生物化學(xué)4抗體制藥

1、第四章 抗體制藥4.1 概述4.2 單克隆抗體4.3 基因工程抗體4.4 多功能抗體4.5 抗體庫技術(shù)4.6 抗體診斷試劑4.7 抗體治療藥物 4.1 概述 抗體（抗體（antibody）： 能與相應(yīng)能與相應(yīng)抗原抗原特異性結(jié)合的免疫球蛋白特異性結(jié)合的免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）。）。 抗體通過以下途徑抗體通過以下途徑中和中和和和除去除去有害物質(zhì)：有害物質(zhì)：n直接使抗原失去活性直接使抗原失去活性n促使免疫效應(yīng)細(xì)胞將其吞噬并加以破壞促使免疫效應(yīng)細(xì)胞將其吞噬并加以破壞n使抗原表面弱化而易于受補(bǔ)體破壞使抗原表面弱化而易于受補(bǔ)體破壞結(jié)晶片段結(jié)晶片段Fragment crystalli

2、zableIgM, IgG, IgA, IgD, IgE抗原結(jié)合片段抗原結(jié)合片段fragment of antigen binding110aa 抗體研究的抗體研究的3 3個階段：個階段： 1 1、多克隆抗體、多克隆抗體n含針對多個不同抗原決定簇的含針對多個不同抗原決定簇的不同抗體不同抗體n不同淋巴細(xì)胞產(chǎn)生、針對同一不同淋巴細(xì)胞產(chǎn)生、針對同一抗原區(qū)存在多種抗體抗原區(qū)存在多種抗體 中和外源性毒素（蛇毒、白喉毒中和外源性毒素（蛇毒、白喉毒素）素） 非特異性交叉反應(yīng)非特異性交叉反應(yīng)不能應(yīng)用腫不能應(yīng)用腫瘤和其他疾病治療。瘤和其他疾病治療。 2 2、單克隆抗體（、單克隆抗體（ monoclonal an

3、tibody ，McAbMcAb）n僅識別單一抗原決定簇僅識別單一抗原決定簇n由同一細(xì)胞產(chǎn)生由同一細(xì)胞產(chǎn)生 高度特異性、均一性、來源穩(wěn)定可高度特異性、均一性、來源穩(wěn)定可大量生產(chǎn)。大量生產(chǎn)。McAb（ monoclonal antibody ）在臨床在臨床上主要用于診斷和治療：上主要用于診斷和治療：n疾病的診斷疾病的診斷 檢測某疾病相關(guān)的抗原（檢測某疾病相關(guān)的抗原（ELISA）n治療治療 抑制器官移植排斥（抗分化抗原抑制器官移植排斥（抗分化抗原CD3 單抗）單抗） 作為藥物載體對腫瘤進(jìn)行定向治療作為藥物載體對腫瘤進(jìn)行定向治療 McAbMcAb 在免疫導(dǎo)向療法中存在的問題（障礙）：在免疫導(dǎo)向療法中

4、存在的問題（障礙）： A、鼠源性，產(chǎn)生人抗鼠抗體（鼠源性，產(chǎn)生人抗鼠抗體（HAMA，human antimouse antibody），），排斥反應(yīng)，半衰期短排斥反應(yīng)，半衰期短，難維難維持有效藥物作用靶組織時間；持有效藥物作用靶組織時間； B、相對分子質(zhì)量過大，難以穿透實體腫瘤組織，達(dá)相對分子質(zhì)量過大，難以穿透實體腫瘤組織，達(dá)不到有效的治療濃度。不到有效的治療濃度。 需要解決的問題需要解決的問題A、降低降低McAb的免疫源性的免疫源性B、降低降低McAb的相對分子質(zhì)量的相對分子質(zhì)量3、基因工程抗體、基因工程抗體 人源化抗體人源化抗體（嵌合抗體，（嵌合抗體，chimeric antibody；改

5、形抗改形抗體，體，reshaping antibody；等）等） 基因工程抗體片斷基因工程抗體片斷（單鏈抗體，（單鏈抗體，scFv，single chain antibody；單域抗體單域抗體VH或或VL等）等） 抗體片斷只保留了與抗原特異結(jié)合的能力，抗體片斷只保留了與抗原特異結(jié)合的能力，F(xiàn)c片斷片斷所具有的所具有的補(bǔ)體激活、免疫調(diào)理補(bǔ)體激活、免疫調(diào)理等各種生物功能喪失。等各種生物功能喪失。 4.2 單克隆抗體 McAb是將抗體產(chǎn)生細(xì)胞與具有無限增殖能力的骨髓瘤細(xì)胞融合，通過有限稀釋法及克隆化使雜交瘤細(xì)胞成為純一的單克隆細(xì)胞系而產(chǎn)生的抗體。一、抗原與動物免疫一、抗原與動物免疫 抗原：抗原：種類

6、上無限制（種類上無限制（純化分子、病毒、細(xì)菌、細(xì)胞等純化分子、病毒、細(xì)菌、細(xì)胞等） 純度無絕對要求（純度無絕對要求（盡可能高純度抗原盡可能高純度抗原） 動物：動物： 骨髓瘤細(xì)胞系同品系動物（骨髓瘤細(xì)胞系同品系動物（BALB/c小鼠和小鼠和Lou大鼠大鼠） 免疫方法：免疫方法：體內(nèi)免疫體內(nèi)免疫 皮下、肌肉及腹腔免疫皮下、肌肉及腹腔免疫 顆粒性抗原（無需佐劑）顆粒性抗原（無需佐劑） 可溶性抗原（加佐劑）可溶性抗原（加佐劑） 脾內(nèi)免疫脾內(nèi)免疫 手術(shù)暴露脾臟，直接注入手術(shù)暴露脾臟，直接注入 來源有限、昂貴抗原來源有限、昂貴抗原 免疫效果差免疫效果差體外免疫體外免疫 從脾臟或外周血中分離淋巴細(xì)胞，加入抗

7、原共從脾臟或外周血中分離淋巴細(xì)胞，加入抗原共培養(yǎng)培養(yǎng)45天。天。 二、二、 細(xì)胞融合與雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng)細(xì)胞融合與雜交瘤細(xì)胞的選擇培養(yǎng) 骨髓瘤細(xì)胞：骨髓瘤細(xì)胞： 自身自身不合成不合成或或不分泌不分泌任何免疫球蛋白分子或片斷。任何免疫球蛋白分子或片斷。 HGPRT-（次黃嘌呤（次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶） 融合過程：融合過程： 取脾細(xì)胞（取脾細(xì)胞（1*108）與骨髓瘤細(xì)胞（）與骨髓瘤細(xì)胞（2*1073*107）進(jìn)行混合，在進(jìn)行混合，在PEG作用下誘導(dǎo)它們?nèi)诤?，時間控制在作用下誘導(dǎo)它們?nèi)诤希瑫r間控制在2min以內(nèi)，然后用培養(yǎng)液將以內(nèi)，然后用培養(yǎng)液將PEG融合液緩慢稀釋融合

8、液緩慢稀釋 。 HAT選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng)選擇性培養(yǎng)基培養(yǎng) 動物細(xì)胞核苷酸合成兩條途徑： 全合成途徑、補(bǔ)救合成途徑 氨基喋呤（Aminopterine，A）為四氫葉酸的結(jié)構(gòu)類似物，能夠和二氫葉酸還原酶（能夠?qū)⒍淙~酸還原生成四氫葉酸）發(fā)生不可逆結(jié)合，阻止了四氫葉酸（核苷酸生物合成的甲基供體）的生成。從而阻斷了阻斷GMP、TMP的生物合成。 GMP、TMP的補(bǔ)救合成途徑： GMP可以在HGPRT（次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶）的作用下由次黃嘌呤（hypoxanthine，H）合成。 TMP可以在TK(胸苷激酶)的作用下，由胸腺嘧啶（thymine, T）合成。A:氨基喋呤H:次黃嘌呤 T:胸腺嘧啶

9、抗原免疫小鼠HGPRT- 骨髓瘤細(xì)胞 PEG脾B細(xì)胞HAT培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)B-瘤（2周）B、B-B、瘤、瘤-瘤、B-瘤瘤細(xì)胞無補(bǔ)救途徑，同時全合成途徑被A阻斷，不能存活；B細(xì)胞具有補(bǔ)救途徑但不能長期存活；B-瘤細(xì)胞具有補(bǔ)救途徑又可長期存活三、篩選陽性克隆與克隆化三、篩選陽性克隆與克隆化檢測方法：免疫酶技術(shù)檢測方法：免疫酶技術(shù)（ELISA常用）、免常用）、免疫熒光技術(shù)、放射免疫熒光技術(shù)、放射免疫技術(shù)疫技術(shù)克隆化克隆化 克隆化方法：有限稀釋法和軟瓊脂法。有限稀釋法：雜交瘤細(xì)胞懸液稀釋后，加入到96孔板，使每孔中在理論上只含有一個細(xì)胞。軟瓊脂法：在培養(yǎng)液中加入0.5%的瓊脂糖凝膠，細(xì)胞分裂后形成小球樣

10、團(tuán)塊，培養(yǎng)基為半固體狀態(tài)，可用吸管吸出，移入96孔板培養(yǎng)。 加入飼養(yǎng)細(xì)胞加入飼養(yǎng)細(xì)胞 雜交瘤細(xì)胞染色體不穩(wěn)定，易雜交瘤細(xì)胞染色體不穩(wěn)定，易丟失，反復(fù)克隆化，丟失，反復(fù)克隆化，3 34 4次，次，至各孔至各孔100%100%抗體陽性抗體陽性四四、 雜交瘤細(xì)胞與抗體性狀的鑒定雜交瘤細(xì)胞與抗體性狀的鑒定1、染色體分析、染色體分析 正常鼠的脾細(xì)胞染色體數(shù)：40，全部為端著絲粒。 小鼠骨髓瘤細(xì)胞染色體：SP2/0細(xì)胞為6268，NS-1為5464，大多數(shù)為非整倍性，有中部和亞中部著絲點(diǎn)。 雜交瘤細(xì)胞的染色體數(shù)目： 接近兩親本細(xì)胞染色體數(shù)目的總和，在結(jié)構(gòu)上多數(shù)為端著絲粒染色體外，還應(yīng)出現(xiàn)少數(shù)標(biāo)志染色體。

11、染色體數(shù)目多且較集中的雜交瘤細(xì)胞分泌高效價的抗體；反之，則反2、分泌抗體穩(wěn)定性分析、分泌抗體穩(wěn)定性分析 連續(xù)傳代，檢測上清中抗體濃度；連續(xù)傳代，檢測上清中抗體濃度； 一般需一般需3個月。個月。3、Ig類別及亞類鑒別類別及亞類鑒別 羊或兔抗羊或兔抗Ig不同類或亞類的抗體不同類或亞類的抗體 免疫擴(kuò)散或免疫擴(kuò)散或ELISA。4、親和力測試親和力測試高親和力：體內(nèi)應(yīng)用或檢測試劑高親和力：體內(nèi)應(yīng)用或檢測試劑低親和力：親和層析低親和力：親和層析5、抗原識別位點(diǎn)等其他測試、抗原識別位點(diǎn)等其他測試Ig抗IgG1抗體抗IgG2抗體抗IgA抗體抗IgD抗體抗IgE抗體五、五、單克隆抗體的大量制備單克隆抗體的大量制

12、備1、 動物體內(nèi)誘生法動物體內(nèi)誘生法 520mg/ml抗體抗體 基本程序：基本程序： 接種前接種前12周，同品系鼠腹腔注射周，同品系鼠腹腔注射0.5ml 降植烷或液降植烷或液體石蠟體石蠟，然后注射，然后注射1*106雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞，712d便有腹水生便有腹水生成后注射器抽取，離心去細(xì)胞沉淀即得單抗腹水成后注射器抽取，離心去細(xì)胞沉淀即得單抗腹水，每只每只小鼠可得小鼠可得35ml。 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：操作簡便，比較經(jīng)濟(jì)，抗體濃度高，多操作簡便，比較經(jīng)濟(jì)，抗體濃度高，多用于研究和診斷等一般用途，用于研究和診斷等一般用途，為一般用途單抗制為一般用途單抗制備首選備首選。 缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：混有來自小鼠的非特

13、異性抗體，給純化混有來自小鼠的非特異性抗體，給純化帶來難度。帶來難度。2、體外培養(yǎng)法、體外培養(yǎng)法 懸浮培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)等動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)方式懸浮培養(yǎng)、微載體培養(yǎng)等動物細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)方式 抗體濃度比動物體內(nèi)誘生發(fā)低抗體濃度比動物體內(nèi)誘生發(fā)低 用于防病治病單抗的工業(yè)化生產(chǎn)用于防病治病單抗的工業(yè)化生產(chǎn) 最好采用無血清培養(yǎng)最好采用無血清培養(yǎng)六、六、單克隆抗體的純化單克隆抗體的純化 根據(jù)根據(jù)IgIg的類和亞類以及用途選擇不同的純化方法的類和亞類以及用途選擇不同的純化方法：體外診斷試劑體外診斷試劑IgGIgG類類-沉淀處理沉淀處理+ +親和層析親和層析IgMIgM類類-沉淀處理沉淀處理+ +凝膠過濾凝膠

14、過濾體內(nèi)診斷試劑或治療用藥體內(nèi)診斷試劑或治療用藥-親和層析親和層析+ +陰離子交換層析陰離子交換層析六、六、單克隆抗體的純化單克隆抗體的純化 動物體內(nèi)誘生法制備的動物體內(nèi)誘生法制備的McAbMcAb純化的一般程序：純化的一般程序： （1）澄清和沉淀處理）澄清和沉淀處理： 1.11.9%正辛酸正辛酸等電點(diǎn)沉淀白蛋白（血清中主要雜蛋白等電點(diǎn)沉淀白蛋白（血清中主要雜蛋白), 再再硫酸銨沉淀硫酸銨沉淀。小鼠腹水小鼠腹水 90%以上的單克隆抗體以上的單克隆抗體 離心力為離心力為1000g離心離心5min離心力離心力20000g高速離心高速離心30min0.2um微孔過濾膜微孔過濾膜 50%飽和硫酸銨沉淀

15、飽和硫酸銨沉淀 （2）分離）分離凝膠過濾凝膠過濾 用于IgG和IgM類。 Sephadex G 200 3個峰，分子量最高峰為IgM，另外兩個峰為 IgG。 抗體回收率5080%，純度可達(dá)95%以上。陰離子交換層析陰離子交換層析 適用于IgG類的分離純化。親和層析親和層析 適用于適用于IgG類類 蛋白蛋白A（protein A, 金黃色葡萄球菌）金黃色葡萄球菌） 蛋白蛋白G （protein G，G群鏈球菌）群鏈球菌） IgG的的 Fc片斷片斷 蛋白蛋白A、蛋白蛋白G與不同屬來源的抗體結(jié)合強(qiáng)度不同與不同屬來源的抗體結(jié)合強(qiáng)度不同 pH8.0 結(jié)合在親和柱結(jié)合在親和柱 降低降低pH至至2.53之間

16、進(jìn)行洗脫之間進(jìn)行洗脫細(xì)胞培養(yǎng)液中單抗的濃縮：細(xì)胞培養(yǎng)液中單抗的濃縮：離心或過濾離心或過濾 親和層析親和層析 IgG 超濾超濾 4.3 基因工程抗體互補(bǔ)性決定區(qū)互補(bǔ)性決定區(qū) (CDR，complementarity determinant region)骨架區(qū)（骨架區(qū)（FR, frame region）Vk1一、嵌合抗體（一、嵌合抗體（chimeric antibody） 將鼠源單克隆抗體可變區(qū)和人抗體恒定區(qū)連接起來的抗體。 免疫原性大幅度降低。 保留抗原結(jié)合特異性。構(gòu)建過程：構(gòu)建過程： 提取雜交瘤細(xì)胞提取雜交瘤細(xì)胞mRNA反轉(zhuǎn)錄成反轉(zhuǎn)錄成cDNA cDNA RT-PCR分別擴(kuò)增分別擴(kuò)增 VL、

17、VH 基因基因表達(dá)載體共轉(zhuǎn)表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染骨髓瘤細(xì)胞染骨髓瘤細(xì)胞分別與人的輕鏈、分別與人的輕鏈、重鏈恒定區(qū)基因相連重鏈恒定區(qū)基因相連人人-鼠嵌合鼠嵌合抗體抗體1516aa二、改形抗體（二、改形抗體（reshaping antibody） 抗原結(jié)合區(qū)域：抗原結(jié)合區(qū)域： H和和L鏈鏈 V區(qū)中的互補(bǔ)性決定區(qū)區(qū)中的互補(bǔ)性決定區(qū) (CDR，complementarity determinant region) 將鼠源性單克隆抗體的將鼠源性單克隆抗體的CDR以外序列替換人以外序列替換人 Ig分子中的序列，分子中的序列，可基本消除免疫原性。可基本消除免疫原性。 改型抗體也稱改型抗體也稱CDR移植抗體移植抗體

18、(CDR grafting antibody)。1516aa構(gòu)建過程：構(gòu)建過程： 分別分別RT-PCR克隆克隆雜交瘤細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞H、L鏈可變區(qū)基因并鏈可變區(qū)基因并測序測序設(shè)計改形抗設(shè)計改形抗體可變區(qū)基體可變區(qū)基因因 化學(xué)合成可變區(qū)基化學(xué)合成可變區(qū)基因因表達(dá)載體共轉(zhuǎn)表達(dá)載體共轉(zhuǎn)染骨髓瘤細(xì)胞染骨髓瘤細(xì)胞分別與人的輕鏈、分別與人的輕鏈、重鏈恒定區(qū)基因相連重鏈恒定區(qū)基因相連改形抗體改形抗體1516aa問題：問題： 抗體親和力下降抗體親和力下降原因：原因： 骨架區(qū)（骨架區(qū)（FR, frame region）影響影響CDR的空間結(jié)構(gòu)的空間結(jié)構(gòu)。提高親和力：提高親和力：從已知人可變區(qū)數(shù)據(jù)庫中選擇骨架區(qū)與鼠

19、抗骨架區(qū)同源從已知人可變區(qū)數(shù)據(jù)庫中選擇骨架區(qū)與鼠抗骨架區(qū)同源性最高的序列性最高的序列骨架區(qū)內(nèi)可能影響抗原結(jié)合的氨基酸殘基替換為鼠抗殘骨架區(qū)內(nèi)可能影響抗原結(jié)合的氨基酸殘基替換為鼠抗殘基：基：立體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)、結(jié)構(gòu)預(yù)測、分子設(shè)計推測立體結(jié)構(gòu)數(shù)據(jù)、結(jié)構(gòu)預(yù)測、分子設(shè)計推測合適保留合適保留CDR兩側(cè)骨架區(qū)序列兩側(cè)骨架區(qū)序列 大都涉及大都涉及VL、VH相互作用以及與相互作用以及與CDR接觸接觸選擇性保留可變區(qū)選擇性保留可變區(qū)N末端的數(shù)個氨基酸殘基末端的數(shù)個氨基酸殘基 N末端與末端與CDR表面相距很近，可能參與抗原結(jié)合表面相距很近，可能參與抗原結(jié)合三、鑲面抗體（三、鑲面抗體（resurfacing antibo

20、dy） 抗體可變區(qū)表面暴露的氨基酸殘基位置和數(shù)量非常?？贵w可變區(qū)表面暴露的氨基酸殘基位置和數(shù)量非常保守，不因種屬和型別改變。守，不因種屬和型別改變。 為免疫原性主要來源為免疫原性主要來源 將鼠抗可變區(qū)表面暴露的將鼠抗可變區(qū)表面暴露的骨架區(qū)氨基酸殘基骨架區(qū)氨基酸殘基改為相應(yīng)改為相應(yīng)的人源殘基，使可變區(qū)表面人源化。的人源殘基，使可變區(qū)表面人源化。 消除異源性，保持單抗特異性和親和力。消除異源性，保持單抗特異性和親和力。四、小分子抗體四、小分子抗體nFab片斷（片斷（fragment of antigen binding） 完整輕鏈和重鏈完整輕鏈和重鏈Fd段（單價）段（單價） 完整抗體的完整抗體的1

21、/3 木瓜蛋白酶水解抗體木瓜蛋白酶水解抗體 重組方式生產(chǎn)重組方式生產(chǎn) 抗原特異性、制作簡單抗原特異性、制作簡單 nFv與單鏈抗體（與單鏈抗體（single chain Fv，ScFv ）（1）Fv （可變區(qū)片斷）可變區(qū)片斷） VL、VH非共價鍵結(jié)合（單價）非共價鍵結(jié)合（單價） 完整抗體的完整抗體的1/6 基因工程重組生產(chǎn)基因工程重組生產(chǎn) 易解離易解離（2）ScFv 常用連接肽常用連接肽：(Gly4Ser)3 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：分子量?。ǚ肿恿啃。?/6），免疫原性低），免疫原性低容易進(jìn)入瘤體組織容易進(jìn)入瘤體組織無無Fc，免疫診斷成像清晰，本底低免疫診斷成像清晰，本底低單鏈容易改造單鏈容易改造可采用大

22、腸桿菌大量生產(chǎn)可采用大腸桿菌大量生產(chǎn)缺點(diǎn)：缺點(diǎn)：單價，親和力下降單價，親和力下降半衰期短，體內(nèi)清除過快半衰期短，體內(nèi)清除過快功能單一，僅能與一種抗原結(jié)合功能單一，僅能與一種抗原結(jié)合可形成可形成scFv二聚體和多聚體二聚體和多聚體3. 單域抗體單域抗體 VH或或VL 仍保留了抗原結(jié)合活性仍保留了抗原結(jié)合活性 親和力低親和力低4. 分子識別單位分子識別單位（MRU，molecular recognition unit） 單個單個 CDR區(qū)區(qū) 親和力相當(dāng)?shù)陀H和力相當(dāng)?shù)?.4 多功能抗體一、雙功能抗體一、雙功能抗體(bispecific antibody,BsAb) 具有兩種抗原結(jié)合特性具有兩種抗原結(jié)

23、合特性主要指主要指雙特異性單鏈抗體雙特異性單鏈抗體( bispecific single-chain Fvs, BsFvs)構(gòu)建雙特異性單鏈抗體的方式：構(gòu)建雙特異性單鏈抗體的方式：末端半胱氨酸殘基共價交聯(lián)末端半胱氨酸殘基共價交聯(lián) 大腸桿菌表達(dá)大腸桿菌表達(dá) 鏈間連接肽相連鏈間連接肽相連微型抗體微型抗體 利用專門的二聚化結(jié)構(gòu)域?qū)衫脤ｉT的二聚化結(jié)構(gòu)域?qū)蓅cFv連接成異二聚體連接成異二聚體 亮氨酸拉鏈亮氨酸拉鏈（a螺旋每兩圈螺旋每兩圈7個氨基酸出現(xiàn)一個亮氨酸，位于同一側(cè)）個氨基酸出現(xiàn)一個亮氨酸，位于同一側(cè)） 轉(zhuǎn)錄因子轉(zhuǎn)錄因子Fos和和Jun蛋白中含亮氨酸拉鏈，形成穩(wěn)定蛋白中含亮氨酸拉鏈，形成穩(wěn)定

24、Fos-Jun二聚體二聚體 其他二聚體結(jié)構(gòu)：其他二聚體結(jié)構(gòu)：螺旋螺旋-轉(zhuǎn)角轉(zhuǎn)角-螺旋螺旋等等雙體形式雙體形式 短連接肽（短連接肽（312aa）: 同一同一scFv分子內(nèi)分子內(nèi)VH和和VL內(nèi)不能內(nèi)不能配對，只能和另一分子配對，只能和另一分子VH和和VL配對，形成雙體分子。配對，形成雙體分子。雙特異性抗體的應(yīng)用：雙特異性抗體的應(yīng)用：在免疫診斷中應(yīng)用在免疫診斷中應(yīng)用 兩兩 抗原結(jié)合位點(diǎn)分別設(shè)計為針對靶抗原和酶分子抗原結(jié)合位點(diǎn)分別設(shè)計為針對靶抗原和酶分子 可取代酶標(biāo)抗體可取代酶標(biāo)抗體 優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： 不需要標(biāo)記抗體，避免化學(xué)交聯(lián)抗體和酶對蛋白的損傷，生物活不需要標(biāo)記抗體，避免化學(xué)交聯(lián)抗體和酶對蛋白的損傷

25、，生物活性高，可大量制備，應(yīng)用方便。性高，可大量制備，應(yīng)用方便。 例（肝癌等癌癥診斷）：例（肝癌等癌癥診斷）： 抗辣根過氧化物酶抗辣根過氧化物酶(HRP)-抗甲胎蛋白（抗甲胎蛋白（AFP）雙特異性抗體雙特異性抗體ELISA 檢測檢測AFP最低濃度最低濃度5ng/mL在腫瘤放射免疫顯像中應(yīng)用在腫瘤放射免疫顯像中應(yīng)用 一端針對腫瘤細(xì)胞表面的抗原一端針對腫瘤細(xì)胞表面的抗原 一端能與帶放射性核素的半抗原結(jié)合一端能與帶放射性核素的半抗原結(jié)合 二次導(dǎo)向：二次導(dǎo)向： 先注入雙特異性抗體定位腫瘤，一定時間后游離抗體被清除先注入雙特異性抗體定位腫瘤，一定時間后游離抗體被清除 注入放射性核素的半抗原，定位于腫瘤細(xì)

26、胞注入放射性核素的半抗原，定位于腫瘤細(xì)胞 與常規(guī)放射免疫顯像比，可提高清晰度和靈敏度與常規(guī)放射免疫顯像比，可提高清晰度和靈敏度雙特異性抗體介導(dǎo)的藥物殺傷效應(yīng)雙特異性抗體介導(dǎo)的藥物殺傷效應(yīng) 常規(guī)腫瘤導(dǎo)向：常規(guī)腫瘤導(dǎo)向： 單抗與化療藥物、毒素或放射性核素偶聯(lián)單抗與化療藥物、毒素或放射性核素偶聯(lián) 導(dǎo)致抗體或偶聯(lián)藥物失活導(dǎo)致抗體或偶聯(lián)藥物失活 雙特異性抗體雙特異性抗體 很好避免這點(diǎn)很好避免這點(diǎn) 雙特異性抗體介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷效應(yīng)雙特異性抗體介導(dǎo)的細(xì)胞殺傷效應(yīng) 一端針對腫瘤細(xì)胞表面的抗原一端針對腫瘤細(xì)胞表面的抗原 一端針對免疫活性細(xì)胞表面的效應(yīng)分子，活化該細(xì)胞一端針對免疫活性細(xì)胞表面的效應(yīng)分子，活化該細(xì)胞

27、二、多功能抗體二、多功能抗體 將將scFv鏈內(nèi)連接肽從鏈內(nèi)連接肽從12aa減少減少0aa，可形成二聚體、三可形成二聚體、三聚體、四聚體等。聚體、四聚體等。分子量比分子量比scFv大，克服大，克服scFv清除速度過快的缺點(diǎn)清除速度過快的缺點(diǎn) 多價，親和力增強(qiáng)多價，親和力增強(qiáng) 成功報道的不多成功報道的不多 三、抗體融合蛋白三、抗體融合蛋白 將目的蛋白基因與抗體或抗體部分片斷基因相連表達(dá)出來的重組蛋將目的蛋白基因與抗體或抗體部分片斷基因相連表達(dá)出來的重組蛋白。白。 目的蛋白：目的蛋白： 細(xì)胞因子、受體、酶、配體等。細(xì)胞因子、受體、酶、配體等。 目的蛋白與抗體或抗體可變區(qū)片斷（目的蛋白與抗體或抗體可變

28、區(qū)片斷（ scFv 、 Fab等等）融合）融合 利用抗體的特異性結(jié)合，將生物活性靶向至特定部位利用抗體的特異性結(jié)合，將生物活性靶向至特定部位 重組免疫毒素：重組免疫毒素：蛋白毒素（蓖麻毒素、白喉毒素等蛋白毒素（蓖麻毒素、白喉毒素等)-抗體片斷抗體片斷 抗體抗體-細(xì)胞因子細(xì)胞因子 酶酶-抗體抗體 ：抗體靶向的酶前體藥物治療（抗體靶向的酶前體藥物治療（antibody directed enzyme prodrug therapy，ADEPT） 抗體、酶、前體藥物抗體、酶、前體藥物 前體藥物藥物 目的蛋白與抗體恒定區(qū)片斷目的蛋白與抗體恒定區(qū)片斷（Fc）融合）融合 Fc片斷作用：片斷作用：增加蛋白的

29、半衰期增加蛋白的半衰期可利用可利用protein A進(jìn)行親和層析進(jìn)行親和層析Fc具有補(bǔ)體激活、抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用等生物活性具有補(bǔ)體激活、抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用等生物活性CD4-Ig：CD4-Fcr HIV病毒表面糖結(jié)合病毒表面糖結(jié)合CTLA4-Ig: CTLA4的胞外區(qū)的胞外區(qū)- Fcr (細(xì)胞毒細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞抗原淋巴細(xì)胞抗原4) CTLA4-Ig: CTLA4(細(xì)胞毒細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞抗原淋巴細(xì)胞抗原4)的胞外區(qū)的胞外區(qū)- Fcr 抑制器官移植的免疫排斥反應(yīng)抑制器官移植的免疫排斥反應(yīng) 與與B7分子結(jié)合分子結(jié)合, 阻斷阻斷T細(xì)胞活化的第二信號細(xì)胞活化的第二信號 Fc 有利于有利

30、于Protein A純化，純化，CTLA4 為免疫球蛋白超家族成員為免疫球蛋白超家族成員,胞胞外段與外段與Ig Fc段結(jié)合后能較好維持分子完整性和空間結(jié)。段結(jié)合后能較好維持分子完整性和空間結(jié)。T淋巴細(xì)胞CD28CTLA-4B7CTLA4-Ig4.5 抗體庫技術(shù) 早期用于構(gòu)建基因工程抗體的抗體基因來源于早期用于構(gòu)建基因工程抗體的抗體基因來源于雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞為鼠源且要經(jīng)過雜交瘤細(xì)胞，雜交瘤細(xì)胞為鼠源且要經(jīng)過動物免疫動物免疫、細(xì)胞融合、篩選、細(xì)胞融合、篩選復(fù)雜過程，獲得的抗體基因還需復(fù)雜過程，獲得的抗體基因還需進(jìn)行改造進(jìn)行改造。 20世紀(jì)世紀(jì)90年代，產(chǎn)生抗體庫技術(shù)。年代，產(chǎn)生抗體庫技術(shù)。

31、兩大突破：兩大突破：PCR出現(xiàn)和發(fā)展，使得一套引物可擴(kuò)增全套免疫球出現(xiàn)和發(fā)展，使得一套引物可擴(kuò)增全套免疫球蛋白可變區(qū)基因蛋白可變區(qū)基因利用大腸桿菌成功表達(dá)出具有抗原結(jié)合功能的抗體利用大腸桿菌成功表達(dá)出具有抗原結(jié)合功能的抗體分子片斷分子片斷 抗體庫（抗體庫（antibody library）技術(shù)：技術(shù)： 克隆全套抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)基因，重組到特克隆全套抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)基因，重組到特定原核表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌表達(dá)有功能的抗定原核表達(dá)載體中，轉(zhuǎn)化大腸桿菌表達(dá)有功能的抗體分子片斷，通過親和篩選得到特異性抗體可變區(qū)體分子片斷，通過親和篩選得到特異性抗體可變區(qū)基因的技術(shù)。基因的技術(shù)。 經(jīng)歷了經(jīng)歷

32、了組合抗體庫、噬菌體抗體庫、核糖體展示組合抗體庫、噬菌體抗體庫、核糖體展示抗體庫抗體庫3個階段個階段。 噬菌體抗體庫噬菌體抗體庫發(fā)展最成熟、應(yīng)用最廣泛。發(fā)展最成熟、應(yīng)用最廣泛。 噬菌體抗體庫噬菌體抗體庫技術(shù)是在技術(shù)是在噬菌體展噬菌體展示（示（phage display）基礎(chǔ)建立的?；A(chǔ)建立的。 絲狀噬菌體（絲狀噬菌體（M13、fd、f1） P3、P8 N端融合端融合 P3展示系統(tǒng)（展示系統(tǒng)（展示數(shù)百氨基酸，展示數(shù)百氨基酸，適合篩選高親和力配體適合篩選高親和力配體） P8展示系統(tǒng)展示系統(tǒng) 外源基因外源基因插入在特殊的質(zhì)粒，即插入在特殊的質(zhì)粒，即噬噬菌粒菌粒上，噬菌粒含上，噬菌粒含質(zhì)粒和噬菌體的復(fù)

33、制質(zhì)粒和噬菌體的復(fù)制起始點(diǎn)起始點(diǎn)，但需要輔助噬菌體提供產(chǎn)生單，但需要輔助噬菌體提供產(chǎn)生單鏈所必需的蛋白。鏈所必需的蛋白。 噬菌體的繁殖需要噬菌體的繁殖需要野生型野生型P3、P8蛋蛋白白，也由輔助噬菌體提供，野生型的，也由輔助噬菌體提供，野生型的P3(或或P8蛋白蛋白)和和P3融合蛋白融合蛋白(或或P8融合蛋白融合蛋白)共同組裝到噬菌體顆粒的表面。共同組裝到噬菌體顆粒的表面。 噬菌體顆粒中單鏈?zhǔn)删w顆粒中單鏈DNA主要來自于主要來自于帶帶外源基因的噬菌粒外源基因的噬菌粒。外源基因噬菌體復(fù)制子質(zhì)粒復(fù)制子有缺陷的噬菌體復(fù)制子P3、P8、P5等蛋白輔助噬菌體P3外源蛋白融合蛋白噬菌體抗體庫的構(gòu)建：噬菌

34、體抗體庫的構(gòu)建：擴(kuò)增全套抗體可變區(qū)基因擴(kuò)增全套抗體可變區(qū)基因 從人外周血獲取從人外周血獲取B細(xì)胞，提取細(xì)胞，提取B細(xì)胞細(xì)胞mRNA，RT-PCR擴(kuò)增全套抗體可變區(qū)基因擴(kuò)增全套抗體可變區(qū)基因構(gòu)建合適的噬菌體表面展示載體構(gòu)建合適的噬菌體表面展示載體 Fab抗體庫展示載體抗體庫展示載體 scFv抗體庫展示載體抗體庫展示載體轉(zhuǎn)化大腸桿菌轉(zhuǎn)化大腸桿菌Fab抗體庫展示載體抗體庫展示載體pComb3 周質(zhì)腔表達(dá)周質(zhì)腔表達(dá)P3scFv抗體庫展示載體抗體庫展示載體pHEN2 周質(zhì)腔表達(dá)周質(zhì)腔表達(dá)琥珀型終止密碼子琥珀型終止密碼子TAG 琥珀突變琥珀突變 （supE，編碼琥珀突變編碼琥珀突變 型型tRNA)抑制菌株

35、抑制菌株 谷氨酸谷氨酸噬菌體抗體庫的篩選：噬菌體抗體庫的篩選：9天可完成天可完成3次篩選次篩選 對目的克隆進(jìn)行表達(dá)和檢測對目的克隆進(jìn)行表達(dá)和檢測 噬菌體抗體庫技術(shù)的特點(diǎn)：噬菌體抗體庫技術(shù)的特點(diǎn)：能包含能包含B B細(xì)胞全部克隆，庫容量大，可篩選到各種抗體細(xì)胞全部克隆，庫容量大，可篩選到各種抗體避開了人工免疫和雜交瘤技術(shù)，直接獲得抗體基因避開了人工免疫和雜交瘤技術(shù)，直接獲得抗體基因可獲得高親和力的人源化抗體可獲得高親和力的人源化抗體篩選得到的抗體更易于在大腸桿菌中表達(dá)篩選得到的抗體更易于在大腸桿菌中表達(dá) 噬菌體抗體庫為抗體工程發(fā)展的一個里程碑。噬菌體抗體庫為抗體工程發(fā)展的一個里程碑。 成功篩選出大

36、量抗體，有些已經(jīng)進(jìn)入臨床實驗階段成功篩選出大量抗體，有些已經(jīng)進(jìn)入臨床實驗階段 噬菌體抗體庫還可用于抗體分子定向進(jìn)化的篩選噬菌體抗體庫還可用于抗體分子定向進(jìn)化的篩選 新型抗體庫技術(shù)：新型抗體庫技術(shù)： 選擇性感染噬菌體展示抗體庫技術(shù)選擇性感染噬菌體展示抗體庫技術(shù) 核糖體展示抗體庫技術(shù)核糖體展示抗體庫技術(shù)4.6 抗體診斷試劑 抗體診斷藥物基本分為三類：抗體診斷藥物基本分為三類：n血清學(xué)鑒定用的抗體試劑血清學(xué)鑒定用的抗體試劑n免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體試劑免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體試劑n體內(nèi)導(dǎo)向診斷藥物體內(nèi)導(dǎo)向診斷藥物 一、血清學(xué)鑒定用的抗體試劑一、血清學(xué)鑒定用的抗體試劑 血清學(xué)鑒定：血清學(xué)鑒定： 用已知抗體來鑒

37、定未知的抗原型，主要用于疾病的病用已知抗體來鑒定未知的抗原型，主要用于疾病的病原菌診斷和血型鑒定。原菌診斷和血型鑒定。 基本原理：基本原理： 抗體與抗原之間的凝集反應(yīng)抗體與抗原之間的凝集反應(yīng)（1）鑒定病原菌用的抗體試劑）鑒定病原菌用的抗體試劑 診斷血清診斷血清162種（2）乙型肝炎病毒表面抗原（）乙型肝炎病毒表面抗原（HBsAg）的的反向被動血凝診斷反向被動血凝診斷試劑試劑 靈敏度與酶免疫測定法相同，操作簡便快速。靈敏度與酶免疫測定法相同，操作簡便快速。（3）妊娠診斷試劑）妊娠診斷試劑 檢測血液和尿液中的檢測血液和尿液中的絨毛膜促性腺激素絨毛膜促性腺激素HCG。（4）抗）抗ABO血型系統(tǒng)血清血

38、型系統(tǒng)血清 紅細(xì)胞表面存在紅細(xì)胞表面存在A或或B凝集原，鑒定血型凝集原，鑒定血型二、二、免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體類試劑免疫標(biāo)記技術(shù)用的抗體類試劑n熒光抗體診斷試劑熒光抗體診斷試劑n酶免疫測定用抗體診斷試劑酶免疫測定用抗體診斷試劑n放射免疫用抗體診斷試劑放射免疫用抗體診斷試劑（1）熒光抗體診斷試劑熒光抗體診斷試劑 熒光抗體熒光抗體: 熒光色素?zé)晒馍? 如如異硫氰酸熒光素（異硫氰酸熒光素（FITC）、）、羅丹羅丹明（明（RB200）、）、藻紅素（藻紅素（PE）等標(biāo)記抗體蛋白而成等標(biāo)記抗體蛋白而成。 主要用于組織內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的主要用于組織內(nèi)或細(xì)胞內(nèi)抗原物質(zhì)的定位測定定位測定： 用熒光抗體浸染含有

39、抗原物質(zhì)的用熒光抗體浸染含有抗原物質(zhì)的組織切片或細(xì)胞組織切片或細(xì)胞，熒光抗體與抗原結(jié)合，在熒光抗體與抗原結(jié)合，在熒光顯微鏡熒光顯微鏡下成為發(fā)光的可視下成為發(fā)光的可視物，達(dá)到診斷和定位目的。物，達(dá)到診斷和定位目的。直接法直接法: 熒光抗體直接與抗原反應(yīng)，抗原鑒定、定位和分布。熒光抗體直接與抗原反應(yīng)，抗原鑒定、定位和分布。 需要制備所需檢測抗原的相應(yīng)抗體。需要制備所需檢測抗原的相應(yīng)抗體。 熒光熒光CD單克隆抗體：單克隆抗體： 白細(xì)胞分化抗原（表面標(biāo)志）：白細(xì)胞分化抗原（表面標(biāo)志）： CD（分化群，分化群，cluster of differentiation），），按發(fā)現(xiàn)先后編號（按發(fā)現(xiàn)先后編號（1

40、247） 相應(yīng)的相應(yīng)的CD抗原的抗原的熒光標(biāo)記單克隆抗體熒光標(biāo)記單克隆抗體用于細(xì)胞的鑒定、分離。用于細(xì)胞的鑒定、分離。間接法間接法 標(biāo)記標(biāo)記抗免疫球蛋白抗體抗免疫球蛋白抗體（二抗、抗抗體）（二抗、抗抗體） 標(biāo)記一種抗體，可檢測多種抗原抗體系統(tǒng)標(biāo)記一種抗體，可檢測多種抗原抗體系統(tǒng)，靈敏度比直接法高靈敏度比直接法高510倍。倍。 根據(jù)一抗不同，二抗根據(jù)一抗不同，二抗 種類不同：羊抗兔抗體、羊抗人抗體等。種類不同：羊抗兔抗體、羊抗人抗體等。（2）酶免疫測定用抗體診斷試劑酶免疫測定用抗體診斷試劑 用酶標(biāo)記抗體來檢測抗原或抗體，酶的顯色反應(yīng)。用酶標(biāo)記抗體來檢測抗原或抗體，酶的顯色反應(yīng)。 常用酶：常用酶：

41、辣根過氧化物酶辣根過氧化物酶( (HRP)HRP)、堿性磷酸酶堿性磷酸酶( (AP)AP)等。等。 標(biāo)記抗體：標(biāo)記抗體：一抗或二抗一抗或二抗 分類：分類：免疫酶染色（組化法）免疫酶染色（組化法）和和酶免疫測定酶免疫測定 免疫酶染色免疫酶染色（組化法）（組化法） 用于組織內(nèi)抗原物質(zhì)的用于組織內(nèi)抗原物質(zhì)的定位測定定位測定。 酶標(biāo)（酶標(biāo)（辣根過氧化物酶，辣根過氧化物酶，HRPHRP ）抗體與抗原發(fā)生特異）抗體與抗原發(fā)生特異性結(jié)合，性結(jié)合， HRPHRP催化底物催化底物二氨基聯(lián)苯胺（二氨基聯(lián)苯胺（DABDAB）生成棕褐生成棕褐色沉淀物色沉淀物, ,標(biāo)本的抗原部位顯色，光學(xué)顯微鏡下觀察。標(biāo)本的抗原部位顯

42、色，光學(xué)顯微鏡下觀察。酶免疫測定（酶免疫測定（定量測定定量測定溶液溶液中抗原中抗原或抗體濃度或抗體濃度） 抗原抗體結(jié)合后，抗原抗體結(jié)合后，分離結(jié)合物分離結(jié)合物，利用所標(biāo)記酶將底物轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)利用所標(biāo)記酶將底物轉(zhuǎn)化為有色產(chǎn)物，使用分光光度進(jìn)行測定。物，使用分光光度進(jìn)行測定。 ELISA（enzyme-linked immunosorbent assay, 酶聯(lián)免疫吸酶聯(lián)免疫吸附試驗附試驗）：）： 抗原或抗體吸附于聚苯乙烯塑料表面，抗原抗體在塑料抗原或抗體吸附于聚苯乙烯塑料表面，抗原抗體在塑料表面進(jìn)行表面進(jìn)行, 非結(jié)合抗原或抗體容易洗去，簡化抗原抗體結(jié)合非結(jié)合抗原或抗體容易洗去，簡化抗原抗體結(jié)合物

43、的分離。物的分離。 ELISA靈敏度靈敏度ng/ml 基本方法：基本方法：夾心法、間接法、競爭法夾心法、間接法、競爭法。 間接法（測抗體）間接法（測抗體） 夾心法（測多價抗原）夾心法（測多價抗原）競爭法競爭法(可測單價抗原可測單價抗原)生物素生物素-親和素放大親和素放大ELISA (biotin-avidin system-ELISA，BAS-ELISA)生物素（維生素生物素（維生素H）親和素（親和素（avidin，堿性糖蛋白，雞蛋清提?。A性糖蛋白，雞蛋清提?。╂溇H和素（鏈菌親和素（streptavidin，鏈霉菌培養(yǎng)液提純）鏈霉菌培養(yǎng)液提純）親和力親和力: biotin-avidin 比

44、抗原比抗原-抗體高抗體高1萬倍萬倍采用采用生物素化抗體生物素化抗體替代替代酶標(biāo)抗體酶標(biāo)抗體一個抗體可結(jié)合一個抗體可結(jié)合90個生物素個生物素一個親和素結(jié)合一個親和素結(jié)合4個個生物素生物素生物素或親和素與生物素或親和素與酶偶聯(lián)酶偶聯(lián)靈敏度靈敏度 pg/ml HBsAg(乙型肝炎表面抗原乙型肝炎表面抗原)酶標(biāo)診斷試劑酶標(biāo)診斷試劑 HBeAg(乙型肝炎乙型肝炎e抗原抗原)酶標(biāo)診斷試劑酶標(biāo)診斷試劑 HAVAg(甲型肝炎病毒抗原甲型肝炎病毒抗原)酶標(biāo)診斷試劑酶標(biāo)診斷試劑 測定測定HIV（人免疫缺陷病毒）抗原的酶標(biāo)診斷試劑人免疫缺陷病毒）抗原的酶標(biāo)診斷試劑 AFP（甲胎蛋白）酶標(biāo)診斷試劑甲胎蛋白）酶標(biāo)診斷試

45、劑 CEA（癌胚抗原）酶標(biāo)診斷試劑癌胚抗原）酶標(biāo)診斷試劑（3）放射免疫用抗體診斷試劑放射免疫用抗體診斷試劑 抗體或抗原采用同位素標(biāo)記，通過測定放射量測抗體或抗原采用同位素標(biāo)記，通過測定放射量測定濃度。定濃度。 常用常用125I 測定方法與測定方法與ELISAELISA相同（相同（夾心法、間接法、競爭夾心法、間接法、競爭法法），檢測方法不同），檢測方法不同 靈敏度高靈敏度高pg/mlng/ml放射性對人有害，需防護(hù)措施放射性對人有害，需防護(hù)措施標(biāo)記物半衰期短標(biāo)記物半衰期短 檢測儀器昂貴檢測儀器昂貴 三、導(dǎo)向診斷藥物三、導(dǎo)向診斷藥物 腫瘤放射免疫顯像腫瘤放射免疫顯像 抗腫瘤單抗（抗腫瘤單抗（Ab）

46、與與 二乙基三胺五乙酸（二乙基三胺五乙酸（DTPA）偶聯(lián)成偶聯(lián)成Ab-DTPA Ab-DTPA注入體內(nèi)與腫瘤結(jié)合（注入體內(nèi)與腫瘤結(jié)合（3d） 注入注入In-113 (銦銦) ，與，與DTPA絡(luò)合顯像（絡(luò)合顯像（2h）4.7 抗體治療藥物抗體治療藥物 一、抗體一、抗體封閉類抗體封閉類抗體 與抗原結(jié)合，封閉抗原生物活性，阻斷其與其他蛋與抗原結(jié)合，封閉抗原生物活性，阻斷其與其他蛋白或配基作用。白或配基作用。 如：如： 封閉各種細(xì)胞因子，破壞信號傳導(dǎo)通路封閉各種細(xì)胞因子，破壞信號傳導(dǎo)通路 效應(yīng)殺傷類抗體效應(yīng)殺傷類抗體 與抗原結(jié)合后，通過與抗原結(jié)合后，通過Fc片斷介導(dǎo)的生物學(xué)功能清除片斷介導(dǎo)的生物學(xué)功能清除或殺傷抗原物質(zhì)（如腫瘤細(xì)胞、自身免疫細(xì)胞）或殺傷抗原物質(zhì)（如腫瘤細(xì)胞、自身免疫細(xì)胞） 二、以抗體為載體的導(dǎo)向治療藥物二、以抗體為載體的導(dǎo)向治療藥物導(dǎo)向載體：導(dǎo)向載體： 抗體、小分子抗體片斷抗體、小分子抗體片斷如如scFv，F(xiàn)ab效應(yīng)分子：效應(yīng)分子：放射性同位素、化學(xué)藥物（放射性同位素、化學(xué)藥物（化學(xué)偶聯(lián)化學(xué)偶聯(lián)） 細(xì)胞因子、毒素、酶（細(xì)胞因子、毒素、酶（化學(xué)偶聯(lián)或融合蛋白化學(xué)偶聯(lián)或融合蛋白）1. 放射性同位素標(biāo)記抗體藥物放射性同位素標(biāo)記抗體藥物 I-131, Re-186或或188