糖尿病基因治療的現(xiàn)狀及展望

1、糖尿病基因治療的現(xiàn)狀及展望彭博綜述(哈爾濱醫(yī)科大學(xué))摘要糖尿病是伴有不同程度胰島素缺乏或胰島功能障礙的一類代謝性疾病。由于當(dāng)今治療1型糖尿病的方法在預(yù)防長期并發(fā)癥方面收效甚微，研究者試圖找出一種有效的療法來再生胰島B細(xì)胞，分化多能干細(xì)胞，和/或重新編碼自體非B體細(xì)胞如肝細(xì)胞成為胰島素分泌細(xì)胞達(dá)到重建葡萄糖穩(wěn)態(tài)的目的。本篇文章將從糖尿病基因治療的策略、關(guān)鍵基因以及基因治療的載體這三個(gè)方面來進(jìn)行論述。關(guān)鍵詞糖尿病；基因治療；胰島素分泌細(xì)胞；胰腺轉(zhuǎn)錄因子ThecurrentstatusandprospectofgenetherapyfordiabetesmellitusPengBo(HarbinMe

2、dicalUniversity)AbstractDiabetesisametabolicdiseaseassociatedwithvaryingdegreesofinsulindeficiencyorisletdysfunction.Becausecurrentmethodsfortreatingtype1diabetes(T1D)areineffectiveinproventinglong-termcomplications,researchershavesoughttoindentifyalternativetherapiesthatregeneratepancreaticbetacell

3、s,differentiatepluripotent/progrnitorstemcells,and/orreprogramautologousnon-pancreaticsomaticcells,suchaslivercells,intoinsulin-producingcells(IPCs)forrestoringglucosehomeostasis.Inthispaper,wewillelaborateonthekeygenes,vectorsandstrategiesofgenetherapyinthetreatmentofdiabetesmellitus.Keywordsdiabet

4、es,genetherapy,insulin-producingcells(IPCs),pancreatictranscriptionfactors(PTFs).1、糖尿病概況及治療現(xiàn)狀2013年全世界范圍內(nèi)糖尿病患者已經(jīng)達(dá)到了億人，統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，預(yù)計(jì)2040年將達(dá)到億人。在過去的幾十年里，我們對于糖尿病病理生理學(xué)的認(rèn)知取得了明顯進(jìn)展。糖尿病主要包括1型糖尿病和2型糖尿病，1型糖尿病(type1diabetesmellitus,T1DM),由于胰島素的絕對缺乏產(chǎn)生的一種青少年型糖尿病。目前認(rèn)為免疫功能紊亂是T1DM的主要發(fā)病機(jī)制，T1DM具有較強(qiáng)的遺傳易感性，這類患者與環(huán)境誘發(fā)因素接觸后便可觸

5、發(fā)T細(xì)胞功能改變，產(chǎn)生大量的白介素2,丫干擾素等因子引起胰島的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致胰島B細(xì)胞損壞和功能障礙1。2型主要發(fā)生于成人期，通常與不良生活習(xí)慣導(dǎo)致的肥胖相關(guān)，外周組織(肌肉，肝臟等)對胰島素敏感性下降，早期表現(xiàn)為高胰島素血癥和胰島素抵抗，持續(xù)發(fā)生的高血糖損傷B細(xì)胞，使得B細(xì)胞胰島素分泌水平降低而發(fā)病。糖尿病人中晚期通?？砂l(fā)展為嚴(yán)重的并發(fā)癥。并發(fā)癥分為急性和慢性兩種，其中急性并發(fā)癥以酮癥酸中毒為主，慢性并發(fā)癥從根本上影響身體各器官系統(tǒng)的功能，其中包括腎衰竭，心血管疾病，神經(jīng)系統(tǒng)功能障礙，失明以及導(dǎo)致截肢的四肢壞死和壞疽。二十世紀(jì)20年代胰島素的發(fā)現(xiàn)徹底變革了糖尿病的治療手段，極大地減少了急性并

6、發(fā)癥酮癥酸中毒的發(fā)生。然而，慢性并發(fā)癥取代急性并發(fā)癥成為糖尿病致殘率和死亡率高居不下的主要原因。目前人們已達(dá)成共識，精準(zhǔn)地控制血糖水平在糖尿病的治療中至關(guān)重要，這可預(yù)防或大大推遲慢性并發(fā)癥的發(fā)病，降低糖尿病的致殘率和致死率。藥物和胰島素治療過程中誘發(fā)的低血糖癥是達(dá)到完美控制血糖的一個(gè)限制因素2,3o雖然如此，胰島素增敏劑，胰島素分泌增強(qiáng)劑和新型胰島素的應(yīng)用已經(jīng)降低了醫(yī)源性低血糖癥的發(fā)生率，如今對血糖的控制比過去好得多。雖然目前在糖尿病治療方面已經(jīng)取得了重大的進(jìn)展，但對于大多數(shù)糖尿病人來說仍然無法完美地控制血糖。胰島素替代療法是目前臨床治療糖尿病的主要手段，但是外源性胰島素不可能產(chǎn)生精確模仿胰島

7、素自然動力學(xué)的胰島素曲線。胰島移植是糖尿病治療較為理想的方案，胰島移植成功的大多數(shù)糖尿病患者可以擺脫胰島素注射治療，但是離恢復(fù)正常的胰島素葡萄糖動力學(xué)的目標(biāo)還有較大的差距4,胰島移植也受到捐贈者適用性的限制，因?yàn)槊恳淮纬晒Φ囊浦残枰獊碜詢蓚€(gè)甚至更多的捐贈者的胰島5,6。止匕外，進(jìn)行胰島移植的患者必須接受長期甚至終身的免疫抑制療法?；谶@些現(xiàn)狀，研究者試圖找出一種高效的療法來再生胰島B細(xì)胞，分化多能干細(xì)胞，和/或重新編碼自體非B體細(xì)胞如肝細(xì)胞成為胰島素分泌細(xì)胞達(dá)到重建葡萄糖穩(wěn)態(tài)的目的。2 .糖尿病基因治療的策略糖尿病體內(nèi)基因治療主要有三個(gè)策略，第一類為編碼的蛋白質(zhì)能夠促進(jìn)葡萄糖利用或抑制肝葡萄糖

8、合成的基因的轉(zhuǎn)移；第二類為葡萄糖反應(yīng)性胰島素基因的轉(zhuǎn)移；第三類為促進(jìn)肝中B細(xì)胞新生或誘導(dǎo)胰島素分泌細(xì)胞的基因治療。用于降低血糖的非胰島素基因的轉(zhuǎn)移兩種非胰島素轉(zhuǎn)基因應(yīng)用于降低血糖，這兩類基因主要通過抑制肝中葡萄糖生成和增加外周組織葡萄糖的利用發(fā)揮作用。在第一類基因的研究中，葡糖激酶（Gck）的基因轉(zhuǎn)移主要在在嚙齒動物的不同種群中實(shí)施7。葡糖激酶之前被分類為一種能降低肝中葡萄糖生成的轉(zhuǎn)基因11,然而在他們的研究中，肝葡萄糖生成并未被直接測定，Gck主要的下游效應(yīng)很可能是增加葡萄糖的利用。在STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠的骨骼肌中Gck的過度表達(dá)可明顯刺激葡萄糖利用，并防止高血糖癥的發(fā)生。另一種下調(diào)肝中葡

9、萄糖生成的方法是通過糖原靶向蛋白質(zhì)的過度表達(dá)將葡萄糖轉(zhuǎn)化為糖原12130這種蛋白是蛋白磷酸酶1的糖原靶向亞基家族的成員，可以調(diào)節(jié)糖原的新陳代謝。在小鼠中腺病毒介導(dǎo)的糖原靶向蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)化可以顯著地刺激肝中糖原合成并降低血糖水平。葡萄糖反應(yīng)性胰島素基因的轉(zhuǎn)移這一策略是通過胰島素基因變異型向肝細(xì)胞中的傳遞實(shí)現(xiàn)的。這種被修飾的胰島素基因的變異型要么使胰島素原更容易加工為成熟胰島素或消除加工的必要，要么促進(jìn)對血糖濃度變化敏感的基因的表達(dá)140胰島素基因治療最具挑戰(zhàn)性的部分在于給予表達(dá)的胰島素轉(zhuǎn)基因以葡萄糖反應(yīng)性。正常B細(xì)胞是非常巧妙的：它們通過幾乎瞬時(shí)爆發(fā)式產(chǎn)生胰島素來對葡萄糖濃度的變化產(chǎn)生反應(yīng)。不同研

10、究者使用不同的葡萄糖反應(yīng)性啟動子，如？L-丙酮酸激酶基因的元件，磷酸烯醇式丙酮酸竣激酶(PEPCK)基因的啟動子，葡萄糖-6-磷酸酶基因以及其他基因，這些啟動子通過血糖水平的變化使處于轉(zhuǎn)錄水平的胰島素轉(zhuǎn)基因在1-2小時(shí)內(nèi)得到調(diào)節(jié)，使處于蛋白質(zhì)分泌水平的胰島素轉(zhuǎn)基因通過血糖水平的變化在3-4小時(shí)內(nèi)得到調(diào)節(jié)。當(dāng)血糖正?；蛱幱诘退綍r(shí)，這些啟動子的關(guān)閉需要很長時(shí)間。由于分泌反應(yīng)的延遲效應(yīng)，通過轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)的胰島素轉(zhuǎn)基因?qū)ρ堑目刂仆ǔＪ遣环€(wěn)定的，低血糖癥是一個(gè)主要的并發(fā)癥。促進(jìn)肝中B細(xì)胞新生或誘導(dǎo)胰島素分泌細(xì)胞的基因治療肝細(xì)胞作為靶細(xì)胞的生物學(xué)基礎(chǔ)據(jù)報(bào)道，多種細(xì)胞和組織如胚胎干細(xì)胞，肝臟，胰腺，腸和骨髓

11、等可以被誘導(dǎo)分化為胰島素分泌細(xì)胞。結(jié)果表明胚胎干細(xì)胞具有向胰島素分泌細(xì)胞分化的潛能，但是這些細(xì)胞用于治療糖尿病存在倫理問題和成瘤性的風(fēng)險(xiǎn)。胰管，腺泡以及胰島中的非B細(xì)胞同樣顯示出具有向胰島素分泌細(xì)胞分化的潛能。相比于其他細(xì)胞和組織，由于胰腺和肝臟在胚胎發(fā)育中起源于內(nèi)胚層的相鄰區(qū)，肝臟與胰腺在發(fā)育過程中具有共同的祖細(xì)胞，兩者有很多相同的表觀基因組，因此，肝臟被認(rèn)為是誘導(dǎo)胰島素分泌細(xì)胞的一個(gè)潛在的來源，誘導(dǎo)肝細(xì)胞向胰島細(xì)胞的轉(zhuǎn)分化過程中，能較少地改變表觀基因。止匕外，肝臟具有強(qiáng)大的自我再生能力。肝臟在受到機(jī)械性或化學(xué)性損傷后會進(jìn)行高效的自我修復(fù)，同時(shí)在修復(fù)的過程中，肝臟始終保持良好的功能。良好的再

12、生能力為將肝臟多次誘導(dǎo)為胰島細(xì)胞提供足夠的細(xì)胞來源。肝臟參與血糖的代謝和調(diào)節(jié)，細(xì)胞表面存在血糖感受裝置，是較為理想的異位誘導(dǎo)胰島素分泌細(xì)胞(IPCs)的器官。通過關(guān)鍵胰腺轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)誘導(dǎo)替代B細(xì)胞許多以前的研究證明，利用病毒載體介導(dǎo)的多種胰腺轉(zhuǎn)錄因子（PTFs）,可以使肝細(xì)胞重編程轉(zhuǎn)化為胰島素分泌細(xì)胞（IPCs）。PDX-1在胰腺發(fā)育，B細(xì)胞分化以及激活胰島素基因轉(zhuǎn)錄方面具有關(guān)鍵性作用。MafA作為一個(gè)最近被確立的B細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子，是胰島素基因轉(zhuǎn)錄高效的激活劑。這些關(guān)鍵胰腺轉(zhuǎn)錄因子在非B細(xì)胞（組織）中（如胰腺非B細(xì)胞，肝，腸，骨髓細(xì)胞）的過度表達(dá)可誘導(dǎo)不同B細(xì)胞相關(guān)基因的表達(dá)，其中包含胰

13、人們對病毒介導(dǎo)的胰腺相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子治療糖尿病進(jìn)行了大量的體內(nèi)和體外研究，F(xiàn)erber等用第一代腺病毒載體（FGAd）將PDX-1基因和編碼B-半乳糖音酶的基因?qū)胱⑸溥^STZ兩日后的小鼠肝臟中15,這項(xiàng)實(shí)驗(yàn)終止于8天之后，相比于FGAd-B-半乳糖甘酶，F(xiàn)GAd-PDX-1引起了血糖的明顯降低。止匕外，在PDX-1治療的小鼠中發(fā)現(xiàn)了血清胰島素增高，并在肝內(nèi)發(fā)現(xiàn)胰島素陽性細(xì)胞。Kojima等人的最近一項(xiàng)報(bào)告證實(shí)：通過遞送胰島特異性轉(zhuǎn)錄因子在肝中誘導(dǎo)內(nèi)分泌細(xì)胞是可行的16。Kojima等人向STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠肝臟中遞送的兩種轉(zhuǎn)錄因子基因，PDX-1和Beta-2（又名NeuroD）,在實(shí)驗(yàn)中他們

14、使用輔助病毒依賴型腺病毒載體（helper-dependentadenovirus,HDAd）替代FGAd來遞送基因，降低了病毒載體的毒性和宿主細(xì)胞中的免疫反應(yīng)。3 .糖尿病基因治療的關(guān)鍵基因越來越多的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明在體外和體內(nèi)用病毒載體將關(guān)鍵胰腺轉(zhuǎn)錄因子基因?qū)敫渭?xì)胞，可以重新編碼肝細(xì)胞，使其變?yōu)榭梢跃S持糖尿病動物葡萄糖穩(wěn)態(tài)的胰島素分泌細(xì)胞，這也成為了糖尿病基因治療的主要方法。眾所周知，胰腺的發(fā)生、發(fā)育和B細(xì)胞分化過程中，有多種轉(zhuǎn)錄因子參與，在這些轉(zhuǎn)錄因子中，PDX-1對于胰腺發(fā)育，B細(xì)胞分化以及激活胰島素基因轉(zhuǎn)錄是至關(guān)重要的。Ngn3和NeuroD對于胰腺內(nèi)分泌細(xì)胞的分化同樣重要。MafA的

15、表達(dá)發(fā)生于B細(xì)胞分化的最后階段，并作為胰島素基因轉(zhuǎn)錄的強(qiáng)效激活劑。這一過程被認(rèn)為是轉(zhuǎn)錄因子級聯(lián)激活和不同基因的順序表達(dá)，導(dǎo)致了不同類型胰腺細(xì)胞的發(fā)生和發(fā)育。在糖尿病基因治療中，PDX-1,Ngn3,NeuroD和MafA這四個(gè)基因受到廣泛關(guān)注。PDX-1在胰腺發(fā)育和B細(xì)胞分化中起決定性作用在胚胎發(fā)育的早期階段，當(dāng)前腸內(nèi)胚層向普通的胰腺前體細(xì)胞發(fā)育時(shí)，PDX-1最初表達(dá)于內(nèi)臟部位。在胰腺發(fā)育過程中，PDX-1在前體細(xì)胞中持續(xù)表達(dá)，并且共表達(dá)一些與胰腺相關(guān)的激素，部分細(xì)胞最終分化為成熟的B細(xì)胞。有證據(jù)顯示PDX-1(+/-)小鼠葡萄糖耐量減低，伴有胰島細(xì)胞死亡，胰島團(tuán)塊減少以及異常的胰島結(jié)構(gòu)，這說

16、明PDX-1的基因劑量對于維持葡萄糖穩(wěn)態(tài)是至關(guān)重要的。據(jù)報(bào)道PDX-1-VP16而不是野生型PDX-1可高效誘導(dǎo)肝中胰島素分泌細(xì)胞。此外，結(jié)果表明PDX-1-VP16可高效誘導(dǎo)肝中胰島素基因表達(dá)，尤其是在胰腺轉(zhuǎn)錄因子NeuroD或者Ngn3存在的情況下17。PDX-1-VP16與NeuroD或Ngn3聯(lián)合應(yīng)用，對胰島素分泌的增加和葡萄糖耐量的提高效果顯著，揭示了這個(gè)組合可以有效且高效地替代糖尿病中胰島素生物合成的減少，同時(shí)PDX-1需要同等功能的轉(zhuǎn)錄因子或者輔酶因子的補(bǔ)充來充分發(fā)揮它的功能。MafA作為一個(gè)最近新確定的胰腺轉(zhuǎn)錄因子，具有高效激活胰島素基因的功能MafA基因的概述以前的結(jié)果表明，

17、一個(gè)未被確認(rèn)的B細(xì)胞特異性核因子可結(jié)合到胰島素基因增強(qiáng)子區(qū)域中一個(gè)被稱為RIPE3b1的保守的順式作用元件上，它很可能是胰島素基因重要的反式激活因子18。最近，這種重要的反式激活因子被認(rèn)為是MafA,一個(gè)基本的亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子。MafA蛋白屬于巨噬細(xì)胞激活因子(Maf)家族，由一個(gè)包含N末端的酸性轉(zhuǎn)錄激活域的大Maf蛋白和三個(gè)只包含亮氨酸拉鏈轉(zhuǎn)錄因子的小Maf蛋白組成。MafA在胰島素分泌中的調(diào)節(jié)作用MafA通過一個(gè)被稱為RIPE3b1的順式作用元件控制胰島素基因的0細(xì)胞特異性表達(dá)，同時(shí)它也是胰島素基因的強(qiáng)有力的反式激活因子。在胰腺發(fā)育過程中,MafA基因的表達(dá)首次出現(xiàn)于胰島素分泌細(xì)胞產(chǎn)生的

18、主要階段的早期，同時(shí)其他重要的轉(zhuǎn)錄因子如PDX-1和NeuroD表達(dá)于胰腺發(fā)育的早期階段。此外，當(dāng)PDX-1和NeuroD同時(shí)表達(dá)于胰島的不同類型細(xì)胞中時(shí)，MafA僅表達(dá)于0細(xì)胞，且可以作為胰島素基因轉(zhuǎn)錄的強(qiáng)效激活劑?；贛afA調(diào)節(jié)胰島素分泌的作用，目前有兩種基本觀點(diǎn)：（1）在MafA（-/-）小鼠中，insulinl,insulin2的轉(zhuǎn)錄明顯減少，說明MafA對于體內(nèi)胰島素基因轉(zhuǎn)錄是一個(gè)至關(guān)重要的調(diào)節(jié)因子。（2）MafA缺失對于胚胎時(shí)期的胰腺發(fā)育影響不大，這可能與MafA表達(dá)于胰腺發(fā)育的最后階段有關(guān)。相反，PDX-1和NeuroD的缺失導(dǎo)致胰腺發(fā)育障礙。最近證實(shí)MafA與一些其他的胰腺轉(zhuǎn)

19、錄因子共同作用可高效誘導(dǎo)肝中胰島素基因表達(dá)。MafA、PDX-1和NeuroD共同作用時(shí)可大幅度增加胰島素啟動子活性。這些結(jié)果證實(shí)MafA,PDX-1和NeuroD在胰島素啟動子活性方面表現(xiàn)出強(qiáng)大的協(xié)同效應(yīng)。4 .糖尿病基因治療的載體腺病毒載體（AD）腺病毒屬于DNA病毒家族，同時(shí)擁有線性雙鏈基因組，因其強(qiáng)大的外源基因攜帶能力和轉(zhuǎn)染分裂或非分裂細(xì)胞的能力，故成為基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的常用工具。腺病毒基因組具有4個(gè)區(qū)域，依次為E1-E4,分別與病毒復(fù)制，編碼病毒多肽及細(xì)胞基因表達(dá)，表達(dá)主要組織相容性復(fù)合物，抑制細(xì)胞程序性凋亡等有關(guān)19。Ferber等用第一代腺病毒載體（FGAd）將PDX-1基因或編碼B-半

20、乳糖甘酶的基因?qū)胱⑸溥^STZ兩日后的小鼠肝臟中取彳#了一定的療效，在FGAd中E1被刪除，從而防止病毒無限制復(fù)制，否則會摧毀接受的宿主。然而注射這種載體后，當(dāng)它們用于向肝中遞送基因時(shí)，受體動物常發(fā)展為嚴(yán)重的肝炎。止匕外，宿主將增加免疫反應(yīng)，從而在治療的數(shù)周內(nèi)過早地終止轉(zhuǎn)基因的表達(dá)，這些通過腺病毒重新編碼程序的肝源性胰島素分泌細(xì)胞通常被免疫反應(yīng)迅速消除?？紤]到這一點(diǎn)，Kojima等人使用輔助病毒依賴型腺病毒載體（helper-dependentadenovirusHDAd）來遞送基因。這種輔助病毒依賴型腺病毒載體（HDAd）刪除了所有的病毒編碼序列，僅保留了末端反向重復(fù)序列和包裝信號序列20o

21、在小鼠中它的毒性可忽略不計(jì)，在單次治療后，由HDAd遞送的轉(zhuǎn)基因通常可表達(dá)數(shù)月，甚至終生。借助HDAd向STZ誘導(dǎo)的糖尿病小鼠的肝中遞送PDX-1可導(dǎo)致局部血糖的暫時(shí)降低。由于HDAd載體仍然保留了病毒的衣殼蛋白，因此仍然存在宿主對載體的免疫反應(yīng)，然而與早期載體相比，HDAd已經(jīng)大幅度降低了免疫反應(yīng)。腺相關(guān)病毒載體（AAV）腺相關(guān)病毒是細(xì)小病毒科的一種單鏈DNA病毒，無包膜，并且存在復(fù)制缺陷。我們通過去除野生型病毒的整個(gè)病毒編碼區(qū)域改造出用于基因治療的重組腺相關(guān)病毒載體。AAV的優(yōu)點(diǎn)在于引起機(jī)體的免疫反應(yīng)較小。腺相關(guān)病毒（AAV）重組體是一個(gè)更有希望檢驗(yàn)肝源性胰島素分泌細(xì)胞的自身免疫的載體，它

22、能高效介導(dǎo)基因轉(zhuǎn)移，且能使目的基因穩(wěn)定表達(dá)，并具有較低的免疫原性。AAV載體可轉(zhuǎn)染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞，使已分化的組織作為靶點(diǎn)，并允許動物模型中治療基因產(chǎn)物長期表達(dá)21oVijayKoya等人使用Stz誘導(dǎo)NOD/SCID小鼠建立糖尿病小鼠模型，通過門靜脈注射AAV介導(dǎo)的目的基因（PDX-1-VP16,Ngn3）至小鼠肝臟中，目的基因在肝臟中穩(wěn)定表達(dá)，并產(chǎn)生肝源性胰島素分泌細(xì)胞。為排除基因治療過程中胰腺的影響，VijayKoya等人對基因治療后的小鼠實(shí)施了胰腺全切術(shù)，胰腺切除后，肝胰島素分泌細(xì)胞可以獨(dú)立維持血糖正常。他們的結(jié)果還表明非胰腺胰島素分泌細(xì)胞可能具有與胰腺B細(xì)胞類似的表面自身抗原分布

23、，這些胰島素分泌細(xì)胞對于致糖尿病免疫細(xì)胞引起的攻擊和破壞是敏感的。因此，通過基因治療重新編碼程序的B細(xì)胞替換和再生療法，需要免疫輔助途徑來抑制之前存在的自身免疫反應(yīng)，消除或降低淋巴細(xì)胞對重新編碼程序胰島素分泌細(xì)胞的損傷。5展望將非胰腺體細(xì)胞重新編碼程序使之成為胰島素分泌細(xì)胞被視為最有希望治愈1型糖尿病的策略之一。試驗(yàn)性的糖尿病基因治療尚處于初級階段。在近年的研究中，已經(jīng)達(dá)到了以下的目標(biāo)：1）通過使用重組的AAV載體已將病毒抗原的免疫原性降到最低。2）證明肝胰島素分泌細(xì)胞具有葡萄糖反應(yīng)性并且可以維持糖尿病小鼠的葡萄糖穩(wěn)態(tài)。3）直接觀察到肝胰島素分泌細(xì)胞易受自身免疫攻擊的影響胰島的發(fā)生、發(fā)育和分化

24、是在多個(gè)基因的精準(zhǔn)調(diào)控下完成的，繼續(xù)尋找決定產(chǎn)生胰島素分泌細(xì)胞的關(guān)鍵性基因或基因組合仍是目前的首要任務(wù)，目前的基因治療手段還不能獲得完全成熟的B細(xì)胞，進(jìn)一步明確B細(xì)胞分化成熟的基因調(diào)控機(jī)制必將促進(jìn)糖尿病基因治療的發(fā)展和應(yīng)用。目前將基因治療應(yīng)用于臨床試驗(yàn)的主要限制因素是獲得安全有效的基因轉(zhuǎn)移載體，發(fā)展安全有效的基因轉(zhuǎn)移載體成為全世界許多基因治療實(shí)驗(yàn)室的主要目標(biāo)?？梢韵胂蟮氖牵S著載體開發(fā)的快速發(fā)展，加上胰島新生方法取得的長足進(jìn)步，將使我們在不遠(yuǎn)的將來，糖尿病的基因治療從動物實(shí)驗(yàn)到應(yīng)用于臨床試驗(yàn)成為現(xiàn)實(shí)。參考文獻(xiàn)1. vanBelleTL,CoppietersKT,vonHerrathMG.Typ

25、e1diabetes:etiology,immunology,andtherapeuticstrategies.PhysiolRev,2011,91:791182. Cryer,.(1994)Bantinglecture.hypoglycemia:thelimitingfactorinthemanagementofIDDM.Diabetes43,13783893. Cryer,.(2002)Hypoglycaemia:thelimitingfactorintheglycaemicmanagementoftypeIandtypeIIdiabetes.Diabetologia45,9379484.

26、 Paty,.etal.(2002)Intrahepaticislettransplantationintype1diabeticpatientsdoesnotrestorehypoglycemichormonalcounterregulationorsymptomrecognitionafterinsulin51,3428W4345. Ryan,.etal.(2001)ClinicaloutcomesandinsulinsecretionafterislettransplantationwiththeEdmontonprotocol.Diabetes50,7107196. Shapiro,e

27、tal.(2000)Islettransplantationinsevenpatientswithtype1diabetesmellitususingaglucocorticoid-freeimmunosuppressiveregimen.N.Engl.J.Med.343,2302387. Ferre,T.etal.(1996)Correctionofdiabeticalterationsby.Natl.Acad.Sci.U.S.A.93,722522308. O'Doherty,.etal.(1999)Metabolicimpactofglucokinaseoverexpressio

28、ninliver.Diabetes48,2022W0279. Shiota,M.etal.(2001)Glucokinasegenelocustransgenicmiceareresistanttothedevelopmentofobesity-inducedtype250,622-62910. Desai,.etal.(2001)Phenotypiccorrectionofdiabeticmicebyadenovirus-mediatedglucokinaseexpression.Diabetes50,2287-229511. Morral,N.(2003)Noveltargetsandth

29、erapeuticstrategiesfortype2diabetes.TrendsEndocrinol.Metab.14,169T7512. ODoherty,.etal.(2000)Activationofdirectandindirectpathwaysofglycogensynthesisbyhepaticoverexpressionofproteintargetingtoglycogen.J.Clin.Invest.105,47948813. Newgard,.etal.(2000)Organizingglucosedisposal.Emergingrolesoftheglycoge

30、ntargetingsubunitsofproteinphosphatase-1.Diabetes49,196797714. Yoon,.andJun,.(2002)Recentadvancesininsulingenetherapyfortype1diabetes.TrendsMol.Med.8,626815. Ferber,S.etal.(2000)Pancreaticandduodenalhomeoboxgene1inducesexpressionofinsulingenesinliverandamelioratesstreptozotocin-inducedhyperglycemia.Nat.Med.6,56857216. Kojima,H.etal.(2003)NeuroD/beta