細(xì)菌診斷學(xué)ppt課件

1、細(xì)菌學(xué)診斷根底韓惠瑛第一部分 緒論微生物包括非構(gòu)外型：體積小，不具備細(xì)胞構(gòu)造，必需在活細(xì)胞內(nèi)才干增殖，如病毒。原核細(xì)胞型：僅有核質(zhì)，無(wú)核膜和核仁，缺乏完好細(xì)胞器，如細(xì)菌、螺旋體、支原體真核細(xì)胞型：細(xì)胞核的分化程度高，有核膜、核仁和染色體，完好的細(xì)胞器，如真菌微生物的分布廣利與弊-能引起人和動(dòng)物發(fā)病的細(xì)菌稱為病原菌微生物的開(kāi)展史19世紀(jì)中葉開(kāi)展為一門(mén)科學(xué)，實(shí)踐是從發(fā)明顯微鏡之后發(fā)現(xiàn)了微生物世界1、形狀學(xué)時(shí)期，17世紀(jì)末至19世紀(jì)中葉近200年2、生理學(xué)及免疫學(xué)時(shí)期3、近代微生物時(shí)期一、細(xì)菌根本形狀球菌：?jiǎn)吻颉㈦p球、 鏈球、葡萄球菌桿菌：短桿、長(zhǎng)桿、棒桿、梭桿等。螺菌：弧菌、螺旋菌等。第二部分 細(xì)

2、菌根本形狀與構(gòu)造1、球菌 鏈球菌：留意其鏈狀陳列，鏈的長(zhǎng)短，個(gè)體的形狀。 葡萄球菌：留意其無(wú)一定次序，無(wú)一定數(shù)目，不規(guī)那么地堆放在一同的形狀。雙球菌：兩輛相連，呈腎壯、扁豆?fàn)罨蛎鉅铍p球菌diplococcus腦膜炎萘瑟菌肺炎雙球菌+葡萄球菌 Staphylococcus葡萄球菌電鏡片葡萄球菌革蘭氏染色+葡萄球菌Staphylococcus鏈球菌Streptococcus(Hemoculture)豬鏈球菌的形狀+四聯(lián)球菌Tetracoccus八疊球菌Sarcina2、桿菌bacillus，bacilli菌體呈圓柱形或近似卵圓形,桿菌的種類很多，其長(zhǎng)短、粗細(xì)及顯微鏡下的籠統(tǒng)很不一致。大腸桿菌 E

3、.coli大腸桿菌 E.coli沙門(mén)氏菌 Salmonella.sp大腸桿菌(SEM)沙門(mén)氏菌salmonella(SEM)布氏桿菌Bacterium burgeri G- 銅鋁假單胞桿菌綠膿桿菌G-產(chǎn)氣莢膜梭菌Clostridium perfringens產(chǎn)氣莢膜梭菌(SEM)乳酸桿菌lactobacilli結(jié)核桿菌Tbc (SEM)枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis (SEM)單核細(xì)胞增生性李氏桿菌(SEM)炭疽繁衍體(SEM)空腸彎曲桿菌(SEM)雙歧桿菌鼻疽桿菌細(xì)直、微彎兩端鈍園的G-桿菌炭疽桿菌炭疽桿菌炭疽桿菌在動(dòng)物體內(nèi)的形狀炭疽桿菌蠟狀桿菌炭疽桿菌禽分支桿菌結(jié)核分支桿菌

4、李氏桿菌鼠傷寒沙門(mén)氏菌 (x 20,800)肉毒桿菌C. botulinum白喉棒狀桿菌大腸桿菌 E. coli (0157:H7志賀氏痢疾桿菌 (x 22,400)3、螺旋狀菌spirillum菌體呈彎曲或螺旋狀的園柱形，兩端圓或尖突又可分弧菌和螺菌兩種弧菌vibrio：菌體只需一個(gè)彎曲，呈弧形或逗點(diǎn)狀，螺菌spirillum：菌體較長(zhǎng)，有兩個(gè)以上的彎曲，捻轉(zhuǎn)呈螺旋狀螺旋狀菌spirillum螺菌弧菌霍亂弧菌 (x 15,575)梅毒螺旋體Microspironema pallidum鉤端螺旋體二、細(xì)菌的構(gòu)造內(nèi)部構(gòu)造細(xì)胞漿核蛋白體核體核質(zhì)質(zhì)粒間體內(nèi)含物芽孢細(xì)胞膜菌毛表層構(gòu)造外部附件鞭毛細(xì)胞壁

5、莢膜按分布部位大致可分為習(xí)慣上：細(xì)菌的構(gòu)造根本構(gòu)造特殊構(gòu)造細(xì)胞壁、細(xì)胞膜、細(xì)胞漿、核物質(zhì)、核糖體和內(nèi)含物等細(xì)菌根本生命活動(dòng)中所必需各種細(xì)菌都具有的構(gòu)造 如莢膜、鞭毛、菌毛、芽孢等與根本生命活動(dòng)沒(méi)有多大關(guān)系并不是一切細(xì)菌都有這些構(gòu)造細(xì)胞質(zhì)間體菌毛莢膜細(xì)胞膜鞭毛內(nèi)含顆粒核糖體核體細(xì)胞壁/外膜假設(shè)存在細(xì)胞壁(Cell wall)細(xì)胞壁位于細(xì)菌細(xì)胞最外層，貼近胞漿膜之外，是一層無(wú)色透明，堅(jiān)韌而具有一定彈性的膜狀構(gòu)造。細(xì)菌細(xì)胞壁化學(xué)組成構(gòu)造不同，將細(xì)菌分為 -革蘭氏陽(yáng)性菌 G+ -革蘭氏陰性菌 G-革蘭氏陽(yáng)性菌細(xì)胞壁方式圖革蘭氏陰性菌的細(xì)胞壁方式圖革蘭氏陽(yáng)性菌和陰性菌細(xì)胞壁電鏡圖革蘭氏陽(yáng)性菌革蘭氏陰性菌

6、Gram stain of Gram + Staphylococcus cellsGram stain of Gram - E. coli cells 細(xì)菌芽孢破傷風(fēng)芽孢桿菌 Bacillus tetani細(xì)菌莢膜粘液層鞭毛莢膜普通染色光鏡察看肺炎球菌莢膜三、細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)細(xì)菌的化學(xué)組成：水70-90%、固形物10-30%細(xì)菌的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：水、糖類、蛋白質(zhì)、無(wú)機(jī)鹽、生長(zhǎng)因子四、細(xì)菌的生長(zhǎng)繁衍條件：營(yíng)養(yǎng)、溫度、酸堿度、浸透壓、氣體環(huán)境繁衍方式與速度：簡(jiǎn)單的二分列式。緩慢期、對(duì)數(shù)期、穩(wěn)定期、衰老期。五、細(xì)菌的新陳代謝酶在新陳代謝中作用：胞內(nèi)酶、胞外酶呼吸類型，對(duì)氧的需求：專性需氧菌、專性厭氧菌、兼性厭氧

7、菌代謝產(chǎn)物：糖-糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、甲基紅實(shí)驗(yàn)、伏-普實(shí)驗(yàn)。蛋白質(zhì)-吲哚實(shí)驗(yàn)、硫化氫實(shí)驗(yàn)、尿素實(shí)驗(yàn)、硝酸鹽復(fù)原實(shí)驗(yàn)。其他代謝產(chǎn)物：無(wú)機(jī)酸、有機(jī)酸、氨基酸、醇類、脂類、維生素、抗生素、毒素。第三部分 細(xì)菌病的診斷程序 一、診斷的根據(jù)畜禽細(xì)菌性病少數(shù)可根據(jù)流行情況、臨床病癥做出診斷，如破傷風(fēng)。畜禽細(xì)菌性病多數(shù)在流行情況調(diào)查、臨床病癥、病理剖解的根底，結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷做出最后確診。診斷方法有：顯微鏡檢查光鏡、電鏡、病原的分別培育、血清學(xué)抗體檢測(cè)、病原的分子生物學(xué)檢測(cè)。 二、細(xì)菌實(shí)驗(yàn)室診斷內(nèi)容流 程無(wú)菌操作貫穿一直病料的采集和運(yùn)送病料處置細(xì)菌的分別與接種細(xì)菌的培育鑒定病料采集涂片、染色鏡檢染色及形狀特征分別培育

8、察看培育特性挑取可疑菌落純培育食物中毒的嘔吐物或疑似剩余食物涂片、染色、鏡檢生化實(shí)驗(yàn)毒素檢測(cè)細(xì)菌分別鑒定程序血清學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)血清學(xué)實(shí)驗(yàn)分子生物學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)病料的采集1、病料采集根本原那么采樣所用器械應(yīng)事先消毒。無(wú)菌操作貫穿一直。對(duì)急性死亡的動(dòng)物，從耳尖或四肢末梢血管取血制成涂片，染色鏡檢，在排除炭疽后方能剖檢取樣。要分別病原菌，應(yīng)采集到含菌最多的組織臟器。采集的病料要盡能夠齊全，除了內(nèi)臟、淋巴結(jié)和部分病變組織外，還應(yīng)采取腦組織和骨髓，以防脫漏。病料應(yīng)新穎，動(dòng)物死后，應(yīng)立刻采集，夏天不宜超越6-8小時(shí)，冬天不應(yīng)遲于24小時(shí)。采集、包裝和送檢過(guò)程中要留意平安，做好個(gè)人防護(hù)和環(huán)境消毒，防止病原菌的分

9、散。做好記錄和標(biāo)志采集的病料內(nèi)臟器官血液糞便濃汁皮膚和粘膜腦和脊髓膽汁腸和胃乳汁流產(chǎn)胎兒2、病料采集方法液體資料的采集內(nèi)臟皮膚及羽毛胎兒檢出形狀與染色上具有特征性的病原菌，有助于病原的初步診斷或確診，如痰液檢出抗酸性分支桿菌形狀學(xué)檢查特定部位的標(biāo)本直接涂片染色后鏡檢分別培育 在細(xì)菌學(xué)診斷中，分別培育是不可短少的一環(huán)。 主要是在含許多細(xì)菌的病料或培育物中挑選出某種細(xì)菌。 選擇適宜于所分別細(xì)菌生長(zhǎng)的培育基、培育溫度、氣體條件等。同時(shí)應(yīng)嚴(yán)厲按無(wú)菌操作程序進(jìn)展實(shí)驗(yàn)，并做好標(biāo)志。分別培育的目的分別培育時(shí)應(yīng)留意2、細(xì)菌的分別培育無(wú)菌采集的標(biāo)本污染的標(biāo)本選擇或鑒別培育基選擇適宜的培育基是分別出病原菌的重要環(huán)

10、節(jié)固體或液體培育基大多數(shù)細(xì)菌37經(jīng)1624h可構(gòu)成可見(jiàn)菌落少數(shù)生長(zhǎng)緩慢的細(xì)菌需13周才干構(gòu)成可見(jiàn)菌落。如布氏桿菌、結(jié)核桿菌等綿羊布氏桿菌和流產(chǎn)布氏桿菌初次分別時(shí)，須在5%10%的CO2環(huán)境中才干生長(zhǎng)根據(jù)細(xì)菌對(duì)氣體的要求適當(dāng)?shù)臍怏w環(huán)境油鏡的運(yùn)用細(xì)菌抹片的制備幾種常用的染色方法培育基的制造細(xì)菌生長(zhǎng)外形的察看細(xì)菌的生化性狀察看藥物敏感實(shí)驗(yàn)五、細(xì)菌抹片的制備玻片預(yù)備 抹片 枯燥 固定 染色 鏡檢六、幾種常用的染色方法1、革蘭氏染色法原理利用細(xì)菌的細(xì)胞壁組成成分和構(gòu)造的不同。革蘭氏染色法是細(xì)菌學(xué)中廣泛運(yùn)用的重要鑒別染色法，經(jīng)過(guò)此法染色，可將細(xì)菌鑒別為革蘭陽(yáng)性細(xì)菌G+和革蘭氏陰性細(xì)菌G兩大類。 鏈球菌革蘭

11、氏染色鏈球菌革蘭氏染色膿皰中金黃葡萄球菌革蘭氏染色Gram stain of Staphylococcus aureus in pustular exudate組織細(xì)胞白細(xì)胞內(nèi)的葡萄球菌葡萄球菌創(chuàng)口感染革蘭氏染色涂片2、抗酸染色法抗酸桿菌類普通不易著色，需用強(qiáng)濃染液加溫或長(zhǎng)時(shí)間才干著色，但一旦著色后即使運(yùn)用強(qiáng)酸、強(qiáng)堿或酒精也不能使其脫色。其緣由一是細(xì)菌細(xì)胞壁含有豐富的蠟質(zhì)分支菌酸，它可阻止染料透入菌體內(nèi)著染，但一旦染料進(jìn)入菌體后就不易脫去；二是菌體外表構(gòu)造完好，當(dāng)染料著染后即能抗御酸類脫色，假設(shè)胞膜及胞壁破損，那么失去抗酸性染色特性。萋-尼Ziehl-Neelsen氏染色法 結(jié)核桿菌抗酸染色3

12、、瑞特氏染色法 九、細(xì)菌生長(zhǎng)外形的察看霍亂弧菌在TCBS的平板上的菌落特征傷寒沙門(mén)菌在CHROM agar顯色培育基上的菌落特征梭菌在CCFA培育基上的生長(zhǎng)特性布魯氏菌的菌落炭疽芽孢桿菌的菌落鼠疫耶氏菌菌落禽霍亂菌菌落 枯草芽胞桿菌菌落 鏈球菌的溶血環(huán)在血液瓊脂平板構(gòu)成的菌落較大，多數(shù)致病菌株能構(gòu)成溶血。溶血景象-溶血草綠色溶血-溶血菌落周圍構(gòu)成明顯的全透明溶血環(huán)-溶血不溶血十、細(xì)菌生化實(shí)驗(yàn)察看生化實(shí)驗(yàn)前進(jìn)展純度檢查檢查方法鏡檢時(shí)要適當(dāng)多看幾個(gè)視野，每個(gè)視野中細(xì)菌形狀與染色特性均須符合該菌種的特性。1糖發(fā)酵管接種：2蛋白胨水接種：吲哚實(shí)驗(yàn)。3葡萄糖蛋白胨水接種：接種兩管，分別作MR實(shí)驗(yàn)和VP實(shí)

13、驗(yàn)。4尿素瓊脂接種5枸櫞酸鹽瓊脂接種1、生化實(shí)驗(yàn)檢驗(yàn)工程包括6醋酸鉛瓊脂接種：應(yīng)接近管壁穿刺7半固體瓊脂接種：穿刺線應(yīng)在培育基中央，不斷刺到管底，拔出穿刺針時(shí)應(yīng)順原穿刺線取出，切不可左右滑動(dòng)，以免影響察看結(jié)果。以上培育基接種后，在各管管壁上標(biāo)志菌種號(hào)碼，然后置于37溫箱培育23d。糖培育基應(yīng)每日察看一次尿素培育基接種的細(xì)菌量多時(shí)，普通在培育后數(shù)小時(shí)內(nèi)出現(xiàn)結(jié)果1糖發(fā)酵實(shí)驗(yàn)：凡培育基變?yōu)辄S色者，表示該菌發(fā)酵此糖產(chǎn)酸以表示；凡培育基變黃并含氣泡者，表示該菌發(fā)酵此糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣以表示；凡培育基不變色者，表示該菌不發(fā)酵此糖以表示。生化特性的察看不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣產(chǎn)酸 不產(chǎn)氣產(chǎn)酸產(chǎn)氣2吲哚實(shí)驗(yàn)：取蛋白胨水培育管先加

14、乙醚少量，塞緊棉塞搖振試管，使乙醚與培育液充分混勻，靜置片刻，待乙醚浮于液面上層時(shí)，沿管壁參與吲哚試劑23滴。凡在乙醚層內(nèi)出現(xiàn)玫瑰紅色者為陽(yáng)性反響，不變色者為陰性反響。色氨酸 吲哚 玫瑰吲哚 吲哚試劑 3MR實(shí)驗(yàn)：取經(jīng)23d培育的葡萄糖蛋白胨水培育管，參與MR試劑數(shù)滴5滴左右。凡液體呈紅色者為陽(yáng)性反響，呈黃色者為陰性反響橙黃色者為可疑反響。甲基紅-甲基紅+對(duì)照4V-P實(shí)驗(yàn)：取另一支葡萄糖蛋白胨水培育管，先加V-P試劑甲液6甲萘酚酒精溶液3 mL，再加VP試劑乙液40KOH溶液1mL，充分搖勻后靜置于試管架上在數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色者為陽(yáng)性反響，不出現(xiàn)紅色者應(yīng)放在37繼續(xù)察看12h，依然不變色者判為陰性。葡萄糖丙酮酸乙酰甲基甲醇 氧化 二乙酰 胍基化合物 紅色化合物 葡萄糖丙酮酸 乙酰甲基甲醇 5枸櫞酸鹽利用實(shí)驗(yàn)：察看經(jīng)23d培育的枸櫞酸鹽瓊脂管能否有細(xì)菌生長(zhǎng)，并察看其顏色變化。凡有細(xì)菌生長(zhǎng)，培育基變?yōu)樘焖{(lán)色者，為該菌利用枸櫞酸鹽否那么為陰性反響。