動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)的基本方法ppt課件

1、第五節(jié)第五節(jié) 動(dòng)物細(xì)胞培育的根本方法動(dòng)物細(xì)胞培育的根本方法一一 細(xì)胞分別細(xì)胞分別1 1 離心分別法離心分別法 用于從含有細(xì)胞的體液如血液、羊水、胸腹用于從含有細(xì)胞的體液如血液、羊水、胸腹水中分別細(xì)胞。普通用水中分別細(xì)胞。普通用8008001000rpm1000rpm離心離心5 510min10min。2 2 消化分別法消化分別法 先從生物體取來(lái)組織塊，將其剪碎，并用消化先從生物體取來(lái)組織塊，將其剪碎，并用消化液將其消化，使組織松散成細(xì)胞懸液，然后用緩沖液將其消化，使組織松散成細(xì)胞懸液，然后用緩沖液洗滌、離心、去除殘留的消化液而獲得所需的細(xì)液洗滌、離心、去除殘留的消化液而獲得所需的細(xì)胞。胞。 常

2、用的消化液有胰蛋白酶、乙二胺四乙酸、胰常用的消化液有胰蛋白酶、乙二胺四乙酸、胰酶檸檬酸鹽、胰酶酶檸檬酸鹽、胰酶EDTAEDTA、膠原酶、鏈霉蛋白酶、膠原酶、鏈霉蛋白酶、木瓜蛋白酶等。木瓜蛋白酶等。二二 細(xì)胞計(jì)數(shù)細(xì)胞計(jì)數(shù)1 1 血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)2 2 自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)器計(jì)數(shù)3 3 結(jié)晶紫染色細(xì)胞核計(jì)數(shù)法結(jié)晶紫染色細(xì)胞核計(jì)數(shù)法4 MTT4 MTT染色計(jì)數(shù)法染色計(jì)數(shù)法三三 細(xì)胞傳代細(xì)胞傳代1 1 懸浮細(xì)胞的傳代懸浮細(xì)胞的傳代 參與一倍或幾倍的生長(zhǎng)液，然后分種兩只或參與一倍或幾倍的生長(zhǎng)液，然后分種兩只或多只培育瓶即可。多只培育瓶即可。2 2 貼壁細(xì)胞的傳代貼壁細(xì)胞的傳代消化前

3、需用肉眼或鏡下察看需消化的細(xì)胞，確認(rèn)細(xì)消化前需用肉眼或鏡下察看需消化的細(xì)胞，確認(rèn)細(xì)胞有無(wú)污染；胞有無(wú)污染；參與消化液量要適當(dāng)，以搖動(dòng)時(shí)能蓋滿(mǎn)單層細(xì)胞為參與消化液量要適當(dāng)，以搖動(dòng)時(shí)能蓋滿(mǎn)單層細(xì)胞為度；度；消化時(shí)間不宜過(guò)久，普通在室溫下靜置消化時(shí)間不宜過(guò)久，普通在室溫下靜置2 25min,5min,當(dāng)當(dāng)見(jiàn)細(xì)胞層呈現(xiàn)麻布樣網(wǎng)孔時(shí)，即可倒去消化液。見(jiàn)細(xì)胞層呈現(xiàn)麻布樣網(wǎng)孔時(shí)，即可倒去消化液。終止消化要先倒去消化液，然后參與有血清的培育終止消化要先倒去消化液，然后參與有血清的培育基。基。已培育過(guò)的瓶子可再次運(yùn)用，但普通不要超越已培育過(guò)的瓶子可再次運(yùn)用，但普通不要超越2 23 3次。次。2 2倍體細(xì)胞培育時(shí)

4、每次傳代必需寫(xiě)上傳代次數(shù)。倍體細(xì)胞培育時(shí)每次傳代必需寫(xiě)上傳代次數(shù)。分種數(shù)量取決于細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞特性，多數(shù)細(xì)胞分分種數(shù)量取決于細(xì)胞數(shù)和細(xì)胞特性，多數(shù)細(xì)胞分種以種以20203030萬(wàn)個(gè)萬(wàn)個(gè)/ml,/ml,每次每次1 1傳傳2 2或或1 1傳傳3 3。傳代后普通每天或隔一天換液，每傳代后普通每天或隔一天換液，每3 35 5天就要傳天就要傳代一次。代一次。四四 細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇細(xì)胞的凍存和復(fù)蘇 將細(xì)胞放入試管內(nèi)，在冰浴條件下參與預(yù)冷將細(xì)胞放入試管內(nèi)，在冰浴條件下參與預(yù)冷的冰凍維護(hù)劑二甲基亞砜的冰凍維護(hù)劑二甲基亞砜+ +山梨醇山梨醇+ +甘油甘油+ +蔗糖。蔗糖。密封試管，繼續(xù)在冰浴中停留密封試管，繼續(xù)在

5、冰浴中停留15min15min。然后試管以。然后試管以1/min1/min的速度冷卻，降到的速度冷卻，降到-40-40，在，在-40-40停留停留2h2h后投入液氮罐后投入液氮罐-196-196。1 1 細(xì)胞的凍存細(xì)胞的凍存2 2 細(xì)胞的復(fù)蘇細(xì)胞的復(fù)蘇復(fù)溫速率復(fù)溫速率復(fù)溫速率是指在細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)溫度升高的速度。復(fù)溫速率是指在細(xì)胞復(fù)蘇時(shí)溫度升高的速度。普通來(lái)說(shuō)復(fù)蘇速度越快越好。普通來(lái)說(shuō)復(fù)蘇速度越快越好。常規(guī)的做法是，在常規(guī)的做法是，在3737水浴中，于水浴中，于1 12min2min內(nèi)完內(nèi)完成復(fù)溫。成復(fù)溫。 動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培育：動(dòng)物細(xì)胞大規(guī)模培育： 在人工條件下設(shè)定在人工條件下設(shè)定pHpH、溫度、溶

6、氧等，、溫度、溶氧等，在細(xì)胞生物反響器在細(xì)胞生物反響器bioreactorbioreactor中高密度大中高密度大量培育動(dòng)物細(xì)胞用于消費(fèi)生物制品的技術(shù)。目量培育動(dòng)物細(xì)胞用于消費(fèi)生物制品的技術(shù)。目前可大規(guī)模培育的動(dòng)物細(xì)胞有雞胚、豬腎、猴前可大規(guī)模培育的動(dòng)物細(xì)胞有雞胚、豬腎、猴腎、地鼠腎等多種原代細(xì)胞及人二倍體細(xì)胞、腎、地鼠腎等多種原代細(xì)胞及人二倍體細(xì)胞、chocho中華倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞、中華倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞、BHK-21BHK-21倉(cāng)鼠腎倉(cāng)鼠腎細(xì)胞、細(xì)胞、VeroVero細(xì)胞非洲綠猴腎傳代細(xì)胞，貼細(xì)胞非洲綠猴腎傳代細(xì)胞，貼壁依賴(lài)等。壁依賴(lài)等。 已勝利消費(fèi)了包括狂犬病疫苗、口蹄疫已勝利消費(fèi)了包括狂犬病疫苗

7、、口蹄疫疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、紅疫苗、甲型肝炎疫苗、乙型肝炎疫苗、紅細(xì)胞生成素、單克隆抗體等產(chǎn)品。細(xì)胞生成素、單克隆抗體等產(chǎn)品。依細(xì)胞種類(lèi)：原代培育、傳代培育依細(xì)胞種類(lèi)：原代培育、傳代培育依培育基：液體培育、固體培育依培育基：液體培育、固體培育依培育器和方式依培育器和方式: : 靜止培育、旋轉(zhuǎn)培育、攪靜止培育、旋轉(zhuǎn)培育、攪拌培育、微載體培育、中空纖維培育、固拌培育、微載體培育、中空纖維培育、固定床或流化床培育。定床或流化床培育。消費(fèi)實(shí)踐來(lái)看：懸浮培育、貼壁培育和貼壁消費(fèi)實(shí)踐來(lái)看：懸浮培育、貼壁培育和貼壁- -懸浮培育。懸浮培育。1 1、懸浮培育、懸浮培育suspension cul

8、turesuspension culture讓細(xì)胞自在的懸浮于培育基內(nèi)進(jìn)展生長(zhǎng)繁衍。讓細(xì)胞自在的懸浮于培育基內(nèi)進(jìn)展生長(zhǎng)繁衍。適用細(xì)胞類(lèi)型：懸浮細(xì)胞，兼性貼壁細(xì)胞，雜適用細(xì)胞類(lèi)型：懸浮細(xì)胞，兼性貼壁細(xì)胞，雜交瘤交瘤設(shè)備：通氣攪拌式生物反響器、氣升式生物反設(shè)備：通氣攪拌式生物反響器、氣升式生物反響器。響器。消費(fèi)藥物：?jiǎn)慰寺】贵w；干擾素。消費(fèi)藥物：?jiǎn)慰寺】贵w；干擾素。缺陷：細(xì)胞體積小，且處于懸浮形狀，難采缺陷：細(xì)胞體積小，且處于懸浮形狀，難采用灌流培育，細(xì)胞密度低。用灌流培育，細(xì)胞密度低。 必需讓細(xì)胞貼附在某種基質(zhì)上生長(zhǎng)繁衍的培育方法。 適用細(xì)胞類(lèi)型：貼壁依賴(lài)型細(xì)胞，兼性貼壁細(xì)胞。 基質(zhì)要求：具有凈

9、陽(yáng)電荷和高度外表活性。對(duì)微載體而言還要求具有一定電荷密度。優(yōu)點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)：a a容易改換培育液，細(xì)胞嚴(yán)密黏附于固相外表，容易改換培育液，細(xì)胞嚴(yán)密黏附于固相外表，可直接傾去舊培育液，清洗后直接參與新培育可直接傾去舊培育液，清洗后直接參與新培育液。液。 b b容易采用灌流培育，從而到達(dá)提高細(xì)胞密度的容易采用灌流培育，從而到達(dá)提高細(xì)胞密度的目的，因細(xì)胞被固定，不需過(guò)濾系統(tǒng)。目的，因細(xì)胞被固定，不需過(guò)濾系統(tǒng)。 c c當(dāng)細(xì)胞貼壁于生長(zhǎng)基質(zhì)時(shí)，很多細(xì)胞將更有效當(dāng)細(xì)胞貼壁于生長(zhǎng)基質(zhì)時(shí)，很多細(xì)胞將更有效的表達(dá)一種產(chǎn)品。的表達(dá)一種產(chǎn)品。 缺陷：a操作比較費(fèi)事，需求適宜的貼附資料和足夠的面積。b培育條件不易均一，傳質(zhì)

10、和傳氧效果差。c不能有效地監(jiān)控細(xì)胞的生長(zhǎng)。 貼壁培育系統(tǒng)：中空纖維；玻璃珠；微載體培育。 貼壁培育和懸浮培育的不同之處是在貼壁培育和懸浮培育的不同之處是在傳代或擴(kuò)展培育時(shí)，經(jīng)常需求用酶將其從傳代或擴(kuò)展培育時(shí)，經(jīng)常需求用酶將其從基質(zhì)上消化下來(lái)。基質(zhì)上消化下來(lái)。將懸浮培育和貼壁培育相結(jié)合的方法。將懸浮培育和貼壁培育相結(jié)合的方法。 微載體培育：細(xì)胞貼附在載體外表。發(fā)明微載體培育：細(xì)胞貼附在載體外表。發(fā)明大的貼附面積，供細(xì)胞貼附生長(zhǎng)增殖；載體大的貼附面積，供細(xì)胞貼附生長(zhǎng)增殖；載體體積小，比重較輕，在輕度攪拌下即可攜帶體積小，比重較輕，在輕度攪拌下即可攜帶細(xì)胞自在地懸浮在培育基內(nèi)，充沛發(fā)揚(yáng)懸浮細(xì)胞自在地

11、懸浮在培育基內(nèi)，充沛發(fā)揚(yáng)懸浮培育的一切優(yōu)點(diǎn)。培育的一切優(yōu)點(diǎn)。 載體：葡聚糖、聚苯乙烯、膠原等。載體：葡聚糖、聚苯乙烯、膠原等。 理想的微載體應(yīng)具備：理想的微載體應(yīng)具備： 生物相容性；無(wú)毒性；外表惰性；比重適當(dāng)生物相容性；無(wú)毒性；外表惰性；比重適當(dāng)1.030-1.045g/ml；粒徑均一，在；粒徑均一，在60-250m之間溶脹后；光學(xué)透明；柔軟；之間溶脹后；光學(xué)透明；柔軟；耐高壓滅菌溫度；反復(fù)屢次運(yùn)用；制備簡(jiǎn)單、耐高壓滅菌溫度；反復(fù)屢次運(yùn)用；制備簡(jiǎn)單、原料充沛。原料充沛。 80年代以后開(kāi)展的多孔微載體或多孔微球，年代以后開(kāi)展的多孔微載體或多孔微球，增大了供細(xì)胞貼附的比外表積。增大了供細(xì)胞貼附的比

12、外表積。 運(yùn)用：工業(yè)化消費(fèi)干擾素、疫苗和尿激酶原運(yùn)用：工業(yè)化消費(fèi)干擾素、疫苗和尿激酶原 包埋或微囊培育： 將細(xì)胞包埋或包裹在凝膠載體或微囊內(nèi)。 可用于包埋細(xì)胞的載體資料為：人工合成的高分子聚合物；糖類(lèi)如纖維素等；蛋白質(zhì)如膠原、纖維蛋白等。包埋法：包埋法： 將細(xì)胞包埋在多孔載體內(nèi)部制成固定化細(xì)胞將細(xì)胞包埋在多孔載體內(nèi)部制成固定化細(xì)胞的方法。的方法。優(yōu)點(diǎn)：步驟簡(jiǎn)單，條件溫暖，負(fù)荷量大，細(xì)優(yōu)點(diǎn)：步驟簡(jiǎn)單，條件溫暖，負(fù)荷量大，細(xì)胞泄露少，抗機(jī)械剪切。胞泄露少，抗機(jī)械剪切。缺陷：分散限制，并非一切的細(xì)胞處于最正缺陷：分散限制，并非一切的細(xì)胞處于最正確基質(zhì)濃度，且大分子基質(zhì)不能浸透到高確基質(zhì)濃度，且大分子

13、基質(zhì)不能浸透到高聚物網(wǎng)絡(luò)內(nèi)部。聚物網(wǎng)絡(luò)內(nèi)部。普通適用于非貼壁依賴(lài)性細(xì)胞的固定。普通適用于非貼壁依賴(lài)性細(xì)胞的固定。常用的載體：瓊脂糖；海藻酸鈣凝膠常用的載體：瓊脂糖；海藻酸鈣凝膠微囊法：微囊法：用一層親水的半透膜將細(xì)胞包圍在珠狀的微用一層親水的半透膜將細(xì)胞包圍在珠狀的微囊內(nèi)，細(xì)胞不能溢出，但小分子物質(zhì)及營(yíng)囊內(nèi)，細(xì)胞不能溢出，但小分子物質(zhì)及營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)可自在出入半透膜。養(yǎng)物質(zhì)可自在出入半透膜。囊內(nèi)是微小培育環(huán)境，與液體培育類(lèi)似，能囊內(nèi)是微小培育環(huán)境，與液體培育類(lèi)似，能維護(hù)細(xì)胞少受損傷，故細(xì)胞生長(zhǎng)好、密度維護(hù)細(xì)胞少受損傷，故細(xì)胞生長(zhǎng)好、密度高。高。 結(jié)團(tuán)培育：結(jié)團(tuán)培育： 利用細(xì)胞本身構(gòu)成結(jié)團(tuán)的特點(diǎn)，相互

14、結(jié)團(tuán)后利用細(xì)胞本身構(gòu)成結(jié)團(tuán)的特點(diǎn)，相互結(jié)團(tuán)后再用懸浮的方法培育，操作簡(jiǎn)便，節(jié)省了再用懸浮的方法培育，操作簡(jiǎn)便，節(jié)省了用于微載體的本錢(qián)。用于微載體的本錢(qián)。1 1、分批式操作、分批式操作 將細(xì)胞和培育基一次性參與反響器內(nèi)將細(xì)胞和培育基一次性參與反響器內(nèi)進(jìn)展培育，以后細(xì)胞不時(shí)增長(zhǎng)，產(chǎn)物不時(shí)進(jìn)展培育，以后細(xì)胞不時(shí)增長(zhǎng)，產(chǎn)物不時(shí)構(gòu)成和積累，最后將條件培育基，即經(jīng)培構(gòu)成和積累，最后將條件培育基，即經(jīng)培育已含有細(xì)胞產(chǎn)物的培育基，或連同細(xì)胞育已含有細(xì)胞產(chǎn)物的培育基，或連同細(xì)胞一并取出，培育終了。一并取出，培育終了。 另一種是先將細(xì)胞和培育基參與反響器，待細(xì)胞生長(zhǎng)至一定密度后，向反響器內(nèi)參與誘導(dǎo)劑或病毒等，經(jīng)一

15、段時(shí)間作用后，將反響物取出。 當(dāng)細(xì)胞和培育基一同參與反響器后，在細(xì)胞增長(zhǎng)和產(chǎn)物構(gòu)成過(guò)程中，每間隔一段時(shí)間，取出部分培育物，或單純是條件培育基，或連同細(xì)胞、載體一同，然后補(bǔ)充同樣數(shù)量的新穎培育基，或另加新穎載體，繼續(xù)培育。 該操作方式在動(dòng)物細(xì)胞培育和藥品消費(fèi)中被廣泛采用，它的優(yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)便，消費(fèi)效率高，可長(zhǎng)期進(jìn)展消費(fèi)，反復(fù)收獲產(chǎn)品，而且可使細(xì)胞密度和產(chǎn)品產(chǎn)量不時(shí)堅(jiān)持在較高的程度。 當(dāng)細(xì)胞和培育基一同參與反響器后，在細(xì)胞增長(zhǎng)和產(chǎn)物構(gòu)成過(guò)程中，不時(shí)地將部分條件培育基取出，同時(shí)不時(shí)地補(bǔ)充新穎培育基。 細(xì)胞被固定，在取出部分條件培育基和補(bǔ)充新穎培育基時(shí)，細(xì)胞根本上都被保管在反響器內(nèi)。1、攪拌式生物反響器

16、、攪拌式生物反響器2、氣升式生物反響器、氣升式生物反響器3、中空纖維式生物反響器、中空纖維式生物反響器4、透析袋或膜式生物反響器、透析袋或膜式生物反響器5、固定床或流化床式生物反響器、固定床或流化床式生物反響器機(jī)械攪拌式生物反響器1罐體的高徑比普通采用1-1.5：1，利于增大與空氣的接觸面2為防止攪拌產(chǎn)生的切力損傷細(xì)胞，攪拌速度慢，普通在20-100r/min3采用無(wú)氣泡通氣系統(tǒng)，防止氣泡破裂時(shí)產(chǎn)生的應(yīng)力對(duì)細(xì)胞的損傷4高密度、長(zhǎng)時(shí)間培育以及提高反響器的消費(fèi)效率思索，反響器經(jīng)常需求配備有進(jìn)出液體系統(tǒng)，以便進(jìn)展灌流培育，并有使細(xì)胞與培育基分別使細(xì)胞保管在反響器內(nèi)的安裝。氣升式生物反響器 與攪拌式生

17、物反響器相比，具有剪切力小，混合均一，氧和營(yíng)養(yǎng)的傳送好，由于沒(méi)有了機(jī)械攪拌的構(gòu)造，有利于設(shè)備的密封，降低了造價(jià)。高徑比普通在10：1左右。中空纖維反響器 由數(shù)百乃至數(shù)千根中空纖維集束組成的反響器，纖維的資料為聚砜或丙烯共聚物，纖維壁厚為50-100m，呈多孔性，內(nèi)層為超濾膜，內(nèi)腔直徑為200m，兩端用環(huán)氧樹(shù)脂等資料將纖維粘和在一同，并使內(nèi)腔開(kāi)口于外加的塑料圓筒，使構(gòu)成兩個(gè)隔開(kāi)的腔。 不能反復(fù)運(yùn)用；不能耐受高壓滅菌，需用環(huán)氧乙烷或其它消毒劑滅菌；難以取樣檢測(cè)。 在動(dòng)物細(xì)胞培育過(guò)程中，會(huì)產(chǎn)生一些代在動(dòng)物細(xì)胞培育過(guò)程中，會(huì)產(chǎn)生一些代謝產(chǎn)物，如乳酸和氨等，對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)和產(chǎn)謝產(chǎn)物，如乳酸和氨等，對(duì)細(xì)胞的

18、生長(zhǎng)和產(chǎn)物的產(chǎn)生會(huì)產(chǎn)生抑制造用，因此有些學(xué)者設(shè)物的產(chǎn)生會(huì)產(chǎn)生抑制造用，因此有些學(xué)者設(shè)計(jì)了透析袋或膜式反響器，它們可將這些有計(jì)了透析袋或膜式反響器，它們可將這些有害代謝產(chǎn)物透析或過(guò)濾掉，從而使細(xì)胞生長(zhǎng)害代謝產(chǎn)物透析或過(guò)濾掉，從而使細(xì)胞生長(zhǎng)至更高密度，同時(shí)可根據(jù)需求選用不同相對(duì)至更高密度，同時(shí)可根據(jù)需求選用不同相對(duì)分子質(zhì)量的膜，使產(chǎn)物保管在膜內(nèi)或與細(xì)胞分子質(zhì)量的膜，使產(chǎn)物保管在膜內(nèi)或與細(xì)胞別分開(kāi)。別分開(kāi)。 構(gòu)造較簡(jiǎn)單，裝填的資料可以是一切對(duì)構(gòu)造較簡(jiǎn)單，裝填的資料可以是一切對(duì)細(xì)胞無(wú)毒、又有利于細(xì)胞貼附的資料，有細(xì)胞無(wú)毒、又有利于細(xì)胞貼附的資料，有實(shí)心載體和有孔載體兩類(lèi)。實(shí)心載體和有孔載體兩類(lèi)。Wav

19、e Bioreactor 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)方法，人工地把人們想轉(zhuǎn)基因動(dòng)物：經(jīng)過(guò)實(shí)驗(yàn)方法，人工地把人們想要研討的動(dòng)物或人類(lèi)基因，或者是有經(jīng)濟(jì)價(jià)值要研討的動(dòng)物或人類(lèi)基因，或者是有經(jīng)濟(jì)價(jià)值的藥物蛋白質(zhì)基因，通常稱(chēng)為外源基因，導(dǎo)入的藥物蛋白質(zhì)基因，通常稱(chēng)為外源基因，導(dǎo)入動(dòng)物的受精卵或早期胚胎細(xì)胞，使之與動(dòng)動(dòng)物的受精卵或早期胚胎細(xì)胞，使之與動(dòng)物本身的基因組整合在一同，這樣外源基因能物本身的基因組整合在一同，這樣外源基因能隨細(xì)胞的分裂而增殖，并能穩(wěn)定地遺傳給下一隨細(xì)胞的分裂而增殖，并能穩(wěn)定地遺傳給下一代的一類(lèi)動(dòng)物。代的一類(lèi)動(dòng)物。 普通把目的片段在器官或組織中表達(dá)的轉(zhuǎn)普通把目的片段在器官或組織中表達(dá)的轉(zhuǎn)

20、基因動(dòng)物叫動(dòng)物生物反響器基因動(dòng)物叫動(dòng)物生物反響器bioreactor， 幾乎任何有生命的器官、組織或其中一部分都幾乎任何有生命的器官、組織或其中一部分都可經(jīng)過(guò)人為馴化為生物反響器可經(jīng)過(guò)人為馴化為生物反響器, 從消費(fèi)的角度思索，生物反響器選擇的組從消費(fèi)的角度思索，生物反響器選擇的組織和器官要方便產(chǎn)物的獲得，例如，乳腺、膀織和器官要方便產(chǎn)物的獲得，例如，乳腺、膀胱、血液等，由此開(kāi)展了動(dòng)物乳腺生物反響器胱、血液等，由此開(kāi)展了動(dòng)物乳腺生物反響器,動(dòng)物血液生物反響器和動(dòng)物膀胱生物反響器等。動(dòng)物血液生物反響器和動(dòng)物膀胱生物反響器等。其中，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物乳腺生物反響器的研討最為其中，轉(zhuǎn)基因動(dòng)物乳腺生物反響器的研

21、討最為引人矚目。引人矚目。1 動(dòng)物血液生物反響器動(dòng)物血液生物反響器 外源基因在血液中表達(dá)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物叫外源基因在血液中表達(dá)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物叫血液生物反響器。大家畜的血液容量較大，血液生物反響器。大家畜的血液容量較大，利用動(dòng)物血液消費(fèi)某些蛋白質(zhì)或多肽等藥物利用動(dòng)物血液消費(fèi)某些蛋白質(zhì)或多肽等藥物己獲得了一定進(jìn)展。外源基因編碼產(chǎn)物可直己獲得了一定進(jìn)展。外源基因編碼產(chǎn)物可直接從血清中分別出來(lái)接從血清中分別出來(lái),血細(xì)胞組分可經(jīng)過(guò)裂解血細(xì)胞組分可經(jīng)過(guò)裂解細(xì)胞獲得。細(xì)胞獲得。 2 動(dòng)物膀胱生物反響器動(dòng)物膀胱生物反響器 外源基因在膀胱中表達(dá)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生物外源基因在膀胱中表達(dá)的轉(zhuǎn)基因動(dòng)物生物反響器反響器,叫動(dòng)物膀

22、胱生物反響器。膀胱尿乳頭叫動(dòng)物膀胱生物反響器。膀胱尿乳頭頂端外表可表達(dá)一組尿血小板溶素的膜蛋白頂端外表可表達(dá)一組尿血小板溶素的膜蛋白,這種蛋白在膀胱中表達(dá)具有專(zhuān)注性這種蛋白在膀胱中表達(dá)具有專(zhuān)注性,而且它的而且它的基因是高度保守的基因是高度保守的,將外源基因插入將外源基因插入5端調(diào)控端調(diào)控序列中序列中,就可以指點(diǎn)外源基因在尿中表達(dá)。就可以指點(diǎn)外源基因在尿中表達(dá)。 3 動(dòng)物乳腺生物反響器動(dòng)物乳腺生物反響器 動(dòng)物乳腺生物反響器利用哺乳動(dòng)物乳腺動(dòng)物乳腺生物反響器利用哺乳動(dòng)物乳腺特異性表達(dá)的啟動(dòng)子元件構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動(dòng)物特異性表達(dá)的啟動(dòng)子元件構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動(dòng)物, 指指點(diǎn)外源基因在乳腺中表達(dá)點(diǎn)外源基因在乳腺中表達(dá),

23、 并從轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的并從轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的乳液中獲取重組蛋白。乳液中獲取重組蛋白。 牛、羊的乳中牛、羊的乳中蛋白質(zhì)大多為酪蛋白、蛋白質(zhì)大多為酪蛋白、-乳清蛋白、酸性乳清蛋白、酸性蛋白、表達(dá)時(shí)需由特蛋白、表達(dá)時(shí)需由特定的啟動(dòng)子調(diào)理分泌定的啟動(dòng)子調(diào)理分泌出來(lái)，該啟動(dòng)子定位出來(lái)，該啟動(dòng)子定位在乳腺細(xì)胞中。現(xiàn)將在乳腺細(xì)胞中?，F(xiàn)將該啟動(dòng)子克隆出來(lái)用該啟動(dòng)子克隆出來(lái)用于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中。于轉(zhuǎn)基因動(dòng)物中。在山羊奶中消費(fèi)在山羊奶中消費(fèi)ATT顯微注射儀表示圖顯微注射儀表示圖 自自19821982年年P(guān)alimiterPalimiter提出用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物來(lái)消提出用轉(zhuǎn)基因動(dòng)物來(lái)消費(fèi)藥用蛋白以來(lái)，開(kāi)展迅速。費(fèi)藥用蛋白以來(lái)，開(kāi)展迅速

24、。 優(yōu)點(diǎn)：產(chǎn)量高本錢(qián)低，質(zhì)量與天然一樣。優(yōu)點(diǎn)：產(chǎn)量高本錢(qián)低，質(zhì)量與天然一樣。 缺陷：外源基因與動(dòng)物本身的基因組整合率缺陷：外源基因與動(dòng)物本身的基因組整合率低，外源基因應(yīng)有的性質(zhì)得不到充沛表現(xiàn)或低，外源基因應(yīng)有的性質(zhì)得不到充沛表現(xiàn)或不表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)運(yùn)動(dòng)如牛、羊和豬的整合率普不表現(xiàn)。實(shí)驗(yàn)運(yùn)動(dòng)如牛、羊和豬的整合率普通為通為1%1%左右。外源基因?qū)?dòng)物本身也有影響，左右。外源基因?qū)?dòng)物本身也有影響，它影響了動(dòng)物的安康。它影響了動(dòng)物的安康。 組織工程：經(jīng)過(guò)對(duì)大量細(xì)胞的培育，組織工程：經(jīng)過(guò)對(duì)大量細(xì)胞的培育，并用細(xì)胞直接作為一種治療手段用于并用細(xì)胞直接作為一種治療手段用于臨床，或用培育的細(xì)胞進(jìn)一步加工構(gòu)臨床，或用培育的細(xì)胞進(jìn)一步加工構(gòu)成一種組織，如人造皮膚、人造肝臟、成一種組織，如人造皮膚、人造肝臟、人造胰腺、人造血管、人造骨等并用人造胰腺、人造血管、人造骨等并用于臨床治療。于臨床治療。 3.2 3.2 動(dòng)物細(xì)胞形狀和生理特點(diǎn)動(dòng)物細(xì)胞形狀和生理特點(diǎn) 3.3 3.3 消費(fèi)用動(dòng)物細(xì)胞的要