血紅蛋白的分離

1、血血每個肽鏈環(huán)繞一個亞鐵血紅素基團，每個肽鏈環(huán)繞一個亞鐵血紅素基團，此基團可攜帶一分子氧或一分子二此基團可攜帶一分子氧或一分子二氧化碳，血紅蛋白因含有血紅素而氧化碳，血紅蛋白因含有血紅素而呈紅色。呈紅色。一、基礎(chǔ)知識一、基礎(chǔ)知識 凝膠色譜法（分配色譜法）凝膠色譜法（分配色譜法）1 1、凝膠：、凝膠：一些微小多孔的球體（內(nèi)含許多貫穿的通一些微小多孔的球體（內(nèi)含許多貫穿的通道，由多糖類構(gòu)成如葡聚糖、瓊脂糖）道，由多糖類構(gòu)成如葡聚糖、瓊脂糖）2 2、概念：、概念：根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有根據(jù)相對分子質(zhì)量的大小分離蛋白質(zhì)的有效方法效方法3 3、原理：、原理： 用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時，分子

2、量用凝膠色譜法分離蛋白質(zhì)時，分子量大的蛋白質(zhì)大的蛋白質(zhì) A A路程較長，移動速度較慢路程較長，移動速度較慢 B B路程較長，移動速度較快路程較長，移動速度較快 C C路程較短，移動速度較慢路程較短，移動速度較慢 D D路程較短，移動速度較快路程較短，移動速度較快D 相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中相對分子質(zhì)量不同的蛋白質(zhì)在凝膠中的進行過程可表示為圖中哪一個的進行過程可表示為圖中哪一個B緩沖溶液：緩沖溶液：能夠抵制（能夠抵制（ ） 對溶對溶液的（液的（ ）的影響，維持）的影響，維持PH PH 基本基本不變。不變。外界的酸或堿外界的酸或堿PHPH值值使用使用SDS-SDS-聚丙烯酰胺電泳過程中，不

3、同蛋聚丙烯酰胺電泳過程中，不同蛋白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于白質(zhì)的電泳遷移率完全取決于A A 電荷的多少電荷的多少 B B 分子的大小分子的大小C C 肽鏈的多少肽鏈的多少 D D 分子形狀的差異分子形狀的差異分離血紅蛋白溶液分離血紅蛋白溶液有機溶劑有機溶劑 （無色透明的甲苯層）（無色透明的甲苯層）脂類物質(zhì)脂類物質(zhì) （白色白色脂溶性物質(zhì)沉淀層）脂溶性物質(zhì)沉淀層）血紅蛋白溶液血紅蛋白溶液 （紅色透明液體）（紅色透明液體）紅細胞破碎物沉（暗紅色沉淀物）紅細胞破碎物沉（暗紅色沉淀物） 下列操作正確的是（下列操作正確的是（ ） A. A. 分離紅細胞時采用低速長時間離心分離紅細胞時采用低速長時間離心 B

4、. B. 紅細胞釋放出血紅蛋白只需要加入蒸紅細胞釋放出血紅蛋白只需要加入蒸餾水就可餾水就可 C. C. 分離血紅蛋白溶液是低速短時間離心分離血紅蛋白溶液是低速短時間離心 D. D. 透析時要用透析時要用20mmol/l20mmol/l的磷酸緩沖液，的磷酸緩沖液，透析透析12h12hD在蛋白質(zhì)的提取和分離中，關(guān)于對樣品處理過程在蛋白質(zhì)的提取和分離中，關(guān)于對樣品處理過程中，分析無誤的是中，分析無誤的是A A洗滌紅細胞的目的是去除血漿中的葡萄糖、無洗滌紅細胞的目的是去除血漿中的葡萄糖、無機鹽機鹽B B洗滌時離心速度過小，時間過短，白細胞等會洗滌時離心速度過小，時間過短，白細胞等會沉淀，達不到分離的效

5、果沉淀，達不到分離的效果C C洗滌過程選用洗滌過程選用0.1%0.1%的生理鹽水的生理鹽水D D透析的目的是去除樣品中相對分子質(zhì)量較小的透析的目的是去除樣品中相對分子質(zhì)量較小的雜質(zhì)雜質(zhì)D注意事項：注意事項：底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮底塞中插入的玻璃管的上部不得超出橡皮塞的凹穴底面，否則難以鋪實尼龍網(wǎng)，還會導致液體塞的凹穴底面，否則難以鋪實尼龍網(wǎng)，還會導致液體殘留，蛋白質(zhì)分離不徹底。殘留，蛋白質(zhì)分離不徹底。二、實驗操作二、實驗操作 蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步：蛋白質(zhì)的提取和分離一般分為四步： （1 1）樣品處理：樣品處理：包括洗滌紅細胞；血紅包括洗滌紅細胞；血紅蛋白釋放；離心等操作收集到的血紅蛋蛋白釋放；離心等操作收集到的血紅蛋白溶液。白溶液。 （2 2）粗分離：粗分離：透析除去分子較小的雜質(zhì)。透析除去分子較小的雜質(zhì)。 （3 3）純化：純化：通過凝膠色譜法將分子量較通過凝膠色譜法將分子量較大的雜質(zhì)蛋白質(zhì)除去。大的雜質(zhì)蛋白質(zhì)除去。 （4 4）純度鑒定：純度鑒定：通過聚丙烯酰胺凝膠電通過聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定。泳鑒定。3.3.下列是有關(guān)血紅蛋白提取和分離的相關(guān)下列是有關(guān)血紅蛋白提取和分離的相關(guān)操作，其中正確的是（操作，其中正確的是（ ）A A可采集豬血作為實驗材料可采集豬血作為實驗材料 B B用蒸餾水