結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)及應(yīng)用

1、結(jié)核病的實(shí)驗(yàn)室診斷技術(shù)及應(yīng)用全球范圍內(nèi)結(jié)核病疫情急劇惡化全球范圍內(nèi)結(jié)核病疫情急劇惡化 1/320億）已感染了結(jié)核菌， 人口的大規(guī)模流動(dòng) 結(jié)核病與艾滋病同時(shí)流行 結(jié)核菌耐多藥菌株的出現(xiàn)我國(guó)是世界上僅低于印度我國(guó)是世界上僅低于印度和印尼的第三結(jié)核病大國(guó)和印尼的第三結(jié)核病大國(guó) 患病率新發(fā)患者93，結(jié)核菌感染率為約40 死亡率高，每年死亡人數(shù)達(dá)13萬(wàn) 耐藥率高早期快速診斷與治療成為制約結(jié)核病早期快速診斷與治療成為制約結(jié)核病防控的關(guān)鍵因素防控的關(guān)鍵因素 常規(guī)結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法診斷陽(yáng)性率不到60。 摘自摘自2014年中國(guó)結(jié)核病監(jiān)測(cè)報(bào)告年中國(guó)結(jié)核病監(jiān)測(cè)報(bào)告結(jié)核病檢測(cè)技術(shù)發(fā)展歷程結(jié)核病檢測(cè)技術(shù)發(fā)展歷程分子診

2、斷時(shí)代分子診斷時(shí)代DNA診斷：診斷：PCRLAMPGeneXpert基因芯片基因芯片RNA診斷：診斷：TMANASBA免疫學(xué)檢測(cè)：免疫學(xué)檢測(cè)：Ab Ag PPDT-SPOT 細(xì)菌法：細(xì)菌法：直接鏡檢直接鏡檢體外培養(yǎng)體外培養(yǎng)SAT19世紀(jì)中葉世紀(jì)中葉20世紀(jì)世紀(jì)60年代年代20世紀(jì)世紀(jì)80年代年代20世紀(jì)世紀(jì)90年代年代n靈敏度低靈敏度低n檢測(cè)周期長(zhǎng)檢測(cè)周期長(zhǎng)n成本低成本低n交叉污染交叉污染n儀器要求復(fù)雜儀器要求復(fù)雜n反應(yīng)抑制反應(yīng)抑制n高靈敏度高靈敏度n高特異性高特異性n交叉污染少交叉污染少n血清學(xué)檢測(cè)血清學(xué)檢測(cè)WHO不推薦不推薦nr-干擾素釋放實(shí)干擾素釋放實(shí)驗(yàn)驗(yàn)結(jié)核病檢測(cè)技術(shù)發(fā)展歷程結(jié)核病檢測(cè)

3、技術(shù)發(fā)展歷程 一、細(xì)菌法 直接涂片（陽(yáng)性率低5000以上細(xì)菌/ml；不能區(qū)分真假、死活）一、細(xì)菌法 結(jié)核菌的培養(yǎng) 結(jié)核病病原學(xué)診斷的金標(biāo)準(zhǔn) (培養(yǎng)時(shí)間長(zhǎng)是其軟肋)一、細(xì)菌學(xué)檢測(cè)的新方法提高陽(yáng)性率 發(fā)光二極管熒光顯微鏡（LED） 液體培養(yǎng)（可同時(shí)縮短培養(yǎng)時(shí)間） 自動(dòng)化涂片/染色技術(shù)（夾層杯法）不能區(qū)分真假、死活；培養(yǎng)仍是金標(biāo)準(zhǔn)但耗時(shí)長(zhǎng)、分枝桿菌固體培養(yǎng)與液體培養(yǎng)比較液體培養(yǎng)液體培養(yǎng)（BD MGIT960）固體培養(yǎng)固體培養(yǎng)（羅氏（羅氏L-J）疑似新發(fā)患者報(bào)陽(yáng)時(shí)間（d）13.637.1428.6710.04復(fù)診患者報(bào)陽(yáng)時(shí)間(d)22.949.5528.5310.40疑似新發(fā)患者陽(yáng)性率32.00%17

4、.90%復(fù)診患者陽(yáng)性率9.30%2.60%污染率6.57%4.0%液體培養(yǎng)在提高陽(yáng)性率、縮短報(bào)陽(yáng)時(shí)間上均優(yōu)于固體培養(yǎng)。吳學(xué)兵，陸彬，桂曉虹等。液體MGIT培養(yǎng)法在結(jié)核分枝桿菌檢測(cè)中的應(yīng)用評(píng)估。檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)，2013,3（28）：211-214仍然不能滿(mǎn)足臨床快速診斷的需要二、免疫學(xué)檢測(cè)二、免疫學(xué)檢測(cè) 血清學(xué)檢測(cè)（抗體、抗原）結(jié)核菌素試驗(yàn)（靈敏度、特異性？）結(jié)核感染結(jié)核感染T T細(xì)胞檢測(cè)（細(xì)胞檢測(cè)（-干擾素檢測(cè)）干擾素檢測(cè)）WHO關(guān)于血清學(xué)檢測(cè)聲明2011年7月20日，世界衛(wèi)生組織（ WHO ）正式聲明，要求禁止將 血清學(xué)檢測(cè)方法 （抗原，抗體，蛋白芯片等）用于肺結(jié)核和肺外結(jié)核的診斷。WHO war

5、ns against the use of inaccurate commercialserological tests for pulmonary and extra-pulmonaryTB.蛋白質(zhì)組學(xué)的發(fā)展 3、4、7種結(jié)核桿菌優(yōu)勢(shì)表位抗原（16KD、38KD、MPT64、ESAT-6、CFP10、Mtb8、 ）制備多靶點(diǎn)蛋白微陣列 大量的文獻(xiàn)報(bào)道其敏感性特異性均顯著高于涂片與培養(yǎng)法 可用于結(jié)核病的臨床輔助診斷，提高痰涂片和痰培養(yǎng)假陰性的檢測(cè)率參考文獻(xiàn)略-干擾素釋放實(shí)驗(yàn)（干擾素釋放實(shí)驗(yàn)（IGRAs)10Interferon-Gamma Release Assays 結(jié)核桿菌特異抗原：結(jié)核桿

6、菌特異抗原：ESAT-6與與CFP10由結(jié)核桿菌基因組RD1區(qū)相同的操縱子編碼的蛋白所有的卡介苗（BCG）均丟失RD1和RD2絕大多數(shù)的環(huán)境分枝桿菌(NTM)也不存在RD1和RD2區(qū)11ESAT-6 : 早期抗原靶早期抗原靶6（Early Secreted Antigenic Rarget 6）CFP10 : 培養(yǎng)濾液蛋白培養(yǎng)濾液蛋白10（Culture Filtrate Protein 10）12結(jié)核桿菌特異抗原：結(jié)核桿菌特異抗原：ESAT-6與與CFP10結(jié)核菌群結(jié)核菌群抗原抗原ESAT6CFP-10M tuberculosis+M africanum+M bovis+BCG substr

7、ain gothenburg- moreau- tice- tokyo- danish- glaxo- montreal- pasteur-抗原抗原 ESAT6CFP-10M abcessus-M avium-M branderi-M celatum-M chelonae-M fortuitum-M gordonii+Mintracellulare-+M malmoense-M marinum+M oenavense-M crofulaceum-M szulgai+M terrae-M vaccae-M xenopi-環(huán)境分枝桿菌環(huán)境分枝桿菌 M smegmatisM kansasii- 特異

8、性特異性只針對(duì)結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群敏感，與絕大多數(shù)環(huán)境分枝桿菌和卡介苗（BCG）無(wú)交叉反應(yīng)美國(guó)FDA數(shù)據(jù)：特異性97.1%(297/306)國(guó)內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：特異性94.1%(478/508) 靈敏度靈敏度基本不受免疫力低下/受抑制影響，在肺外結(jié)核患者中有很高的檢出率美國(guó)FDA數(shù)據(jù)：靈敏度95.6%(175/183)國(guó)內(nèi)臨床數(shù)據(jù)：靈敏度95.3%(624/655)13陰性預(yù)測(cè)值：陰性預(yù)測(cè)值：93.9%（478/509）陽(yáng)性預(yù)測(cè)值：陽(yáng)性預(yù)測(cè)值：95.4%（624/654）T-SPOT.TB是采用是采用-干擾素釋放試驗(yàn)（干擾素釋放試驗(yàn)（IGRA）原理，獲得）原理，獲得美國(guó)美國(guó)FDA認(rèn)證、歐盟認(rèn)證、歐盟C

9、E認(rèn)證和首個(gè)中國(guó)認(rèn)證和首個(gè)中國(guó)CFDA認(rèn)證的商業(yè)化認(rèn)證的商業(yè)化產(chǎn)品產(chǎn)品列入歐美列入歐美25個(gè)國(guó)家結(jié)核診療指南個(gè)國(guó)家結(jié)核診療指南 2011年英國(guó)NICE指南、2010年美國(guó)最新結(jié)核診療指南、 2010年加拿大結(jié)核指南美國(guó)美國(guó)CDC推薦推薦卡介苗（卡介苗（BCG）接種人群結(jié)核感染檢測(cè)首選）接種人群結(jié)核感染檢測(cè)首選 國(guó)內(nèi)風(fēng)濕科和消化科已列入專(zhuān)家共識(shí)國(guó)內(nèi)風(fēng)濕科和消化科已列入專(zhuān)家共識(shí)14用BD CPT 管或Ficoll提取液收集外周血單個(gè)核細(xì)胞結(jié)核特異抗原（ESAT-6/CFP 10）刺激結(jié)核特異的效應(yīng)T淋巴細(xì)胞使其分泌-干擾素效應(yīng)T淋巴細(xì)胞分泌的-干擾素與膜板預(yù)包被的抗-干擾素抗體結(jié)合并固定在細(xì)胞周?chē)?/p>

10、1個(gè)斑點(diǎn)=1個(gè)效應(yīng)T細(xì)胞加入顯色液，觀(guān)察結(jié)果過(guò)夜孵育，洗板，加入酶標(biāo)二抗15實(shí)驗(yàn)效果圖陰性結(jié)果陰性結(jié)果陽(yáng)性結(jié)果陽(yáng)性結(jié)果空白對(duì)照空白對(duì)照抗原抗原AESAT-6抗原抗原BCFP10陽(yáng)性對(duì)照陽(yáng)性對(duì)照（PHA）一個(gè)斑點(diǎn)一個(gè)斑點(diǎn)=一個(gè)結(jié)核效應(yīng)淋巴細(xì)胞一個(gè)結(jié)核效應(yīng)淋巴細(xì)胞T-SPOT結(jié)果的解讀-陽(yáng)性結(jié)果 活動(dòng)性結(jié)核病 典型結(jié)核中毒癥狀 影像學(xué)支持 排除其他診斷 MTB感染狀態(tài) 典型結(jié)核中毒癥狀 未發(fā)現(xiàn)結(jié)核患病證據(jù) 潛伏性結(jié)核感染 無(wú)結(jié)核中毒癥狀 無(wú)其它結(jié)核患病證據(jù) 陳舊性結(jié)核 無(wú)結(jié)核中毒癥狀 既往TB史或明確TB證據(jù) NTM（四種）感染高孟秋 ，-干擾素釋放試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的臨床意義解讀，中華結(jié)核和呼吸雜志，

11、2014T-SPOT結(jié)果解讀-陰性結(jié)果除外結(jié)核感染 所用抗原為MTB特異性抗原 機(jī)體沒(méi)有結(jié)核特異抗原致敏的T淋巴細(xì)胞 目前未感染結(jié)核分枝桿菌假陰性：感染階段不同（窗口期）少數(shù)免疫系統(tǒng)功能不全/基礎(chǔ)疾病的情況，如HIV感染者、腫瘤患者、嬰幼兒等特殊肺外結(jié)核：結(jié)核性腦膜炎、粟粒性結(jié)核靈敏度相對(duì)較低實(shí)驗(yàn)非正常操作：細(xì)胞計(jì)數(shù)不夠等高孟秋 ，-干擾素釋放試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果的臨床意義解讀，中華結(jié)核和呼吸雜志，2014T-SPOT的應(yīng)用 優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：使用血液標(biāo)本，取樣簡(jiǎn)單；可用于肺內(nèi)和肺外結(jié)核檢測(cè)；陰性預(yù)測(cè)值很高，可用于排除結(jié)核感染。 缺點(diǎn)缺點(diǎn)： 陽(yáng)性預(yù)測(cè)值約80%，不能用于結(jié)核的確診 不能確定是否是肺結(jié)核（肺外）

12、 不能區(qū)分是活動(dòng)性和潛伏性結(jié)核 不能區(qū)分某些非結(jié)核分枝桿菌（堪薩斯、蘇氏、戈登、海 分枝桿菌） 操作復(fù)雜，時(shí)間長(zhǎng)；對(duì)于原發(fā)感染初期或免疫低下人群，可能存在假陰性。能否療效監(jiān)測(cè)？無(wú)大量數(shù)據(jù) 三、三、結(jié)核結(jié)核DNA檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù) 測(cè)序測(cè)序金標(biāo)準(zhǔn)金標(biāo)準(zhǔn) 熒光定量熒光定量 PCR 環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法（環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法（LAMP） 基因芯片檢測(cè)鑒定技術(shù)基因芯片檢測(cè)鑒定技術(shù) 基因基因Xpert MTB/RIFXpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)1. 熒光定量熒光定量 PCR 是應(yīng)用是應(yīng)用最為最為廣泛的廣泛的TB-DNA定量定量PCR檢測(cè)方檢測(cè)方法法 具有靈敏度高（具有靈敏度高（10CFU/ml）、特

13、異性強(qiáng)、）、特異性強(qiáng)、線(xiàn)性關(guān)系好、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。線(xiàn)性關(guān)系好、操作簡(jiǎn)單等優(yōu)點(diǎn)。 2.環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法（環(huán)介導(dǎo)恒溫?cái)U(kuò)增法（LAMP） 是在恒溫下進(jìn)行是在恒溫下進(jìn)行PCR擴(kuò)增，因此操作更為簡(jiǎn)便，反擴(kuò)增，因此操作更為簡(jiǎn)便，反應(yīng)更加快速。應(yīng)更加快速。65擴(kuò)增擴(kuò)增40min即可用肉眼觀(guān)察結(jié)果。即可用肉眼觀(guān)察結(jié)果。擴(kuò)增陽(yáng)性標(biāo)本呈現(xiàn)綠色熒光，反之為陰性。擴(kuò)增陽(yáng)性標(biāo)本呈現(xiàn)綠色熒光，反之為陰性。 是結(jié)核分枝桿菌是結(jié)核分枝桿菌DNA檢測(cè)技術(shù)的代表檢測(cè)技術(shù)的代表-靈敏、快速、靈敏、快速、特異、簡(jiǎn)捷將會(huì)極大地推動(dòng)結(jié)核病的防治工作特異、簡(jiǎn)捷將會(huì)極大地推動(dòng)結(jié)核病的防治工作DNA檢測(cè)-LAMP結(jié)果判讀：顯色目測(cè)或SYBR

14、Green I等熒光染料LAMP法和其他PCR法的比較LAMP法在結(jié)核菌檢測(cè)中的應(yīng)用臨床試驗(yàn)臨床試驗(yàn) LAMP法和對(duì)照試劑（BD快速培養(yǎng)）對(duì)比結(jié)果靈敏度89.54% 陽(yáng)性結(jié)果預(yù)期值98.13% 特異性98.93% 陰性結(jié)果預(yù)期值93.77% 總符合率95.31%26 Journal of Clinical Microbiology. 2010, 48(10): 36543660.結(jié)核 胞內(nèi) 通量：可同時(shí)檢測(cè)通量：可同時(shí)檢測(cè) 16-2216-22種常見(jiàn)分枝桿菌種常見(jiàn)分枝桿菌速度：速度：6 6小時(shí)小時(shí) 靈敏度：靈敏度： 10 103 3 CFU/ml CFU/ml可自動(dòng)或肉眼判讀結(jié)果可自動(dòng)或肉眼判

15、讀結(jié)果 3. 基因芯片檢測(cè)技術(shù)基因芯片檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)全程僅需檢測(cè)全程僅需6小時(shí)小時(shí)同時(shí)鑒定同時(shí)鑒定MTC與與21種種NTM 4.Xpert MTB/RIF 4.Xpert MTB/RIF檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù) GeneXpert應(yīng)用1、TB復(fù)合群鑒定。2、利福平耐藥檢測(cè) 。3、WHO推薦4、XpertMTB/RIF檢測(cè)試劑的陽(yáng)性檢出率低于人們對(duì)分子生物學(xué)診斷試劑高敏感度的預(yù)期值，（1000CFU/ml）DNA用于臨床檢驗(yàn)的不足用于臨床檢驗(yàn)的不足“死菌檢測(cè)呈陽(yáng)性死菌檢測(cè)呈陽(yáng)性”，與臨床相關(guān)性差不能區(qū)分“潛伏感染”“活動(dòng)性感染” 易交叉污染易交叉污染 反應(yīng)易受抑制反應(yīng)易受抑制NASBA（國(guó)外）TMA（國(guó)外

16、）SAT（國(guó)內(nèi)）（國(guó)內(nèi)）四、常見(jiàn)的四、常見(jiàn)的RNA檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù) SAT SAT技術(shù)是將核酸恒溫?cái)U(kuò)增和實(shí)時(shí)熒光技術(shù)是將核酸恒溫?cái)U(kuò)增和實(shí)時(shí)熒光 檢測(cè)相結(jié)合的一種新型檢測(cè)相結(jié)合的一種新型RNARNA檢測(cè)技術(shù)。檢測(cè)技術(shù)。 TBSAT TBSAT 檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)技術(shù)TB-RNA釋放釋放恒溫?cái)U(kuò)增恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)檢測(cè)實(shí)時(shí)檢測(cè)超聲波（超聲波（300W）15 min痰液預(yù)處理痰液預(yù)處理42 40 min與反應(yīng)液混合與反應(yīng)液混合6010 min42 5 minTB-SATTB-SAT操作流程操作流程50 l 稀釋液稀釋液全程2小時(shí)，會(huì)做PCR，就學(xué)的會(huì)SATTB-SAT檢測(cè)技術(shù)優(yōu)點(diǎn)RNA診斷技術(shù)的優(yōu)勢(shì)診斷技術(shù)的優(yōu)勢(shì)

17、靈敏度高：靈敏度高：RNA DNA拷貝數(shù)與臨床相關(guān)性好與臨床相關(guān)性好：區(qū)分“死活菌”： 減少抗生素濫用減少抗生素濫用可以診斷可以診斷“活動(dòng)性感染活動(dòng)性感染”： 活動(dòng)性感染：活動(dòng)性感染：RNA轉(zhuǎn)錄活躍轉(zhuǎn)錄活躍 潛伏感染：潛伏感染：RNA不轉(zhuǎn)錄不轉(zhuǎn)錄不易污染不易污染：靶標(biāo)和擴(kuò)增產(chǎn)物都是RNATB-SAT檢測(cè)區(qū)分MTB和NTM結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群（MTB）：人型結(jié)核分枝桿菌牛型結(jié)核分枝桿菌非洲型結(jié)核分枝桿菌非結(jié)核分枝桿菌（NTM）：研究表明，TB-SAT可以區(qū)分如下NTM：堪薩斯分枝桿菌、胞內(nèi)分枝桿菌、龜分枝桿菌、戈登分枝桿菌、海分枝桿菌等18種活菌檢測(cè)技術(shù)，可用作肺結(jié)核治療效果評(píng)估 據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道：每個(gè)

18、結(jié)核分枝桿菌含有約2000個(gè)拷貝rRNA 研究表明：rRNA與結(jié)核分枝桿菌的生活力有著很好的相關(guān)性， rRNA可以反映結(jié)核分枝桿菌的死菌活菌狀態(tài) 研究表明：在用藥治療期內(nèi)，隨著結(jié)核分枝桿菌的死亡，rRNA大約在7天左右時(shí)間全部降解。而DNA含量幾乎保持不變CLAUDIO PIERSIMONI, et al. JOURNAL OF CLINICAL MICROBIOLOGY,Jan.1997, p.193196.GABRIELLE M. E. ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY, Sept. 1994, p. 1959-1965 免疫法常有既往感染問(wèn)題SA

19、TSAT更有利于治愈判斷更有利于治愈判斷窗口期時(shí)間示意相對(duì)濃度示意抗體RNADNA病原體感染前后各檢測(cè)靶標(biāo)的含量變化死菌的RNA快速降解，有助治愈判斷用藥治療DNA需要一段時(shí)間降解RNA快速降解相比相比DNA,RNADNA,RNA檢測(cè)能更好的體現(xiàn)療效檢測(cè)能更好的體現(xiàn)療效服用利福平和氧氟沙星后，第三天和第七天DNA和RNA的滴度變化，相比DNA,RNA與藥物濃度變化的符合率更高，RNA檢測(cè)能更好的進(jìn)行療效評(píng)估。GABRIELLE M. E. Assessment of Mycobacterial Viability by RNA Amplification. ANTIMICROBIAL AGEN

20、TS AND CHEMOTHERAPY, Sept. 1994, p. 1959-1965 DNARNASAT與培養(yǎng)的監(jiān)測(cè)結(jié)果一致，與培養(yǎng)的監(jiān)測(cè)結(jié)果一致，可應(yīng)用于療效評(píng)估可應(yīng)用于療效評(píng)估胡永領(lǐng)，劉成永，成松. 應(yīng)用RNA恒溫?cái)U(kuò)增實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)技術(shù)觀(guān)察抗結(jié)核藥物的療效. 海峽藥學(xué),2015年第27卷第1期SAT在抗結(jié)核治療藥物效果檢測(cè)方面，雖不能直接作出藥物敏感試驗(yàn)，但可以最在抗結(jié)核治療藥物效果檢測(cè)方面，雖不能直接作出藥物敏感試驗(yàn)，但可以最快地直接判斷所用藥物的療效，及時(shí)調(diào)整藥物使用，可大大降低醫(yī)療成本和耐藥快地直接判斷所用藥物的療效，及時(shí)調(diào)整藥物使用，可大大降低醫(yī)療成本和耐藥產(chǎn)生的機(jī)會(huì)，大幅度減

21、少醫(yī)療時(shí)間和費(fèi)用。產(chǎn)生的機(jī)會(huì)，大幅度減少醫(yī)療時(shí)間和費(fèi)用。TB-SAT檢測(cè)體液、病灶組織標(biāo)本的靈敏度檢測(cè)體液、病灶組織標(biāo)本的靈敏度蔡杏珊, 馬品云, 張?jiān)毫迹T耀駒 中國(guó)防癆雜志, 2014,36(6): 458-461小結(jié) TB-SAT是國(guó)內(nèi)唯一的結(jié)核分枝桿菌RNA檢測(cè)產(chǎn)品，2小時(shí)報(bào)告結(jié)果，可以快速快速對(duì)開(kāi)放性肺結(jié)核患者進(jìn)行排查。 TB-SAT可以區(qū)分結(jié)核分枝桿菌復(fù)合群和非結(jié)核分枝桿菌非結(jié)核分枝桿菌，準(zhǔn)準(zhǔn)確確鑒別出肺結(jié)核患者。 中國(guó)防癆協(xié)會(huì)與結(jié)核病權(quán)威專(zhuān)家推崇TB-SAT用于早期發(fā)現(xiàn)用于早期發(fā)現(xiàn)傳染性肺結(jié)核傳染性肺結(jié)核，減少肺結(jié)核導(dǎo)致的公共衛(wèi)生安全問(wèn)題。美國(guó)CDC關(guān)于RNA檢測(cè)技術(shù)在TB診斷的

22、指南 1996：美國(guó)首個(gè)結(jié)核病的：美國(guó)首個(gè)結(jié)核病的RNA檢測(cè)技術(shù)通過(guò)檢測(cè)技術(shù)通過(guò)FDA認(rèn)證，認(rèn)證，配合培養(yǎng)法對(duì)涂陽(yáng)患者進(jìn)行診斷配合培養(yǎng)法對(duì)涂陽(yáng)患者進(jìn)行診斷 2000：美國(guó)：美國(guó)CDC指出指出RNA檢測(cè)技術(shù)用于檢測(cè)技術(shù)用于TB疑似患者疑似患者(涂陽(yáng)、涂陽(yáng)、涂陰涂陰)痰液檢測(cè)、痰液檢測(cè)、DNA檢測(cè)技術(shù)僅用于涂陽(yáng)患者的痰液檢檢測(cè)技術(shù)僅用于涂陽(yáng)患者的痰液檢測(cè)測(cè) 2009：更新關(guān)于分子診斷技術(shù)在：更新關(guān)于分子診斷技術(shù)在TB實(shí)驗(yàn)室診斷的指南實(shí)驗(yàn)室診斷的指南 至少一個(gè)痰液樣本使用分子診斷技術(shù)檢測(cè)至少一個(gè)痰液樣本使用分子診斷技術(shù)檢測(cè)TB實(shí)驗(yàn)室初步診斷同時(shí)參照分子診斷和涂片的結(jié)果實(shí)驗(yàn)室初步診斷同時(shí)參照分子診斷和

23、涂片的結(jié)果中國(guó)結(jié)核病診斷專(zhuān)家共識(shí)結(jié)核病診斷專(zhuān)家組：結(jié)核病診斷專(zhuān)家組：莊玉輝、萬(wàn)利亞莊玉輝、萬(wàn)利亞潘毓瑄、成詩(shī)明潘毓瑄、成詩(shī)明趙雁林、王國(guó)治趙雁林、王國(guó)治吳雪瓊、萬(wàn)康林吳雪瓊、萬(wàn)康林周林、許衛(wèi)國(guó)周林、許衛(wèi)國(guó)居金良、胡忠義居金良、胡忠義專(zhuān)家共識(shí)：專(zhuān)家共識(shí)：TB-SATTB-SAT顯著提高結(jié)核分枝桿菌顯著提高結(jié)核分枝桿菌的陽(yáng)性檢出率，對(duì)早期發(fā)現(xiàn)傳的陽(yáng)性檢出率，對(duì)早期發(fā)現(xiàn)傳染性肺結(jié)核患者，控制結(jié)核病染性肺結(jié)核患者，控制結(jié)核病傳染源有極其重要的意義傳染源有極其重要的意義中國(guó)防癆協(xié)會(huì)，2012年6月結(jié)核實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法中推薦SAT胡忠義. 實(shí)驗(yàn)結(jié)核病學(xué). 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)出版社. 2014.趙雁林. 結(jié)核病實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)規(guī)程. 中國(guó)防癆協(xié)會(huì). 2015五、耐多藥結(jié)核病診斷現(xiàn)狀 固液體培養(yǎng)（時(shí)間、生物安全等）分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用使快速檢測(cè)耐藥成為可能MDR、XDR的出現(xiàn)對(duì)結(jié)核病的防控提出了嚴(yán)峻的考驗(yàn)結(jié)核耐藥分子診斷技術(shù) 測(cè)序（金標(biāo)準(zhǔn)-檢測(cè)突變的理想方法） 實(shí)時(shí)熒光PCR探針溶解曲線(xiàn)