第十四章 維生素類藥物的分析(VB)

1、第十四章第十四章 維生素類藥物的分析維生素類藥物的分析第二節(jié)維生素第二節(jié)維生素B B1 1的分析的分析第二節(jié)維生素B1的分析維生素B1（vitaminB1）廣泛存在于米糠、麥麩和酵母中，此外來源于人工合成。本品具有維持糖代謝及神經(jīng)傳導(dǎo)與消化的正常功能，主要用于治療腳氣病、多發(fā)性神經(jīng)炎和胃腸道疾病。ChP2015收載有維生素B1及其片劑和注射液。一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（一）結(jié)構(gòu)氨基嘧啶環(huán)噻唑環(huán)NNNH2CH2NSCH3OHH3C12345123456Cl , HCl亞甲基季銨一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)（二）性質(zhì)1.溶解性 維生素B1為白色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末，干燥品在空氣中迅速吸收4%的水分。本品在水中易溶，在乙醇中微

2、溶，在乙醚中不溶，水溶液呈酸性。2.硫色素反應(yīng) 噻唑環(huán)在堿性介質(zhì)中可開環(huán)，再與嘧啶環(huán)上的氨基環(huán)合，經(jīng)鐵氰化鉀等氧化劑氧化成具有熒光的硫色素，后者溶于正丁醇中呈藍色熒光。一、結(jié)構(gòu)與性質(zhì)3.紫外吸收特性本品的12.5ug/ml鹽酸溶液（9 1000）在246nm波長處測定吸光度，故本品的吸光系數(shù)（ ）為406436。4.與生物堿沉淀試劑反應(yīng)分子中具有兩個雜環(huán)（嘧啶環(huán)和噻唑環(huán)），故可與某些生物堿沉淀試劑（如碘化汞鉀、三硝基酚、碘溶液、硅鎢酸）反應(yīng)生成組成恒定的沉淀，可用于鑒別和含量測定。5.氯化物的特征維生素B1為鹽酸鹽，故本品水溶液顯氯化物的鑒別反應(yīng)。%1cm二、鑒別實驗（一）硫色素?zé)晒夥磻?yīng)1.原

3、理維生素B1在堿性溶液中可被鐵氰化鉀氧化生成硫色素，硫色素溶于正丁醇（或異丁醇）中顯藍色熒光。NNNH2CH3CH2NSCH2CH2OHCH3Cl-HClNaOHNNNH2CH3CH2SCH2CH2OHCH3NCOHNaNNCH3NNSCH2CH2OHCH3Na-H2ONNCH3NNSCH2CH2OHCH3H環(huán)合NNCH3NNSCH2CH2OHCH3NaNNCH3NNSCH2CH2OHCH3O2H硫色素Thiochtome二、鑒別實驗2.方法取本品約5mg，加NaOH T.S. 2.5ml溶解后，加鐵氰化鉀 T.S. 0.5ml與正丁醇5ml，強力振搖2min，放置使分層，上層顯強烈的藍色熒光

4、；加酸使呈酸性，熒光即消失；再加堿使呈堿性，熒光又重現(xiàn)。二、鑒別實驗（二）沉淀反應(yīng)維生素B1結(jié)構(gòu)中有嘧啶環(huán)和氨基，顯生物堿的特征，可與多種生物堿沉淀或顯色劑反應(yīng)。維生素B1與碘化汞鉀生成淡黃色沉淀B.H2HgI4維生素B1與苦酮酸生成扇形白色結(jié)晶維生素B1與碘生成紅色沉淀B.HI.I2維生素B1與硅鎢酸反應(yīng)生成白色沉淀B2.SiO2(OH)2.12WO3.4H2O二、鑒別實驗（三）氯化物反應(yīng)本品是鹽酸鹽,水溶液呈氯化物的鑒別反應(yīng)（四）硫元素反應(yīng)維生素B1與NaOH共熱，分解產(chǎn)生硫化鈉，可與硝酸鉛反應(yīng)生成黑色沉淀，可供鑒別。 PbSNaSVitBAcPbNaOH二、鑒別實驗（五）紅外分光光度法取

5、本品適量，加水溶解，水浴蒸干，在105干燥2小時測定。本品的紅外光吸收譜圖應(yīng)與應(yīng)與對照圖譜一致。三、含量測定u非水溶液滴定法 (Non-aqueous Titrimetry)u 紫外分光光度法 (UV)u 硫色素?zé)晒夥?(Thiochrone Fluoremetry)三、含量測定（一）非水滴定法1.原理 維生素B1分子中含有兩個堿性的已成鹽的伯胺和季銨基團,在非水溶液中均可與高氯酸作用,以電位指示終點.根據(jù)消耗的高氯酸量即可算出維生素B1的含量。三、含量測定2.方法取本品約0.12g，精密稱定，加冰醋酸20ml微熱使溶解，放冷，加醋酐30ml，照電位滴定法 ，用高氯酸滴定液（0.1mol/L）

6、滴定，并將滴定的結(jié)果用空白實驗校正。沒1ml高氯酸滴定液（0.1mol/L）相當(dāng)于16.86mg的維生素B1。 HClOClOBHClOHClClBAcHg）（喹那啶紅亞甲藍 （紫紅天藍）%100WFTVV%空樣含量三、含量測定（二）紫外分光光度法1.原理維生素B1分子中含有共軛雙鍵結(jié)構(gòu),在紫外區(qū)有吸收,根據(jù)最大吸收波長處的吸光度即可以計算含量.ChP2015收載的維生素B1片劑和注射液均采用本法測定。三、含量測定（三）硫色素?zé)晒夥ǎ║SP所采用的方法）1.原理維生素B1在堿性溶液中被鐵氰化鉀氧化成硫色素，用異丁醇提取后，在紫外光(ex365m)照射下呈現(xiàn)藍色熒光(em435m)。通過與對照品

7、比較熒光強度，即可求得供試品含量。VitB1鐵氰化鉀鐵氰化鉀NaOH硫色素異丁醇異丁醇熒光ex-365nmem-435nm三、含量測定2.方法1.氧化試劑的制備取當(dāng)天配制的1.0%鐵氰化鉀溶液4.0ml，加3.5mol/L的氫氧化鈉溶液制成100ml，于4h內(nèi)使用。2.對照品溶液的制備精密稱取維生素Bl對照品約25mg，溶于300ml的稀醇溶液(15)，用3mol/L鹽酸溶液調(diào)節(jié)至pH4.0，加稀醇稀釋成1000ml，作為貯備液。避光冷藏，每月配制一次。取貯備液適量，用0.2mol/L鹽酸溶液逐步定量稀釋至0.2&ug/ml的溶液。3.供試品溶液的制備取供試品適量，用0.2mol/L鹽酸溶液溶

8、解制成100&ug/ml的溶液(若供試品難溶，可在水浴上加熱使溶解)，精密量取5ml，逐步定量稀釋至0.2&ug/ml的溶液。三、含量測定4.測定方法取40ml具塞試管(或其他合適容器)3支或3支以上，各精密加入對照品溶液5ml，于其中2支(或2支以上)試管中迅速(12s內(nèi))加入氧化劑各3.0ml，在30s內(nèi)再加入異丁醇20.0ml，密塞，劇烈振搖90s。于另一文試管中加3.5mol/L 氫氧化鈉溶液3.0ml以代替氧化試劑，并照上述方法操作，作為空白。另取3支或3支以上的相同試管，各精密加入供試品溶液5ml，照上述對照品溶液管的方法，同法處理。于上述6支或6支以上試管中，各加入無水乙醇2ml

9、，旋搖數(shù)秒鐘，待分層后，取上層澄清的異丁醇液約10ml，置熒光計測定池內(nèi)，測定其熒光強度(熒光計的輸入和輸出的最大波長分別為365nm和435nm)。三、含量測定計算A和S分別為供試品溶液和對照品溶液側(cè)得的平均熒光讀數(shù);b和d分別為其相應(yīng)的空白讀數(shù);0.2為對照品溶液的濃度ug/ml);5為測定時對照品溶液的取樣體積(ml)。52 . 0dSbAml5數(shù)的供試品溶液中維生素gB1三、含量測定2.方法VitB+ NaOH + 鐵氰化鉀鐵氰化鉀 + 異丁醇異丁醇VitB+ NaOH + 異丁醇異丁醇對照液VitB+ NaOH + 鐵氰化鉀鐵氰化鉀 + 異丁醇異丁醇VitB+ NaOH + 異丁醇異丁醇供試液SdAb52 . 0dSbAml5數(shù)的供試品溶液中維生素gB1三、含量測定討論(1)硫色素反應(yīng)為維生素Bl的專屬反應(yīng)，雖非定量完成，促在一定條件下形成的硫色素與維生素Bl濃度成正比，且回收恒定。故可用于維生素Bl及其制劑的含量測定。(2)本法為維生素B