毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定野菊花揮 發(fā)油中龍腦和樟腦的含量毛細(xì)管氣

1、1、掌握中藥揮發(fā)油的水蒸餾同時(shí)溶劑提取的方法掌握中藥揮發(fā)油的水蒸餾同時(shí)溶劑提取的方法以及微波輔助提取法；以及微波輔助提取法；2、熟悉毛細(xì)管氣相色譜儀的工作原理及其操作；、熟悉毛細(xì)管氣相色譜儀的工作原理及其操作；3、掌握野菊花揮發(fā)油中樟腦、龍腦的毛細(xì)管氣相、掌握野菊花揮發(fā)油中樟腦、龍腦的毛細(xì)管氣相色譜分離分析及定量分析方法。色譜分離分析及定量分析方法。一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康囊?、?shí)驗(yàn)?zāi)康?氣相色譜過程：混合物的分離氣相色譜過程：混合物的分離各組分的測(cè)定各組分的測(cè)定氣相色譜分為氣相色譜分為: 氣固色譜（吸附氣固色譜（吸附-脫附）脫附）(吸附劑吸附劑) 氣液色譜（分配）氣液色譜（分配）*兩相：兩相： 固定相固定

2、相 流動(dòng)相流動(dòng)相 固定液固定液 擔(dān)體擔(dān)體 載氣載氣（高沸點(diǎn)的有機(jī)溶劑（高沸點(diǎn)的有機(jī)溶劑)（惰性固體（惰性固體) H2、N2、He*分離原理：載氣攜帶被分析的氣態(tài)混合物分離原理：載氣攜帶被分析的氣態(tài)混合物通過色譜柱時(shí)通過色譜柱時(shí),各組分在氣液兩相間反復(fù)分各組分在氣液兩相間反復(fù)分配，由于各組分的配，由于各組分的K值不同，先后流出色譜值不同，先后流出色譜柱得到分離。柱得到分離。*檢測(cè)：各組分的化學(xué)性質(zhì)、熱導(dǎo)率、電性檢測(cè)：各組分的化學(xué)性質(zhì)、熱導(dǎo)率、電性能學(xué)等性質(zhì)，用相應(yīng)的檢測(cè)器，通過電子線能學(xué)等性質(zhì)，用相應(yīng)的檢測(cè)器，通過電子線路紀(jì)錄信號(hào)，得到隨時(shí)間變化的曲線（色譜路紀(jì)錄信號(hào)，得到隨時(shí)間變化的曲線（色譜

3、圖）圖） *定性：色譜峰出現(xiàn)的時(shí)間與該組分的性質(zhì)有關(guān)，定性：色譜峰出現(xiàn)的時(shí)間與該組分的性質(zhì)有關(guān)，即保留時(shí)間定性（經(jīng)驗(yàn)規(guī)律、保留指數(shù)、雙即保留時(shí)間定性（經(jīng)驗(yàn)規(guī)律、保留指數(shù)、雙柱定性、儀器聯(lián)用柱定性、儀器聯(lián)用)*定量：峰高或峰面積大小與組分的含量有關(guān)定量：峰高或峰面積大小與組分的含量有關(guān) （校正因子、歸一化法、外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法）（校正因子、歸一化法、外標(biāo)法、內(nèi)標(biāo)法） 野菊花為菊科植物, 藥用歷史悠久。提取揮發(fā)油，氣相色譜分析可得各成分及含量。 野菊花中的揮發(fā)油中目前已鑒定出60余個(gè)化合物, 因產(chǎn)地或提取方法不同，它們所含揮發(fā)油成分差 異較大,含有的相同成分有樟腦、龍腦等。 樟腦有藥用價(jià)值，如用作呼吸

4、循環(huán)興奮藥、清涼 油、十滴水和消炎鎮(zhèn)痛膏等均含有樟腦。 龍腦，俗稱冰片、樟醇，是我國(guó)很多名貴中成藥的原料毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定野菊花揮發(fā)油中龍腦和樟腦的含量 瓦里安瓦里安CP-3800氣相色譜儀氣相色譜儀氣路系統(tǒng)氣路系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)進(jìn)樣系統(tǒng)柱分離系統(tǒng)柱分離系統(tǒng)溫控系統(tǒng)溫控系統(tǒng)各類檢測(cè)器各類檢測(cè)器 可連用計(jì)算機(jī)工作站。 可同時(shí)安裝多達(dá)三個(gè)進(jìn)樣口： 1079 PTV進(jìn)樣口（可配置五種進(jìn)樣模式） 專用的分流/不分流1177毛細(xì)管進(jìn)樣口 1041填充柱進(jìn)樣口 可同時(shí)安裝三個(gè)檢測(cè)器： FID、TCD 、ECD、TSD(N,P)、PFPD及離子阱MS、四極桿MS/MS（并可同時(shí)操作控制）等。電子流量控制方式柱箱

5、程序升溫7階8平臺(tái)，室溫+10450。 毛細(xì)管氣相色譜，空心柱： CP-Sil 5 CB （100二甲基聚硅氧烷）300.25mmI.D.0.25m film（非極性，幾乎完全根據(jù)沸點(diǎn)分離） FID檢測(cè)器 LWMC-205型可調(diào)功率微波化學(xué)反應(yīng)器 提取揮發(fā)油：水蒸餾同時(shí)溶劑萃取法微波輔助水蒸餾同時(shí)溶劑萃取法（微波具有穿透力強(qiáng)，選擇性高，加熱能力強(qiáng)等特點(diǎn)，從而可獲得高的萃取速度和萃取效率及較好的萃取質(zhì)量，因此在中藥有效成分的提取中具有很好的應(yīng)用前景。）氫氣與氮?dú)獾牧髁勘韧ǔ?111.5；氫氣和空氣流量之比為110。載氣：N2，流速：1 mL/min。分流比：201檢測(cè)器：FID溫度設(shè)置：進(jìn)樣口

6、溫度250；柱溫280（程序升溫程序：從60開始, 保持 1 min。再以12/min的升溫速度到達(dá)280 ，保持3 min）；檢測(cè)器溫度300進(jìn)樣量：1 L火焰離子化檢測(cè)器火焰離子化檢測(cè)器（FID） 又稱氫焰離子化檢測(cè)器。又稱氫焰離子化檢測(cè)器。 FID屬質(zhì)量型檢測(cè)器屬質(zhì)量型檢測(cè)器原理：原理： 以氫氣和空氣燃燒生成的火焰為能源，當(dāng)以氫氣和空氣燃燒生成的火焰為能源，當(dāng)有機(jī)化合物進(jìn)入以氫氣和氧氣燃燒的火焰，在高有機(jī)化合物進(jìn)入以氫氣和氧氣燃燒的火焰，在高溫下產(chǎn)生化學(xué)電離，在高壓電場(chǎng)的定向作用下，溫下產(chǎn)生化學(xué)電離，在高壓電場(chǎng)的定向作用下，形成離子流，微弱的離子流形成離子流，微弱的離子流 ,經(jīng)過高阻放大

7、，成經(jīng)過高阻放大，成為與進(jìn)入火焰的有機(jī)化合物量成正比的電信號(hào)，為與進(jìn)入火焰的有機(jī)化合物量成正比的電信號(hào)，因此可以根據(jù)信號(hào)的大小對(duì)有機(jī)物進(jìn)行定量分析。因此可以根據(jù)信號(hào)的大小對(duì)有機(jī)物進(jìn)行定量分析。FID是一種選擇性的檢測(cè)器，它只能檢測(cè)那些在氫是一種選擇性的檢測(cè)器，它只能檢測(cè)那些在氫火焰中燃燒產(chǎn)生大量碳正離子的有機(jī)化合物?；鹧嬷腥紵a(chǎn)生大量碳正離子的有機(jī)化合物。 影響影響FID靈敏度的因素：靈敏度的因素： 1）載氣和氫氣流速：通常以）載氣和氫氣流速：通常以N2為載氣，其流速為載氣，其流速主要考慮其柱效能。但也要考慮其流速與主要考慮其柱效能。但也要考慮其流速與H2流速流速相匹配。相匹配。一般一般N2:

8、H2 = 1:11:1.5； 2）空氣流速：流速越大。靈敏度越大，到一定）空氣流速：流速越大。靈敏度越大，到一定值時(shí)，空氣流速對(duì)靈敏度影響不大。一般地，值時(shí)，空氣流速對(duì)靈敏度影響不大。一般地，H2:Air = 1:10。 3）極化電壓：在）極化電壓：在50V以下時(shí)，電壓越高，靈敏度以下時(shí)，電壓越高，靈敏度越高。但在越高。但在50V以上，則靈敏度增加不明顯。通以上，則靈敏度增加不明顯。通常選擇常選擇100300V的極化電壓。的極化電壓。 4）操作溫度：比柱的最高允許使用溫度低約）操作溫度：比柱的最高允許使用溫度低約 50oC(防止固定液流失及基線漂移防止固定液流失及基線漂移)1、樣品制備（1）水蒸餾同時(shí)溶劑萃取法提取揮發(fā)油（2）微波輔助萃取法提取野菊花揮發(fā)油2、測(cè)定樟腦,龍腦的標(biāo)準(zhǔn)曲線 （內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線法）3、野菊花中龍腦、樟腦含量的測(cè)定 1、記錄色譜操作條件。 2、分別測(cè)量和繪制樟腦和龍腦的內(nèi)標(biāo)標(biāo)準(zhǔn)曲線。 3、測(cè)量并計(jì)算樟腦/內(nèi)標(biāo)和龍腦/內(nèi)標(biāo)的峰面積比，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中分別測(cè)得樟腦和龍腦的量。 4、進(jìn)一步計(jì)算野菊花中樟