實驗四X染色質(zhì)標本制備與觀察

1、實驗四實驗四 X染色質(zhì)標本制備與觀察染色質(zhì)標本制備與觀察 目的要求目的要求（1）掌握）掌握X染色質(zhì)標本制備方法及其原理。染色質(zhì)標本制備方法及其原理。（2）掌握）掌握X染色質(zhì)的形態(tài)特征及其臨床意義。染色質(zhì)的形態(tài)特征及其臨床意義。實驗原理實驗原理一個個體不論其細胞中有幾條一個個體不論其細胞中有幾條X染色體，均只染色體，均只有一條具有轉(zhuǎn)錄活性，其余的有一條具有轉(zhuǎn)錄活性，其余的X染色體均失活染色體均失活形成異固縮的形成異固縮的X染色質(zhì)。正常女性間期細胞核染色質(zhì)。正常女性間期細胞核中中X染色質(zhì)陽性率一般約為染色質(zhì)陽性率一般約為10一一30，有的，有的可高達可高達50以上。其出現(xiàn)率的高低與個體不同以上。其

2、出現(xiàn)率的高低與個體不同生理狀態(tài)、染色方法、染色技術(shù)以及生理狀態(tài)、染色方法、染色技術(shù)以及X染色體染色體在細胞核中的位置不同有關(guān)。在男性間期細胞在細胞核中的位置不同有關(guān)。在男性間期細胞核中則平均低于核中則平均低于1。一般檢查。一般檢查X染色質(zhì)確定性染色質(zhì)確定性別時，觀察別時，觀察200個細胞，個細胞，X染色質(zhì)出現(xiàn)染色質(zhì)出現(xiàn)5以上以上者為女性?，F(xiàn)在，者為女性?，F(xiàn)在，X染色質(zhì)檢查已廣泛應(yīng)用于染色質(zhì)檢查已廣泛應(yīng)用于臨床，作為性別測定和性染色體數(shù)目異常的一臨床，作為性別測定和性染色體數(shù)目異常的一種輔助診斷方法。種輔助診斷方法。實驗用品實驗用品(1)器材：顯微鏡、載玻片、牙簽。器材：顯微鏡、載玻片、牙簽。

3、(2)試劑試劑 ：Giemsa染液、染液、0.2甲苯胺藍甲苯胺藍染液染液 、5mol/L HCl溶液溶液 、95乙醇、乙醇、pH 6.8 PBS (3)材料：人口腔黏膜上皮細胞。材料：人口腔黏膜上皮細胞。 方法與步驟方法與步驟（一）（一） Giemsa染色法染色法(1)取材制片：先讓受檢者用水漱口數(shù)次，然后用牙簽取材制片：先讓受檢者用水漱口數(shù)次，然后用牙簽鈍頭部刮取口腔下唇內(nèi)側(cè)面，棄去第一次刮到的細胞，鈍頭部刮取口腔下唇內(nèi)側(cè)面，棄去第一次刮到的細胞，在同一部位連刮幾次，將刮取物均勻涂在干凈的載玻在同一部位連刮幾次，將刮取物均勻涂在干凈的載玻片上晾干。片上晾干。(2)固定：將帶有標本的載玻片置入

4、裝有新配置的甲醇固定：將帶有標本的載玻片置入裝有新配置的甲醇-冰醋酸固定液（冰醋酸固定液（3：1）的染色缸中固定）的染色缸中固定10min后取出，后取出，空氣干燥?？諝飧稍?。(3)水解：玻片標本置于水解：玻片標本置于5mol/L HCl中，室溫水解中，室溫水解20 min。用新鮮蒸餾水沖洗四次，充分洗去殘留的。用新鮮蒸餾水沖洗四次，充分洗去殘留的HCl。(4)染色：置染色：置Giemsa染液中染色染液中染色10min ，蒸餾水沖洗后，蒸餾水沖洗后晾干，酒精燈上過火脫水，以二甲苯透明，樹膠封片。晾干，酒精燈上過火脫水，以二甲苯透明，樹膠封片。 （二）甲苯胺藍染色法 (1)取材制片：先讓受檢者用水

5、漱口數(shù)次，然后用牙簽鈍頭部刮取口腔下唇內(nèi)側(cè)面，棄去第一次刮到的細胞，在同一部位連刮幾次，將刮取物均勻涂在干凈的載玻片上晾干。(2)固定：用95%乙醇固定30分鐘。(3)水解：玻片標本置于5mol/L HCl中，室溫水解20 min。用新鮮蒸餾水沖洗四次，充分洗去殘留的HCl。(4)染色：0.2甲苯胺藍染液染色510min。(5)鏡檢：自來水漂洗，空氣干燥后油鏡下觀察。 觀察與結(jié)果觀察與結(jié)果 高倍鏡下可見許多染成藍色的細胞核，細胞質(zhì)不著色或不明顯。選擇核較大，染色清晰，輪廓完整，核質(zhì)呈均勻細網(wǎng)狀的細胞進行觀察。找到核膜內(nèi)側(cè)緣有藍色濃染小體的細胞核后，換油鏡進一步觀察。油鏡下X染色質(zhì)為藍色平凸形、三角形、扁平形的濃染小體。 注意事項注意事項(1)取材前要漱口，以免口腔中的雜質(zhì)影響觀察效果。 (2)HCl水解要充分，使X染色質(zhì)易于顯現(xiàn)。 (3)臨床檢查時要選擇形態(tài)好的細胞