土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)上課用

1、選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基以尿素為以尿素為唯一氮源唯一氮源的培養(yǎng)基的培養(yǎng)基牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培養(yǎng)基培養(yǎng)基 是是分離能分分離能分解尿素的解尿素的細菌細菌判斷該判斷該培養(yǎng)基培養(yǎng)基有無選有無選擇性擇性實驗組實驗組對照組對照組培養(yǎng)基類型培養(yǎng)基類型是否是否接種接種目的目的結(jié)果結(jié)果只生長能只生長能分解尿素分解尿素的細菌的細菌生長多種生長多種微生物微生物是是欄目鏈接欄目鏈接用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用需要設(shè)置的對照是的對照是( )A未接種的選擇培養(yǎng)基未接種的選擇培養(yǎng)基B未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基未接種的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基C接種了的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基接種了的

2、牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基D接種了的選擇培養(yǎng)基接種了的選擇培養(yǎng)基C如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？樣品中的菌落數(shù)？ 統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計能統(tǒng)計3個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均值，然后按課本旁欄的公式進行計算值，然后按課本旁欄的公式進行計算教材教材P22實例分析實例分析P22第一同學只涂布了一個平板，第一同學只涂布了一個平板，沒有設(shè)置沒有設(shè)置重復組，因此結(jié)果不具有說服力。重復組，因此結(jié)果不具有說服力。第二位同學考慮到設(shè)置重復組的問題，第二位同學考慮到設(shè)置重復組的問題，涂布了

3、三個平板，但是涂布了三個平板，但是其中其中1個平板的計個平板的計數(shù)結(jié)果與數(shù)結(jié)果與2個相差太遠，說明在操作過程個相差太遠，說明在操作過程中可能出現(xiàn)了錯誤，因此，不能簡單地中可能出現(xiàn)了錯誤，因此，不能簡單地將將3個平板的計數(shù)值用來求平均值個平板的計數(shù)值用來求平均值。設(shè)置對照的方法：設(shè)置對照的方法：空白對照：不給對照組任何處理因素?？瞻讓φ眨翰唤o對照組任何處理因素。條件對照（標準對照）：指給予對照組一種被證明有條件對照（標準對照）：指給予對照組一種被證明有效因素的處理效因素的處理自身對照：對照組和實驗組都在同一研究對象上進行。自身對照：對照組和實驗組都在同一研究對象上進行。相互對照：不單設(shè)對照組，而

4、是幾個實驗組相互對照。相互對照：不單設(shè)對照組，而是幾個實驗組相互對照。將細菌放在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，它會繁殖并形成菌落將細菌放在固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，它會繁殖并形成菌落(如下圖如下圖)。某實驗小組想檢驗兩種抗生素的殺菌作用，。某實驗小組想檢驗兩種抗生素的殺菌作用，下列哪個實驗方案最合適下列哪個實驗方案最合適()C菌落計數(shù)菌落計數(shù)系列稀釋系列稀釋涂布平板與培養(yǎng)涂布平板與培養(yǎng)配制土配制土壤溶液壤溶液根據(jù)圖示根據(jù)圖示27填寫以下實驗流程：填寫以下實驗流程：實驗設(shè)計：實驗設(shè)計：（一）土壤取樣（一）土壤取樣（二）制備培養(yǎng)基（二）制備培養(yǎng)基（三）土壤樣品的稀釋（三）土壤樣品的稀釋（四）取樣涂布（四）取樣涂布（五

5、）微生物的培養(yǎng)與觀察（五）微生物的培養(yǎng)與觀察（八）鑒定（八）鑒定（七）細菌的計數(shù)（七）細菌的計數(shù) 選擇培養(yǎng)基（尿素培養(yǎng)基）選擇培養(yǎng)基（尿素培養(yǎng)基）牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基(作對照作對照) 從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土土3cm3cm左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的左右，再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中。信封中。取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用取土樣用的小鐵鏟和盛土樣的的信封在使用前都要滅菌。前都要滅菌。制備以尿素為唯一氮源的制備以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（作對照）（作對照）稀

6、釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)目的目的細菌細菌10104 4、10105 5、10106 6放線菌放線菌10103 3、10104 4、10105 5真菌真菌10102 2、10103 3、10104 4由于初次實驗，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選由于初次實驗，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為擇了一個較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為10103 310107 7。 由于初次實驗，對于稀釋的范圍沒有把握，因由于初次實驗，對于稀釋的范圍沒有把握，因此選擇了一個較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為此選擇了一個較為寬泛的范圍：稀釋倍數(shù)為10103 310107 7。每個稀釋度下需要。每個稀釋度下需要3

7、3個個選擇培養(yǎng)基，選擇培養(yǎng)基，1 1個牛肉個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，因此共需要膏蛋白胨培養(yǎng)基，因此共需要1515個選擇培養(yǎng)基，個選擇培養(yǎng)基，5 5個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。此外，還需要準備個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。此外，還需要準備8 8個個滅滅菌的試管和菌的試管和1 1個個滅菌的移液管。滅菌的移液管。 為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋為什么分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？尿素的細菌的數(shù)量，選用的稀釋范圍相同嗎？實驗時要實驗時要對培養(yǎng)皿作對培養(yǎng)皿作好標記。注好標記。注明培養(yǎng)基類明

8、培養(yǎng)基類型、培養(yǎng)時型、培養(yǎng)時間、稀釋度、間、稀釋度、培養(yǎng)物等。培養(yǎng)物等。每個稀釋度下需要每個稀釋度下需要3 3個個選擇培養(yǎng)基（作重復組），選擇培養(yǎng)基（作重復組），1 1個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（作對照）個牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（作對照）同種微生物有同種微生物有穩(wěn)定的菌落特穩(wěn)定的菌落特征：形狀，大征：形狀，大小，隆起程度，小，隆起程度，顏色顏色（六）鑒定（六）鑒定：篩選后必鑒定：篩選后必鑒定 鑒別培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基：加入某種指示劑或化學加入某種指示劑或化學藥品，不影響微生物的生存藥品，不影響微生物的生存1 1、酚紅培養(yǎng)基：、酚紅培養(yǎng)基：鑒定分解尿素的細菌。鑒定分解尿素的細菌。原理：原理：脲酶催化尿素分解成

9、氨脲酶催化尿素分解成氨培養(yǎng)培養(yǎng)基堿性增強基堿性增強 酚紅變紅酚紅變紅脲酶陽性脲酶陽性2 2、伊紅、伊紅美藍培養(yǎng)基：美藍培養(yǎng)基：鑒定大腸桿菌鑒定大腸桿菌原理：原理：代謝產(chǎn)物與伊紅代謝產(chǎn)物與伊紅美藍結(jié)合美藍結(jié)合 菌落呈黑色并帶有金屬光澤。菌落呈黑色并帶有金屬光澤。屬鑒別培養(yǎng)基，它并沒有促進大腸桿屬鑒別培養(yǎng)基，它并沒有促進大腸桿菌的生長和抑制其他微生物的生長菌的生長和抑制其他微生物的生長伊紅伊紅美藍培養(yǎng)基美藍培養(yǎng)基是鑒別培養(yǎng)基，可以是鑒別培養(yǎng)基，可以用來檢測自來水中的大腸桿菌是否超標，因用來檢測自來水中的大腸桿菌是否超標，因為的為的代謝產(chǎn)物與伊紅代謝產(chǎn)物與伊紅美藍結(jié)合美藍結(jié)合，使菌落呈，使菌落呈深紫

10、色并帶有金屬光澤深紫色并帶有金屬光澤，使大腸桿菌的菌落，使大腸桿菌的菌落顯示出來，顯示出來，并沒有促進大腸桿菌的生長和抑并沒有促進大腸桿菌的生長和抑制其他微生物的生長。制其他微生物的生長。例如：鑒別大腸桿菌培養(yǎng)基例如：鑒別大腸桿菌培養(yǎng)基大腸桿菌呈黑色中心大腸桿菌呈黑色中心 , ,有或無金屬光澤有或無金屬光澤大腸桿菌在伊紅美藍瓊脂大腸桿菌在伊紅美藍瓊脂(EMB)(EMB)上典型特征上典型特征 （一）培養(yǎng)物（一）培養(yǎng)物( (即培養(yǎng)的目的菌種即培養(yǎng)的目的菌種) )中是否有雜菌污染中是否有雜菌污染? ?以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落以及選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落? ? 對照的培養(yǎng)皿對照的培養(yǎng)皿在培養(yǎng)過程中

11、沒有菌落在培養(yǎng)過程中沒有菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染。 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的菌落數(shù)目明顯大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目大于選擇培養(yǎng)基的數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。篩選出一些菌落。如果學生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計的結(jié)如果學生選取的是同一種土樣，統(tǒng)計的結(jié)果應該接近。如果結(jié)果相差太遠，需要進一步果應該接近。如果結(jié)果相差太遠，需要進一步分析產(chǎn)生差異的原因。分析產(chǎn)生差異的原因。（二）樣品的稀釋操作是否成功（二）樣品的稀釋操作是否成功 如果得到了如果得到了2 2個或個或2 2個以上菌落數(shù)目在個以上菌落數(shù)目在303030

12、0300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進行菌落的計數(shù)。進行菌落的計數(shù)。 （三）重復組的結(jié)果是否一致（三）重復組的結(jié)果是否一致操作實驗組對照組判斷培養(yǎng)基判斷培養(yǎng)基中是否有雜中是否有雜菌污染菌污染判斷選擇培判斷選擇培養(yǎng)基是否具養(yǎng)基是否具有篩選作用有篩選作用選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基接種接種選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基不接不接種種選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基接種接種牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基胨培養(yǎng)基接種接種需將需將未接種的未接種的選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基同同時進行培養(yǎng)時進行培養(yǎng)需設(shè)立牛肉膏蛋需設(shè)立牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基進行白胨培養(yǎng)基進行接種后培養(yǎng)，觀接種后培養(yǎng)，觀察兩種培養(yǎng)基上察兩

13、種培養(yǎng)基上菌落數(shù)目、進行菌落數(shù)目、進行對比得出結(jié)對比得出結(jié)實驗設(shè)計原則實驗設(shè)計原則(1)設(shè)立重復組：設(shè)立重復組：統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)時，要至少涂布三個統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)時，要至少涂布三個平板作重復組，增強實驗結(jié)果的說服力與準確性。平板作重復組，增強實驗結(jié)果的說服力與準確性。(2)設(shè)立兩種對照組：設(shè)立兩種對照組：欄目鏈接欄目鏈接22課后練習課后練習 2.提示：反芻動物的瘤胃中含有大量的微生提示：反芻動物的瘤胃中含有大量的微生物，其中也包括分解尿素的微生物。物，其中也包括分解尿素的微生物。由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接由于瘤胃中的微生物多為厭氧菌，接觸空氣后會死亡，因此分離

14、其中能分解尿觸空氣后會死亡，因此分離其中能分解尿素的微生物除了需要準備素的微生物除了需要準備選擇培養(yǎng)基選擇培養(yǎng)基外，外，還應參照還應參照厭氧菌的培養(yǎng)厭氧菌的培養(yǎng)方法進行實驗設(shè)計。方法進行實驗設(shè)計。11某化工廠的污水池中，含有一種有害的、難以降解的有某化工廠的污水池中，含有一種有害的、難以降解的有機化合物機化合物A。研究人員用化合物。研究人員用化合物A、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元、磷酸鹽、鎂鹽以及微量元素配制的培養(yǎng)基，成功地篩選到了能高效降解化合物素配制的培養(yǎng)基，成功地篩選到了能高效降解化合物A的細的細菌菌(“目的菌目的菌”)。請分析回答下列問題。請分析回答下列問題。(1)培養(yǎng)基中加入化合物培養(yǎng)基中

15、加入化合物A的目的是篩選的目的是篩選_，這種，這種培養(yǎng)基屬于培養(yǎng)基屬于_培養(yǎng)基。培養(yǎng)基。(2)“目的菌目的菌”生長所需的氮源和碳源是來自培養(yǎng)基中的生長所需的氮源和碳源是來自培養(yǎng)基中的_，實驗需要振蕩培養(yǎng)，由此推測，實驗需要振蕩培養(yǎng)，由此推測“目的菌目的菌”的的代謝類型是代謝類型是_。(3)培養(yǎng)若干天后，應選擇培養(yǎng)瓶中化合物培養(yǎng)若干天后，應選擇培養(yǎng)瓶中化合物A含量含量_的培養(yǎng)液，接入新的培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng)，使的培養(yǎng)液，接入新的培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng)，使“目的菌目的菌”的數(shù)量的數(shù)量_。(4)可采用可采用_的方法將的方法將“目的菌目的菌”接種到固體培養(yǎng)接種到固體培養(yǎng)基上，通過基上，通過_法對法對“目的菌目的

16、菌”的數(shù)量進行統(tǒng)計，的數(shù)量進行統(tǒng)計，通常需要對菌落數(shù)為通常需要對菌落數(shù)為_的平板進行計數(shù)。的平板進行計數(shù)。(5)實驗結(jié)束時，使用過的培養(yǎng)基應該進行實驗結(jié)束時，使用過的培養(yǎng)基應該進行_處理處理后，才能倒掉。后，才能倒掉?！澳康木康木边x擇選擇化合物化合物A異養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型減少減少增加增加稀釋涂布平板稀釋涂布平板活菌計數(shù)活菌計數(shù)30300滅菌滅菌 1.1.使用選擇培養(yǎng)基的目的是（使用選擇培養(yǎng)基的目的是（ ） A.A.培養(yǎng)細菌培養(yǎng)細菌 B.B.培養(yǎng)真菌培養(yǎng)真菌 C.C.使需要的微生物大量繁殖使需要的微生物大量繁殖 D.D.表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微生物加以區(qū)別表現(xiàn)某微生物的特定性狀與其他微

17、生物加以區(qū)別2.2.能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是能合成脲酶的微生物所需要的碳源和氮源分別是( )( ) A.COA.CO2 2和和N N2 2 B. B.葡萄糖和葡萄糖和NHNH3 3 C.COC.CO2 2和尿素和尿素 D.D.葡萄糖和尿素葡萄糖和尿素C CD D3.3.下列說法不正確的是（下列說法不正確的是（ ） A.A.科學家從科學家從70708080度熱泉中分離到耐高溫的度熱泉中分離到耐高溫的TaqDNATaqDNA聚聚合酶合酶 B.B.統(tǒng)計某一稀釋度的統(tǒng)計某一稀釋度的5 5個平板的菌落數(shù)依次為個平板的菌落數(shù)依次為M1M1、M2M2、M3M3、M4M4、M5M5，以，以M

18、3M3作為該樣品菌落數(shù)的估計值作為該樣品菌落數(shù)的估計值 C.C.設(shè)置對照實驗的主要目的是排除實驗組中非測試因設(shè)置對照實驗的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度 D.D.同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數(shù)量最大，同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物數(shù)量最大，種類最多。種類最多。4.4.為培養(yǎng)和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養(yǎng)基中為培養(yǎng)和分離出酵母菌并淘汰雜菌，常在培養(yǎng)基中加入（）加入（） A.A.較多的氮源物質(zhì)較多的氮源物質(zhì) B.B.較多的碳源物質(zhì)較多的碳源物質(zhì) C.C.青霉素類藥物青霉素類藥物 D.D.高濃度食鹽高濃度食

19、鹽B BC C（09，寧夏，寧夏，15分）分）（1）在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮）在大腸桿菌培養(yǎng)過程中，除考慮營養(yǎng)條件外，還要考慮_、_和滲透壓等條件。由于該細菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容和滲透壓等條件。由于該細菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡單、變異類型容易選擇、易選擇、_、_等優(yōu)點，因此常作為遺傳學研究的實驗材料。等優(yōu)點，因此常作為遺傳學研究的實驗材料。 （2）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿）在微生物培養(yǎng)操作過程中，為防止雜菌污染，需對培養(yǎng)基和培養(yǎng)皿進行進行_（消毒、滅菌）；操作者的雙手需要進行清洗和（消毒、滅菌）；操作者的雙手需要進行清洗和_；靜止空氣中的細