鹽酸二甲雙胍腸溶片上市后人體生物等效性再評(píng)價(jià)_張丹

1、基金項(xiàng)目:衛(wèi)生部公益性行業(yè)科研專項(xiàng)(200902008作者簡(jiǎn)介:張丹,女,工程師研究方向:藥物分析和藥代動(dòng)力學(xué)研究*通訊作者:劉會(huì)臣,男,博士,主任藥師研究方向:臨床藥理學(xué)及藥代動(dòng)力學(xué)Tel :(01059971772鹽酸二甲雙胍腸溶片上市后人體生物等效性再評(píng)價(jià)張丹,楊漫,韓靜,王曉琳,張麗娜,張婭喃,肖雪,杜愛(ài)華,劉曼,王振龍,王濤,劉會(huì)臣*(航天中心醫(yī)院臨床藥理室,北京100049摘要:目的對(duì)已上市的鹽酸二甲雙胍腸溶片的人體生物等效性進(jìn)行再評(píng)價(jià)。方法采用轉(zhuǎn)籃法和紫外分光光度法考察4個(gè)廠家(A 、B 、C 、D 的鹽酸二甲雙胍腸溶片的體外釋放度,選擇其中2個(gè)廠家的鹽酸二甲雙胍腸溶片作為受試制

2、劑(受試制劑1和受試制劑2,以原研藥鹽酸二甲雙胍片(格華止為參比制劑。21名健康男性受試者隨機(jī)分組,于3個(gè)周期交叉服用受試制劑1、受試制劑2和參比制劑500mg ,采用LC-MS /MS 測(cè)定血漿樣本中二甲雙胍的濃度,計(jì)算藥動(dòng)學(xué)參數(shù)及2種受試制劑相對(duì)于參比制劑的平均相對(duì)生物利用度,采用(1-2置信區(qū)間法評(píng)價(jià)2種受試制劑與參比制劑的生物等效性,以及2種受試制劑之間的生物等效性。結(jié)果除A 廠家的鹽酸二甲雙胍腸溶片在酸中釋放度不符合2010年版中國(guó)藥典增補(bǔ)本擬新增品種公示中的規(guī)定外,確保不同廠家、同一廠家不同批次的藥品質(zhì)量的一致性。關(guān)鍵詞:鹽酸二甲雙胍;腸溶片;體外釋放度;生物等效性;上市后再評(píng)價(jià);

3、生物不等效風(fēng)險(xiǎn)中圖分類號(hào):R969文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A文章編號(hào):10012494(201219156505Post-Marketing Reevaluation of Bioequivalence of Metformin Hydrochloride Enteric-Coated Tablets ZHANG Dan ,YANG Man ,HAN Jing ,WANG Xiao-lin ,ZHANG Li-na ,ZHANG Ya-nan ,XIAO Xue ,DU Ai-hua ,LIU Man ,WANG Zhen-long ,WANG Tao ,LIU Hui-chen *(Department

4、 of Clinical Pharmacology ,Aerospace Center Hospital ,Beijing 100049,China ABSTRACT :OBJECTIVETo reevaluate the bioequivalence of marked metformin hydrochloride enteric-coated tablets.METHODSUsing method 2described in the appendix X D and apparatus 1described in the appendix X C in Chinese Pharmacop

5、oeia (edition 2010,the in vitro release of metformin hydrochloride enteric-coated tablets from different pharmaceutical factories (A ,B ,C ,and D was investi-gated.The contents were measured by utlraviolet (UV spectroscopy.Generic tablets from factory A and D were chosen to be test 1and test 2prepar

6、ations ,with the innovative metformin hydrochloride tablets (Glucophage as the reference preparation.In a randomized ,three-way crossover study ,21healthy male volunteers were given a single oral dose of test 1,test 2and reference preparations containing 500mg of metformin hydrochloride.Plasma conce

7、ntrations of metformin were determined by LC-MS /MS.The pharmacokinetic parameters and relative bioavailability were calculated.The bioequivalence between test 1and reference preparation ,test 2and reference preparation ,and the bioequivalence between the two test preparations were evaluated.RESULTS

8、The in vitro release of metformin hydrochloride en-teric-coated tablets from factory B ,C and D met the standard of Chinese Pharmacopoeia (the supplement edition of 2010while that of the tablets from factory A did not.Metformin hydrochloride enteric-coated tablets from factory A and D were chosen to

9、 be test 1and test 2preparations ,KEY WORDS:metformin hydrochloride;enteric-coated tablet;in vitro release;bioequivalence;post-marketing reevaluation; bioinequivalence risk二甲雙胍(metformin可增強(qiáng)機(jī)體對(duì)胰島素的敏感性,加強(qiáng)外周組織對(duì)葡萄糖的攝取,抑制肝臟糖異生,減少肝葡萄糖輸出,減少腸道葡萄糖吸收1-2。目前國(guó)內(nèi)已上市的鹽酸二甲雙胍口服制劑有多種,包括鹽酸二甲雙胍片、鹽酸二甲雙胍腸溶片、鹽酸二甲雙胍緩釋片、鹽酸二甲

10、雙胍腸溶膠囊等,其中原研藥為中美上海施貴寶有限公司的鹽酸二甲雙胍片(格華止。由于鹽酸二甲雙胍常見(jiàn)的不良反應(yīng)為胃腸道不適,臨床使用鹽酸二甲雙胍片時(shí)一般于餐中或餐后即刻服用可減輕其胃腸道不適。為減輕鹽酸二甲雙胍片的胃腸道不適,國(guó)內(nèi)多家企業(yè)研發(fā)了鹽酸二甲雙胍腸溶片或膠囊,理論上腸溶制劑可減輕二甲雙胍的胃腸道不適,但目前尚無(wú)相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。我國(guó)部分仿制藥在臨床前研究、臨床試驗(yàn)、生產(chǎn)等諸多方面存在著若干問(wèn)題,容易出現(xiàn)“國(guó)產(chǎn)藥不如進(jìn)口藥”、“一個(gè)廠家的藥品不如另一個(gè)廠家的藥品”、“同一廠家不同批次藥品不一致”等問(wèn)題,嚴(yán)重影響用藥療效與安全。因此,有必要進(jìn)行仿制藥上市后質(zhì)量的一致性評(píng)價(jià),生物等效性監(jiān)測(cè)與再評(píng)價(jià)

11、對(duì)保證仿制藥的臨床效果具有重要、甚至不可或缺的作用3。鹽酸二甲雙胍腸溶片是目前國(guó)內(nèi)臨床常用的降糖藥,本實(shí)驗(yàn)考察了國(guó)內(nèi)4個(gè)廠家的鹽酸二甲雙胍腸溶片的體外釋放度,并選擇其中2個(gè)廠家的鹽酸二甲雙胍腸溶片作為受試制劑,以原研藥鹽酸二甲雙胍片(格華止為參比制劑,考察2種國(guó)產(chǎn)鹽酸二甲雙胍腸溶片與原研藥鹽酸二甲雙胍片(格華止的生物等效性,以及2種國(guó)產(chǎn)鹽酸二甲雙胍腸溶片間的生物等效性。1材料與方法1.1藥品與試劑鹽酸二甲雙胍腸溶片(規(guī)格:均為每片025g;來(lái)源:A廠,含量:101.2%,批號(hào):20110904,有效期:2014年8月;來(lái)源:B廠,含量:99.4%,批號(hào):20110864,有效期:2014年7月

12、;來(lái)源:C廠,含量:102.4%,批號(hào):20111002,有效期:2013年3月;來(lái)源:D廠,含量:99.2%,批號(hào):100602,有效期:2013年5月;鹽酸二甲雙胍片(商品名:格華止,規(guī)格:每片0.5g,含量:100%,來(lái)源:中美上海施貴寶有限公司,批號(hào):1111076,有效期:2013年10月。鹽酸二甲雙胍對(duì)照品(以C4H11N5·HCl計(jì)純度為100%,中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào):100664-200602;米曲肼(內(nèi)標(biāo),純度為98.5%,北京新領(lǐng)先醫(yī)藥科技發(fā)展有限公司。甲醇與甲酸為色譜純;水(超純水,由蒸餾水經(jīng)KLZ艾柯純水機(jī)純化后制得;其他試劑均為分析純?？瞻兹搜獫{由航

13、天中心醫(yī)院提供或來(lái)自于健康受試者。1.2儀器UV160A紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)(日本Shimad-zu公司;ZRS8G智能溶出實(shí)驗(yàn)儀(天津市天大天發(fā)科技有限公司;AP250D電子天平(美國(guó)OHAUS公司;API3200型三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀配有電件,美國(guó)Applied Biosystems公司;Prominence20A液相色譜儀(包括LC20AD型二元泵,DGU20A3型脫氣機(jī),SIL20A型自動(dòng)進(jìn)樣器,CTO20A型柱溫箱,CBM20A系統(tǒng)控制器,日本Shi-madzu公司;QB600型高速振蕩混合器(海門(mén)市其林貝爾儀器制造有限公司;Sigma318K臺(tái)式高速離心機(jī)(德國(guó)Sartorius S

14、tedim Biotech公司。1.3體外釋放度考察按照2010年版中國(guó)藥典增補(bǔ)本擬新增品種公示的相關(guān)要求4,采用轉(zhuǎn)籃法,以0.1mol·L1鹽酸溶液為釋放介質(zhì),經(jīng)2h時(shí)取溶液的續(xù)濾液為供試液(1;棄去鹽酸溶液,以磷酸鹽緩沖液(pH6.8為釋放介質(zhì),分別于5、10、20、30、45min時(shí)取溶液的續(xù)濾液為供試液(2。再分別以相應(yīng)的鹽酸二甲雙胍對(duì)照品溶液,采用紫外分光光度法測(cè)定各供試液中鹽酸二甲雙胍的含量,計(jì)算不同廠家鹽酸二甲雙胍腸溶片的酸中釋放度和緩沖液中釋放度。1.4受試者選擇21名中國(guó)健康男性受試者,年齡(233歲,體(221kg·m2。試驗(yàn)前進(jìn)行病史詢問(wèn)和體格檢查,血

15、常規(guī)、尿常規(guī)、肝腎功能、血糖及心電圖檢查等均正常。無(wú)既往病史、藥物過(guò)敏史和藥物依賴史,精神狀態(tài)良好,試驗(yàn)前2周及試驗(yàn)期間未服用任何藥物,試驗(yàn)前1周及試驗(yàn)期間禁煙酒或含咖啡因的飲料,試驗(yàn)期間統(tǒng)一飲食。試驗(yàn)方案經(jīng)航天中心醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。受試者在了解試驗(yàn)?zāi)康?、方法、意義以及可能發(fā)生的不良反應(yīng)后,均簽署知情同意書(shū)。1.5給藥方案及血樣采集本試驗(yàn)采用隨機(jī)、開(kāi)放、3制劑、3周期自身交叉試驗(yàn)設(shè)計(jì)。選擇2個(gè)廠家的鹽酸二甲雙胍腸溶片作為受試制劑(受試制劑1和受試制劑2,選擇原研藥鹽酸二甲雙胍片(格華止作為參比制劑。21名受試者隨機(jī)分為3組,于3個(gè)周期交叉服用受試制劑1、受試制劑2或參比制劑,清洗期為3d

16、。受試者隔夜禁食,于用藥前禁水2h后,空腹口服受試制劑1、受試制劑2或參比制劑,劑量均為500mg,用10%葡萄糖溶液240mL送服,并于用藥后1、2、3h分別飲用10%葡萄糖溶液100mL。用藥后2h內(nèi)保持上身直立狀態(tài),用藥后4h統(tǒng)一進(jìn)低脂清淡飲食。于受試者用藥前(0h和用藥后0.25,0.5,1,1.5,2,2.5,3,3.5,4,4.5,5,6,8,12, 16,24h于上肢靜脈取血約2mL置于肝素化試管中,2500r·min1離心5min,取血漿,立即置于80冰箱中保存?zhèn)錅y(cè)。1.6血藥濃度測(cè)定采用本室已報(bào)道的LC-MS/MS5,測(cè)定21名受試者空腹口服受試制劑1、受試制劑2和

17、參比制劑500mg后不同時(shí)間血漿中二甲雙胍的濃度。精密取血漿樣本50L置于1.5mL EP管中,加入內(nèi)標(biāo)米曲肼溶液(20.0g·mL110L、乙腈沉淀劑190L,渦流1min,10000r·min1離心10min,將全部上清液(230L轉(zhuǎn)移至另一潔凈1.5mL EP 管中,加入醋酸溶液(1mol·L150L,渦流1min 后,取100L于進(jìn)樣瓶中進(jìn)行LC-MS/MS分析。人血漿樣本以乙腈沉淀蛋白后,選用Zorbax SB-C18 Narrow-Bore色譜柱(2.1mm150mm,5m,以甲醇-10mmol·L1乙酸銨(含1%甲酸(595為流動(dòng)相,流速為

18、0.3mL·min1;選用API3200型三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀的多重反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM掃描方式進(jìn)行監(jiān)測(cè),電噴霧離子化源,正離子方式,選擇監(jiān)測(cè)離子反應(yīng)分別為m/z130.1m/z71.0(二甲雙胍和m/z147.1m/z58.2(內(nèi)標(biāo)米曲肼。為確保未知樣本測(cè)定的結(jié)果準(zhǔn)確可靠,在測(cè)定過(guò)程中進(jìn)行質(zhì)量控制,每個(gè)分析批隨行測(cè)定均勻分布的質(zhì)控樣本。1.7藥動(dòng)學(xué)參數(shù)計(jì)算和生物等效性分析0-t、AUC0-和max經(jīng)對(duì)數(shù)轉(zhuǎn)換后進(jìn)行方差分析和(1-2置信區(qū)間分析,評(píng)價(jià)2種受試制劑與參比制劑的生物等效性,以及2種受試制劑之間的生物等效性;生物等效標(biāo)準(zhǔn)為受試制劑與參比制劑的AUC0-t、AUC0-和max幾何

19、均值比的90%置信區(qū)間分別落在80% 125%、80% 125%和75%133%之內(nèi)。tmax采用配對(duì)Wilcoxon法檢驗(yàn),但不作為判斷生物等效性的重要指標(biāo)。2結(jié)果2.1鹽酸二甲雙胍腸溶片體外釋放度國(guó)內(nèi)4個(gè)廠家(A、B、C、D的鹽酸二甲雙胍腸溶片體外釋放度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。其中,緩沖液中累積釋放度-時(shí)間曲線見(jiàn)圖1。除A廠鹽酸二甲雙胍腸溶片的酸中釋放度不符合2010年版中國(guó)藥典增補(bǔ)本擬新增品種公示中的規(guī)定外,其他3個(gè)廠家均符合規(guī)定,且4個(gè)廠家鹽酸二甲雙胍腸溶片的緩沖液中釋放度均符合規(guī)定。選擇A和D廠家的鹽酸二甲雙胍腸溶片作為受試制劑1和受試制劑2。表1國(guó)內(nèi)4個(gè)廠家(A、B、C、D的鹽酸二甲雙胍腸

20、溶片的體外釋放度.n=6,珋xsTab.1In vitro release rate of metformin hydrochloride enteric-coated tablets from different pharmaceutical factories(A,B,C, and D.n=6,珋xsFactoryRelease rate in0.1mol·L1hydrochloric acid solution/%Release rate in phosphate buffer 46圖1國(guó)內(nèi)4個(gè)廠家(A、B、C、D的鹽酸二甲雙胍腸溶片在緩沖液中的平均累積釋放度-時(shí)間曲線.n=6

21、,珋xsFig.1Mean cumulative release rate-time profiles in phosphate buffer(pH6.8of metformin hydrochloride enteric-coated tab-lets from different pharmaceutical factories(A,B,C,and D. n=6,珋xs2.2血藥濃度-時(shí)間曲線及藥動(dòng)學(xué)參數(shù)21名受試者口服受試制劑1、受試制劑2和參比制劑500mg 后的平均血藥濃度-時(shí)間曲線見(jiàn)圖2,主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)見(jiàn)表2。2.3生物等效性分析受試制劑1相對(duì)于參比制劑的平均相對(duì)生物利幾何均數(shù)比值

22、為81.5%,90%置信區(qū)間為71.6% 92.8%,沒(méi)有落在75% 133%內(nèi),并且其下限低于75%。受試制劑1和參比制劑間t max 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此,不能判定受試制劑1和參比制劑不具有生物等效性,受試制劑1的相對(duì)生物利用度低 。圖2受試者口服受試制劑1、受試制劑2和參比制劑500mg 后二甲雙胍的平均血藥濃度-時(shí)間曲線.n =21,珋x s Fig.2Mean plasma concentration-time profiles of metforminafter a single oral dose of test 1,test 2,and reference prepara-t

23、ions containing 500mg metformin hydrochloride in healthy vol-unteers.n =21,珋x s 表2受試者口服受試制劑1、受試制劑2和參比制劑500mg 后二甲雙胍的主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù).n =21,珋x s Tab.2Pharmacokinetic parameters of metformin after a singleoral dose of test 1,test 2,and reference preparations containing500mg metformin hydrochloride in healthy vo

24、lunteers.n =21,珋x s ParameterTest 1Test 2Reference max /g ·mL 11受試制劑2相對(duì)于參比制劑的平均相對(duì)生物參比制劑的AUC 0-t 、AUC 0-幾何均數(shù)比值分別為42.7%、43.5%,90%置信區(qū)間分別為38.1% 47.8%、39.0% 48.5%,完全超出80%125%;受試制劑1和參比制劑的max 幾何均數(shù)比值為45.4%,90%置信區(qū)間為39.9% 51.7%,完全超出75% 133%的范圍。受試制劑2和參比制劑間t max 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此,判定受試制劑2與參比制劑不具有生物等效性,受試制劑2的相對(duì)生物利

25、用度低。比值為179.5%,90%置信區(qū)間為157.7% 204.4%,完全超出75% 133%。受試制劑1和受試制劑2間t max 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。因此,判定2種受試制劑之間不具有生物等效性,受試制劑1的相對(duì)生物利用度較高。2.4安全性分析21名入組受試者均完成試驗(yàn)。共5人發(fā)生6次不良事件,包括惡心、皮炎、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶升高、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶升高、白細(xì)胞減少,除惡心判斷為與試驗(yàn)用藥“可能有關(guān)”,即不良反應(yīng)外,其他均判斷為與試驗(yàn)用藥“可能無(wú)關(guān)”。上述不良事件均為輕度,未經(jīng)處理,隨訪至結(jié)果正常。3討論由于鹽酸二甲雙胍片和鹽酸二甲雙胍腸溶片在臨床上用量相同,且鹽酸二甲雙胍的吸收基本不受或很少

26、受食物的影響6-10。因此,本研究選擇以原研藥鹽酸二甲雙胍片(格華止為參比制劑。研究結(jié)果表明,A 、D 廠家的鹽酸二甲雙胍腸溶片的生物利用度均比原研藥的生物利用度低,且A 廠腸溶片的生物利用度明顯高于D 廠。然而A 廠腸溶片在酸中釋放度卻明顯高于D 廠腸溶片,超出了藥典規(guī)定的合格標(biāo)準(zhǔn),其在緩沖液中釋放度也明顯低于D 廠腸溶片,表明鹽酸二甲雙胍腸溶片的體外釋放度評(píng)價(jià)結(jié)果不能反映其體內(nèi)生物利用度和生物等效性評(píng)價(jià)結(jié)果。根據(jù)生物藥劑學(xué)分類系統(tǒng)(biopharmaceutics classification system,BCS分類,鹽酸二甲雙胍是BCS分類的藥物,具有高溶解性、低膜通透性、吸收受膜通透

27、性限制的特點(diǎn)11;口服鹽酸二甲雙胍溶液和鹽酸二甲雙胍片后其在胃腸道的吸收并不完全,主要在小腸吸收,胃和大腸對(duì)其吸收甚微,用藥后6 10h時(shí)吸收近乎停止,平均絕對(duì)生物利用度約55%10。鹽酸二甲雙胍片若能快速溶出(15min 內(nèi)溶出超過(guò)85%,可以獲得生物豁免,以體外溶出度測(cè)定代替體內(nèi)生物等效性研究12。但若口服鹽酸二甲雙胍腸溶片后,藥片進(jìn)入小腸方開(kāi)始釋放,15 min內(nèi)平均累積釋放度僅約40%,小腸中吸收程度可能降低,且容易受到其他因素的影響。從理論上分析,鹽酸二甲雙胍腸溶片容易出現(xiàn)生物不等效的情況。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也證實(shí)有的已上市鹽酸二甲雙胍腸溶片的相對(duì)生物利用度偏低,其制劑方面的因素有待深入研究

28、。因此,我們認(rèn)為鹽酸二甲雙胍腸溶片是生物不等效風(fēng)險(xiǎn)高的藥品。通過(guò)本實(shí)驗(yàn),建議加強(qiáng)對(duì)口服藥品生物不等效風(fēng)險(xiǎn)的重視,對(duì)臨床用量大的重點(diǎn)口服藥品進(jìn)行生物不等效風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估與分級(jí),針對(duì)鹽酸二甲雙胍腸溶片等生物不等效風(fēng)險(xiǎn)高的口服藥品,不能僅進(jìn)行體外溶出度或釋放度評(píng)價(jià),應(yīng)進(jìn)行上市后人體生物等效性監(jiān)測(cè)與再評(píng)價(jià),才能確保上市后藥品質(zhì)量的一致性。REFERENCES1BAILEY C J,TURNER R CMetfor minJN Engl J Med,1996,334(9:574-5792KIRPICHNIKOV D,MCFARLANE S I,SOWERS J RMetformin:An updateJAnn

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