單元(擴充)繁殖生物技術ppt課件

1、單元擴展 繁衍生物技術 Bio-Tec of Reproduction第一節(jié) 體外受精第二節(jié) 發(fā)情控制第三節(jié) 其它繁衍生物學技術.第一節(jié) 體外受精 體外受精是指卵母細胞與精子在體外交融，構成合子的過程。體外受精勝利的標志是經過移植產生后代。 卵母細胞：體內；體外 精子：體外獲能一、卵母細胞1、體內成熟卵母細胞 1超數排卵：略，胚胎移植講 2卵母細胞采集 ：在內窺鏡的導引下，穿刺成熟卵 泡，從卵泡中抽吸卵泡液和成熟卵母細胞。 3鏡檢：將汲取的卵泡液及卵母細胞置于評皿中，在 體視顯微鏡下25X， 選那么合格的卵母細胞，用 于體外受精。. 合格卵母細胞規(guī)范：放射冠細胞分散良好，質地均一，放射冠細胞間

2、透明；透明帶明晰；卵母細胞圓形，直徑大小適中，細胞質質地均勻，色澤柔和，透明度適中圖1。2、體外成熟的卵母細胞1卵母細胞來源1卵巢來源：從屠宰 場宰殺的母畜獲得卵巢， 38 C生理鹽水中保溫， 宰殺后 2 小時內運回實 驗室。圖1 成熟卵母細胞圖. 2采集卵母細胞卵丘細胞復合物：用 38 C 生理鹽水洗滌卵巢 2 次，左手持卵巢，右手持注射器，如下圖，抽取 35mm 卵泡 的卵泡液及卵母細 胞卵丘細胞復合 物，置于20ml試管 內，靜置待檢。 選擇 35 mm 卵泡的緣由是：更 大卵泡的閉鎖比例 能夠例高，更小卵 泡的發(fā)育程度能夠 低。圖2 卵母細胞卵丘細胞復合物采集 表示圖. 生理鹽水配方：

3、NaCl 18g，Mill-Q或三蒸水2l， 青霉素2,000,000IU，鏈霉素2g。3鏡檢卵母細胞卵丘復合物：用吸管汲取經靜置 后試管底部的混合物于平皿中，用吸管鋪平，在實體顯微鏡下用吸管檢出卵母細胞卵丘復合物，置于另一平皿中，用洗滌液在實體顯微鏡下洗滌2次，在洗滌過程中要剔除不合格的卵母細胞卵丘復合物。選擇合格的卵母細胞卵丘復合物非常重要，否那么將降低卵母細胞的成熟比例。卵母細胞卵丘復合物分類規(guī)范 a、分類根據：卵母細胞的直徑、外形、質地的均勻度、色澤；透明帶的完好性；卵丘細胞圍繞卵母細胞的完好性、數量、分散程度、色澤。 普通分為4級，1、2級為合格；3、4級為不合格。. 一級：卵母細胞

4、：直徑120m，圓形，質地均勻。 卵丘細胞：包圍卵母細胞數層、嚴密、完好， 質地均勻。二級：卵母細胞：直徑120m，圓形，質地均勻。 卵丘細胞：包圍卵母細胞數層、嚴密，但不完 整，質地均勻。三級：卵母細胞：直徑太大或太小，橢圓形，質地均 勻。 卵丘細胞：包圍卵母細胞單層或無、不嚴密、 不完好，質地均勻。四級：卵母細胞：直徑太大或太小，橢圓形，質地不 均勻。 卵丘細胞：包圍卵母細胞單層或無、不嚴密、 不完好，質地不均勻。. 4卵母細胞卵丘復合物體外成熟 體外成熟大多采取液滴或試管培育。液滴培育的 優(yōu)點是培育液不蒸發(fā)，浸透壓穩(wěn)定，缺陷是培育液中 的脂溶性物質能溶于覆蓋的石蠟油；試管培育的缺陷是培育

5、液容易蒸發(fā)而致浸透壓提高。普通來說，采用液滴培育普遍，因此，這里引見液滴培育。a、制造體外成熟培育液滴 在一次性利用的平皿36cm中，用加樣器整 齊、小心地參與液滴大多采用50l液滴，然后用 石蠟油覆蓋，在CO2培育箱中平衡2小時圖3。b、培育 牛：在平衡后的每個液滴中用吸管參與510個卵母細胞卵丘復合物， 39 C 、5 CO2、潮濕環(huán)境中培育24小時，卵母細胞成熟，細胞核到達第二次減數分裂。. 豬：在平衡后的每個液滴 中用吸管參與 510 個卵 母細胞卵丘復合物，在 39 C 、5 CO2、潮濕環(huán) 境中培育4048小時，卵 母細胞成熟，細胞核到達 第二次減數分裂。 c、 成熟卵母細胞的檢查

6、 外觀檢查：卵母細胞在成熟過程中，卵丘細胞分散，因此，卵丘細胞分散，闡明卵母細胞能夠成熟圖4。 卵母細胞核成熟：在卵母 圖3 液滴表示圖. 細胞成熟過程中，卵母細胞啟動第一次減數分裂，根據其核型進展鑒定。在成熟過程中，核型可分為核膜期、染色質濃縮期、核膜消逝期、第一次減數分裂中期、第一次減數分裂后期、第二次減數分裂中期。各期特點如下圖5： 核膜期：經染色后可見完好的核膜。 染色質濃縮期：染色質染色很深、均一，此為卵 母細胞曾經啟動第一次減數分裂。 核膜消逝期：核膜從斷續(xù)到完全消逝。 第一次減數分裂中期：染色體分為兩組。此時標 志著卵母細胞核曾經成熟。 第二次減數分裂中期：染色體分為兩組，可見第 一極體。 卵母細胞質成熟：細胞質成熟較難鑒定，因此，通常 只檢查細胞核的成熟。. 卵母細胞核染色圖6 制片：壓片。 固定：固定液 乙醇：乙酸3：1，24h 染色：1地衣紅，40乙酸 鏡檢：光學顯微鏡.圖6 制片、固定、染色 表示圖. 液體制備. 二、精子體外獲能1、牛冷凍精液：Swimming-up2、