第六章 化學物質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用

1、第六章第六章 化學物質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用化學物質(zhì)與蛋白質(zhì)的相互作用 在生物體內(nèi)，蛋白質(zhì)（包括酶）占細胞干重的在生物體內(nèi)，蛋白質(zhì)（包括酶）占細胞干重的70%70%以上，以上，種類繁多，在生命活動過程中起著發(fā)揮各種各樣的作種類繁多，在生命活動過程中起著發(fā)揮各種各樣的作用。隨著人們對環(huán)境保護和生活質(zhì)量要求的提高，蛋用。隨著人們對環(huán)境保護和生活質(zhì)量要求的提高，蛋白質(zhì)在食品、醫(yī)藥（生化藥物、臨床檢驗、藥物篩選白質(zhì)在食品、醫(yī)藥（生化藥物、臨床檢驗、藥物篩選等）、環(huán)保（環(huán)境分析）、農(nóng)業(yè)、日用化工（化妝等）、環(huán)保（環(huán)境分析）、農(nóng)業(yè)、日用化工（化妝品）、精細化工（酶催化合成）等領(lǐng)域的應用日益廣品）、精細化工（酶

2、催化合成）等領(lǐng)域的應用日益廣泛。泛。在蛋白質(zhì)體外的應用中，一般涉及到在蛋白質(zhì)體外的應用中，一般涉及到分離純化、儲存、分離純化、儲存、含量檢測含量檢測等過程等過程，其中常常發(fā)生化學物質(zhì)與蛋白質(zhì)非，其中常常發(fā)生化學物質(zhì)與蛋白質(zhì)非專一性的相互作用，如沉淀作用、變性作用、穩(wěn)定作專一性的相互作用，如沉淀作用、變性作用、穩(wěn)定作用以及化學修飾作用等。用以及化學修飾作用等。 球狀蛋白三級結(jié)構(gòu)的主要特征球狀蛋白三級結(jié)構(gòu)的主要特征絕大多致的蛋白質(zhì)折疊成為近乎球狀的結(jié)構(gòu)。球狀蛋白質(zhì)一旦具有絕大多致的蛋白質(zhì)折疊成為近乎球狀的結(jié)構(gòu)。球狀蛋白質(zhì)一旦具有三級結(jié)構(gòu)后，蛋白質(zhì)內(nèi)部變得更為緊密，內(nèi)部的空間約有三級結(jié)構(gòu)后，蛋白質(zhì)內(nèi)

3、部變得更為緊密，內(nèi)部的空間約有7575被原被原子所充滿。這樣的密集程度遠遠超過在液體中的小分子，可以與一子所充滿。這樣的密集程度遠遠超過在液體中的小分子，可以與一些晶體的情況相比。些晶體的情況相比?？梢哉J為蛋白質(zhì)是帶有極性外套的油滴，也就是可以認為蛋白質(zhì)是帶有極性外套的油滴，也就是“非極性在內(nèi)，極非極性在內(nèi)，極性在外性在外”。大量蛋白質(zhì)的。大量蛋白質(zhì)的X X射線晶體衍射分析統(tǒng)計的結(jié)果充分證明射線晶體衍射分析統(tǒng)計的結(jié)果充分證明了這一規(guī)律。了這一規(guī)律。存在于蛋白質(zhì)內(nèi)部主要是一些非極性殘基的側(cè)鏈存在于蛋白質(zhì)內(nèi)部主要是一些非極性殘基的側(cè)鏈，約有，約有6363是丙氨是丙氨酸、甘氨酸、異亮氨酸、有氨酸、纈

4、氨酸和苯丙氨酸等；酸、甘氨酸、異亮氨酸、有氨酸、纈氨酸和苯丙氨酸等；帶電的殘帶電的殘基基，天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸和精氨酸只有，天冬氨酸、谷氨酸、賴氨酸和精氨酸只有4 4。約約9595的帶電的帶電的側(cè)鏈是分布在蛋白質(zhì)的表面的側(cè)鏈是分布在蛋白質(zhì)的表面；約；約1414的亮氨酸、異亮氨酸、纈氨的亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸和苯丙氨酸在蛋白質(zhì)分子表面。酸和苯丙氨酸在蛋白質(zhì)分子表面。在蛋白質(zhì)的內(nèi)部也存在極少量的親水殘基，在蛋白質(zhì)分子的表面也常在蛋白質(zhì)的內(nèi)部也存在極少量的親水殘基，在蛋白質(zhì)分子的表面也常見到一些疏水的殘基。這些見到一些疏水的殘基。這些“異常異?！狈植嫉臍埢率闺逆湹木植拷Y(jié)分布的殘基，致使肽鏈

5、的局部結(jié)構(gòu)發(fā)生構(gòu)發(fā)生“扭曲扭曲”，一些鍵的張角與一般正常的值有所偏離，蛋白質(zhì)中，一些鍵的張角與一般正常的值有所偏離，蛋白質(zhì)中這些局部的構(gòu)象具有相對偏高的能量，相對地處于較不穩(wěn)定的狀態(tài)，這些局部的構(gòu)象具有相對偏高的能量，相對地處于較不穩(wěn)定的狀態(tài)，在外界很小的擾動作用下，就能發(fā)生變化。在外界很小的擾動作用下，就能發(fā)生變化。原則上，一些相對規(guī)則的原則上，一些相對規(guī)則的 - -螺旋和螺旋和 - -折疊分布在球狀蛋白的內(nèi)部，而折疊分布在球狀蛋白的內(nèi)部，而且壓積得很緊密，致使球狀蛋白成為致密的結(jié)構(gòu)；那些連接且壓積得很緊密，致使球狀蛋白成為致密的結(jié)構(gòu)；那些連接 - -螺旋和螺旋和 - -折疊疊的規(guī)整性相對差

6、一些的二級結(jié)構(gòu)，轉(zhuǎn)角和環(huán)狀以及特定的折疊疊的規(guī)整性相對差一些的二級結(jié)構(gòu)，轉(zhuǎn)角和環(huán)狀以及特定的“無規(guī)無規(guī)”卷曲，則更多地是分布在球狀蛋白的外周。卷曲，則更多地是分布在球狀蛋白的外周。還值得指出的是，在很多蛋白質(zhì)分子的內(nèi)部還存在著數(shù)量不同的水分還值得指出的是，在很多蛋白質(zhì)分子的內(nèi)部還存在著數(shù)量不同的水分子，這些水分子也和一些極性的基因或負電性的原子形成氫鍵。其中子，這些水分子也和一些極性的基因或負電性的原子形成氫鍵。其中一些水分子也參與了蛋白質(zhì)功能的行使。一些水分子也參與了蛋白質(zhì)功能的行使。球狀蛋白的表面并不是非常光滑的，而是具有很多溝渠，多數(shù)球狀蛋球狀蛋白的表面并不是非常光滑的，而是具有很多溝渠

7、，多數(shù)球狀蛋白的可及表面的面積約為同樣大小的球的表面積的兩倍。白的可及表面的面積約為同樣大小的球的表面積的兩倍。 球狀蛋白質(zhì)分子的立體結(jié)構(gòu)具右高度特異性和高度靈球狀蛋白質(zhì)分子的立體結(jié)構(gòu)具右高度特異性和高度靈敏性。每種蛋白質(zhì)分子都有特定的高級結(jié)構(gòu)。這種構(gòu)敏性。每種蛋白質(zhì)分子都有特定的高級結(jié)構(gòu)。這種構(gòu)象的特異性，使它區(qū)別于其他蛋白質(zhì)；但這種高度特象的特異性，使它區(qū)別于其他蛋白質(zhì)；但這種高度特異的結(jié)構(gòu)，并非固定不變，在執(zhí)行生物學功能時，常異的結(jié)構(gòu)，并非固定不變，在執(zhí)行生物學功能時，常常發(fā)生一系列的構(gòu)象變化，表現(xiàn)出高度靈敏性。常發(fā)生一系列的構(gòu)象變化，表現(xiàn)出高度靈敏性。在生物體內(nèi)，這些構(gòu)象變化，往往是該

8、蛋白質(zhì)分子與在生物體內(nèi)，這些構(gòu)象變化，往往是該蛋白質(zhì)分子與配基相互作用引起的，配基包括酶的小分子底物、受配基相互作用引起的，配基包括酶的小分子底物、受體的小分子激素和神經(jīng)介質(zhì)、血紅蛋白的體的小分子激素和神經(jīng)介質(zhì)、血紅蛋白的O O2 2等。因此，等。因此，生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)是處于一種可以相互轉(zhuǎn)變的多種構(gòu)生物體內(nèi)的蛋白質(zhì)是處于一種可以相互轉(zhuǎn)變的多種構(gòu)象的平衡態(tài)象的平衡態(tài). .球狀蛋白質(zhì)分子表面并不是光滑的，經(jīng)常會出現(xiàn)一些球狀蛋白質(zhì)分子表面并不是光滑的，經(jīng)常會出現(xiàn)一些“裂隙裂隙”或或“洞穴洞穴”，在，在“裂隙裂隙”或或“洞穴洞穴的周的周圍常常是疏水性的：這些圍常常是疏水性的：這些“裂隙裂隙”或或“洞穴

9、洞穴”可能是可能是蛋白質(zhì)蛋白質(zhì)( (酶酶) )的活性部位所在。的活性部位所在。硫氧還蛋白的結(jié)構(gòu)硫氧還蛋白的結(jié)構(gòu)緊密結(jié)合水緊密結(jié)合水親水性殘基親水性殘基疏水性殘基疏水性殘基第一節(jié)第一節(jié) 化學物質(zhì)對蛋白質(zhì)的沉淀作用化學物質(zhì)對蛋白質(zhì)的沉淀作用 由于蛋白質(zhì)的分子量很大，它在水中能夠形成膠體溶由于蛋白質(zhì)的分子量很大，它在水中能夠形成膠體溶液。蛋白質(zhì)溶液具有膠體溶液的典型性質(zhì)，如丁達爾液。蛋白質(zhì)溶液具有膠體溶液的典型性質(zhì)，如丁達爾現(xiàn)象、布郎運動等。由于膠體溶液中的蛋白質(zhì)不能通現(xiàn)象、布郎運動等。由于膠體溶液中的蛋白質(zhì)不能通過半透膜，因此可以應用透析法將非蛋白的小分子雜過半透膜，因此可以應用透析法將非蛋白的小

10、分子雜質(zhì)除去。質(zhì)除去。根據(jù)蛋白質(zhì)的親水膠體性質(zhì)，當其環(huán)境發(fā)生改變時，根據(jù)蛋白質(zhì)的親水膠體性質(zhì)，當其環(huán)境發(fā)生改變時，蛋白質(zhì)會發(fā)生沉淀作用。蛋白質(zhì)會發(fā)生沉淀作用。蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定性與它的分子量大小、所帶的蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定性與它的分子量大小、所帶的電荷和水化作用有關(guān)。改變?nèi)芤旱臈l件，將影響蛋白電荷和水化作用有關(guān)。改變?nèi)芤旱臈l件，將影響蛋白質(zhì)的溶解性質(zhì)。在適當?shù)臈l件下，蛋白質(zhì)能夠從溶液質(zhì)的溶解性質(zhì)。在適當?shù)臈l件下，蛋白質(zhì)能夠從溶液中沉淀出來。中沉淀出來。 一、一、沉沉淀淀作作用用的的類類型型1 1、可逆沉淀可逆沉淀2 2、不可逆沉淀不可逆沉淀3 3、抗體抗體- -抗原沉淀抗原沉淀在溫和條件下，

11、通過改變?nèi)芤旱脑跍睾蜅l件下，通過改變?nèi)芤旱膒HpH或電荷狀況，使蛋白質(zhì)從膠體溶液或電荷狀況，使蛋白質(zhì)從膠體溶液中沉淀分離。蛋白質(zhì)在沉淀過程中中沉淀分離。蛋白質(zhì)在沉淀過程中結(jié)構(gòu)和性質(zhì)都沒有發(fā)生變化，在適結(jié)構(gòu)和性質(zhì)都沒有發(fā)生變化，在適當?shù)臈l件下，可以重新溶解形成溶當?shù)臈l件下，可以重新溶解形成溶液，又稱為非變性沉淀。液，又稱為非變性沉淀。在強烈沉淀條件下，不僅破壞了蛋在強烈沉淀條件下，不僅破壞了蛋白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定性，而且也破白質(zhì)膠體溶液的穩(wěn)定性，而且也破壞了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，產(chǎn)生的壞了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)，產(chǎn)生的蛋白質(zhì)沉淀不可能再重新溶解于水蛋白質(zhì)沉淀不可能再重新溶解于水由于沉淀過程發(fā)生了蛋白質(zhì)的

12、結(jié)構(gòu)由于沉淀過程發(fā)生了蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和性質(zhì)的變化，又稱為變性沉淀。和性質(zhì)的變化，又稱為變性沉淀?？贵w和抗原蛋白通過相互識別抗體和抗原蛋白通過相互識別和結(jié)合而發(fā)生的沉淀現(xiàn)象。這和結(jié)合而發(fā)生的沉淀現(xiàn)象。這種特殊的沉淀作用是生物體免種特殊的沉淀作用是生物體免疫功能的基礎(chǔ)疫功能的基礎(chǔ)。二、沉淀劑類型二、沉淀劑類型1 1、無機物沉淀、無機物沉淀2 2、等電點沉淀等電點沉淀3 3、有機物沉淀有機物沉淀4 4、聚合物沉淀聚合物沉淀鹽析鹽析金屬離子沉淀法金屬離子沉淀法有機溶劑有機溶劑酚類化合物及其有機酸酚類化合物及其有機酸非離子型聚合物沉淀法非離子型聚合物沉淀法聚電解質(zhì)沉淀法聚電解質(zhì)沉淀法當向蛋白質(zhì)溶液中逐漸加

13、入無機鹽時，當向蛋白質(zhì)溶液中逐漸加入無機鹽時，開始，蛋白質(zhì)的溶解增大，這是由于開始，蛋白質(zhì)的溶解增大，這是由于蛋白質(zhì)的活度系數(shù)降低的緣故，這種蛋白質(zhì)的活度系數(shù)降低的緣故，這種現(xiàn)象稱為鹽溶?，F(xiàn)象稱為鹽溶。但當繼續(xù)加入電解質(zhì)時，另一種因素但當繼續(xù)加入電解質(zhì)時，另一種因素起作用，使蛋白質(zhì)的溶解度減小，稱起作用，使蛋白質(zhì)的溶解度減小，稱為鹽析。這是由于電解質(zhì)的離子在水為鹽析。這是由于電解質(zhì)的離子在水中發(fā)生水化，當電解質(zhì)的濃度增加時，中發(fā)生水化，當電解質(zhì)的濃度增加時，水分子就離開蛋白質(zhì)的周圍，暴露出水分子就離開蛋白質(zhì)的周圍，暴露出疏水區(qū)域，疏水區(qū)域間的相互作用，疏水區(qū)域，疏水區(qū)域間的相互作用，使蛋白質(zhì)聚

14、集而沉淀，疏水區(qū)域越多，使蛋白質(zhì)聚集而沉淀，疏水區(qū)域越多，就越易產(chǎn)生沉淀。就越易產(chǎn)生沉淀。（1 1）鹽析）鹽析牢固結(jié)牢固結(jié)合水合水大量溶大量溶劑水層劑水層1、無機物沉淀、無機物沉淀含高價陰離子的鹽，效果比含高價陰離子的鹽，效果比1 1價的鹽好。陰離子價的鹽好。陰離子的鹽析效果有下列次序：的鹽析效果有下列次序： 檸檬酸鹽檸檬酸鹽POPO4 43-3-SOSO4 42-2-CHCH3 3COOCOO- -ClCl- -NONO3-3-SCNSCN- -。 但高價陽離子的效果不如低價陽離子，例如硫酸但高價陽離子的效果不如低價陽離子，例如硫酸鎂的效果不如硫酸銨。對于鎂的效果不如硫酸銨。對于1 1價陽離

15、子則有下列價陽離子則有下列次序：次序：NHNH4 4+ +K K+ +NaNa+ +。 因此，最常用的鹽析劑是硫酸銨、硫酸鈉、磷酸鉀或因此，最常用的鹽析劑是硫酸銨、硫酸鈉、磷酸鉀或磷酸鈉。但硫酸鈉在磷酸鈉。但硫酸鈉在40C40C 以下溶解度較低，因而僅適以下溶解度較低，因而僅適用于對熱穩(wěn)定的蛋白質(zhì)。磷酸鹽在中性范圍內(nèi)實際上用于對熱穩(wěn)定的蛋白質(zhì)。磷酸鹽在中性范圍內(nèi)實際上是是HPOHPO4 42-2-和和H H2 2POPO4-4-的混合物，其作用比的混合物，其作用比POPO4 43+3+差。硫酸銨差。硫酸銨由于價廉、溶解度大，且能使蛋白質(zhì)穩(wěn)定由于價廉、溶解度大，且能使蛋白質(zhì)穩(wěn)定, , 在在2-2

16、-3mol/L (NH4)3mol/L (NH4)2 2SOSO4 4中酶可保存幾年。同時由于鹽的濃中酶可保存幾年。同時由于鹽的濃度高，可防止蛋白酶和細菌作用，故是最常用的鹽析度高，可防止蛋白酶和細菌作用，故是最常用的鹽析劑。硫酸銨的缺點是水解后變酸，在高劑。硫酸銨的缺點是水解后變酸，在高pHpH下會釋放出下會釋放出氨，腐蝕性強；殘留的硫酸銨在食品中雖然量少，也氨，腐蝕性強；殘留的硫酸銨在食品中雖然量少，也會影響其味，在醫(yī)療上有毒，因此必須除去。會影響其味，在醫(yī)療上有毒，因此必須除去。（2 2）金屬離子沉淀法）金屬離子沉淀法一些高價金屬離子對沉淀蛋白質(zhì)很有效。它們可以分一些高價金屬離子對沉淀蛋

17、白質(zhì)很有效。它們可以分為三類：為三類：第一類為第一類為MnMn2+2+，F(xiàn)eFe2+2+，CoCo2+2+，NiNi2+2+，CuCu2+2+，ZnZn2+2+和和CdCd2+2+能能和蛋白質(zhì)分子表面的羧基，氨基、咪唑基、胍基等側(cè)和蛋白質(zhì)分子表面的羧基，氨基、咪唑基、胍基等側(cè)鏈結(jié)合。鏈結(jié)合。第二類為第二類為CaCa2+2+，BaBa2+2+，MgMg2+2+和和PbPb2+2+能和蛋白質(zhì)分子表面能和蛋白質(zhì)分子表面的羧基結(jié)合，但不和含氮化合物相結(jié)合。的羧基結(jié)合，但不和含氮化合物相結(jié)合。第三類為第三類為AgAg+ +，HgHg2+2+和和PbPb2+2+能和蛋白質(zhì)分子表面的巰基能和蛋白質(zhì)分子表面的

18、巰基相結(jié)合。相結(jié)合。金屬離子沉淀法的優(yōu)點是它們在稀溶液中對蛋白金屬離子沉淀法的優(yōu)點是它們在稀溶液中對蛋白質(zhì)有效強的沉淀能力。處理后殘余的金屬離子可質(zhì)有效強的沉淀能力。處理后殘余的金屬離子可用離子交換樹脂或螯合劑除去。用離子交換樹脂或螯合劑除去。在這些離子中，應用較廣的是在這些離子中，應用較廣的是ZnZn2+2+，CaCa2+2+，MgMg2+2+，BaBa2+2+和和MnMn2+2+，而，而CuCu2+2+，F(xiàn)eFe2+2+，PbPb2+2+，HgHg2+2+等較少應用，等較少應用，因為它們會使產(chǎn)品損失和引起污染。如因為它們會使產(chǎn)品損失和引起污染。如ZnZn2+2+可用于可用于沉淀桿菌肽沉淀桿

19、菌肽( (作用于第作用于第4 4個組氨酸殘基上個組氨酸殘基上) )和胰島素；和胰島素；CaCa2+2+(CaCO(CaCO3 3) )用于分離乳酸，血清清蛋白等。用于分離乳酸，血清清蛋白等。2 2、等電點沉淀等電點沉淀蛋白質(zhì)與多肽一樣，能夠發(fā)生兩性離解，也有等電點。蛋白質(zhì)與多肽一樣，能夠發(fā)生兩性離解，也有等電點。在等電點時，蛋白質(zhì)的溶解度最小，在電場中不移動。在等電點時，蛋白質(zhì)的溶解度最小，在電場中不移動。等電點沉淀法的一個主要優(yōu)點是很多蛋白質(zhì)的等電點等電點沉淀法的一個主要優(yōu)點是很多蛋白質(zhì)的等電點都在偏酸性范圍內(nèi)，而無機酸通常價較廉，并且某些都在偏酸性范圍內(nèi)，而無機酸通常價較廉，并且某些酸，如

20、磷酸、鹽酸和硫酸的應用能為蛋白質(zhì)類食品所酸，如磷酸、鹽酸和硫酸的應用能為蛋白質(zhì)類食品所允許。同時，?？芍苯舆M行其他純化操作，無需將殘允許。同時，?？芍苯舆M行其他純化操作，無需將殘余的酸除去。余的酸除去。等電點沉淀法的最主要缺點是酸化時，易使蛋白質(zhì)失等電點沉淀法的最主要缺點是酸化時，易使蛋白質(zhì)失活，這是由于蛋白質(zhì)對低活，這是由于蛋白質(zhì)對低pHpH比較敏感。比較敏感。pHpH對對 - -乳球蛋白溶解度的影響乳球蛋白溶解度的影響 3 3、有機物沉淀有機物沉淀利用和水互溶的有機溶劑使蛋白質(zhì)沉淀的方法很早就利用和水互溶的有機溶劑使蛋白質(zhì)沉淀的方法很早就用來純化蛋白質(zhì)。加入有機溶劑于蛋白質(zhì)溶液中產(chǎn)生用來純

21、化蛋白質(zhì)。加入有機溶劑于蛋白質(zhì)溶液中產(chǎn)生多種效應，這些效應結(jié)合起來使蛋白質(zhì)沉淀。其中主多種效應，這些效應結(jié)合起來使蛋白質(zhì)沉淀。其中主要效應是水活度的降低。要效應是水活度的降低。當有機溶劑濃度增大時，水對蛋白質(zhì)分子表面上荷電當有機溶劑濃度增大時，水對蛋白質(zhì)分子表面上荷電基團或親水基團的水化程度降低，或者說溶劑的介電基團或親水基團的水化程度降低，或者說溶劑的介電常數(shù)降低，因而靜電吸力增大。常數(shù)降低，因而靜電吸力增大。在疏水區(qū)域附近近有序排列的水分子可以為有機溶劑在疏水區(qū)域附近近有序排列的水分子可以為有機溶劑所取代，使這些區(qū)域的溶解性增大。但除了疏水性特所取代，使這些區(qū)域的溶解性增大。但除了疏水性特

22、別強的蛋白質(zhì)外，對多數(shù)蛋白質(zhì)來說，后者影響較小，別強的蛋白質(zhì)外，對多數(shù)蛋白質(zhì)來說，后者影響較小，所以總的效果是導致蛋白質(zhì)分子聚集而沉淀。所以總的效果是導致蛋白質(zhì)分子聚集而沉淀。 （1 1）有機溶劑）有機溶劑有機溶劑沉淀法的優(yōu)點是溶劑容易蒸發(fā)除去，不會殘留有機溶劑沉淀法的優(yōu)點是溶劑容易蒸發(fā)除去，不會殘留在成品中，因此適用于制備食品蛋白質(zhì)。而且有機溶劑在成品中，因此適用于制備食品蛋白質(zhì)。而且有機溶劑密度低，與沉淀物密度差大，便于離心分離。有機溶劑密度低，與沉淀物密度差大，便于離心分離。有機溶劑沉淀法的缺點是容易使蛋白質(zhì)變性失活，且有機溶劑易沉淀法的缺點是容易使蛋白質(zhì)變性失活，且有機溶劑易燃、易爆、

23、安全要求較高。燃、易爆、安全要求較高。一般所選擇的溶劑必須能和水互溶，而和蛋白質(zhì)不發(fā)生一般所選擇的溶劑必須能和水互溶，而和蛋白質(zhì)不發(fā)生化學反應，最常用的溶劑是乙醇和丙酮，加量在化學反應，最常用的溶劑是乙醇和丙酮，加量在20%-50%20%-50%（V/VV/V）之間。當?shù)鞍踪|(zhì)的溶液）之間。當?shù)鞍踪|(zhì)的溶液pHpH接近等電點時，引起接近等電點時，引起沉淀所需加入有機溶劑的量較少。沉淀所需加入有機溶劑的量較少。 （2 2）酚類化合物及有機酸沉淀）酚類化合物及有機酸沉淀當?shù)鞍踪|(zhì)溶液當?shù)鞍踪|(zhì)溶液pHpH小于其等電點時，蛋白質(zhì)顆粒帶小于其等電點時，蛋白質(zhì)顆粒帶有正電荷，容易與酚類化合物或有機酸酸根所帶的有

24、正電荷，容易與酚類化合物或有機酸酸根所帶的負電荷發(fā)生作用生成不溶性鹽而沉淀。負電荷發(fā)生作用生成不溶性鹽而沉淀。這類化合物包括鞣酸（又稱單寧）、苦味酸（即這類化合物包括鞣酸（又稱單寧）、苦味酸（即2,4,6-2,4,6-三硝基苯酚）、三氯乙酸、磺酰水楊酸等。三硝基苯酚）、三氯乙酸、磺酰水楊酸等。單寧是一種多酚類化合物的寡聚單寧是一種多酚類化合物的寡聚體，它們的酚羥基可以解離而帶體，它們的酚羥基可以解離而帶有負電荷，而且分子中的苯環(huán)、有負電荷，而且分子中的苯環(huán)、多個羥基可以與蛋白質(zhì)發(fā)生非共多個羥基可以與蛋白質(zhì)發(fā)生非共價相互作用，結(jié)合在蛋白質(zhì)的表價相互作用，結(jié)合在蛋白質(zhì)的表面，然后在蛋白質(zhì)分子之間形

25、成面，然后在蛋白質(zhì)分子之間形成多點交連而成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，最終導多點交連而成網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)，最終導致聚集而沉淀致聚集而沉淀 4 4、聚合物沉淀聚合物沉淀許多非離子型聚合物，包括聚乙二醇（許多非離子型聚合物，包括聚乙二醇（PEGPEG）可用來進行）可用來進行選擇性沉淀以純化蛋白質(zhì)。聚合物的作用認為與有機溶劑選擇性沉淀以純化蛋白質(zhì)。聚合物的作用認為與有機溶劑相似，能降低水化度，使蛋白質(zhì)沉淀。此現(xiàn)象和雙水相的相似，能降低水化度，使蛋白質(zhì)沉淀。此現(xiàn)象和雙水相的形成有聯(lián)系。若使低分子量的蛋白質(zhì)沉淀，需加入大量形成有聯(lián)系。若使低分子量的蛋白質(zhì)沉淀，需加入大量PEGPEG；而使高分子量的蛋白質(zhì)沉淀，加入的量較小。；而使高分子量的蛋白質(zhì)沉淀，加入的量較小。PEGPEG是是一種特別有用