生物儀器分析期末重點(diǎn)

1、名詞解釋精密度（precision）：是指用同樣的方法所測(cè)得的數(shù)據(jù)相互一致性的程度，是表征數(shù)據(jù)隨機(jī)誤差大小的一個(gè)量，一般用標(biāo)準(zhǔn)偏差來(lái)度量，標(biāo)準(zhǔn)偏差越大，儀器精密度越低。檢出限（detection limit）：指在適當(dāng)?shù)闹眯潘缴媳粰z出的組分的最小量。靈敏度（sensitivity）：物質(zhì)單位濃度或單位質(zhì)量的變化所引起的響應(yīng)信號(hào)值變化的程度，也就是校正曲線(xiàn)的斜率，斜率越大，則靈敏度越大。沉降系數(shù)：指單位離心力作用下顆粒的沉降速度。沉降速度：在離心作用下顆粒在單位時(shí)間內(nèi)運(yùn)動(dòng)的距離。生色團(tuán)：指分子中能吸收紫外或可見(jiàn)光的基團(tuán)，其含有非鍵軌道和分子軌道的電子體系。主要包括乙烯基、羧基、亞硝基、偶氮基、

2、乙炔基、氰基。助色團(tuán)：指能使生色團(tuán)吸收峰向長(zhǎng)波方向移動(dòng)并增強(qiáng)其強(qiáng)度的基團(tuán)。溶劑效應(yīng)：指由溶劑極性不同造成的化合物吸收光譜的紅移或藍(lán)移現(xiàn)象。藍(lán)移：溶液極性增強(qiáng)，導(dǎo)致激發(fā)態(tài)能量下降，并且導(dǎo)致躍遷所需能量下降，最大吸收波長(zhǎng)max發(fā)生紅移。紅移：溶劑極性增強(qiáng)，導(dǎo)致躍遷所需能量增大，最大吸收波長(zhǎng)max發(fā)生藍(lán)移。增色效應(yīng)：由于助色團(tuán)或生色團(tuán)的引入，以及溶劑的影響，吸收強(qiáng)度增大。減色效應(yīng)：由于基團(tuán)取代或溶劑的影響，吸收強(qiáng)度減小。溶劑效應(yīng)：指由溶劑極性不同造成的化合物吸收光譜的紅移或藍(lán)移現(xiàn)象。朗伯比爾定律：當(dāng)一束平行單色光垂直照射到樣品溶液時(shí)，溶液的吸光度與溶液的濃度及光程成正比關(guān)系。AlgT= kbc A

3、: 吸光度，T : 透射比， K :比例常數(shù)，b : 光程(溶液厚度)，c :溶液濃度半峰寬：一半熒光強(qiáng)度時(shí)，所對(duì)應(yīng)的發(fā)射波長(zhǎng)范圍，被稱(chēng)為熒光半峰寬。熒光壽命()：當(dāng)激發(fā)光切斷后熒光強(qiáng)度衰減至原強(qiáng)度的1/e所經(jīng)歷的時(shí)間，它表示熒光分子S1激發(fā)態(tài)的平均壽命。 在沒(méi)有非輻射躍遷發(fā)生的情況下， = 1/kfkf : 熒光發(fā)射的速率常數(shù)，即單位時(shí)間內(nèi)發(fā)射的光子數(shù)K：各種分子內(nèi)的非輻射躍遷過(guò)程的速率常數(shù)之和熒光量子產(chǎn)率：熒光物質(zhì)吸收后，所發(fā)射的熒光的光子數(shù)與所吸收的激發(fā)光的光子數(shù)的比值。熒光量子產(chǎn)率越大，單位濃度的熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度越大，熒光性能更加優(yōu)越熒光淬滅：熒光分子與溶劑分子或其它溶質(zhì)分子的相互作

4、用而引起的熒光量子產(chǎn)率降低的作用。19、熒光閾值：在熒光定量PCR擴(kuò)增的指數(shù)期，畫(huà)一條線(xiàn)，在此直線(xiàn)上，所有樣品的熒光強(qiáng)度與其本底熒光強(qiáng)度的差值全部相同。20、CT值：PCR擴(kuò)增過(guò)程中，擴(kuò)增產(chǎn)物的熒光信號(hào)達(dá)到設(shè)定的閾值時(shí)所經(jīng)過(guò)的擴(kuò)增循環(huán)次數(shù)。21、死時(shí)間(t M )：不被固定相吸附或溶解的物質(zhì)經(jīng)過(guò)色譜柱時(shí)，從進(jìn)樣到出現(xiàn)峰極大值所需的時(shí)間稱(chēng)為死時(shí)間。22、分配系數(shù) (K )：它是指在一定溫度和壓力下，組分在固定相和流動(dòng)相之間分配達(dá)平衡時(shí)的濃度比。23、分配比 (kappa) ：分配比又稱(chēng)容量因子，它是指在一定溫度和壓力下，組分在固定相和流動(dòng)相之間分配達(dá)平衡時(shí)的質(zhì)量比，即 ：24、分離因子：也稱(chēng)為選

5、擇因子，是樣品中兩個(gè)最難分離組分(A和B)的相對(duì)保留值之比。25、親和色譜：是利用生物分子和固定相表面存在的某種特異性的靶向性和親和力，進(jìn)行選擇性分離的一種方法。26、固定相：通常是在擔(dān)體表面鍵合具有生物識(shí)別能力的生物分子(配體)，擔(dān)體如果是凝膠，還可以實(shí)現(xiàn)“親和尺寸排阻”雙重作用。27、顯微鏡分辨率(resolution)：指顯微鏡將近鄰的兩個(gè)質(zhì)點(diǎn)分辨清楚的能力，通常是用顯微鏡所能分辨清楚最近的相鄰兩點(diǎn)間的距離(即最小分辨距離)來(lái)表示。28、焦點(diǎn)深度：簡(jiǎn)稱(chēng)焦深，指在使用顯微鏡時(shí)，當(dāng)焦點(diǎn)對(duì)準(zhǔn)標(biāo)本某一點(diǎn)時(shí)，不僅看清這一點(diǎn)，而且它的上下兩側(cè)也能同時(shí)看清楚，看到的物體不僅僅是一個(gè)平面，而且還能看到一

6、定的厚度，這個(gè)清晰的厚度就是焦深。29、鏡像亮度(image brightness)：指顯微鏡中觀察到的圖像的明暗程度，在一定放大倍數(shù)下，與數(shù)值孔徑的平方成正比。30、視場(chǎng)亮度(field brightness)：指顯微鏡中觀察到的整個(gè)視場(chǎng)的明暗程度。31、分離度：又叫分辨率，是相鄰兩組分(A和B)色譜峰保留值之差的兩倍與兩組分色譜峰底寬之和的比值。填空、選擇、判斷知識(shí)點(diǎn)1：1）玻璃勻漿器 原理：筒狀套管和槌管之間的擠壓作用 應(yīng)用：動(dòng)物細(xì)胞和組織 優(yōu)點(diǎn)：溫和、便捷 缺點(diǎn)：效率較低、不適合于植物組織和微生物細(xì)胞的破碎2）超聲波細(xì)胞破碎儀原理：超聲波在液體中的空化效應(yīng)，壓迫、擠碎細(xì)胞 應(yīng)用：細(xì)菌細(xì)

7、胞、動(dòng)物細(xì)胞、以及組織破碎 優(yōu)點(diǎn)：快速、高效缺點(diǎn)：作用劇烈，容易破壞蛋白質(zhì)相互作用，厚壁細(xì)胞（如酵母和植物細(xì)胞）的破碎效率較低3）玻璃珠細(xì)胞破碎儀原理：在劇烈震蕩中，通過(guò)玻璃珠的球磨作用破碎細(xì)胞應(yīng)用：微生物細(xì)胞、動(dòng)植物細(xì)胞、組織、尤其是某些厚壁細(xì)胞的破碎（如酵母細(xì)胞和植物細(xì)胞）優(yōu)點(diǎn)：快速、高效缺點(diǎn)：樣品處理量低，儀器噪音大，容易發(fā)熱，對(duì)樣品產(chǎn)生影響4）高壓細(xì)胞破碎儀原理：高壓產(chǎn)生的擠壓作用破碎細(xì)胞或組織應(yīng)用：幾乎所有微生物細(xì)胞、動(dòng)植物細(xì)胞優(yōu)點(diǎn)：快速、高效、處理量大、可低溫控制缺點(diǎn)：價(jià)格相對(duì)昂貴5）高速組織搗碎機(jī)原理：通過(guò)葉片刀高速攪拌應(yīng)用：較為堅(jiān)硬的組織或樣品，如骨骼、植物果實(shí)，一般用于細(xì)胞破

8、碎前的組織樣本預(yù)處理優(yōu)點(diǎn)：處理質(zhì)地堅(jiān)硬的樣品缺點(diǎn)：容易過(guò)熱影響樣品，并且不適合處理細(xì)胞樣品6）高溫消解儀原理：通過(guò)高溫、強(qiáng)酸（硝酸）、強(qiáng)氧化劑（高錳酸鉀）徹底破壞細(xì)胞或組織的結(jié)構(gòu)應(yīng)用：針對(duì)所有樣本，為元素分析制備樣品，如重金屬含量的檢測(cè)1、為了研究植物細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)相互作用，破碎較為堅(jiān)硬的植物葉片，應(yīng)該首選（B）制備得到細(xì)胞漿液后，再用（E）破碎細(xì)胞A 玻璃勻漿器； B 高速組織搗碎機(jī)；C 超聲波細(xì)胞破碎儀； D 高溫消解儀；E 高壓細(xì)胞破碎儀2、為了測(cè)定大米中重金屬鎘含量是否超標(biāo)，應(yīng)選用（D）制備樣品A 玻璃勻漿器； B 高速組織搗碎機(jī)；C 超聲波細(xì)胞破碎儀； D 高溫消解儀；E 高壓細(xì)胞破碎

9、儀知識(shí)點(diǎn)2：顆粒最大、最沉的下沉的快，質(zhì)量相同形狀不同的，球形顆粒比不規(guī)則形狀的顆粒要快，密度大的比密度小的快，水中的顆粒沉降比油中的顆粒沉降快。知識(shí)點(diǎn)3：知識(shí)點(diǎn)4：溶劑效應(yīng)：指由溶劑極性不同造成的化合物吸收光譜的紅移或藍(lán)移現(xiàn)象，例如：*躍遷：溶液極性增強(qiáng)，導(dǎo)致激發(fā)態(tài)能量下降，激發(fā)態(tài)極性大于基態(tài)極性，下降更多，并且導(dǎo)致躍遷所需能量下降，最大吸收波長(zhǎng)max發(fā)生紅移。n*躍遷：溶劑極性增強(qiáng)，基態(tài)n電子容易與極性溶劑形成氫鍵，從而降低基態(tài)能量，導(dǎo)致躍遷所需能量增大，最大吸收波長(zhǎng)max發(fā)生藍(lán)移。知識(shí)點(diǎn)5：代表性生物分子的紫外-可見(jiàn)吸收光譜大多數(shù)氨基酸在可見(jiàn)光區(qū)(380-750 nm)和近紫外區(qū)(200

10、-380 nm)范圍內(nèi)沒(méi)有吸收，只有芳香族氨基酸(Phe、Tyr、Trp)具有近紫外區(qū)（280nm）的吸收，因?yàn)樗鼈兊腞基帶有苯環(huán)共軛 鍵系統(tǒng)。1、苯丙氨酸(Phe)max : 257 nm max : 200 Lmol-1 cm-1 2、酪氨酸(Tyr)max : 275 nm max : 1400 Lmol-1 cm-1 3、色氨酸(Trp)max : 280 nm max : 5600 Lmol-1 cm-1 嘌呤堿和嘧啶堿具有共軛雙鍵，使得堿基、核苷、核苷酸和核酸分子在240-290 nm處具有強(qiáng)烈吸收，最大吸收值在260 nm附近。核酸分子的紫外吸收與其堿基的相互作用具有很大關(guān)系，其

11、中變性(單鏈)核酸分子的max 相對(duì)于雙鏈核酸分子的max大，這是由于雙鏈的形成導(dǎo)致堿基對(duì)的電子云發(fā)生重疊，產(chǎn)生減色效應(yīng)，減少了對(duì)紫外光的吸收。DNA變性(增色效應(yīng))；DNA復(fù)性(減色效應(yīng)最有用的吸收光譜往往是基于n*躍遷和*躍遷而產(chǎn)生的。5、核酸的定量和純度檢測(cè)純DNA： OD260 / OD280 = 1.8；OD260 / OD230 = 2.5 純RNA： OD260 / OD280 = 2.0 ；OD260 / OD230 = 2.5 OD260 / OD280 1.8 或 2.0，則樣品污染了蛋白質(zhì)或苯酚類(lèi)物質(zhì)OD260 / OD230 2.5，則樣品污染了糖類(lèi)、無(wú)機(jī)鹽和有機(jī)溶劑知

12、識(shí)點(diǎn)6：熒光與磷光的比較：產(chǎn)生過(guò)程：熒光是從S1 S0的輻射躍遷，磷光是從T1 S0的輻射躍遷2）壽命：熒光壽命較短10-710-9s，磷光壽命較長(zhǎng)10-410s 知識(shí)點(diǎn)7：生物樣本自熒光的主要來(lái)源 苯丙氨酸Phe 酪氨酸Tyr 色氨酸Trp來(lái)源：蛋白質(zhì)(由芳香族氨基酸引起)和一些小分子代謝物特點(diǎn)：熒光強(qiáng)度較弱，最大發(fā)射波長(zhǎng)一般小于500 nm還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)最大激發(fā)波長(zhǎng)：340 nm；最大發(fā)射波長(zhǎng)：450 nm知識(shí)點(diǎn)8：設(shè)計(jì)qPCR 實(shí)驗(yàn)的關(guān)鍵一步是選擇監(jiān)測(cè)目標(biāo)序列擴(kuò)增的化學(xué)方法，可用的熒光化學(xué)方法多種多樣，被分為2 大類(lèi)：1）DNA 結(jié)合染料（SYBR Gree

13、n I），2）熒光探針（分子信標(biāo)和TaqMan）這一類(lèi)方法利用熒光共振能量傳遞（FRET），或一些其它熒光淬滅形式來(lái)保證僅在擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)時(shí)特異的熒光知識(shí)點(diǎn)9：優(yōu)化的qPCR實(shí)驗(yàn)應(yīng)該滿(mǎn)足以下幾方面的要求：標(biāo)準(zhǔn)品、待檢測(cè)的未知樣品和陰性對(duì)照樣品，在相同條件下和同一次qPCR實(shí)驗(yàn)環(huán)境中進(jìn)行擴(kuò)增；每個(gè)樣品至少具有3個(gè)平行重復(fù)，且檢測(cè)到的 CT 值波動(dòng)范圍在 0.1-0.2之內(nèi)，表明各重復(fù)樣品的數(shù)據(jù)具有良好的一致性；標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的相關(guān)系數(shù)(R2)大于0.98，表明各標(biāo)準(zhǔn)品具有一致的擴(kuò)增效率；標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的斜率應(yīng)在 -3 到 -3.5 之間，能夠反映出標(biāo)準(zhǔn)品的10倍梯度稀釋關(guān)系；擴(kuò)增效率應(yīng)在 90-105%之間，

14、表明反應(yīng)體系具有良好的擴(kuò)增性能；如果是SYBR Green I 法，熔鏈曲線(xiàn)分析中，只出現(xiàn)單一峰，表明擴(kuò)增過(guò)程具有良好的特異性，擴(kuò)增產(chǎn)物僅為單一的目的片段，結(jié)果可靠；7. 通過(guò)熔鏈曲線(xiàn)分析，陰性對(duì)照中無(wú)擴(kuò)增發(fā)生，既不會(huì)產(chǎn)生特異性產(chǎn)物，也不會(huì)產(chǎn)生非特異性產(chǎn)物，表明整個(gè)擴(kuò)增體系和過(guò)程中，沒(méi)有污染外源DNA片段，并且不會(huì)產(chǎn)生非特異性?xún)?yōu)化方法：1、無(wú)擴(kuò)增產(chǎn)物：降低退火溫度， 增加模板用量， 增加鎂離子濃度，減少dNTP用量，增加酶用量，重新設(shè)計(jì)引物2、非特異性：提高退火溫度， 減少模板用量， 減少鎂離子濃度，減少酶用量，重新設(shè)計(jì)引物3、擴(kuò)增效率過(guò)高或過(guò)低：降低模板用量，重新稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，注意加樣操作4、

15、R2值過(guò)低：重新稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，注意加樣操作5、污染發(fā)生：更換模板和實(shí)驗(yàn)用具知識(shí)點(diǎn)10：1、由于該物質(zhì)不被色譜柱吸附或溶解，因此死時(shí)間可以被用來(lái)測(cè)定流動(dòng)相的平均線(xiàn)速度2、相對(duì)保留值只與柱溫和固定相性質(zhì)有關(guān)，而與柱徑、柱長(zhǎng)、填充情況和流動(dòng)相流速無(wú)關(guān)，因此是色譜分析方法中廣泛使用的定性依據(jù)3、速率理論式中 H為板高，u 為流動(dòng)相線(xiàn)速度，A, B, C分別為渦流擴(kuò)散項(xiàng)系數(shù)、分子擴(kuò)散項(xiàng)系數(shù)、傳質(zhì)阻力擴(kuò)散項(xiàng)系數(shù)4、分離度又叫分辨率，是相鄰兩組分(A和B)色譜峰保留值之差的兩倍與兩組分色譜峰底寬之和的比值，即知識(shí)點(diǎn)11：色譜方法的選擇根據(jù)樣品物理、化學(xué)性質(zhì)選擇色譜方法；各種氣體、沸點(diǎn)5000C以下?lián)]發(fā)性、熱穩(wěn)

16、定的樣品，一般采用氣相色譜分析；非揮發(fā)性樣品，包括有機(jī)物、無(wú)機(jī)物、高分子化合物等均可采用液相色譜分析。知識(shí)點(diǎn)12：正相色譜法：流動(dòng)相極性小于固定相極性，即親水的固定相選用疏水的流動(dòng)相；在正相色譜法中：極性小的組分，保留時(shí)間短，先出峰；極性大的組分，保留時(shí)間長(zhǎng)，后出峰。反相色譜法：流動(dòng)相極性大于固定相極性，即疏水的固定相選用親水的流動(dòng)相；在反相色譜法中：極性大的組分，保留時(shí)間短，先出峰；極性小的組分，保留時(shí)間長(zhǎng)，后出峰知識(shí)點(diǎn)13：離子交換原理離子交換色譜法是利用不同離子對(duì)離子交換劑的親和力差異實(shí)現(xiàn)分離；離子交換劑一般采用離子交換樹(shù)脂，樹(shù)脂上分布有固定的帶電荷基團(tuán)和游離的平衡離子，分析物質(zhì)電離后產(chǎn)

17、生的離子可與樹(shù)脂上游離的平衡離子進(jìn)行可逆交換；根據(jù)交換的對(duì)象，可分為陽(yáng)離子交換樹(shù)脂(帶負(fù)電荷)和陰離子交換樹(shù)脂(帶正電荷)，它們各自的交換反應(yīng)過(guò)程分別如下：陽(yáng)離子交換：陰離子交換：如果增加鹽離子的濃度，則可降低樣品離子的競(jìng)爭(zhēng)吸附能力，從而降低其在固定相上的保留值PH視情況不同而定，增大pH值會(huì)使酸的解離增加，使堿的解離減少；降低pH值，其結(jié)果相反；對(duì)于單純的酸或堿，只要解離增加，就可以增大保留值；對(duì)于兩性電解質(zhì)，情況則要復(fù)雜一些蛋白質(zhì)離子交換色譜蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)(isoelectric point IP)蛋白質(zhì)所帶正、負(fù)電荷相等，即總凈電荷為零時(shí)，溶液對(duì)應(yīng)的 pH 稱(chēng)該蛋白質(zhì)等電點(diǎn)對(duì)于中性pH下

18、，某種帶有正電荷的蛋白質(zhì)，可通過(guò)陽(yáng)離子交換色譜進(jìn)行純化，知識(shí)點(diǎn)14：尺寸排阻色譜原 理：組分中，尺寸(流體力學(xué)體積)較大的分子由于不能進(jìn)入凝膠顆粒的內(nèi)部，而只能通過(guò)凝膠顆粒之間的縫隙，因此保留時(shí)間最短，最先流出；尺寸中等的組分，可以進(jìn)入較大的凝膠顆粒的內(nèi)部，同時(shí)經(jīng)過(guò)凝膠顆粒之間的縫隙，因此，保留時(shí)間較長(zhǎng)，相對(duì)于大尺寸組分，后流出；尺寸最小的組分，可以進(jìn)入所有凝膠顆粒的內(nèi)部，并經(jīng)過(guò)凝膠顆粒之間的縫隙，所經(jīng)過(guò)路徑最長(zhǎng)，因此，保留時(shí)間最長(zhǎng)，最后流出；此外，形狀規(guī)則的分子比形狀不規(guī)則的分子先流出尺寸排阻色譜的特點(diǎn)：1. 由于溶劑分子非常小，在絕大多數(shù)情況下，可被認(rèn)為是試樣中尺寸最小的組分，因此，最后流

19、出這樣試樣中的待分離組分的保留時(shí)間均小于死時(shí)間，這與其他色譜是完全相反的；2. 組分不是通過(guò)兩相之間的作用力差異來(lái)進(jìn)行分離，而是按照組分的大小和形狀進(jìn)行分離知識(shí)點(diǎn)15：親和色譜親和色譜是利用生物分子和固定相表面存在的某種特異性的靶向性和親和力，進(jìn)行選擇性分離的一種方法固定相：通常是在擔(dān)體表面鍵合具有生物識(shí)別能力的生物分子(配體)，擔(dān)體如果是凝膠，還可以實(shí)現(xiàn)“親和尺寸排阻”雙重作用流動(dòng)相：一般選擇離子強(qiáng)度較小、pH接近中性的緩沖液分離原理：組分首先與固定相上鍵合的配體進(jìn)行作用，能夠與配體進(jìn)行特異性識(shí)別和相互作用的組分將被保留，而不能作用的組分則先被洗脫，然后通過(guò)高鹽或者可溶性配體對(duì)與配體結(jié)合的組

20、分進(jìn)行洗脫，因此存在如下關(guān)系：不能與配體發(fā)生特異性親和作用的組分：保留值小，先出峰；能夠與配體發(fā)生特異性親和作用的組分：保留值大，后出峰；常用的親和識(shí)別對(duì)包括：抗原抗體；生物素(biotin)鏈合親霉素(SA)；組氨酸鎳；酶底物(如，谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶谷胱甘肽)；鈣鈣調(diào)蛋白等知識(shí)點(diǎn)16：數(shù)值孔徑又稱(chēng)為(numerical aperture NA)，是物鏡前透鏡與被檢測(cè)物體之間介質(zhì)的折射率()和孔徑角()半數(shù)的正弦之乘積，用公式表示如下：顯微鏡的有效放大倍數(shù)取決于其N(xiāo)A的大小，一般是NA的5001000 倍；可見(jiàn)，提高NA，可以提高有效放大倍數(shù)；焦深與放大率和NA成反比；NA越大，焦深越淺NA大的

21、物鏡，工作距離小，這是因?yàn)橄鄳?yīng)的孔徑角較大視場(chǎng)直徑與視場(chǎng)數(shù)成正比，與物鏡倍率成反比前向散射(FSC)也稱(chēng)小角散射，該值的大小與細(xì)胞的直徑成近似線(xiàn)性關(guān)系，即細(xì)胞尺寸越大，其FSC越大，反之亦然側(cè)向散射(SSC)也稱(chēng)90散射，它對(duì)細(xì)胞膜、胞質(zhì)和核膜的折射更加敏感，其散射強(qiáng)度幾乎與細(xì)胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)的質(zhì)量成近似線(xiàn)性關(guān)系，即細(xì)胞內(nèi)部顆粒結(jié)構(gòu)越復(fù)雜、質(zhì)量越大，其SSC越大，反之亦然計(jì)算題離心力與轉(zhuǎn)速的換算：離心力： F m2r 習(xí)慣上F常以相對(duì)離心力(RCF)的大小來(lái)衡量：RCF m2r /mg 2r /g g980cm/s將上式中角速度用轉(zhuǎn)速n (rpm；r/min)來(lái)表示： 2n/60 則 RCF (

22、2n/60) 2r /g 1.11910-5n2r ( 單位:g)例如：文獻(xiàn)中報(bào)道，對(duì)某樣品的離心使用半徑為23.5 cm的轉(zhuǎn)頭，12,000 r/min離心30 min可獲得較好的離心結(jié)果，但是你的實(shí)驗(yàn)室中只有25 cm轉(zhuǎn)頭，請(qǐng)問(wèn)如何重復(fù)出文獻(xiàn)中的離心效果？RCF 1.11910-5n2rRCF 3, 7866.96 g2、3、塔板理論如果色譜柱長(zhǎng)度為 L，理論塔板數(shù)用n表示，則柱長(zhǎng)度、理論塔板高度、理論塔板數(shù)的關(guān)系如下：但是，在上述公式中，由于死時(shí)間 tM 包括在保留時(shí)間 tR 內(nèi)，但是流動(dòng)相并不參與兩相分配過(guò)程，計(jì)算出的理論塔板數(shù)比實(shí)際偏高，因此提出將死時(shí)間 tM 扣除，再來(lái)計(jì)算有效塔板

23、數(shù)論述題朗伯比爾定律：當(dāng)一束平行單色光垂直照射到樣品溶液時(shí)，溶液的吸光度與溶液的濃度及光程成正比關(guān)系。AlgT= bc : 摩爾吸光系數(shù) 表示物質(zhì)的濃度為1mol/L，液層厚度為1cm時(shí)溶液的吸光度，單位： (Lmol-1 cm-1) A=lg (I0 / It ) lgT T = It / I0 朗伯比爾定律的局限性：比爾定律本身的局限性 比爾定律只適用于稀溶液，這是該定律的最主要限定條件濃度過(guò)大，吸收組分的平均距離減小，以致每個(gè)粒子都會(huì)影響其相鄰粒子的電荷分布，導(dǎo)致發(fā)生改變，吸光度和濃度關(guān)系偏離比爾定律2）化學(xué)偏離 比爾定律成立的條件之二：測(cè)試體系中無(wú)發(fā)射、散射或光化學(xué)反應(yīng)，即溶液中存在著

24、離解、聚合、互變異構(gòu)等化學(xué)平衡時(shí)，會(huì)導(dǎo)致溶液濃度發(fā)生變化，影響吸光度與濃度的線(xiàn)性關(guān)系。3）儀器偏離 比爾定律成立的條件之三： 平行單色光，即只有采用真正的單色輻射，才能觀測(cè)到吸收體系嚴(yán)格遵守比爾定律 當(dāng)儀器單色光不純引起的偏離，事實(shí)上，通過(guò)波長(zhǎng)選擇器從連續(xù)光源中分離出的波長(zhǎng)，只是包括所需波長(zhǎng)的波長(zhǎng)帶，即從連續(xù)光源中獲得單一波長(zhǎng)的純單色光是很難辦到的4）非均相體系偏離 比爾定律成立的條件之四：均相體系(真溶液 非均勻介質(zhì) 膠體，懸浮、乳濁等對(duì)光產(chǎn)生散射，使實(shí)測(cè)吸光度增加，導(dǎo)致線(xiàn)性關(guān)系上彎，偏離比爾定律2、三種類(lèi)型光譜儀的結(jié)構(gòu)、光路、優(yōu)缺點(diǎn)：（不是重點(diǎn)） 1）單光束分光光度計(jì)：從單色器中分離得到的

25、單一光束輪流通過(guò)參比溶液和試樣溶液進(jìn)行吸光度測(cè)量?jī)?yōu)點(diǎn)：結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單；價(jià)格低廉；容易維修缺點(diǎn)：受光源、檢測(cè)器波動(dòng)的影響；不能自動(dòng)記錄吸收光譜應(yīng)用范圍：常規(guī)分析 2）雙光束分光光度計(jì)：從單色器中分離得到的光束經(jīng)過(guò)分光鏡分為兩束光，并分別同時(shí)通過(guò)參比溶液和試樣溶液，最后再通過(guò)另一組反射鏡和分光鏡進(jìn)入檢測(cè)器進(jìn)行檢測(cè)優(yōu)點(diǎn)：能自動(dòng)記錄吸收光譜（自動(dòng)掃描）；不受光源和檢測(cè)器的波動(dòng)不影響(不斷通過(guò)參比校正誤差)；是目前用得最多的分光光度計(jì)缺點(diǎn)：無(wú)應(yīng)用范圍：最為廣泛 3）雙波長(zhǎng)分光光度計(jì)：從光源發(fā)出的光被分為兩束，并分別進(jìn)入兩個(gè)單色器，從而同時(shí)得到兩束不同波長(zhǎng)的單色光，再經(jīng)過(guò)切光器使這兩束單色光交替通過(guò)同一樣品池，

26、并檢測(cè)兩波長(zhǎng)處的吸光度差值，當(dāng)兩個(gè)波長(zhǎng)保持1-2 nm間隔，并同時(shí)掃描時(shí)，將得到吸光度對(duì)波長(zhǎng)的變化率曲線(xiàn)，即導(dǎo)數(shù)吸收光譜曲線(xiàn)。優(yōu)點(diǎn)：更高的分辨能力，可以測(cè)定較高濃度的樣品溶液，不受光源和檢測(cè)器波動(dòng)的影響，可以扣除背景吸收缺點(diǎn)：價(jià)格昂貴應(yīng)用范圍：多組分混合物或透明性較差的生物樣品分析。3、熒光光譜的基本過(guò)程基本過(guò)程及機(jī)理：分子熒光、磷光產(chǎn)生以電子能級(jí)間的躍遷為基礎(chǔ)分子被激發(fā)到S1以上的不同振動(dòng)能級(jí)，處于這種激發(fā)態(tài)的分子不穩(wěn)定，其電子很快發(fā)生振動(dòng)弛豫，衰變到到同一電子態(tài)的最低振動(dòng)能級(jí)如果分子被激發(fā)到S2以上的不同振動(dòng)能級(jí)，則發(fā)生S2到S1的內(nèi)轉(zhuǎn)化(S2 到S1)和振動(dòng)弛豫而衰變到S1的最低振動(dòng)能級(jí)

27、，接著，有如下幾種途徑衰變到基態(tài)： 1）S1 S0 的輻射躍遷而發(fā)射熒光 (10-710-9s) 2）S1 S0 的非輻射躍遷，即內(nèi)轉(zhuǎn)換 (不發(fā)光) 3） S1 T1的非輻射躍遷，即系間竄越，接著發(fā)生T1 S0的輻射躍遷而發(fā)射磷光 (10-410s)4）S1 T1的系間竄越，接著發(fā)生TIS1的熱活化，最后通過(guò)S1 S0的輻射躍遷而發(fā)射遲滯熒光。發(fā)射光譜的特征：斯托克斯位移：熒光波長(zhǎng)總是大于激發(fā)光波長(zhǎng)斯托克斯位移的產(chǎn)生說(shuō)明了在激發(fā)和發(fā)射之間存在一定的能量損失，其產(chǎn)生的原因在于：a分子在發(fā)射熒光之前，很快經(jīng)歷了振動(dòng)弛豫和(或)內(nèi)轉(zhuǎn)化，而損失部分激發(fā)能，只是發(fā)射相對(duì)激發(fā)有第一定的能量損失 (主要原因

28、) b輻射躍遷可能只使激發(fā)態(tài)分子衰變到基態(tài)的不同振動(dòng)能級(jí)，然后通過(guò)基態(tài)的振動(dòng)弛豫進(jìn)一步損失能量 c溶劑效應(yīng)，比如極性溶劑會(huì)使激發(fā)態(tài)能量降低發(fā)射光譜的形狀通常與激發(fā)光波長(zhǎng)無(wú)關(guān)：發(fā)射光譜通常只含有一個(gè)發(fā)射帶發(fā)射光譜與吸收光譜呈鏡像對(duì)稱(chēng)的關(guān)系，熒光發(fā)射是光吸收的逆過(guò)程6、熒光量子產(chǎn)率( Yf )：熒光物質(zhì)吸收光后，所發(fā)射的熒光的光子數(shù)與所吸收的激發(fā)光的光子數(shù)的比值熒光量子產(chǎn)率的大小取決于物質(zhì)的化學(xué)結(jié)構(gòu)和實(shí)際測(cè)定的溶液環(huán)境，但通常不隨激發(fā)光波長(zhǎng)而改變，因此，可以用來(lái)反應(yīng)熒光物質(zhì)的熒光性能熒光量子產(chǎn)率越大，單位濃度的熒光物質(zhì)的熒光強(qiáng)度越大，熒光性能更加優(yōu)越影響熒光的因素有：其特定分子的結(jié)構(gòu)，測(cè)試溶液性質(zhì)

29、包括PH值，溫度等結(jié)構(gòu)因素包括：1）隨著電子共軛度的加大和分子平面度的增加，熒光效率也增大隨著鹵素取代基鹵素原子序數(shù)增加而熒光下降，原因是“重原子效應(yīng)”導(dǎo)致系間竄越幾率增大；環(huán)境因素包括：1）熒光波長(zhǎng)隨著溶劑極性的增大而紅移，熒光強(qiáng)度增強(qiáng)溶劑粘度減小或溫度升高，增加熒光分子相互碰撞的機(jī)會(huì)，導(dǎo)致非輻射躍遷的幾率增加，而使熒光效率下降PH值：每一種熒光物質(zhì)都有它最適宜的發(fā)射熒光的存在形式，也就是它最適宜的PH范圍，熒光物質(zhì)本身是弱酸或弱堿時(shí)，PH值對(duì)熒光強(qiáng)度有較大的影響。熒光淬滅的幾種方式：熒光分子與溶劑分子或其它溶質(zhì)分子的相互作用而引起的熒光量子產(chǎn)率降低的作用常見(jiàn)的熒光猝滅劑：分子氧，能引起幾乎

30、所有熒光物質(zhì)產(chǎn)生不同程度的熒光猝滅；胺類(lèi)物質(zhì)，大多數(shù)未取代芳烴的有效猝滅劑；鹵素化合物，對(duì)奎寧的熒光有顯著的猝滅作用重金屬離子；硝基化合物等淬滅方式動(dòng)態(tài)淬滅：淬滅劑與熒光物質(zhì)的激發(fā)態(tài)分子之間的相互作用，激發(fā)態(tài)的熒光分子與淬滅劑發(fā)生碰撞后，將激發(fā)能轉(zhuǎn)化為熱能，便使激發(fā)態(tài)分子以非輻射躍遷的方式回到基態(tài)，影響熒光分子的激發(fā)態(tài)壽命，而不改變其吸收光譜，溫度升高，淬滅增強(qiáng)靜態(tài)淬滅：淬滅劑與熒光物質(zhì)的基態(tài)分子之間相互作用，形成不發(fā)光的配合物，不影響熒光分子的激發(fā)態(tài)壽命，涉及吸收光譜發(fā)生改變，溫度升高，淬滅減弱能量轉(zhuǎn)移，也屬于動(dòng)態(tài)淬滅，淬滅劑與受激發(fā)的熒光分子相互作用后，發(fā)生能量轉(zhuǎn)移，使得淬滅劑得到激發(fā)氧的

31、淬滅：氧存在的情況下，增強(qiáng)了熒光物質(zhì)激發(fā)態(tài)分子的S1T1的系間竄越，隨著溶劑介電常數(shù)的減小而增加自淬滅和自吸收：由于激發(fā)態(tài)分子之間的相互碰撞產(chǎn)生能量損失，所以當(dāng)熒光物質(zhì)濃度較大時(shí)，會(huì)發(fā)生自淬滅現(xiàn)象；當(dāng)熒光物質(zhì)的吸收光譜和發(fā)射光譜重疊嚴(yán)重時(shí)，熒光被溶液中處于基態(tài)的分子吸收，稱(chēng)為自吸收。動(dòng)態(tài)猝滅(熱能釋放)；靜態(tài)猝滅(形成不發(fā)光的配合物，涉及吸收光譜改變)能量轉(zhuǎn)移(激發(fā)猝滅劑)；氧的猝滅作用自猝滅和自吸收；氣相色譜的選擇：在GC中，固定相可分為液體固定相(氣-液色譜) 和 固體固定相(氣-固色譜)，其中液體固定相應(yīng)用更為廣泛；氣相色譜的應(yīng)用范圍GC可應(yīng)用于分析氣體試樣，也可分析易揮發(fā)或可轉(zhuǎn)化為易揮

32、發(fā)的液體和固體試樣，不僅可以分析有機(jī)物，也可應(yīng)用于無(wú)機(jī)物的分析；一般來(lái)說(shuō)，只要沸點(diǎn)在500 以下，熱穩(wěn)定性良好的物質(zhì)，原則上都可采用GC進(jìn)行分離和分析；然而對(duì)于難揮發(fā)和熱不穩(wěn)定的物質(zhì)，GC一般不再適用，但是近年來(lái)，裂解GC(將大分子量的物質(zhì)在高溫下裂解為易揮發(fā)的小分子，然后通過(guò)GC進(jìn)行分析)、反應(yīng)GC(通過(guò)適當(dāng)化學(xué)反應(yīng)將難揮發(fā)物質(zhì)轉(zhuǎn)化為易揮發(fā)物質(zhì)，然后通過(guò)GC進(jìn)行分析)的應(yīng)用，擴(kuò)展了GC的應(yīng)用范圍氣相色譜分離中，欲使色譜峰寬減小，可采取以下措施：減小色譜柱長(zhǎng)度，增加柱溫、減小進(jìn)樣量，較小填料粒度9、HPLC 與 GC 的比較：(1) GC分析對(duì)象只限于分析氣體和沸點(diǎn)較低的化合物，它們僅占有機(jī)物

33、總數(shù)的20，對(duì)于占有機(jī)物總數(shù)近80的那些高沸點(diǎn)、熱穩(wěn)定性差、摩爾質(zhì)量大的物質(zhì)，目前主要采用HPLC進(jìn)行分離和分析；(2) GC的流動(dòng)相一般采用惰性氣體，它對(duì)組分沒(méi)有親和力，即不產(chǎn)生相互作用力，僅起運(yùn)載作用；而HPLC的流動(dòng)相可選用不同極性的液體，選擇余地大，它對(duì)組分可產(chǎn)生一定親和力，并參與固定相對(duì)組分作用的劇烈競(jìng)爭(zhēng)；因此，流動(dòng)相對(duì)分離起很大作用，相當(dāng)于增加了一個(gè)控制和改進(jìn)分離條件的參數(shù)，這為選擇最佳分離條件提供了極大方便(3) GC一般都在較高溫度下進(jìn)行的，而HPLC則經(jīng)常可在室溫條件下工作；總之，高效液相色譜法是吸取了GC與經(jīng)典LC優(yōu)點(diǎn)，并用現(xiàn)代化手段加以改進(jìn)，因此得到迅猛的發(fā)展，目前高效液

34、相色譜法已被廣泛應(yīng)用于分析對(duì)生物學(xué)和醫(yī)藥上有重大意義的生物分子，例如蛋白質(zhì)、核酸、氨基酸、多糖類(lèi)、植物色素、高聚物、染料及藥物等物質(zhì)的分離和分析根據(jù)樣品物理、化學(xué)性質(zhì)選擇色譜方法；各種氣體、沸點(diǎn)5000C以下?lián)]發(fā)性、熱穩(wěn)定的樣品，一般采用氣相色譜分析；非揮發(fā)性樣品，包括有機(jī)物、無(wú)機(jī)物、高分子化合物等均可采用液相色譜分析補(bǔ)充內(nèi)容緒論 精密度 dr = s/ x dr :相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(精確度)；s : 絕對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差；X : n次測(cè)量的平均值 S ：絕對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差n ：測(cè)量次數(shù)Xi：代表單次測(cè)量結(jié)果 X ：代表n次測(cè)量結(jié)果的平均值靈敏度檢出限Sm = Sblank + k sb Sm = Sblank

35、+ 3sb儀器或方法的靈敏度越高，精密度越好，檢出限就越低；一般用S/N來(lái)描述儀器的信噪比，多數(shù)情況下，N是恒定的，與S大小無(wú)關(guān)，當(dāng)測(cè)量信號(hào)較小時(shí)，測(cè)量的相對(duì)誤差將增加。 生物樣品預(yù)制備沉降速度：指在離心力作用下，顆粒在單位時(shí)間內(nèi)的運(yùn)動(dòng)距離差速離心：原理：差速離心是采取逐漸提高離心速度的方法分離不同大小的顆粒。起始的離心速度較低，讓較大的顆粒沉降到管底，小的顆粒仍然懸浮在上清液中。收集沉淀，改用較高的離心速度離心懸浮顆粒，將較小的顆粒沉降，以此類(lèi)推，達(dá)到分離不同大小顆粒的目的。用差速離心分離法分離顆粒不僅取決于顆粒的質(zhì)量和形狀而且也取決于顆粒的密度。離心開(kāi)始時(shí)首先是質(zhì)量最大顆粒的樣品沉降,而且

36、在質(zhì)量和密度相同的條件下,球體顆粒沉降速度要比形狀不對(duì)稱(chēng)的顆粒快，如果質(zhì)量相同而密度不同的顆粒,密度大的沉降得快。原理：用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將具有不同顆粒性質(zhì)的樣品置于介質(zhì)的頂部，通過(guò)離心力場(chǎng)的作用使樣品分層、分離；該方法對(duì)密度介質(zhì)的要求主要包括：1）能產(chǎn)生密度梯度，且密度高時(shí)，粘度適中；2）pH中性或易調(diào)為中性；3）濃度大時(shí)滲透壓不大；4）對(duì)生物樣品惰性；5）易于從介質(zhì)中重新回收樣品；6）在紫外區(qū)或近紫外區(qū)無(wú)吸收，常用的密度介質(zhì)有：密度梯度離心常用的介質(zhì)為氯化銫，蔗糖、多聚蔗糖和硅膠顆粒等。光學(xué)分析導(dǎo)論與光譜法不同，非光譜法不涉及到能量躍遷，而是利用了光與物質(zhì)

37、作用時(shí)所產(chǎn)生的反射、折射、干涉、衍射和偏振的變化來(lái)達(dá)到分析測(cè)試的目的；光譜法的定義：光譜法是基于物質(zhì)與輻射能作用時(shí)，測(cè)量由物質(zhì)內(nèi)部發(fā)生量子化的能級(jí)之間的躍遷而產(chǎn)生的發(fā)射、吸收或散射的波長(zhǎng)和強(qiáng)度進(jìn)行分析的方法單色器也稱(chēng)為分光系統(tǒng)，可將由不同波長(zhǎng)的“復(fù)合光”分開(kāi)為一系列“單一”波長(zhǎng)的“單色光”的器件；理想的100%的單色光是不可能達(dá)到的，實(shí)際上只能獲得的是具有一定“純度”的單色光，即該單色光具有一定的寬度(有效帶寬)；有效帶寬越小，分析的靈敏度越高，選擇性越好，分析物濃度與光學(xué)響應(yīng)信號(hào)的線(xiàn)性相關(guān)性也越好狹縫寬度的選擇原則*定性分析：選擇較窄的狹縫寬度可提高分辨率，減少其它譜線(xiàn)的干擾，提高選擇性；定

38、量分析：選擇較寬的狹縫寬度可增加光強(qiáng)度，提高分析的靈敏度；應(yīng)根據(jù)實(shí)驗(yàn)對(duì)象和分析要求確定狹縫寬度，并通過(guò)條件優(yōu)化確定最佳狹縫寬度，如選擇光譜半峰寬的十分之一可以兼顧靈敏度和光強(qiáng)度 原子吸收光譜測(cè)定對(duì)象：定物質(zhì)中某種元素的存在和含量同一周期：從左到右，原子半徑逐漸減小，原子核對(duì)價(jià)電子束縛增加，所需激發(fā)能越來(lái)越高同一主族：自上而下，所需激發(fā)能越來(lái)越低AAS是應(yīng)用廣泛的微量金屬和非金屬元素的首選測(cè)定方法線(xiàn)光譜 (Line spectra) 由處于氣相的單個(gè)原子發(fā)生電子能級(jí)躍遷所產(chǎn)生的銳線(xiàn)；例 如：鈉原子基態(tài)的光譜項(xiàng)是： 32S1/2 第一激發(fā)態(tài)的光譜項(xiàng)是：32P1/2與32P3/2其中：主量子數(shù)變化：

39、n = 3-3 =0； 總角量子數(shù)變化：L = P - S =1； 總自旋量子數(shù)變化： S = (2s-1) (2s-1) =0； 內(nèi)量子數(shù)變化： J = 1/2 1/2 = 0 or 3/2 1/2 = 1鈉原子第二激發(fā)態(tài)的光譜項(xiàng)為：32D3/2 與 32D5/2當(dāng)電子在3p與3d之間躍遷時(shí)，有四種可能的躍遷：32P1/2-32D5/2、32P1/2-32D3/2、32P3/2-32D5/2、32P3/2-32D3/2實(shí)際上只觀察到后三種躍遷，因第一種躍遷J=2，是禁戒的光源應(yīng)滿(mǎn)足如下要求：（1）光源的帶寬比吸收峰的寬度窄，才能滿(mǎn)足比爾定律的濃度和吸光度的線(xiàn)性關(guān)系；因此，在原子吸收光譜中不能

40、使用連續(xù)光源的激發(fā)模式；（2）根據(jù)氣態(tài)自由原子對(duì)同種原子輻射的特征譜線(xiàn)產(chǎn)生自吸的現(xiàn)象，應(yīng)該使用待測(cè)元素的共振線(xiàn)作為輻射源；（3）輻射光強(qiáng)度大，穩(wěn)定性好；（4）光源溫度低于原子化溫度，防止多普勒變寬火焰的類(lèi)型化學(xué)計(jì)量火焰：燃?xì)馀c助燃?xì)獾谋壤c它們之間的化學(xué)反應(yīng)計(jì)量關(guān)系相近；特點(diǎn)：溫度高，干擾少，穩(wěn)定，背景低，常用；富燃火焰：燃?xì)馀c助燃?xì)獾谋壤笥诨瘜W(xué)計(jì)量關(guān)系特點(diǎn)：還原性火焰，燃燒不完全，適用于測(cè)定易形成氧化物的元素，如：鐵、鈷和鎳等；貧燃火焰：燃?xì)馀c助燃?xì)獾谋壤∮诨瘜W(xué)計(jì)量關(guān)系特點(diǎn)：火焰溫度低，氧化性氣氛，適用于測(cè)定易解離的元素，如：堿性金屬測(cè)定1 優(yōu)點(diǎn) (1) 檢出限低、靈敏度高 20種元素優(yōu)

41、于AAS (2) 譜線(xiàn)簡(jiǎn)單、干擾小(3) 線(xiàn)性范圍寬（可達(dá)35個(gè)數(shù)量級(jí)） (4) 易實(shí)現(xiàn)多元素同時(shí)測(cè)定（產(chǎn)生的熒光向各個(gè)方向發(fā)射）缺點(diǎn) 存在熒光淬滅效應(yīng)、散射光干擾等問(wèn)題；三種類(lèi)型：共振熒光、非共振熒光與敏化熒光共振熒光：氣態(tài)原子吸收共振線(xiàn)被激發(fā)后，激發(fā)態(tài)原子再發(fā)射出與共振線(xiàn)波長(zhǎng)相同的熒光；非共振熒光：當(dāng)熒光與激發(fā)光的波長(zhǎng)不相同時(shí)，產(chǎn)生非共振熒光；分為：直躍線(xiàn)熒光、階躍線(xiàn)熒光、anti-Stokes熒光三種； 原子發(fā)射光譜1原子發(fā)射光譜(AES;)：是依據(jù)每種化學(xué)元素的原子或離子在熱激發(fā)或電激發(fā)下，發(fā)射特征的電磁輻射，而進(jìn)行元素定性、半定量和定量分析的方法，它是光學(xué)分析法中產(chǎn)生與發(fā)展最早的一種

42、分析方法定性分析由于待測(cè)原子的結(jié)構(gòu)不同，因此發(fā)射譜線(xiàn)特征不同定量分析由于待測(cè)原子的濃度不同，因此發(fā)射強(qiáng)度不同2在原理上，AES與AAS的區(qū)別：測(cè)定發(fā)射；AES與AFS的區(qū)別：激發(fā)方式不同，AES屬于熱致激發(fā)或者電致激發(fā)，而AFS屬于光致激發(fā)；但都是線(xiàn)光譜3AES特點(diǎn);多元素同時(shí)檢測(cè)能力；分析速度快；選擇性好，能產(chǎn)生很多光譜線(xiàn)，定性分析很有優(yōu)勢(shì)，但是由于譜線(xiàn)干擾增加了定量分析的難度，因此需要高分辨儀器；檢出限較低，一般光源可達(dá)ug/mL，如采用電感耦合等離子體（ICP）作為光源，則可降低至 ng/mL；精密度好，一般光源為10%左右，線(xiàn)性范圍約2個(gè)數(shù)量級(jí)。 ICP精密度達(dá)到1%以下，線(xiàn)性范圍可延長(zhǎng)至7個(gè)數(shù)量級(jí)，這種方法可有效地用于同時(shí)測(cè)量高、中、低含量的元素；試樣消耗少；非金屬元素測(cè)定困難4 在AES中，光源具有使試樣蒸發(fā)、解離、原子化、激發(fā)、躍遷產(chǎn)生光輻射的作用；一般光源可達(dá)ug/mL，如采用電感耦合等離子體（ICP）作為光源，則可降低至 ng/mL；目前常用的光源有直流電弧、交流電弧、電火花及電感耦合等離子體(ICP)；紫外吸收光譜 * 躍遷和n *是有機(jī)化合物電子躍遷和紫外 可見(jiàn)吸收的最重要的兩種形式熒光PCRA PCR原理：以DNA為模板、4種dNTP為底物，在模板3末端有引物存在的條件下，利用耐熱DNA聚合酶進(jìn)行互補(bǔ)鏈的