酶工程第三章動植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶資料

1、第三章第三章 動植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶動植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶 與微生物細(xì)胞相比，動物細(xì)胞與微生物細(xì)胞相比，動物細(xì)胞和植物細(xì)胞具有各自不同的特性，和植物細(xì)胞具有各自不同的特性，需采用各自不同的培養(yǎng)工藝。需采用各自不同的培養(yǎng)工藝。 一、植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶一、植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶 全世界用其制備天然芳香化合物全世界用其制備天然芳香化合物的價值超過的價值超過1515億億/ /年；年；美國用其生產(chǎn)藥物超過美國用其生產(chǎn)藥物超過3030億億/ /年；年；我國使用的中草藥及其制備大部我國使用的中草藥及其制備大部分來自植物；分來自植物；主要生產(chǎn)色素、藥物、香精、酶主要生產(chǎn)色素、藥物、香精、酶等次級代謝物。等次級代謝物。 酶酶

2、植物細(xì)胞植物細(xì)胞 糖苷酶糖苷酶 -半乳糖苷酶半乳糖苷酶 漆酶漆酶 過氧化物酶過氧化物酶 -葡萄糖苷酶葡萄糖苷酶 酸性轉(zhuǎn)化酶酸性轉(zhuǎn)化酶 堿性轉(zhuǎn)化酶堿性轉(zhuǎn)化酶 糖化酶糖化酶 木瓜蛋白酶木瓜蛋白酶 苯丙氨酸氨裂合酶苯丙氨酸氨裂合酶 胡蘿卜細(xì)胞胡蘿卜細(xì)胞 紫苜宿細(xì)胞紫苜宿細(xì)胞 假挪威槭細(xì)胞假挪威槭細(xì)胞 甜菜細(xì)胞甜菜細(xì)胞 利馬豆細(xì)胞利馬豆細(xì)胞 甜菜細(xì)胞甜菜細(xì)胞 甜菜細(xì)胞甜菜細(xì)胞 甜菜細(xì)胞甜菜細(xì)胞 木瓜細(xì)胞木瓜細(xì)胞 花生細(xì)胞花生細(xì)胞 植物細(xì)胞發(fā)酵產(chǎn)酶植物細(xì)胞發(fā)酵產(chǎn)酶在在細(xì)細(xì)胞膜外，由胞膜外，由纖維纖維素素構(gòu)構(gòu)成成。功能：功能：1.1.支支持持細(xì)細(xì)胞，使它有固定胞，使它有固定形形狀狀。2.2.保保護(hù)細(xì)護(hù)細(xì)胞

3、胞 葉綠體：葉綠體：內(nèi)內(nèi)有有葉葉綠綠素，素，進(jìn)進(jìn)行光行光合行用合行用 植物植物細(xì)細(xì)胞通常有胞通常有較較大的液泡大的液泡 1.1.植物細(xì)胞培養(yǎng)植物細(xì)胞培養(yǎng) 植物細(xì)胞培養(yǎng)植物細(xì)胞培養(yǎng)是指在離是指在離體條件下，將愈傷組體條件下，將愈傷組織或其它易分散的組織或其它易分散的組織置于液體培養(yǎng)基中織置于液體培養(yǎng)基中進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，得到進(jìn)行振蕩培養(yǎng)，得到分散成游離的懸浮細(xì)分散成游離的懸浮細(xì)胞，通過繼代培養(yǎng)增胞，通過繼代培養(yǎng)增殖，獲得大量細(xì)胞的殖，獲得大量細(xì)胞的一種技術(shù)。一種技術(shù)。植物細(xì)胞具有的特性植物細(xì)胞具有的特性細(xì)胞大，細(xì)胞壁以纖維素為主要成分，抗剪切細(xì)胞大，細(xì)胞壁以纖維素為主要成分，抗剪切能力低；能力低；生

4、長速率慢，為防止培養(yǎng)過程中染菌，需加抗生長速率慢，為防止培養(yǎng)過程中染菌，需加抗生素；生素；細(xì)胞培養(yǎng)需氧，而培養(yǎng)液粘度大，且不能強(qiáng)力細(xì)胞培養(yǎng)需氧，而培養(yǎng)液粘度大，且不能強(qiáng)力通風(fēng)攪拌；通風(fēng)攪拌；產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)且產(chǎn)量低；產(chǎn)物在細(xì)胞內(nèi)且產(chǎn)量低；細(xì)胞常生長成各種大小的團(tuán)塊，增加了懸浮培細(xì)胞常生長成各種大小的團(tuán)塊，增加了懸浮培養(yǎng)的難度等。養(yǎng)的難度等。二、植物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)二、植物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)例如：紫草寧的生產(chǎn)，例如：紫草寧的生產(chǎn)，發(fā)酵細(xì)胞中的紫草寧比發(fā)酵細(xì)胞中的紫草寧比紫草根中高紫草根中高1010倍。倍。紫草寧的結(jié)構(gòu)紫草寧的結(jié)構(gòu)（1 1）提高產(chǎn)率）提高產(chǎn)率（2 2）縮短周期）縮短周期發(fā)酵周期發(fā)酵周期101

5、03030天，種植周期幾個月幾年。天，種植周期幾個月幾年。（3 3）易于管理）易于管理減低勞動強(qiáng)度；不受地理環(huán)境和氣候條件等影減低勞動強(qiáng)度；不受地理環(huán)境和氣候條件等影響。響。 （4 4）提高產(chǎn)品質(zhì)量）提高產(chǎn)品質(zhì)量主要產(chǎn)物濃度高，易于分離純化，減少環(huán)境中主要產(chǎn)物濃度高，易于分離純化，減少環(huán)境中各種有害物質(zhì)污染和侵蝕。各種有害物質(zhì)污染和侵蝕。（5 5）其它）其它設(shè)計(jì)植物細(xì)胞生物反應(yīng)器和控制工藝條件時應(yīng)設(shè)計(jì)植物細(xì)胞生物反應(yīng)器和控制工藝條件時應(yīng)注意一些問題。注意一些問題。三、植物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝條件及其控制三、植物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝條件及其控制（一）植物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝流程（一）植物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝流程外植體外

6、植體細(xì)胞細(xì)胞的獲的獲取取細(xì)胞細(xì)胞培養(yǎng)培養(yǎng)分離分離純化純化產(chǎn)物產(chǎn)物1、外植體的選擇與處理、外植體的選擇與處理 外植體是指從植株取出，經(jīng)過預(yù)處理后，用于植物組織外植體是指從植株取出，經(jīng)過預(yù)處理后，用于植物組織和細(xì)胞培養(yǎng)的植物組織（包括根、莖、葉、芽、花、果和細(xì)胞培養(yǎng)的植物組織（包括根、莖、葉、芽、花、果實(shí)、種子等）的片段或小塊；實(shí)、種子等）的片段或小塊；n選擇無病蟲害、生長旺盛的植株；選擇無病蟲害、生長旺盛的植株；n切成小塊，消毒，漂洗切成小塊，消毒，漂洗水稻的外植體（幼胚）水稻的外植體（幼胚）2、植物細(xì)胞的獲取、植物細(xì)胞的獲?。ǎ┲苯臃蛛x法：通常有機(jī)械法、酶解法；（）直接分離法：通常有機(jī)械法、酶

7、解法；機(jī)械法機(jī)械法n具體做法：具體做法：n將葉片輕輕研碎、過濾離心、收集凈化將葉片輕輕研碎、過濾離心、收集凈化n從未分化的疏松易碎的愈傷組織，通過搖從未分化的疏松易碎的愈傷組織，通過搖床振蕩獲得分散的單細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)床振蕩獲得分散的單細(xì)胞或小細(xì)胞團(tuán)n優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：細(xì)胞不受酶傷害；有利于進(jìn)行細(xì)胞的生理和生細(xì)胞不受酶傷害；有利于進(jìn)行細(xì)胞的生理和生化研究?；芯?。n酶解法酶解法n酶對細(xì)胞壁有一定的軟化作用，所以采用酶對細(xì)胞壁有一定的軟化作用，所以采用酶法時，必須加入甘露醇等滲透壓保護(hù)劑。酶法時，必須加入甘露醇等滲透壓保護(hù)劑。n優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)n可獲得較多的葉肉游離細(xì)胞（但對禾本科可獲得較多的葉肉游離細(xì)胞（但對

8、禾本科植物葉片效果不好）。植物葉片效果不好）。2、植物細(xì)胞的獲取、植物細(xì)胞的獲?。ǎ┲苯臃蛛x法，有機(jī)械法、酶解法；（）直接分離法，有機(jī)械法、酶解法；（）愈傷組織誘導(dǎo)法；（）愈傷組織誘導(dǎo)法；（）原生質(zhì)體再生法（）原生質(zhì)體再生法愈傷組織：愈傷組織： 將上述外植體植入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于將上述外植體植入誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，于2525左右培養(yǎng)一段時間，從外植體的切口部位長出左右培養(yǎng)一段時間，從外植體的切口部位長出小細(xì)胞團(tuán)。小細(xì)胞團(tuán)。水稻的愈傷組織（幼胚）水稻的愈傷組織（幼胚）1 1、植物細(xì)胞培養(yǎng)基的特點(diǎn)、植物細(xì)胞培養(yǎng)基的特點(diǎn)（1 1）需要大量無機(jī)鹽，除）需要大量無機(jī)鹽，除P P、S S、K K、CaCa、MgM

9、g外，外，還需還需B B、MnMn、ZnZn、MoMo、CuCu、CoCo、I I（2 2）需要多種維生素和植物生長激素，如硫）需要多種維生素和植物生長激素，如硫胺素、吡哆素、煙酸、肌醇、分裂素等。胺素、吡哆素、煙酸、肌醇、分裂素等。（3 3）一般為無機(jī)氮源。）一般為無機(jī)氮源。（4 4）一般以蔗糖為碳源。）一般以蔗糖為碳源。（二）植物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基（二）植物細(xì)胞培養(yǎng)的培養(yǎng)基2.2.幾種常用的植物細(xì)胞培養(yǎng)基幾種常用的植物細(xì)胞培養(yǎng)基3 3、植物細(xì)胞培養(yǎng)基的配制、植物細(xì)胞培養(yǎng)基的配制（三）溫度的控制（三）溫度的控制室溫（室溫（2525）（四）pHpH值的控制值的控制 微酸性（微酸性（pH5pH56

10、 6）（五）溶解氧的調(diào)節(jié)控制（五）溶解氧的調(diào)節(jié)控制代謝慢，耗氧少，對剪切力敏感，攪拌不宜強(qiáng)烈。代謝慢，耗氧少，對剪切力敏感，攪拌不宜強(qiáng)烈。（六）光照的控制（六）光照的控制（七）前體的添加（七）前體的添加提高次級代謝物的產(chǎn)量。提高次級代謝物的產(chǎn)量。（八）刺激劑（八）刺激劑(electior(electior) )的應(yīng)用的應(yīng)用強(qiáng)化次級代謝產(chǎn)物的生物合成。常用微生物細(xì)胞強(qiáng)化次級代謝產(chǎn)物的生物合成。常用微生物細(xì)胞壁碎片和胞外酶。壁碎片和胞外酶。四、植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶的工藝過程四、植物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶的工藝過程SOD是生物體內(nèi)清除超氧化物陰是生物體內(nèi)清除超氧化物陰離子自由基離子自由基(O 2)的重要金屬酶的重

11、要金屬酶類。它和過氧化氫酶、過氧化物類。它和過氧化氫酶、過氧化物酶一起構(gòu)成了生物體內(nèi)重要的酶酶一起構(gòu)成了生物體內(nèi)重要的酶促反應(yīng)防御體系，從而維護(hù)生物促反應(yīng)防御體系，從而維護(hù)生物體內(nèi)細(xì)胞正常的生理代謝和生化體內(nèi)細(xì)胞正常的生理代謝和生化反應(yīng)。衰老自由基學(xué)說認(rèn)為衰老反應(yīng)。衰老自由基學(xué)說認(rèn)為衰老源于機(jī)體正常代謝過程中產(chǎn)生過源于機(jī)體正常代謝過程中產(chǎn)生過量的自由基對機(jī)體損害的結(jié)果。量的自由基對機(jī)體損害的結(jié)果。超氧化物歧化酶超氧化物歧化酶(SOD)作為能催化作為能催化超氧陰離子發(fā)生歧化反應(yīng)的自由超氧陰離子發(fā)生歧化反應(yīng)的自由基清除劑，具有延緩衰老的作用。基清除劑，具有延緩衰老的作用。天瑞天瑞SOD蘋果蘋果 以

12、大蒜細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)超氧化物歧化酶（以大蒜細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)超氧化物歧化酶（SOD）為例）為例(1)(1)大蒜愈傷組織的誘導(dǎo)大蒜愈傷組織的誘導(dǎo) 選取結(jié)實(shí)、飽滿、無病蟲害的大蒜蒜瓣，選取結(jié)實(shí)、飽滿、無病蟲害的大蒜蒜瓣，去除外皮，先用去除外皮，先用70%70%乙醇消毒乙醇消毒20s20s，再用，再用0.1%0.1%升升汞消毒汞消毒10min10min，然后無菌水漂洗，然后無菌水漂洗3 3次。次。 在無菌條件下，切成在無菌條件下，切成0.5cm0.5cm3 3的小塊，植入的小塊，植入含有含有3mg/L 2,4-D3mg/L 2,4-D和和1.2mg/L 6-BA 1.2mg/L 6-BA 的半固體的半固體MS

13、MS培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)基中，在2525，600lux600lux，12h/d12h/d光照條件光照條件下培養(yǎng)下培養(yǎng)18d18d，誘導(dǎo)得到愈傷組織，每，誘導(dǎo)得到愈傷組織，每1818天繼代天繼代一次。一次。(2)(2)大蒜懸浮細(xì)胞培養(yǎng)大蒜懸浮細(xì)胞培養(yǎng) 將上述在半固體將上述在半固體MSMS培養(yǎng)基上培養(yǎng)培養(yǎng)基上培養(yǎng)18d18d的愈的愈傷組織，在無菌條件下轉(zhuǎn)入含有傷組織，在無菌條件下轉(zhuǎn)入含有3mg/L 2,4-D3mg/L 2,4-D和和 1.2mg/L 6-BA 1.2mg/L 6-BA （芐基腺嘌呤）（芐基腺嘌呤） 的液體的液體MSMS培養(yǎng)基中，加入滅菌的玻璃珠，培養(yǎng)基中，加入滅菌的玻璃珠，2525，

14、600lux600lux，12h/d12h/d光照條件下震蕩培養(yǎng)光照條件下震蕩培養(yǎng)18d18d，使，使愈傷組織分散成為小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞。愈傷組織分散成為小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞。 然后在無菌條件下，經(jīng)過篩網(wǎng)將小細(xì)胞然后在無菌條件下，經(jīng)過篩網(wǎng)將小細(xì)胞團(tuán)或單細(xì)胞轉(zhuǎn)入含有團(tuán)或單細(xì)胞轉(zhuǎn)入含有3mg/L 2,4-D3mg/L 2,4-D和和1.2mg/L 1.2mg/L 6-BA 6-BA 的液體的液體MSMS培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中，25,600lux25,600lux，12h/d12h/d光照條件下震蕩培養(yǎng)光照條件下震蕩培養(yǎng)18d18d。(3)(3)酶的分離純化酶的分離純化 細(xì)胞培養(yǎng)完成后，收集細(xì)胞，經(jīng)過細(xì)胞細(xì)胞

15、培養(yǎng)完成后，收集細(xì)胞，經(jīng)過細(xì)胞破碎、提取、分離得到超氧化物歧化酶。破碎、提取、分離得到超氧化物歧化酶。二、動物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶二、動物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶 動物細(xì)胞可產(chǎn)生較高價值的物質(zhì)動物細(xì)胞可產(chǎn)生較高價值的物質(zhì), ,特特別是激素、疫苗，單克隆抗體和酶等動別是激素、疫苗，單克隆抗體和酶等動物功能蛋白。物功能蛋白。動物細(xì)胞模式圖一、動物細(xì)胞的特性一、動物細(xì)胞的特性（1 1）無細(xì)胞壁）無細(xì)胞壁, ,脆弱脆弱; ;（2 2）體積比微生物細(xì)胞大幾千倍）體積比微生物細(xì)胞大幾千倍, ,稍小于稍小于植物細(xì)胞植物細(xì)胞; ;（3 3）具有群體效應(yīng)、錨地依賴性、接觸抑）具有群體效應(yīng)、錨地依賴性、接觸抑制性、功能全能性；制性、

16、功能全能性；（4 4）營養(yǎng)要求復(fù)雜。）營養(yǎng)要求復(fù)雜。二、二、動物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)動物細(xì)胞培養(yǎng)的特點(diǎn)（1）主要用于生產(chǎn)各種功能蛋白質(zhì)；）主要用于生產(chǎn)各種功能蛋白質(zhì)；（2）生長緩慢；）生長緩慢；（3）需加抗生素防污染；）需加抗生素防污染；（4）細(xì)胞體積大，無細(xì)胞壁保護(hù)，對剪切力敏感；）細(xì)胞體積大，無細(xì)胞壁保護(hù)，對剪切力敏感；（5）具錨地依賴性，宜貼壁培養(yǎng)；部分用懸浮培養(yǎng)；）具錨地依賴性，宜貼壁培養(yǎng)；部分用懸浮培養(yǎng)；（6）培養(yǎng)基成分復(fù)雜，反應(yīng)過程成本高，產(chǎn)品價格貴）培養(yǎng)基成分復(fù)雜，反應(yīng)過程成本高，產(chǎn)品價格貴 ；（7）原代細(xì)胞培養(yǎng)）原代細(xì)胞培養(yǎng)50代后，即會退化死亡，需要重新分離細(xì)代后，即會退化死亡，需

17、要重新分離細(xì)胞。胞。三、動物細(xì)胞培養(yǎng)的方式三、動物細(xì)胞培養(yǎng)的方式來自血液、淋巴組織來自血液、淋巴組織的細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、的細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞等非錨定雜交瘤細(xì)胞等非錨定依賴性細(xì)胞采用。依賴性細(xì)胞采用。類似于微生物細(xì)胞的類似于微生物細(xì)胞的深層發(fā)酵，但工藝條深層發(fā)酵，但工藝條件有較大差別。件有較大差別。雜交瘤細(xì)胞懸浮培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞懸浮培養(yǎng) （一）懸浮培養(yǎng)（一）懸浮培養(yǎng)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)法的優(yōu)點(diǎn)細(xì)胞懸浮培養(yǎng)法的優(yōu)點(diǎn)n可連續(xù)收集部分細(xì)胞進(jìn)行移植繼代培養(yǎng)，可連續(xù)收集部分細(xì)胞進(jìn)行移植繼代培養(yǎng)，傳代時無需消化分散，免遭酶類、傳代時無需消化分散，免遭酶類、EDTAEDTA及機(jī)械損害。及機(jī)械損害。n細(xì)胞收率高，并

18、可連續(xù)測定細(xì)胞濃度，細(xì)胞收率高，并可連續(xù)測定細(xì)胞濃度，還有可能實(shí)現(xiàn)大規(guī)模直接克隆培養(yǎng)。還有可能實(shí)現(xiàn)大規(guī)模直接克隆培養(yǎng)。 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)n培養(yǎng)過程中，為確保細(xì)胞呈單顆粒均勻懸浮狀態(tài)，培養(yǎng)過程中，為確保細(xì)胞呈單顆粒均勻懸浮狀態(tài)，需采用攪拌或氣升式反應(yīng)器，以較低攪拌速度及需采用攪拌或氣升式反應(yīng)器，以較低攪拌速度及一定速度通入含一定速度通入含5 5COCO2 2的無菌空氣，保持細(xì)胞懸的無菌空氣，保持細(xì)胞懸浮態(tài)并維持培養(yǎng)液溶解氧。浮態(tài)并維持培養(yǎng)液溶解氧。n此外不同細(xì)胞懸浮條件亦異，為使細(xì)胞不致凝集、此外不同細(xì)胞懸浮條件亦異，為使細(xì)胞不致凝集、成團(tuán)或沉淀，在配制培養(yǎng)基的基礎(chǔ)鹽溶液中不加成團(tuán)或沉淀，在配制

19、培養(yǎng)基的基礎(chǔ)鹽溶液中不加鈣和鎂離子。間歇或連續(xù)更換部分培養(yǎng)液，可維鈣和鎂離子。間歇或連續(xù)更換部分培養(yǎng)液，可維持持pHpH值，若使用值，若使用HEPESHEPES緩沖鹽溶液時尚可不必連續(xù)緩沖鹽溶液時尚可不必連續(xù)通入含通入含5 5COCO2 2空氣?？諝?。 大多數(shù)動物細(xì)胞，采用大多數(shù)動物細(xì)胞，采用: :（1 1）滾瓶培養(yǎng)系統(tǒng)）滾瓶培養(yǎng)系統(tǒng): :結(jié)構(gòu)簡單結(jié)構(gòu)簡單, ,重現(xiàn)性好重現(xiàn)性好; ;（二）貼壁培養(yǎng)（二）貼壁培養(yǎng)將動物細(xì)胞吸附于微載體表面，在培養(yǎng)液中進(jìn)行將動物細(xì)胞吸附于微載體表面，在培養(yǎng)液中進(jìn)行懸浮培養(yǎng)，使細(xì)胞在微載體表面長成單層的培養(yǎng)懸浮培養(yǎng)，使細(xì)胞在微載體表面長成單層的培養(yǎng)方法稱為微載體培養(yǎng)

20、法。方法稱為微載體培養(yǎng)法。由葡聚糖凝膠制成微球由葡聚糖凝膠制成微球, ,動物細(xì)胞依附其上單層動物細(xì)胞依附其上單層生長繁殖生長繁殖, ,懸浮于培養(yǎng)液中懸浮于培養(yǎng)液中; ;特點(diǎn)特點(diǎn): :比表面積大比表面積大, ,單位體積培養(yǎng)液細(xì)胞產(chǎn)率高單位體積培養(yǎng)液細(xì)胞產(chǎn)率高; ;具有懸浮培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)。具有懸浮培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)。（2 2）微載體系統(tǒng)）微載體系統(tǒng): :制備微載體的材料主要有：制備微載體的材料主要有：n葡聚糖（葡聚糖（DEAEDEAESephadexSephadex A A5050及及A A25 25 ） n塑料塑料n明膠明膠n玻璃玻璃n纖維素纖維素 四、動物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝條件及其控制四、動物細(xì)胞培養(yǎng)的工藝條

21、件及其控制n種質(zhì)細(xì)胞：體細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞；種質(zhì)細(xì)胞：體細(xì)胞、雜交瘤細(xì)胞；n工藝過程：工藝過程：種質(zhì)種質(zhì)細(xì)胞細(xì)胞胰蛋白酶胰蛋白酶懸浮懸浮細(xì)胞細(xì)胞懸浮培懸浮培養(yǎng)或貼養(yǎng)或貼壁培養(yǎng)壁培養(yǎng)收集培收集培養(yǎng)液、養(yǎng)液、分離純分離純化化（一）動物細(xì)胞培養(yǎng)基組成成分（一）動物細(xì)胞培養(yǎng)基組成成分1 1、氨基酸：各種必需氨基酸，谷氨酰胺等，、氨基酸：各種必需氨基酸，谷氨酰胺等， 作為碳源和能源利用；作為碳源和能源利用；2 2、維生素：血清中，、維生素：血清中，B B族和維族和維C C；3 3、無機(jī)鹽：調(diào)節(jié)滲透壓；、無機(jī)鹽：調(diào)節(jié)滲透壓；4 4、葡萄糖：作為碳源和能源；、葡萄糖：作為碳源和能源；5 5、激素：胰島素、生長

22、激素、氫化可的松；、激素：胰島素、生長激素、氫化可的松；6 6、生長因子：如表皮生長因子、神經(jīng)生長、生長因子：如表皮生長因子、神經(jīng)生長 因子、成纖維細(xì)胞生長因子。因子、成纖維細(xì)胞生長因子。（二）動物細(xì)胞培養(yǎng)基的配制（二）動物細(xì)胞培養(yǎng)基的配制n首先配制各類母液，使用前混合過濾除菌，首先配制各類母液，使用前混合過濾除菌，使用時稀釋至所需濃度；使用時稀釋至所需濃度；n各種動物培養(yǎng)基已商品化。各種動物培養(yǎng)基已商品化。（三）（三） 溫度的控制溫度的控制一般控制在一般控制在36.536.5;溫度也會影響溫度也會影響pHpH值。值。（四）（四）pHpH值的控制值的控制n一般控制在一般控制在pH7.0pH7.

23、07.6;7.6;n培養(yǎng)過程中需要對培養(yǎng)過程中需要對pHpH值進(jìn)行監(jiān)測和調(diào)節(jié)；值進(jìn)行監(jiān)測和調(diào)節(jié)；n采用采用COCO2 2和和NaHCONaHCO3 3溶液調(diào)節(jié)溶液調(diào)節(jié): :需注意溶解氧的控制；流加酸需注意溶解氧的控制；流加酸堿液；堿液；n加入緩沖系統(tǒng)；加入緩沖系統(tǒng)；n監(jiān)測指示劑為酚紅。監(jiān)測指示劑為酚紅。（五）滲透壓的控制（五）滲透壓的控制培養(yǎng)液滲透壓應(yīng)與細(xì)胞內(nèi)的滲透壓處于等滲狀態(tài)。培養(yǎng)液滲透壓應(yīng)與細(xì)胞內(nèi)的滲透壓處于等滲狀態(tài)。（六）溶解氧的控制（六）溶解氧的控制溶解氧的供給對動物細(xì)胞培養(yǎng)至關(guān)重要；溶解氧的供給對動物細(xì)胞培養(yǎng)至關(guān)重要；采用調(diào)節(jié)混合氣體的量與比例的方法。采用調(diào)節(jié)混合氣體的量與比例的方法。五、動物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶的工藝過程五、動物細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)酶的工藝過程以人黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)組織纖溶酶原活化以人黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)組織纖溶酶原活化劑劑(tPA(tPA) )為例：為例：tPAtPA是一種絲氨酸蛋白酶是一種絲氨酸蛋白酶, ,可以催化纖溶酶原可以催化纖溶酶原水解，生成纖溶酶水解，生成纖溶酶; ;纖溶酶催化血栓中的血纖纖溶酶催化血栓中的血纖維蛋白水解，對血栓性疾病有顯著療效。維蛋白水解，對血栓性疾病有顯著療效。生產(chǎn)組織纖溶酶原活化劑的工藝過程生產(chǎn)組織纖溶酶原活化劑的工藝過程、人黑色素瘤細(xì)胞培養(yǎng)基；