肌鈣蛋白和肌紅蛋白測定試劑盒介紹

1、肌鈣蛋白和肌紅蛋白肌鈣蛋白和肌紅蛋白測定試劑盒介紹測定試劑盒介紹 膠乳增強(qiáng)免疫比濁法 太原川至生物工程有限公司太原川至生物工程有限公司技術(shù)背景技術(shù)背景n心腦血管病現(xiàn)已成為我國人口死亡的主要原因，名列第一位，心血管疾病特別是心肌損傷的發(fā)病率逐年增加。因此早期進(jìn)行診斷和積極的治療，對挽救病人的生命有重要意義。技術(shù)技術(shù)背景nWHO 1979年制訂的AMI的診斷標(biāo)準(zhǔn) n1.有劇烈而持久的胸痛史：2.明確的心電圖改變，包括ST段抬高和異常的Q波出現(xiàn)：3.系列酶的水平的改變，早期濃度升高，隨后恢復(fù)正常濃度。 技術(shù)背景技術(shù)背景n隨著醫(yī)學(xué)科學(xué)研究的進(jìn)展，心肌損傷的血液生化標(biāo)志物已從早先的以酶活性酶活性為主的檢

2、測發(fā)展到目前的以蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度蛋白質(zhì)質(zhì)量濃度為主的檢測，包括多種標(biāo)志物 。nAST、LD及其同工酶以及-羥丁酸脫氫酶等以酶活性為主的檢測項(xiàng)目在診斷心臟疾病時(shí)已逐漸少用以至不再應(yīng)用。技術(shù)背景技術(shù)背景n25%的AMI病人發(fā)病早期沒有典型的臨床癥狀；n約30%的AMI病人缺乏心電圖（ECG）的特異改變；nCK-MB的敏感性和特異性也不盡如人意。 心肌損傷理想的生化標(biāo)志物心肌損傷理想的生化標(biāo)志物n在心肌細(xì)胞中的濃度很高；而在其它組織中的濃度很低。特異性強(qiáng)特異性強(qiáng) n在心肌損傷后能很快釋放入血。敏感性高敏感性高 n在多日內(nèi)保持異常。窗口期長窗口期長n檢測所需時(shí)間短檢測所需時(shí)間短。肌鈣蛋白是迄今為止，基本

3、符合上述標(biāo)準(zhǔn)的標(biāo)志物。 心肌損傷理想的生化標(biāo)志物心肌損傷理想的生化標(biāo)志物n國際臨床化學(xué)聯(lián)盟（IFCC）的心肌標(biāo)志物標(biāo)準(zhǔn)化委員會（CSCM）和美國臨床生化學(xué)院（NACB）建議：n在臨床工作中運(yùn)用兩類心肌損傷標(biāo)志物：一是有胸痛發(fā)生后幾小時(shí)即增高的早期早期標(biāo)志物；二是發(fā)病后持續(xù)增高的具有高度專一性的確定確定標(biāo)志物。 早期標(biāo)志物早期標(biāo)志物（心肌損傷后6h內(nèi)血中就升高）肌紅蛋白（肌紅蛋白（MbMb）n優(yōu)點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)n出現(xiàn)早（2h），敏感性高。陰性有助于排除AMI。n血中半衰期短，觀察有無再梗死以及梗死有無擴(kuò)展。n是AMI溶栓中評價(jià)再灌注與否的較敏感準(zhǔn)確的指標(biāo)。n缺點(diǎn)缺點(diǎn)n特異性不高 早期標(biāo)志物早期標(biāo)志物（心肌

4、損傷后6h內(nèi)血中就升高）C C反應(yīng)蛋白反應(yīng)蛋白n優(yōu)點(diǎn)n早期即出現(xiàn)異常增高且“窗口期”較短，在心肌損傷的早期診斷和預(yù)后估計(jì)有較好的臨床價(jià)值。n超敏CRP對心梗有一定預(yù)報(bào)價(jià)值。n缺點(diǎn)n特異性不高 晚期標(biāo)志物晚期標(biāo)志物（發(fā)病后6-9h血中增高并持續(xù)數(shù)天，對心肌損傷的敏感性和特異性都較高）心肌肌鈣蛋白（心肌肌鈣蛋白（cTncTn）n 有cTnI和cTnT兩種亞型。因cTn靈敏度高、特異性強(qiáng)、發(fā)病后持續(xù)時(shí)間長，是目前診斷心肌損傷較好的確定標(biāo)志物。新修訂新修訂MI的診斷標(biāo)準(zhǔn)的診斷標(biāo)準(zhǔn)nESC和ACC于2000年聯(lián)合發(fā)表文件，重新修訂MI的診斷標(biāo)準(zhǔn)，最重要的是將檢測到心肌損傷標(biāo)志物（主要是cTn）的異常變化

5、作為診斷MI急性發(fā)病的必要條件。新修訂新修訂MI的診斷標(biāo)準(zhǔn)的診斷標(biāo)準(zhǔn)1.心肌損傷標(biāo)志物升高2.有劇烈而持久的胸痛史3.明確的心電圖改變 1 + 2 or 3 1 + 2 or 3 即可診斷即可診斷 膠乳增強(qiáng)免疫比濁法原理膠乳增強(qiáng)免疫比濁法原理n使用特異抗體結(jié)合于膠乳顆粒表面，標(biāo)本與膠乳試劑在緩沖液中混合，標(biāo)本中的cTnI與膠乳顆粒表面的抗體結(jié)合，使相鄰的膠乳顆粒彼此交聯(lián)，在500600 nm附近測量溶液濁度的增加，其增加的程度與標(biāo)本中的cTnI濃度相關(guān)。 膠乳增強(qiáng)免疫比濁法原理膠乳增強(qiáng)免疫比濁法原理方法學(xué)特性方法學(xué)特性 （cTnI）n該試劑靈敏度為0.3ng/ml;n線性范圍為25ng/ml;

6、n批內(nèi)及批間精密度均小于10%；n以99%單側(cè)界值1.7 ng/ml，敏感性86%，特異性99%，陽性結(jié)果預(yù)示值97.7%，臨床符合率96%。 線性范圍線性范圍n校準(zhǔn)曲線：校準(zhǔn)曲線：n采用速率法多點(diǎn)校準(zhǔn)，多參數(shù)曲線方程（如logit/log）擬合。線性范圍達(dá)25ng / ml。校準(zhǔn)曲線至少穩(wěn)定30天，測試條件變化時(shí)應(yīng)重新校準(zhǔn)，以免試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn)偏差。 線性范圍線性范圍n圖1 cTnI濃度與吸光度線性相關(guān)圖y = -0.0002 x2 + 0.0091 x + 0.0006R2 = 1.00000.000.020.040.060.080.100.120.14051015202530濃度吸光度方法學(xué)

7、特性方法學(xué)特性 （cTnI）n精密度：精密度：水平質(zhì)控1質(zhì)控2均值（ng/ml）5.316.7% CV（批內(nèi)）4.01.4% CV（批間）4.72.0方法學(xué)特性方法學(xué)特性 （cTnI）n回收實(shí)驗(yàn) 不含Tn I的血清加入已知濃度的cTn I混合，n=5, 加入的Tn I（ng/ml）實(shí)測Tn I（ng/ml）回收率（%）4410099.31032020.8104方法學(xué)特性方法學(xué)特性 （cTnI）n靈敏度靈敏度n用0.00 ng/ml校準(zhǔn)品重復(fù)測定20次，計(jì)算結(jié)果如下：n X=0.067 SD=0.019 X + 2.58 SD = 0.1ng/ml 方法學(xué)特性方法學(xué)特性 （cTnI）n穩(wěn)定性穩(wěn)定

8、性n37放置5天后，測定值變化10% 試劑有良好的穩(wěn)定性，實(shí)測效期為兩年。 4375Dd %0.46430.49436.46%方法學(xué)特性方法學(xué)特性 （cTnI）n抗凝劑及抗凝劑及VC影響影響抗凝劑抗凝劑濃度濃度測定值（測定值（x）(ng/ml)回收率回收率(%)-15.0-肝素 12.5U/ml14.395.1枸櫞酸鈉3.2mg/ml15.1100.2EDTA-K23.2ng/ml 13.2 87.6 Vc50ug/dl 15.099.8Vc 100 ug/dl 15.2101.1方法學(xué)特性方法學(xué)特性 （cTnI）n抗干擾容量：抗干擾容量：在以知濃度血清中，加入下列物質(zhì)對在以知濃度血清中，加入

9、下列物質(zhì)對cTn I的干擾的干擾 10%。n人血清白蛋白 3000 mg/dln甘油三脂 25 mg/dln -球蛋白 5000 mg/dl嚴(yán)重溶血或黃疸可造成負(fù)干擾，應(yīng)予避免。臨床評價(jià)臨床評價(jià)n預(yù)期值預(yù)期值： 149例健康成人血清標(biāo)本經(jīng)本法測定，95%單側(cè)分布為1.1 ng/ml， 99%單側(cè) 分布為1.7 ng/ml，此范圍僅供參考。 各試驗(yàn)室應(yīng)確定自己的參考值及診斷標(biāo)準(zhǔn)。 臨床評價(jià)臨床評價(jià)n不同分布下的診斷界值不同分布下的診斷界值 單側(cè)上限（單側(cè)上限（%） 臨界值臨界值 ( ng/ml)86.5 0.8095.0 1.1097.5 1.36 99.01.68 99.51.89不同診斷界值

10、的臨床診斷效率不同診斷界值的臨床診斷效率 n50例確診心梗病人和例確診心梗病人和149例對照標(biāo)本例對照標(biāo)本 臨界值臨界值( ng/ml)特異性特異性 （%）靈敏性（靈敏性（%）符合率（符合率（%） 0.8089.39691.0 1.1094.69494.5 1.3697.39095.51.6899.38696.01.8999.38696.0TNI ROC Curve80848892961000.04.08.012.016.020.01-SPCIFICITYSENSITIVITYROC 曲線曲線注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)n標(biāo)本處理標(biāo)本處理n用血清或血漿標(biāo)本（肝素抗凝），在4小時(shí)內(nèi)測定。標(biāo)本于使用前離心，4

11、000轉(zhuǎn)/分，15分鐘。28貯存的標(biāo)本應(yīng)在24小時(shí)內(nèi)測定，如標(biāo)本存放超過24小時(shí)，應(yīng)于20以下凍存，融化后必須離心，避免反復(fù)凍 融。 注意事項(xiàng)注意事項(xiàng)n標(biāo)本避免溶血及黃疸。n血清分離膠有明顯負(fù)干擾。n慎用抗凝劑。n膠乳試劑避免冰凍。方法學(xué)特性方法學(xué)特性 （Myoglobin）n試劑靈敏度為1.0 ng/ml;n線性范圍為500 ng/ml;n批內(nèi)及批間精密度小于5.6 %；n95%臨界值 為57 ng/ml時(shí)，敏感性96.1%，特異性93.0%，陽性結(jié)果預(yù)示值94.6%，臨床符合率94.7%。 Myo CurveMyo Curvey = 0.0003x - 0.0016R2 = 0.9984-

12、0.0020.0390.0790.1190.1590100200300400500方法學(xué)特性方法學(xué)特性 （Myoglobin）n校準(zhǔn)曲線校準(zhǔn)曲線方法學(xué)特性方法學(xué)特性 （Myoglobin）n精密度精密度均值18751.4CV批內(nèi)%1.834.56CV批間%2.525.38方法學(xué)特性方法學(xué)特性 （Myoglobin）n靈敏度靈敏度n用0.00 ng/ml校準(zhǔn)品重復(fù)測定20次，計(jì)算結(jié)果如下：n X=0.020 SD=0.007 X + 2.58 SD = 0.037 ng/ml回收試驗(yàn)：回收試驗(yàn)：（Myoglobin）n血清中加入已知濃度的純化Mb，20次重復(fù)試驗(yàn)，計(jì)算結(jié)果如下： 加入（ng/ml

13、）實(shí)測(ng/ml）回收率（%）500484.997250245.898125122.79862.5629931.231.5101抗干擾容量抗干擾容量 （MYO）n在以知濃度血清中，下列物質(zhì)在以知濃度血清中，下列物質(zhì)I的干擾的干擾 10%。interferent Level testedexpected recovery回收率回收率30177.0167.4959550177.0175.4999930177.0162.3929250177.0164.59393300177.0158.69090600177.0151.6868630122.9110.6909060122.9110.39090130

14、0122.9118.496961700122.9121.19999Triglycerides(mg/dl)Albumin(mg/ml)Globulins(mg/ml)Haemoglobin(mg/dl)Bilirubin(mg/dl)方法學(xué)特性方法學(xué)特性 （Myo）n穩(wěn)定性穩(wěn)定性n37放置5天后，測定值變化10% 試劑有良好的穩(wěn)定性，實(shí)測效期為兩年。 4375Dd %1091035.50%方法比較方法比較y = 0.0003x - 0.0016R2 = 0.9984y = 7E-05x - 0.0023R2 = 0.9972-0.0020.0390.0790.1190.159010020030

15、0400500600CZ.KitDiasys Kit線性 ( CZ.Kit)線性 ( Diasys Kit)校準(zhǔn)曲線比較校準(zhǔn)曲線比較Mb兩種方法比較y = 0.9833x - 10.508R2 = 0.99430100200300400500050100150200250300350400450500DiasysCZ兩法相關(guān)性兩法相關(guān)性臨床評價(jià)臨床評價(jià)n預(yù)期值預(yù)期值： 100例非相關(guān)人血清標(biāo)本經(jīng)本法測定，95%單側(cè)分布為57 ng/ml， 99%單側(cè) 分布為79 ng/ml，此范圍僅供參考。 各試驗(yàn)室應(yīng)確定自己的參考值及診斷標(biāo)準(zhǔn)。 臨床評價(jià)臨床評價(jià)n不同分布下的診斷界值不同分布下的診斷界值 單

16、側(cè)上限（單側(cè)上限（%）界值界值 ( ng/ml)88.9 50.095.0 57.097.5 62.6 99.070.0 99.575.6不同診斷界值的臨床診斷效率不同診斷界值的臨床診斷效率 n127例已確診心梗病人和例已確診心梗病人和100例對照標(biāo)本例對照標(biāo)本 界值界值( ng/ml)特異性特異性 （%） 靈敏性（靈敏性（%） 符合率（符合率（%）50.0 88.0 97.6 93.457.0 93.096.1 94.762.6 95.0 93.7 94.370.0 98.0 91.3 94.375.6 98.0 87.4 92.1ROC 曲線曲線Mb ROC 380.082.084.086.088.090.092.094.096.098.0100.00.04.08.012.016.020.01-SPCIFICITYSENSITIVITY允許的生物學(xué)變異允許的生物學(xué)變異n肌紅蛋白： 5.6%nCK-MB質(zhì)量： 9.3%ncTn： 10%標(biāo)準(zhǔn)化問題標(biāo)準(zhǔn)化問題肌紅蛋白、CK-