堿性成纖維細胞因子在博萊霉素致肺纖維化肺血管損傷中的作用

1、堿性成纖維細胞因子在博萊霉素致肺纖維化肺血管損傷中的作用         08-01-14 15:12:00     編輯：studa20             作者：劉華，陳利萍，朱新菊，賀永鋒，趙杰，劉新社【摘要】  目的 探討堿性成纖維細胞因子(bFGF)在博萊霉素(BLM)致大鼠肺纖維化肺組織中的表達及其在肺血管損傷中的作用。方法 于大鼠

2、氣管內注射BLM以復制其肺纖維化模型,應用bFGF多克隆抗體按SABC法行免疫組織化學染色,定量圖像分析。結果 BLM組動物支氣管上皮細胞胞漿內、支氣管和肺小動脈肌層以及肺泡巨噬細胞胞漿內可見較多棕黃色細顆粒狀bFGF陽性表達產物,顯著高于對照組(P<0.05)。結論 在BLM致大鼠肺纖維化過程中bFGF表達上調，提示bFGF可能參與肺間質纖維化的發(fā)病過程。 【關鍵詞】  堿性成纖維細胞因子；博萊霉素；肺纖維化；血管損害；免疫組化The role of bFGF in vascular injury ofBLMinduced pulmonary fibrosisABSTRACT

3、: Objective  To explore the expression of basic fibroblast growth factor(bFGF) in pulmonary tissues of rats with bleomycininduced pulmonary fibrosis and the role of bFGF in vascular injury. Methods  Pulmonary fibrosis was induced in rats by intratracheal injection of bleomycin(BLM). Lung e

4、xpression of bFGF proteins was assessed by SABC immunohistochemistry using bFGF monoclonal antibody and quantitative image analysis. Results  The expression of bFGF in the lung tissues of BLM group was mainly distributed in bronchiole epithelial cells, muscular layers of bronchi and arterioles,

5、 and alveolar macrophage. It was higher than that in control group, with significant difference (P<0.05). Conclusion  The upregulation expression of bFGF in the BLMinduced pulmonary fibrosis indicates that it directly participates in the process of pulmonary fibrosis.KEY WORDS: basic fibrobl

6、ast growth factor (bFGF); bleomycin; pulmonary fibrosis; vascular injury; immunohistochemical method肺間質纖維化是一種病因各異、表現相似的疾病譜，是各種彌漫型肺間質疾病的最終表現形式，其主要病理特點是肺內成纖維細胞過度增殖和細胞外基質的過多聚集。肺間質纖維化一旦形成，將不可逆地導致嚴重的甚至致命的呼吸循環(huán)功能障礙。有關肺纖維化發(fā)生的機理已有了較為深入的研究，但纖維化過程中肺組織、血管的損傷機制尚不清楚。堿性成纖維細胞生長因子(basic fibroblast growth factor, bFG

7、F)具有強大的促進細胞分裂增殖的作用1，是各種原因所致肺間質纖維化形成機制研究的重點對象。在本研究中，我們應用免疫組織化學技術結合圖像分析，觀察博萊霉素(bleomycin, BLM)致大鼠肺組織纖維化中肺組織bFGF的表達，從血管損傷方面探討bFGF在BLM致肺間質纖維化的發(fā)病機制中的作用。1  材料與方法1.1  實驗動物及分組  體重200-250g的健康雌性Wistar大鼠60只，由西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心提供。隨機分為BLM組和生理鹽水對照組，每組30只。1.2  肺纖維化模型的建立  BLM組用戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔

8、注射麻醉大鼠，在無菌操作下作頸部正中切口，逐層暴露氣管，用lmL注射器(前帶7號針頭)抽取含BLM(5mg/kg)的生理鹽水0.2-0.3mL，經兩氣管軟骨環(huán)間隙朝向心端刺入氣管。將大鼠直立，繼續(xù)朝向心端進針約1.0-1.5cm，回抽出空氣并無阻力后，將藥液注入氣管，旋轉動物，使藥液在肺內分布充分、均勻?？p合傷口。對照組，在同樣條件下，向氣管內注入相同體積的生理鹽水。兩組動物分別于氣管內灌注后3、7、14、21、28d隨機處死動物各6只。1.3  肺組織病理標本的制作  戊巴比妥鈉(30mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠。常規(guī)消毒后開胸，暴露心肺，于右心室插入與輸液器相連的針頭，

9、左心耳剪一約2mm左右切口，向右心室內灌注PBS(pH 7.4)沖洗血管至雙肺呈白色膠凍狀。結扎左主支氣管，經氣管向右肺注入40g/L多聚甲醛6mL，使胸膜展開，結扎氣管后右肺置40g/L多聚甲醛中固定。上、中、下葉各取材一塊，常規(guī)脫水，石蠟包埋，切片(5m)。1.4  bFGF免疫組織化學染色  采用免疫組化SABC法，bFGF多克隆抗體購自博士德公司。免疫組織化學染色按試劑盒說明書進行：石蠟切片常規(guī)脫蠟、脫水；3%(體積分數)H2O2(蒸餾水新鮮配制)室溫5min以滅活內源性酶，蒸餾水洗，3min×3；復合消化液1min，蒸餾水洗，3min×3；正常

10、工作血清封閉液室溫10min，甩去多余液體，不洗；兔抗大鼠bFGF多克隆抗體(IgG型)，經預試驗選擇工作濃度為1100，4過夜，0.01mol/L PBS洗，3min×3；生物素化山羊抗兔IgG抗體，37 20min，0.01mol/L PBS洗，3min×3。SABC試劑37 20min，0.01mol/L PBS洗，5min×4；DBA室溫顯色，蒸餾水洗；蘇木素復染，脫水、透明、封片。各組均設陰性對照切片，以0.01mol/L PBS代替一抗。1.5  bFGF的定量分析  使用北京航空彩色病理圖像分析系統(tǒng)。將待測切片放置在連接計算機的顯微鏡下觀察。每組6只動物，每只動物取3張組織切片,每張切片取5個視野(上、中、下、左、右)，于高倍鏡下(×400)檢測bFGF平均吸光度值(A)。1.6  統(tǒng)計學處理  采用SPSS12.0統(tǒng)計分析軟件，各組間進行t檢驗和相關分析，以P<0.05為有統(tǒng)計學意義。2  結果2.1  肺組織的病理變化  大體標本：對照組雙肺呈粉紅色，表面光滑,開胸后迅速萎陷；BLM組可見雙肺表面灶狀分布的出血點，隨時間延長上述改變由新鮮