Acquisition面板4、在圖6所示的操作面板中，勾選Setup選項(xiàng)，點(diǎn)擊Acquire按鈕進(jìn)展數(shù)據(jù)收集并調(diào)節(jié)FL2通道的電壓值使得周期圖位于FL2直方圖中適宜的位置。調(diào)好電壓后，將Setup選項(xiàng)勾掉，點(diǎn)擊Acquire按鈕收集數(shù)據(jù)。數(shù)據(jù)以.FCS格式保存在之前預(yù)設(shè)好的文件夾中。圖6. Acquisition Control面板3、 細(xì)胞周期數(shù)據(jù)的分析流式數(shù)據(jù)分析軟件有很多種，比方Cell Quest、BD FCAS Diva、FlowJo等等。但對(duì)于細(xì)胞周期數(shù)據(jù)的分析，統(tǒng)一的分析步驟如下：1、 建立FSC/SSC散點(diǎn)圖，圈定細(xì)胞群，如圖7所示。圖7. FSC/SSC散點(diǎn)圖2、 建立FL2-W/FL2-A散點(diǎn)圖，去除粘連細(xì)胞，如圖8所示。圖8. FL2-W/FL2-A散點(diǎn)圖3、 建立FL2-A直方圖分析細(xì)胞周期，如圖9所示。圖9. FL2-A直方圖內(nèi)容總結(jié)1細(xì)胞周期的流式檢測方法細(xì)胞周期cell cycle是指細(xì)胞從一次分裂完成開場到下一次分裂完畢所經(jīng)歷的全過程，分為G0/G1期、S期、G2/M期2圖7. FSC/S