葉綠體色素的提取與分離實(shí)驗(yàn)

1、一、原理一、原理1、提?。?、提?。?、分離：、分離：注：色素的溶解度（擴(kuò)散速度）：注：色素的溶解度（擴(kuò)散速度）：色素溶解于有機(jī)溶劑（無水乙醇、丙酮），色素溶解于有機(jī)溶劑（無水乙醇、丙酮），形成色素溶液，所以可以提取色素。形成色素溶液，所以可以提取色素。四種色素在層析液中的溶解度不同，因而四種色素在層析液中的溶解度不同，因而隨層析液在濾紙上擴(kuò)散速度不同。所以能隨層析液在濾紙上擴(kuò)散速度不同。所以能使色素分離開來。使色素分離開來。二、流程二、流程 （一）提取色素（一）提取色素 1、選材：、選材： 2、SIO2： 3、CaCO3： 4、無水乙醇：、無水乙醇： 5、研磨迅速：、研磨迅速： 充分：充分：

2、6、管口塞緊：、管口塞緊：富含葉綠素（菠菜）（不能用白菜）富含葉綠素（菠菜）（不能用白菜）研磨充分研磨充分防止色素被破壞（保護(hù)色素）防止色素被破壞（保護(hù)色素）溶解色素、提取色素溶解色素、提取色素避免揮發(fā)避免揮發(fā)使葉綠體完全破裂，提取較多色素使葉綠體完全破裂，提取較多色素避免濾液揮發(fā)，影響效果避免濾液揮發(fā)，影響效果 （二）制濾紙條（二）制濾紙條 7、剪兩角：、剪兩角： （三）濾液劃線（三）濾液劃線 8、均勻、細(xì)、直：、均勻、細(xì)、直： 9、重復(fù)：、重復(fù)： （四）色素分離（紙層析法）（四）色素分離（紙層析法） 10、層析液不能沒及細(xì)線：、層析液不能沒及細(xì)線：使濾液在濾紙條上擴(kuò)散均勻，便于觀察使濾液在

3、濾紙條上擴(kuò)散均勻，便于觀察防止色素帶重疊，使色素?cái)U(kuò)散防止色素帶重疊，使色素?cái)U(kuò)散起點(diǎn)一致。起點(diǎn)一致。增加色素?cái)?shù)量，使效果更明顯。增加色素?cái)?shù)量，使效果更明顯。色素易溶于層析液中，導(dǎo)致色素帶不清晰，實(shí)驗(yàn)不佳色素易溶于層析液中，導(dǎo)致色素帶不清晰，實(shí)驗(yàn)不佳或失敗?；蚴　?（五）關(guān)鍵（五）關(guān)鍵 1、提取的關(guān)鍵：、提取的關(guān)鍵： 2、分離的關(guān)鍵：、分離的關(guān)鍵： 3、提取液顏色較淺（淡綠色）的原因：、提取液顏色較淺（淡綠色）的原因：A、葉片新鮮、濃綠；、葉片新鮮、濃綠； B、研磨迅速、充分；、研磨迅速、充分；C、收集濾液后要及時(shí)塞緊管口，避免揮發(fā)。、收集濾液后要及時(shí)塞緊管口，避免揮發(fā)。A、濾液劃線要均勻、細(xì)、

4、直，并重復(fù)；、濾液劃線要均勻、細(xì)、直，并重復(fù)；B、層析液不能沒及細(xì)線。、層析液不能沒及細(xì)線。A、研磨不充分，色素未能充分提取；、研磨不充分，色素未能充分提?。籅、未加、未加CaCO3色素分子遭破壞；色素分子遭破壞；C、無水乙醇（丙酮）加入量過多，稀釋色素提取液。、無水乙醇（丙酮）加入量過多，稀釋色素提取液。3/41/4三、結(jié)果三、結(jié)果6.排列順序由近到遠(yuǎn)是（名稱、顏色）：排列順序由近到遠(yuǎn)是（名稱、顏色）：最多最多 最寬最寬最少最少 最窄最窄最大最大 最遠(yuǎn)最遠(yuǎn)最小最小 最近最近葉綠素葉綠素b（黃綠色）、葉綠素（黃綠色）、葉綠素a（藍(lán)綠色）、葉黃素（黃色）、胡蘿卜素（橙黃色）（藍(lán)綠色）、葉黃素（黃

5、色）、胡蘿卜素（橙黃色）胡蘿卜素胡蘿卜素 葉綠素葉綠素b四、影響葉綠素合成的因素四、影響葉綠素合成的因素 1、光照、光照 2、溫度、溫度 3、礦質(zhì)元素、礦質(zhì)元素光是影響葉綠素合成的主要條件，光是影響葉綠素合成的主要條件，無光不能合成葉綠素。無光不能合成葉綠素。溫度影響酶的活性；低溫葉綠素易被破壞。溫度影響酶的活性；低溫葉綠素易被破壞。N、Mg是葉綠素的組分，缺乏則不能合成；是葉綠素的組分，缺乏則不能合成；Fe是葉綠素合成所需酶的輔助充分，缺乏則是葉綠素合成所需酶的輔助充分，缺乏則受阻。受阻。2、1779年，荷蘭科學(xué)家英格豪斯的實(shí)驗(yàn)；年，荷蘭科學(xué)家英格豪斯的實(shí)驗(yàn)；明確綠葉在光下放出的是氧氣，吸收

6、的是二氧明確綠葉在光下放出的是氧氣，吸收的是二氧化碳；化碳；3.、1845年，梅耶指出，年，梅耶指出，植物在進(jìn)行光合作用植物在進(jìn)行光合作用時(shí)，把光能轉(zhuǎn)變成化學(xué)能儲(chǔ)存起來；時(shí)，把光能轉(zhuǎn)變成化學(xué)能儲(chǔ)存起來；1、1771年（英）普里斯特利的實(shí)驗(yàn)?zāi)辏ㄓⅲ┢绽锼固乩膶?shí)驗(yàn) 植物可以更新空氣植物可以更新空氣；三、光合作用的探究歷程三、光合作用的探究歷程 4、1864年，薩克斯年，薩克斯(德德)的實(shí)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)思考：思考： 置于暗處幾小時(shí)置于暗處幾小時(shí)目的：目的：用熱酒精處理的目的：用熱酒精處理的目的：一半遮光一半遮光一半曝光一半曝光消耗掉葉片中原有的淀粉消耗掉葉片中原有的淀粉 綠色葉片中光合作用中產(chǎn)生了淀粉；綠色葉片中光合作用中產(chǎn)生了淀粉；結(jié)論：結(jié)論：溶解色素（脫綠處理），使實(shí)溶解色素（脫綠處理），使實(shí)驗(yàn)效果更明顯驗(yàn)效果更明顯5、1880年，恩格爾曼（德）年，恩格爾曼（德） 好氧細(xì)菌和水綿實(shí)驗(yàn)好氧細(xì)菌和水綿實(shí)驗(yàn) 結(jié)論：結(jié)論：O2是葉綠體釋放出來的，葉綠體是光合是葉綠體釋放出來的，葉綠體是光合作用的場所。作用的場所。 6、20世紀(jì)世紀(jì)30年代，魯賓和卡門（美）年代，魯賓和卡門（美）的的同位素標(biāo)記實(shí)驗(yàn)：同位素標(biāo)記實(shí)驗(yàn)：結(jié)論：結(jié)論：光合作用產(chǎn)生的氧氣全部來自水，光合作用產(chǎn)生的氧氣全部來自水，而不是來自而不是來自CO