infiniteM200使用手冊酶標儀

1、TECANe儀器使用手冊infinite200文件版本：1.2 說明：本手冊并非Tecaninfinite200操作手冊的中文版，僅供Tecaninfinite200酶標儀使用者麥考。儀器的性能和使用只能以Tecaninfinite200原廠說明書、TecanMagellan軟件原廠說明書、Tecanl-Control軟件原廠說明書.TecanNanoQuant原廠說明書為準。因不怡當?shù)睦斫夂褪褂帽臼謨詭淼慕?jīng)濟損失和知識產(chǎn)權糾紛，由手冊使用者自行承擔，本手冊編制奢不承擔任何連帶責任。 聲明概況TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark41.1儀黠概述5 HYPERL

2、INK l bookmark61.2儀器支持的檢測功能5 HYPERLINK l bookmark81.3計和要求6安裝 HYPERLINK l bookmark122.1儀器安裝72.1.1開箱7 HYPERLINK l bookmark162.1.2取消托架面定還7 HYPERLINK l bookmark182.1.3裝入濾光片（僅F200）8 HYPERLINK l bookmark202.2加電開機9 HYPERLINK l bookmark262.3移機和運輸11儀黠性能3.1技術規(guī)格參數(shù)12 HYPERLINK l bookmark323.2熒光133.3熒光偏援143.4光吸收

3、15 HYPERLINK l bookmark363.5輝光型發(fā)光163.6閃光型發(fā)光163.7雙色發(fā)光173.8比色杯光吸收18 HYPERLINK l bookmark423.9加樣器18使用 HYPERLINK l bookmark464.1使用須知19 HYPERLINK l bookmark4842I-Control軟件的安裝和聯(lián)機19 HYPERLINK l bookmark504.3Magellan軟件的安裝和聯(lián)機20 HYPERLINK l bookmark524.4使用IControl軟件讀取數(shù)據(jù)224.5各種測畳的金數(shù)設26 HYPERLINK l bookmark584.

4、5.1逸擇板型26 HYPERLINK l bookmark604.5.2光吸收測26 HYPERLINK l bookmark624.5.3熒光測量28 HYPERLINK l bookmark644.5.4發(fā)光測量30 HYPERLINK l bookmark664.5.5動力學測31Magellan軟件操作簡介5.1直取數(shù)據(jù)33 HYPERLINK l bookmark725.2主菜單按鈕說明345.3創(chuàng)建/編輯測方法36 HYPERLINK l bookmark765.3.1ft分析方法說明38 HYPERLINK l bookmark785.4評估結果43 HYPERLINK l b

5、ookmark805.5軟件的注冊43維護 HYPERLINK l bookmark826.1維護44 HYPERLINK l bookmark866.2液體派出的處理446.3儀聽消奉456.3.1消聲方法45 HYPERLINK l bookmark926.3.2消毒步驟46附錄1附1加液黑的使用方法W1.1加液磁述47 HYPERLINK l bookmark100附1.2加液鄂的使用48 HYPERLINK l bookmark102附1.2.1加液器使用注意事頊48 HYPERLINK l bookmark104附1.2.2加液器的維護（Service）指令50 HYPERLINK

6、l bookmark106附1.2.3加液器的加液操作55 HYPERLINK l bookmark108附1.3加液器的維護59附錄2附2NanoQuant模塊的使用方法TOC o 1-5 h z HYPERLINK l bookmark114附2.1NanoQuant60 HYPERLINK l bookmark112附2.2NanoQuant模塊的使用方法60 HYPERLINK l bookmark118附2.3NanoQuant板的維護67 概況1.1儀器概述TecanInfinite200是Tecan公司生產(chǎn)的全自動多功能微孔板閱讀器,支持ANSI/SBS標準的6孔板至384孔板，

7、與Tecan自動工作站兼容。TecanInfinite200分為兩個型號：InfiniteM200采用光柵設計；InfiniteF200采用濾光片設計。1.2儀器支持的檢測功能熒光強度(FI:FluorescenceIntensity)頂部測量熒光強度(FI:FluorescenceIntensity)底部測量時間分辨熒光(TRF:FluorescenceTimeResolved)閃爍熒光(FlashFluorescence)熒光偏振(FP:FlourescencePolarization)(僅F200)光吸收(Absorbance)比色杯光吸收(Absorbancewithcuvette)(

8、僅M200)加液器光吸收(Absorbancewithinjectors)微量核酸、蛋白光吸收檢測(UVAbsorbancewithNmnoQumt)輝光型發(fā)光(GlowTypeChemi-orBioluminescence)生物發(fā)光能量共振轉移(ERET:BioluminescenceResonanceEnergyTransfer)閃爍型發(fā)光(FlmshLuminescence)1.3計算機要求最低配置：奔騰III或其它相應性能處理器1GHz20GB硬盤256MB內(nèi)存1個USB接口CDROM顯示器分辯率：1024X768推薦配置：奔騰4或其它相應性能處理器2GHz40GB硬盤512MB內(nèi)存2

9、個USB接口，1個RS232接口CDROM顯示器分辯率：1280X1024操作系統(tǒng)：WindowXPProfessional,SP1以上或WindowsVistaMicrosoftExcel2000或更高版本（使用I-Control軟件時要求）安裝2.1儀器安裝211開箱査看儀器包裝是否有破損，如有可能導致儀器損壞的破損，不可打開包裝。立即聯(lián)系經(jīng)銷商。將包裝箱置于干凈平整的地面或桌面上，打開包裝，取出填充材料，取出儀器（重約16Kg）,取下塑料封套，觀察儀器有無破損，確認儀器背面的主電源開關處于關閉狀態(tài)。將儀器置于安裝位置。安裝位置要求平整、無陽光直射、無外源震動干擾、干凈無液體殘留和灰塵，儀

10、器背面距離墻壁至少10cm。察看裝箱單，清點配件，確保配件完整。2.1.2取消托架固定裝蚤用手打開儀器微孔板托架門和比色杯/濾光片架門，旋下比色杯/濾光片架門內(nèi)的固定螺栓（下圖中央的紅色圓柱體），旋松另第二個安裝螺栓（下圖下部右側紅色夾子）。 拉出微孔板托架，旋下第二個固定螺栓（下圖右側紅色夾子）?；瑒佑覀燃t色固定夾子，并取下。同右側，取下左側紅色固定夾子。將微孔板托架推回到儀器內(nèi)。保存好固定夾子和固定螺栓，以備運輸儀器時固定微孔板托架。2.1.3裝入濾光片（僅F200）取出隨機附帶的濾光片箱中的濾光片架，用手搬開濾光片架門，將濾光片架插入門內(nèi)的濾光片架位置，只有唯一的一個方向可以插入，濾光片

11、架會自動吸入。!切勿用力推入！濾光片的信息巳經(jīng)儲存在濾光片架上，儀器將自動讀取，不需要用戶填寫或改寫濾光片信息，如果要重新安裝濾光片架上的濾光片，請參照原廠英文說明書相關內(nèi)容進行操作。如需取出/更換濾光片架，請參考章節(jié)4.4和章節(jié)5.2中彈出濾光片架指令。2.2加電開機儀器工作電壓要求：100-120V/220-240V50/60Hz;水儀器環(huán)境要求：-209至+609,相對濕度小于90%o超出工作電壓范圍的供電電壓和不合適的工作環(huán)境都可能造成儀器工作異常，甚至儀器損壞。確認儀器背面的電源開關處于關閉狀態(tài)，確認計算機處于關閉狀態(tài)。用隨儀器配套的USB連接線連接儀器和計算機。如果有加樣器，用隨機

12、配套的連接線連接儀器和加樣器。連接儀器電源線。啟動計算機，進入操作系統(tǒng)，安裝I-Control軟件或Magellan軟件。軟件安裝完成后，打開儀器背面的電源開關。儀器正面左側的綠色三角形電源指示燈會閃爍十數(shù)秒，這是儀器正在進行自檢，閃爍停止后，電源指示燈呈綠色發(fā)光狀態(tài)時，儀器處于待機狀態(tài)。儀器背面接口示意圖IrL丿1儀器風扇電源風扇電源開關電源接口認證標簽配置標簽7儀器名稱和信息保修標簽USB接口加液器接口!注意：撕毀或者除去保修標簽，將使保修合同失效 2.3移機和運輸如果需要移動儀器，請先打開計算機，打開儀器電源，運行操作軟件，用操作軟件依次彈出微孔板托架，比色杯架（M200）,濾光片架（F

13、200）,確定儀器內(nèi)部沒有存留微孔板、比色杯、濾光片架或其它外來實驗耗材，然后關閉操作軟件，關閉儀器和計算機電源，拔下儀器的電源線和USB數(shù)據(jù)線。如需要運輸儀器，請先完成上述移機程序，然后取出安裝時保留下來的兩個微孔板托架固定夾子和兩個固定螺栓，按照上面2.1.2描述的過程執(zhí)行相反的程序，將微孔板托架固定夾子和固定螺栓裝上，隨后用透明膠帶封住微孔板托架門和比色杯/濾光片架門。將儀器置于有充分避震、防撞擊和防水措施的包裝箱中，即可運輸。如果在移機和包裝過程中有任何問題，請咨詢當?shù)卮砩炭蛻舴杖藛T。儀器性能31技術規(guī)格參數(shù)參數(shù)待點檢測軟件控制接口USB濾光方式F200濾光片切換M200自動光柵支

14、持微孔板類型6孔至384孔板(SES標準格式)自定義特殊規(guī)格微孔板軟件自動掃描溫度控制環(huán)壇溫度+5C-42C重板圓形或直線搖動，振幅1mm-6nim,步進0.5mm光源高能閃光氤燈光路Quartz/PMMA光纖和透鏡熒光檢測器標準型：光電倍増管(PMT)增強型：紅光敏感型光電倍增管(red-sensitivePMT)發(fā)光檢測器光于計數(shù)型低暗電流光電倍增管光吸收檢測器光電二極管電源自感應：100-120V/220-240V50/60HZ功率150VA外形外部尺寸長：457mm寬：425mm髙：253imn重量F20014KgM20015.8Kg 環(huán)境時環(huán)埴溫度操作時15C-30C59F-86F非

15、操作時-200-+6000-4F-+140F相對濕度小于90%無冷凝過壓級別n污染級別2用途實驗室用儀器嘈聲水平60dBA處直方式電于廢棄物（傳染性廢棄物）32熒光參數(shù)特點波長范圍M200230nm-850nm,lnm步進F200230nm-850nm標準型PMT激發(fā)230nm-600nm發(fā)射330nm-600nm増強型PMT激發(fā)230nm-850nm發(fā)射280nm-850nm讀數(shù)時間20-2000pS延遲時間0-2000pS増益值設It值手動方式1-2550-60,000RFU優(yōu)化方式自動0-60,000RFU從單孔計算自動0-60,000RFU熒光強度頂部檢測性能板型96液體體積ul200

16、閱讀次數(shù)25熒光檢測極限pM20pM一致性25nM熒光素3%CV重復性25nM熒光素2%熒光強度底部檢測性能板型96液體體積ul200閱讀次數(shù)25熒光檢測極限pM100pM一致性25nM熒光素3%CV重復性25nM熒光素2%3.3熒光偏振（僅F200）參數(shù)特點波長范圍標準型PMT激發(fā)300nm-600nm發(fā)射330nm-600nm増強型PMT激發(fā)300nm-850nm發(fā)射標準濾光片330nm-850nm激發(fā)485(20)nm水平/垂育發(fā)散535(25)nm水平/垂直讀數(shù)時間20-2000pS延遲時間0-2000pS偏振精度5mPlnM熒光素增益值設置值測童范圍手動方式1-2550-60,000

17、RFU優(yōu)化方式自動0-60,000RFU從單孔計算自動0-60,000RFU34光吸收#數(shù)特點波長范圍M200230nm-1OOOnmlnm步進F200230nm-1OOOnm測量范圍0-3OD光吸收檢測性能板型96孔準確性0-2OD(l%+10mOD)準確性2-3OD2.5%一致性1OD3%CV車復性0-2OD(l%+10mOD)車復性2-3OD099835輝光型發(fā)光參數(shù)特點波長范圍380nm-600nm線性動態(tài)范圍10107（擴展的動態(tài)范圍）檢測時間l-20000ms串擾率（黑板）10光稀釋10,1（不稀釋）ATP輝光型發(fā)光檢測性能板型96孔液體體積ul200單孔檢測時間ms1000ATP

18、檢測極限3fmol/孔3.6閃光型發(fā)光參數(shù)特點波長范圍380nm-600nm測量范圍10檢測時間l-20000ms串擾率（黑板）0.01%光稀釋10,1（不稀釋）ATP檢測極限80amol/孔37雙色發(fā)光（如BRET）WavelengthnmUOUSS-ESUEJIJL參數(shù)特點波長范圍見本表下面圖1和圖2動態(tài)范圍10檢測時間1-20000ms,雙色各自設定板型96和384孔板圖1:品紅色發(fā)光透光譜Wavelengthnmccnss!EwUQl圖2:綠色發(fā)光透光譜 3.8比色杯光吸收（僅M200）參數(shù)特點波長范圍M200230nm-1OOOnmlnm步進測量范圍0-3OD光吸收檢測性能測量條件波

19、長300nm7OOnin,讀25次比色杯類型12.5X12.5mm,最大高度55mm(含蓋);微量比色皿：中心高15mm,測量窗口2mm準確性0-2OD(l%+10mOD)準確性2-3OD2.5%一致性1OD3%CV車復性0-2OD(l%+10mOD)車復性2-3OD0.9983-9加樣器參效特點準確性10%10ul2%lOOul0.7%450ul精確度10%10ul2%lOOul0.7%450ul使用4.1使用須知+Infinite200是由計算機控制的全自動儀器，儀器表面除電源開關外，沒有需要人工觸動的部件；+Infinite200是精密的光學儀器，請注意防水防塵，不要在機箱上放緩沖液、試

20、劑或者重物；+儀器在彈出、吸入微孔板托架肘，請不要阻擋或者推進；+放微孔板到托架時，A1孔應處于左上角；+可接受的微孔板最大高度為23mm（含蓋）；+開機后穩(wěn)定至少5分鐘，再進行發(fā)光檢測；+檢測完成后及時取出微孔板*比色杯；+儀器背后右上的風扇外的空代過濾墊如積累灰塵較多，需要及時更換。4.2I-Contro1軟件安裝和聯(lián)機I-Control軟件是Tecan公司出品的Infinite系列酶標儀的數(shù)據(jù)讀取軟件，可以控制儀器讀取原始數(shù)據(jù)并輸入到Excel中。安裝I-Control前請確認儀器巳經(jīng)與計算機連接，電源線巳經(jīng)插好，電源開關處于關閉狀態(tài)。取出隨儀器帶來的I-Control光盤，安裝光盤內(nèi)的

21、I-Control軟件，根據(jù)提示完成安裝。安裝完成后，打開儀器電源，等待儀器進入待機狀態(tài)后，運行I-Control軟件，點擊Connect圖標亠:在聯(lián)機窗口中選擇相應儀器，點擊OK即可聯(lián)機。4.3Magellan軟件安裝和聯(lián)機Magellan軟件是Tecan公司的酶標儀數(shù)據(jù)讀取和數(shù)據(jù)分析軟件。打開Mmgellmn軟件包裝盒，取出安裝光盤，根據(jù)軟件提示安裝Magellan軟件。第一次運行M忍gellmn軟件時，或者移機后重新連接了儀器后，都會進入聯(lián)機界面，如下圖： SetupPortInfiniteSeries|Cancel|HelpInstrumentSelect:OFindanyPortOD

22、emomode # 請在“Instrument”下拉菜單中選擇“Infinite”，在Port”項中選擇“findany”,在“Stack”項中選擇“findany”或者“None”，點擊OK即可。軟件連接儀器需要一段時間，請耐心等待，正常情況下會在彈出窗口中出現(xiàn)儀器的名稱，選擇儀器名稱，點擊確認即可聯(lián)機成功。注意：請不要點擊彈出窗口左下角的“Showsimulatedinstruments”，選擇這個選項將顯示出虛擬的儀器，聯(lián)接了虛擬儀器，軟件將無法控制儀器。如果沒有出現(xiàn)儀器請確認以下情況：儀器電源是否打開，儀器前面板右側的綠色三角形是否明亮；儀器與計算機的USE端口是否連接正常；計算機是否

23、感染木馬病毒，或者存在操作系統(tǒng)的故障。排除上述情況后，重新打開軟件，再次聯(lián)機。聯(lián)機成功后酶標儀的微孔板托架會自動彈出。4.4使用IControl軟件讀取數(shù)據(jù)使用I-control軟件聯(lián)機成功后，進入測量流程編輯界面:菜單條工具條指令欄狀態(tài)欄工作流程板信息欄雙擊指令欄中的欄目即可在工作流程板中添加相應的測量或者動作，信息欄中會顯示當前流程的信息。工具條中圖標說明：新建一個測量流程；辰打開一個測量流程文件；凰保存一個測量流程；B提高當前指令的級別；日降低當前指令的級別；5tart開始執(zhí)行一個測量流程;皿斷開儀器；M彈出微孔板托架；厘吸入微孔板托架；辱彈出比色杯(M200);血吸入比色杯(M200)

24、;M彈出濾光片架(F200)o Infinite酶標儀的測量控制是一個近似模塊化編程的流程設計，指令條的長度越長等級越高，低等級的指令從屬于高等級的指令，指令流程按照自上而下的順序執(zhí)行。一個典型的測量指令流程如下：一PmlulPklc000000-00OOOOOGOO0QOO範7006005000036388OQO12111Coo 雖aJNirtXofl-BcrwubnWatMcrBMeewnerrf2arW)ip農(nóng)口Rcfcrctxr上面流程是:第一個指令Plate,選一種微孔板;第二個指令是PartofPlate,選擇板上的一部分進行測量；第三個指令是一個測量和測量參數(shù)。I-Control

25、的指令欄LabWarePlatePartofPlateWellCuvette(M200only)MeasurementsAbsorbsnc巳AbsorbanceScan(M200andM1000only)FluorescenceIntensityFluorescenceIntensityScan(M200andM1000only)FluorescencePolarization(F200.F500andM1000only)LuminescenceLuminescenceDualColorActionsTemperatureShakingInjectionDispenseMovePlateMov

26、eCuvette(M200only)KineticKineticCycleKineticConditionMiscellaneousCommentUserRequestWaitforTemperatureWait仃impIncubaKionLabWare是測量使用的耗材;Measurements是各種不同的測量；Actions是測量中可以做的動作，包括溫度控制、震板、加液、分液、移動板和移動比色杯；Kinetic是動力學測量指令；MisceUaneous雜項，包括注釋、提示、測量溫度范圍設定、計時器、孵育設定。具體的功能和設定請參考I-Control軟件說明書或東勝創(chuàng)新培訓課件光盤內(nèi)容。根據(jù)實

27、驗的要求設計出測量流程后，點擊,按照提示保存測量流程文件后，儀器即開始執(zhí)行測量流程，測量參數(shù)和結果將自動導出到Excel中。4.5各種測量的參數(shù)設量4.5.1選擇板型使用PSte指令時，需要在下拉菜單中選擇測量使用的板的類型。菜單中有預存的板型文件，文件的命名規(guī)則是：前三個字母代表板的品牌；中間的數(shù)字表示孔數(shù)；后兩個字母代表板底的形狀和板的顏色：f-平底板、v-V型底板、u-U型底板、t-透明板、b-黑色板、w-白色板。如COS96ft,即COSTAR公司生產(chǎn)的Corning96孔平底透明板。如果使用國產(chǎn)板，選擇“COS”-Corning板即可。4.5.2光吸收測量Read%VAbsotbnc

28、e剛gnm50(ia)(WiWvelengihtMeasurementJReFeicrcfr：Mdiiple!RpeiWell|MutiptereadsperweI光吸收測要使用透明板，測量參數(shù)設置如下:在Wavelength項中填入測量波長，如果有參比波長就在Reference中填入；在Read項Numbersofflashes中填寫每孔讀取的次數(shù)，一般選擇35次即可，結果自動給出平均值。在Settletimes中填寫靜置時間，即當前孔移動到檢測位置后，到開始測量的間隔時間，用以抵消微孔板移動時產(chǎn)生的液面波動，一般來說96孔板可設置也可以不設，但建議設置，48孔和孔數(shù)更少的板必需設置靜置時間

29、；在Multiplereadsperwell選項打勾，會彈出多點測量設置窗口：Size:Border:MultipleRe-adspefWell0Multiplere-adsperwellType、Size和Border分別設置多點測量的類型、測量點距離孔邊緣的距離。多點測量是指在一個孔中測量多個點，適于非均相樣品的測量，但是要注意過多的點數(shù)會使得檢測時間變得很長。每個點的測量值都在Excel中顯示。多點測量和參比波長只能選擇其一。Label項中填寫的是本次測量的名稱，以區(qū)別同一流程中的其它測量。AbsorbanceScanReadXS/avelenglhFrorriuIo:和Bandwidt

30、h:29610i9nm35GNumbe:ofHashes:Sctllc;time:LabelNme:Labellv光吸收掃描測量，參數(shù)設置與光吸收基本相同，需要設置掃描的起始波長和結束波長，以及波長的步進值。4.5.3熒光測量:FluoieicencelntantyWavetefDgthExcidiion:20Onm(51Emission:330:nm20ReadNumberoffejhe:|25：Settlelime:0$msGdh()ManualgairrC100-incegrauonLagbmc:integrationliwc.zModeTopOBoltomMultipleReadspe

31、rWellMi/tfiereadsperv/elOQpbm日IOCalm陽詔flamwellabelMomLabel2v熒光強度測一般使用黑色板，參數(shù)設置如下:在Wavelength5J中填入測量的激發(fā)波長和發(fā)射波長;在Read項填寫每孔讀取的次數(shù)和靜置時間；在Mode頊中選擇頂部測量/底部測量，底部測量可檢測貼于板底的熒光物質(zhì)，如熒光標記的貼壁細胞，底部檢測要使用底部透明的黑色板；在IntegMtion項中填寫L速time,即激發(fā)后到檢測發(fā)射光的間隔時間，一般不需設定選擇為0即可，時間分辯熒光（TRF）試劑將要求設置此選項，參見具體試劑的說明書。Integrationtime即檢測發(fā)射光的時

32、間，一般設置為20-40us,或參考試劑說明書；在Gain項中選擇增益值，增益值對應的是檢測器的工作電壓，設定恰當?shù)脑鲆嬷?，會得到更好的信噪比，使得樣品測量值與對照測量值的差距更加明顯，Gain值設定有三個選擇：Manualgain:人工設定，一般設定為60-255,值越大，檢測得到的數(shù)值越大；Optimal:自動優(yōu)化，軟件根據(jù)樣品的熒光強度計算確定Gain值，Gain值會在檢測結果中顯示；CalculatedfromWell:用選定孔中的樣品自動計算GMn值，Gain值會在檢測結果中顯示；Multiplereadsperwell項：田各；Label項：略。ScnSelectionOExcii

33、.ationEmiwioniScnMadeTopQBoltonEwatationWavobriglh?Frcm:BandAidlRr.295:.850:9nmEnni?ionWovclcnhFrom:Step:BaxfcMidlh:IntegialiariLManual!G-Facloi1.001；OOptimalOCobufatcdlfromwdlUncdibidtcdG-FadorCdlibi&cRtsferencevalue:Referencerange:20LabelChange.N-ime*La網(wǎng)1Blank,rangeCFnge.S$merreasuiementblankHideD

34、etalsIrtegralioniLaglime:IrJtcgralionilimc:熒光偏振測畳（僅F200）參數(shù)設置基本與熒光強度測量相同，關于G-Factor的設定請參考I-Control軟件說明書或東勝創(chuàng)新培訓課件光盤內(nèi)容。4.5.4發(fā)光測量發(fā)光測董一般使用白色板，發(fā)光測量的參數(shù)設置如下：在Integrationtime頊填寫測量時M,Infinite發(fā)光檢測器是光子計數(shù)型的PMT,測量結果自動計算為1000ms的測量值，所以測量時間的改變只會影響測量結果的準確性；Attenuatiori項是光稀釋選擇，對于非常強的發(fā)光，可以選擇OD1,這時將使用1OD的濾光片，過濾掉90%的光，防止

35、檢測器被飽和，一般情況下發(fā)光測量不需要光稀釋，選擇None;Settletime項：同光吸收測量和熒光測量，略；Label項：略。Fikl1：Green*Integraliontime:1000msFi訕2:MagcnkMlnlra*jntnic;1000Z啲Settlethe;0Z陋LuvninDualCdkvPa-ameter3LabelsNanw1:LabellName2:Label3v雙色發(fā)光測量，參數(shù)設置同發(fā)光測量，僅需分別設置品紅色發(fā)光和綠色發(fā)光的測量時間。4.5.5動力學測量動力學測是指間隔一段時間對同樣的樣品進行相同的測量，以發(fā)現(xiàn)樣品隨時間的變化。動力學測量只需要使用動力學循環(huán)

36、(KineticCycle)和動力學條件(KineticCondition)指令即可，在動力學循環(huán)指令下加入測量指令。G)1KineticCj/cfe3Cf*dt5KmrtclrficsvalG)Nur倏皿cycle監(jiān)|2二口灰“訛血展闊0皿硼：IcomooI叭刪-Tin*:訶期Time:&0000；ms在動力學循環(huán)指令中可以設置循環(huán)的次數(shù)或者循環(huán)的總時間，和動力學的間隔時間。動力學條件的作用是在動力學循環(huán)中加入一個動作(Action),如下圖就是在的第三次循環(huán)中加入一個動作:KineticCondilior)3CondicnExecutecorrmandoatcycte:3=l如下圖例，就是

37、在一個五次循環(huán)的光吸收動力學測量，每次測量間隔1分鐘，在第二個循環(huán)中進行一次震板。KineticCycleCyclesNumberofcycles:KineticIntervalODuration:00:01:000Usekineticinterval(t)Time:00:01:00c60000:(hh:mm:ss)OTime:msKineticCondition4ConditionExecutecommandsatcycle:2v|5ShakingParameterDur-ation;LinearMode;rnrnrprnFrequency;secAmplitude;AbsorbanceWa

38、velengthReadMeasurement;450:nm(9)Reference;Settletime;5704Numberofflashes;Magellan軟件操作簡介51直瞬取數(shù)據(jù)啟動計算機后，打開儀器電源，待自檢完成后，運行Magellan軟件，聯(lián)機成功后，酶標儀自動彈出托架，將樣品板放在托架上，A1孔位置處于左上方。Magellan軟件的主界面如下圖: # Starmeasurement:開始一次新的測量，有四項選擇：ObtainRawDataRunStripLayout金UsePredeEinedMethodStartJavoriteObtainRawData：直接讀取原始數(shù)據(jù)

39、；RunStripLayout：從存在的測量方法中拉取版面設計;UsePredefinedMethod:使用存在的測量方法；StartFavorite:使用收藏夾中的測量方法。Evaluateresults:對保存的測量結果進行分析；Create/editasampleIDlist：創(chuàng)建/編輯樣品ID列表;Create/editamethod:創(chuàng)建/編輯測量方法。選擇軟件主菜單中的“Starmeasurement”，按右下角綠色三角形按鈕繼續(xù)，在彈出窗口中選擇“ObtainRAWdm3”，點擊右下角綠色三角形按鈕繼續(xù)，進入測量流程編輯窗口，編輯測量流程后點擊繼續(xù)，測量流程的設置參見本手冊章節(jié)4

40、.4和4.5。在彈出窗口中可填寫結果文件的名稱，實現(xiàn)控制微孔板進出，打開或關閉溫控等動作:點擊Star按鈕即可開始測量獲得原始數(shù)據(jù)，繼續(xù)點擊Finish和Save可保存數(shù)據(jù)為WSP文件（Magellan的測量數(shù)據(jù)文件格式）。5.2主菜單按鈕說明S：更改當前用戶。:雜項菜單，點擊后進入雜項窗口，可啟動以下功能:Instrumentcontrol:儀器控制，一般不需要用戶更改，點擊后將彈出儀器控制窗口:InstrumentControlSetupfrService：Movements.ChangeinshumentTemperalurecontiol.Definefilterslides.Ldmp

41、7lasercontrol.Inserttransportlock.Injectojcontfol.Dispenseonly.Plategeometryeditor.Ctinri&ctMovements.|Help點擊Movements按鈕可以控制可移動部件的進出運動，如托架、比色杯、濾光片架；UKSncel點擊Temperaturecontrol可以打開/關閉溫度控制功能;點擊Changeinstrument可以更改聯(lián)機的儀器。Filehandling:文件操作功能;Options:選頊，從這里可更改文件保存默認文件夾位置;Useradministration用戶管理;Aboutmagell

42、an:軟件版本和注冊信息。111:溫度控制，點擊此按鈕將彈出溫控窗口:填寫好目標溫度（至少比室溫高5度，最高42度），點擊set按鈕確認輸入，點On按鈕即可開啟控溫，點擊Read按鈕可讀取當前儀器內(nèi)溫度，點擊Off按鈕關閉控溫。紜L彈出/吸入微孔板托架。EitMagellan退出Magellan軟件。53創(chuàng)建/編輯測量方法Magellan軟件可以將測量流程和數(shù)據(jù)處理方法保存成一個方法文件（mth文件），以后可直接調(diào)用方法文件測量數(shù)據(jù)，并在測量結束后自動對數(shù)據(jù)進行處理，包括數(shù)據(jù)分析和結果導出。選擇軟件主菜單中的“6eate/editamethod,按右下角綠色三角形回按鈕繼續(xù)，在彈出窗口中選擇“

43、New”新建方法文件，或者“Open”打開巳有的方法文件，點擊右下角綠色三角形按鈕繼續(xù)，進入測量流程編輯窗口。編輯測量流程后點擊繼續(xù)，測量流程的設置參見本手冊章節(jié)4.4和4.5。 在數(shù)據(jù)處理方法定義窗口中定義樣品的分布和數(shù)據(jù)處理的方法。Create/tditaMethodXUndoJSet眩Nlunu閔dJ10%DZoxnrejectQAutomateddatahsra*cdhncMFCUserpfaftpt4NixrteitarratMetresnotesC2ff.meUwd1腳|start陽qi用手HX19B71FUm.打：心加Mrtho.ENF二勺.$8：S0NEXT樣品定義工具窗說明:

44、WellAssignm.樣品分類列表査看各類樣品的定義在選定孔中填入選擇的樣品分類IdentifiersDef.identif.FillselectionExp.group:1;ID-Num.17cReplicatesFinumber:Deleteselectiont-實驗分組樣品起始ID和排布方向樣品的重復孔數(shù)和排布方向刪除選定孔中存在的樣品分類 5.3.1數(shù)據(jù)分析方法說明數(shù)據(jù)分析方法欄說明:板面定義定義樣品濃度/稀釋度增加新的數(shù)據(jù)轉換方法標準曲線定義判斷方法定義質(zhì)控參數(shù)定義數(shù)據(jù)導出設置打印設置自動數(shù)據(jù)操作設置提示信息數(shù)字格式設置記事本MethodlayoutQPlatelayoutConc

45、.-j.Dil.-,Ref.-valuesTransformeddataAddnewtransformation.WrConcentrationsStandardcurve隱藏欄目按鈕EvaluatedataCutoffdefinitionQCValidationDatahandlingDataexportPrintedreportAutomateddatahandlingMiscellaneousUserpromptsNumberformatMethodnotesn-o-%更板面定義欄標簽數(shù)據(jù)轉換欄濃度計算欄肉1-一數(shù)據(jù)評估欄數(shù)據(jù)操作欄雜項欄 下面分別簡述各種數(shù)據(jù)處理指令的內(nèi)容：板面定義：即

46、定義微孔板上的樣品分布，在一塊板上可定義多組樣品,在數(shù)據(jù)處理時相互間不干擾;定義樣品濃度/稀釋度:SelectIdentifier:Unit:ngHAutoFill可在彈出窗口中選擇不同類型的樣品，定義它們的濃度和稀釋度。在定義“ST”一標準品時可輸入濃度單位，并有自動填充選項。也可以在“Cone.”下方手工輸入數(shù)值，但是不可以在選擇自動填充時采用手工輸入的方式點擊“Cone.”欄。增加新的數(shù)據(jù)轉換方法：如果有“EL”一空白樣品存在，軟件會自動提示是否生成空白扣除，點擊yes確定即可自動產(chǎn)生空白扣除的轉換方式。點擊Addnewtransformation可生產(chǎn)一個新的數(shù)據(jù)轉換，在右側窗口選擇要

47、做數(shù)據(jù)轉換的孔，在上方Inputdata欄中選擇數(shù)據(jù)源，在下方仗欄中填入數(shù)據(jù)轉換公式，點擊對號填入即可。左側方法欄中數(shù)據(jù)轉換的方法名稱可以單擊后修改。BlankreductionTransformeddataMethodlayoutPlatelayoutCone.,Dil.,FXcFvolucsBlankreductionTransformation2AddnewtransformationWfConcentrations令StandardcurveQeare/edit:ms-hodInputdata:J|X|fx(x-0.1)7OBL11X1SM1.11/1ST1_41/1ra1(xo丨ST

48、J2SM1_3SM1_91/1SM1_101/1SM111 # 標準曲線定義：當填寫了“ST”一標準樣品濃度后，就可以點擊此選頊,在彈出窗口中定義標準曲線的數(shù)據(jù)源、坐標、回歸方式、擴展因子、外觀等設置。設置完成后軟件會自動產(chǎn)生一個“Conc.trmnsforme”一濃度轉換欄，并生成一個濃度轉換，在測量獲得數(shù)據(jù)后，軟件將根據(jù)標準曲線公式自動計算出樣品的濃度。MethodlayoutPlatelayoutDil，Ref.-valuesTransformeddataBlankreductionTransformation2AddnewtransformationCone,transforme.Co

49、ne.TransformationlAddnewcone,transforConcentrations令StandardcurveInputdata:Singlecone,(ng)fiaBL11/1SM1_11/1SM1_91/1BST1_11/1ISM1_2I11/1JSM1_101/1ST1.21/1SM1_31/1SM1_111/1回ST1.31/1SM1_41/1SM1_121/1判斷方法定義：通過設置本選項，軟件可以對樣品進行判斷和分類顯示,點擊后在彈出窗口中輸入數(shù)據(jù)源判斷值等即可。CutoffdefinitionInputdata;Rawdata陽性解性1一一-J-BL140.3一

50、十一一AFormulainpulVarhtieOpeialorsFunciion$二CompetitweTe$tCutoffresultsselection. # 質(zhì)控參數(shù)定義：通過本頊設置，可以輸入測量的質(zhì)控標準，測量結束后軟件會自動判斷測量是否達到質(zhì)控標準，并給出True或False的判斷結果。InputdataRawdatavValidationgroup:pTValidationConditions1BL1ec. # See：gwi_|iRdi5xedoQcilrriSpdF4SdStfihImirtrWKZugAhinibfinretRrti:e.閆FrtknMInnher*L燦13

51、關于Timer設置:在使用加液器時，可設置Timer的等待時間包括不包括分液時間:Wait(Timev| # TimerOplionsWMbme:00:00:02:葉:mm閨WaitforinfectionIgnorewait戲lastkineticcpcle選擇Waitforinjection等待時間中包含分液時間；不選擇此項，等待時間將在分液完成后開始計算。4兩個分液指令流程示例:PhleWelltnjecbonln(ectorA,Vokjrre100.Speed:200Wait(Tirarer)Luminescence(Ratio)Luminc-S-Gcnw?(R-dtro)liniec

52、tanWTl00;00;02|hhmm;S3jAlttnualion:NONEIqedorB.Voijfre100.Speed20000:00:02(hkrrnrr鞋)Menuation:NONE4MoveFloleMoveplateau這是一個整板的發(fā)光實驗的檢測流程，每加一種試劑，等待反應2秒鐘,開始測量發(fā)光值，最后將微孔板彈出。Plate1RaftG吃旳bGiera9GPal0b咬v|D亦|P冊nihcavei1丿汁介WdT2（KirwlicCycfe20cycles3強KirwfcCoFidtem4iInjcctbnInjedoik-Vurrr:20.Speed2035”Flwufes

53、cctimInlem|RA8EMC/4bcn桿曠irm.Em:wn怦和ntfh*510nnn6II:Fluoccccnoclntcmi|Rdb)iExcilickb曲幀禹240rw.w-ekrcfrc510nm7MavPlateplaleou!8這是一個整板的熒光動力學測量，分別用380nm和340nm激發(fā)，一共20個循環(huán)，在第五個循環(huán)時每孔加入了20ul試劑。附1.3加液器的維護加液器使用一段時間后，需進行徹底的清洗以洗去沉淀和避免微生物生長。先用蒸他水或去離子水清洗（Wmsh）加液器；用Prime初始化程序將注射器中灌滿70%乙醇，并靜置30分鐘；用70%乙醇清洗加液器；用蒸館水或去離子水

54、清洗（W忍sh）加液器；用去離子水初始化加液器；用脫脂棉蘸取70%乙醇或異丙醇擦拭加液針。 附錄2附2、NanoQuant模塊使用方法附2.1NanoQuant概述NanoQuant是Tecan開發(fā)的利用Infinite200酶標儀光吸收測量功能測量微量(2ul)核酸樣品的工具模塊，包括NanoQuant板一塊.輔助加樣器個說明書一套。附2.2NanoQuant模塊的使用方法打開M200酶標儀電源，運行I-contro1軟件VI.5,聯(lián)機。點擊I-control軟件界面左下角的Applications標簽，進入NanoQumnt檢測界面。匝CommentUserRequestCff-Waitf

55、orTemperalureinfinite200AMR5IM10StandardApplications # 選擇NmoQuant檢測界面左側導航欄中的QuantifyNucleicAcid”標簽，進入核酸定量檢測界面。FfoteBlankingQuantifyNucle;Addlndvdjdl8lIApEdlSarrisA&tfbiMo5?u-cmcri5右側窗口中“PSte”自動選擇為NanoQuantPlate,無需更改；“Elmking”窗口中，用鼠標選擇至少兩個檢測點，作為空白樣品，空白值將取平均值，如果不同點的空白CV值大于10%,空白值無效，請清潔Nanoquant板后重新做空白

56、；也可以選擇MStartBlanking,按鈕上面的IndividualElanking”，這時每孔的空白值將只用于各自孔的樣品。0IndividualBlankingStartBlankingBlanking12AOOBCDEFGHIndividualBlankingColorCodes:Blank:DivergingBlank:MeasurementStartBlankingSampleIDcledD點擊SampleID匚藥亟按鈕可以輸入樣品的序號或名稱；AbsorbanceMeasurements”中的Wavelengths”即檢測波長是事先設好的，不可更改；在“Sample”的“Typ

57、e”下拉菜單中選擇要檢測的核酸類型。-SampleType:|dsDNA3EditSamplE. # RNAssDNAtestother.隨后點擊“Elmking”窗口右下角的“StartEkmking”按鈕，儀器將彈出酶標板托架，將巳加好空白樣品的NmoQuant板放入托架，正確的放置位置是NanoQuant板上的Tecan商標處于右下角，點擊彈出窗口上的“確定”按鈕，即開始空白樣品的測量。空白測量完畢后，測量窗口變色，NanoQuant板彈出，此時去除空白樣品,加入待測樣品，將NanoQumnt板放于酶標板托架上。用鼠標選擇樣品所在的點，點擊菜單欄上的“Start”圖標開始樣品測量如果需要

58、重新定義空白，點擊“Blanking”窗口右下角的RepeatBlanking按鈕即可返回先前的定義空白樣品界面。IndividualBlankingColorCodes:Blank:Selected:Unused:DivergingBlank:IMeasurement:RepeatBlankingSampleID # #測量結束，結果將自動導入Excel,隨后I-control彈出窗口詢問是否繼續(xù)測定，如繼續(xù)測定點擊“確定”即可，但此時不可以改變樣品的位置；如需要改變樣品位置，點擊“取消”，然后按照上述步驟5的方式進行操作?？瞻讟悠范x一次即可，在不關閉I-control時可一直使用。“LabelingEfficiency”測量步驟與上述相同，只需在“AbsorbanceMeasurements”中正確選擇Markers”的種類。 #noQuanrMeasurements久LabefengEffKxnc)i*QudyHuckcAcril-LdbelrigEffiCTercyBUrikhj11rriMcUsIBlar