《藥物分析》II(藥物分析專(zhuān)論)課件

1、藥物分析(藥物分析專(zhuān)論) 藥物分析教研室 孫立新 副教授藥物結(jié)構(gòu)性質(zhì)分析方法第四章芳酸類(lèi)藥物的分析The Analysis of Aromatic Acids第一節(jié)概述一、分類(lèi)羧基直接與苯環(huán)相連接的藥物。根據(jù)結(jié)構(gòu)分為: 水楊酸類(lèi) 苯甲酸類(lèi) 其它芳酸1、水楊酸類(lèi)代表藥物有阿斯匹林 水楊酸（鈉） 對(duì)氨基水楊酸（鈉） 2、苯甲酸類(lèi)代表藥物苯甲酸（鈉） 氨甲苯酸 泛影酸3、其它芳酸代表藥物止血敏 布洛酚二、性質(zhì)1、性狀：大多數(shù)是結(jié)晶性固體 少數(shù)為液體（水楊酸甲酯、苯甲酸芐酯）2、溶解性：游離芳酸類(lèi)藥物，幾乎不溶于水，易溶于有機(jī)溶劑芳酸堿金屬鹽易溶于水3、酸性： 芳酸類(lèi)藥物分子中具有COOH，所以顯弱酸

2、性 藥用芳酸pKa在36之間。 具有酸性，可以與堿成鹽。4、紫外吸收： 具有苯環(huán)，所以具有紫外吸收。一、呈色反應(yīng)1、FeCl3反應(yīng) 紫堇色第二節(jié)鑒別反應(yīng)+ 苯甲酸的堿性或中性溶液與三氯化 鐵試液生成堿式苯甲酸鐵鹽的赭色 沉淀。2、茚三酮反應(yīng)具有類(lèi)似-氨基酸結(jié)構(gòu)如氨甲苯酸，可與茚三酮反應(yīng)，產(chǎn)生藍(lán)紫色的縮合物+二、阿斯匹林水解產(chǎn)物的反應(yīng)三、重氮化-偶合反應(yīng) 對(duì)氨基水楊酸鈉具有芳伯氨基結(jié)構(gòu)，在鹽酸酸性溶液中，與亞硝酸鈉試液發(fā)生重氮化反應(yīng)，生成重氮鹽，與堿性萘酚偶合產(chǎn)生橙紅色沉淀。 四、溴代反應(yīng)酚羥基鄰位、對(duì)位的氫比較活潑，很容易被溴取代。五、紫外光譜法六、紅外光譜法第三節(jié)水楊酸類(lèi)藥物的分析一、特殊雜

3、質(zhì)檢查(一)、阿斯匹林中的雜質(zhì)檢查1、 熾灼殘?jiān)?、 重金屬3、易碳化物4、溶液的澄清度檢查： 檢查碳酸鈉試液中不溶物酚類(lèi)（如苯酚）醋酸苯酯水楊酸苯酯乙酰水楊酸苯酯雜質(zhì)碳酸鈉試液中不溶，而阿斯匹林溶于碳酸鈉試液。5、水楊酸 來(lái)源：生產(chǎn)過(guò)程中乙?；煌耆蛸A藏過(guò)程中水解產(chǎn)生。原理：阿斯匹林無(wú)酚羥基，不與高鐵反應(yīng)。水揚(yáng)酸有酚羥基，與高鐵反應(yīng)生成紫堇色(二)、對(duì)氨基水楊酸中的雜質(zhì)檢查 雜質(zhì)來(lái)源:未反應(yīng)完全的原料間氨基酚 遇熱受潮生成間氨基酚,再 被氧化成二苯醌型化合物檢查方法: 雙相滴定法(ChP2000) HPLC(USP23)二、含量測(cè)定(一)、阿斯匹林含量測(cè)定酸堿滴定法1 直接滴定法 原理：阿

4、司匹林具有游離羧基，具有酸 性，以標(biāo)準(zhǔn)堿滴定液直接滴定。 方法: 取本品0.4g,精密稱(chēng)定,加中性乙醇(對(duì)酚酞指示液顯中性) 20ml,溶解后,加酚酞指示液3滴,用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定.每1ml的氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當(dāng)于18.02的C9H8O4。中性乙醇：溶解供試品 防止酯水解。 目的：扣除乙醇中酸的影響。2. 水解后剩余滴定法原理:阿斯匹林酯結(jié)構(gòu)在堿性溶液中易于水解,加入定量過(guò)量的氫氧化鈉滴定液,加熱使酯水解,剩余的堿用酸回滴.需做空白試驗(yàn)校正. 目的：NaOH在加熱時(shí)易吸收CO2,用酸回滴定會(huì)消耗酸，影響結(jié)果3.兩步滴定法 適用于阿斯匹林片劑片劑穩(wěn)定劑:酒

5、石酸或枸櫞酸分解產(chǎn)物:水楊酸和醋酸第一步:中和第二步:水解和測(cè)定(二)、對(duì)氨基水楊酸鈉含量測(cè)定 亞硝酸鈉滴定法 對(duì)氨基水楊酸鈉具有芳伯氨基,能在鹽酸存在下與亞硝酸鈉定量地發(fā)生重氮化,生成重氮鹽.第四節(jié) 苯甲酸類(lèi)藥物的分析一、苯甲酸鈉的含量測(cè)定雙相滴定法原理： 苯鉀酸鈉溶于H2O 苯甲酸 不溶于H2O，溶于乙醚滴定前：苯甲酸鈉甲基橙指示劑，呈黃色（pH3.14.4）紅 黃滴定中： 苯甲酸鈉+鹽酸 苯甲酸滴定終點(diǎn)：過(guò)量HCl，使指示劑變橙紅色水相乙醚相第一章 糖類(lèi)和苷類(lèi)藥物的分析 一、糖類(lèi) 1、醫(yī)學(xué)上的糖類(lèi) 葡萄糖, 乳糖（半乳糖-葡萄糖）, 蔗糖（葡萄糖-果糖） 2、分類(lèi)： 糖類(lèi)就其化學(xué)結(jié)構(gòu)來(lái)看

6、，屬于多羥基醚或羥基酮以及它們的多縮聚體. 依其是否能水解及水解產(chǎn)生簡(jiǎn)單糖分 子多少，可分為：（1） 單糖類(lèi)： a、戊糖：5個(gè)C原子 b、己糖：6個(gè)C原子 c、醛糖 d、酮糖（2） 雙糖類(lèi)：乳糖，蔗糖（3） 多糖類(lèi)：淀粉，纖維素 3、 性質(zhì)（1） 單糖、雙糖為無(wú)色固體（無(wú)色結(jié)晶或結(jié)晶性粉末）或糖漿狀液體，易溶于水、不溶于乙醚及其它有機(jī)溶劑，微溶于乙醇。（2） 多糖：一般不溶于水。 4、 鑒別（1） 灼燒試驗(yàn)： 糖類(lèi)直火燃燒并產(chǎn)生焦糖臭味（一般用于蔗糖的鑒別）（2） Molish試驗(yàn) 糖類(lèi)濃H2SO4（脫水）糠醛或糠醛衍生物+a-萘酚呈色（3） 游離醛基或酮基的還原反應(yīng)： 單糖或含半縮醛基的雙糖

7、均具有還原性。(4) . 比旋度蔗糖：不得少于+66（10%水溶液）乳糖：+52.052.6（10%水溶液，并100ml中加氨試液0.2ml）無(wú)水葡萄糖：+52.653.2葡萄糖：+52.553（10%水溶液，并100ml中加氨試液0.2ml）5、 含量測(cè)定(1) 旋光法（Polarimetry） 旋光度：直線(xiàn)偏振光通過(guò)光學(xué)活性化合物液體或溶液時(shí)，能引起旋光現(xiàn)象，使偏振光平面向左或右旋轉(zhuǎn)，旋轉(zhuǎn)的度數(shù)稱(chēng)旋光度。 比旋度：偏振光透過(guò)1dm且1ml中含旋光物質(zhì)1g的溶液，在一定波長(zhǎng)一定溫度下測(cè)得的旋光度稱(chēng)比旋度。a=aCLa：旋光度；a：比旋度ChP2000采用鈉光譜的D線(xiàn)（589.3nm）測(cè)定旋光

8、度，除另有規(guī)定外，測(cè)定溫度20，測(cè)定管長(zhǎng)度2dm，物質(zhì)濃度以C（g/ml）表示，則：若物質(zhì)濃度用%濃度（g/100ml）表示，C以C/100代入，則：即 如果已知被測(cè)物質(zhì)的比旋度a,根據(jù)測(cè)量得到的比旋度a,由上式即可計(jì)算出被測(cè)物質(zhì)的百分濃度。(2) 折光率法（Refractometry） 折光率與溶液濃度（W/V）的關(guān)系 用下式表示： n ：折光率n0：同溫度時(shí)水的折光率（20為1.3330）F ：經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)測(cè)得的折光因數(shù)P ：溶液的百分濃度（%，W/V）n=n0+FP sini：光線(xiàn)入射角的正弦 sinr：光線(xiàn)折射角的正弦只要求得折射因數(shù)F，從溶液的折光率和水溶液的折光率即可計(jì)算出溶液的濃度

9、.本法可用于葡萄糖的快速測(cè)定，但測(cè)定結(jié)果較旋光法偏高。折光儀:阿培氏折光計(jì)測(cè)定前用棱鏡或水進(jìn)行校正。 20時(shí)水的折光率為1.3330 25時(shí)水的折光率為1.3325 40時(shí)水的折光率為1.3305藥物名稱(chēng)VE1.4941.499VK11.5251.528苯甲醇1.5171.522二甲硅油1.4001.410月桂氮卓酮1.4701.473Chp2000未見(jiàn)用于含量測(cè)定，但用于純度檢查。 二、苷類(lèi) 1、含義： 糖類(lèi)和有羥基的非糖有機(jī)化合物縮合成環(huán)狀縮醛結(jié)構(gòu)的化合物，其水解產(chǎn)生糖+非糖類(lèi)化合物（苷元或稱(chēng)配基） 2、分類(lèi)：按苷元的結(jié)構(gòu)分為： （1）氰苷類(lèi)（如苦杏仁苷） （2）恩苷類(lèi)（如大黃酚） （3）

10、黃酮苷類(lèi)（如蘆?。?（4）甾體強(qiáng)心苷類(lèi)（如洋地黃毒苷） （5）皂苷類(lèi)（如甘草皂苷） 3、 構(gòu)成天然苷類(lèi)的糖 (1)葡萄糖； (2)其他的五碳糖、六碳糖； (3) 特殊的去氧糖類(lèi)（洋地黃毒糖） 4、性質(zhì) （1）味苦，中性（有的呈酸性，也有呈堿性，稱(chēng)生物堿苷） （2）多為白色結(jié)晶，易溶于水，不溶于甲醇、乙醇，難溶于非極性溶劑中。強(qiáng)心苷類(lèi)難溶于水，可溶于乙醇及氯仿。 5、 鑒別（1）天然產(chǎn)的苷類(lèi):均呈左旋性,無(wú)還原性.但當(dāng)苷在堿性或酸性下水解后,生成苷元和糖類(lèi),后者多為右旋且具有還原性。 鑒別方法： 天然苷：左旋性，無(wú)還原性 已水解苷：右旋，有還原性 （2）Keller-kiliani反應(yīng)(3) K

11、edde反應(yīng) 6、 含量測(cè)定 ChP2000對(duì)洋地黃毒苷采用比色法、熒光法或色譜法測(cè)定。 （1）比色法： 地高辛原料、地高辛注射液采用堿性三硝基苯酚顯色后，于485nm處比色測(cè)定。 （2）熒光法： 地高辛片劑含量測(cè)定、含量均勻度檢查、溶出度采用熒光法測(cè)定。是利用洋地黃毒苷+VC+H2O2+HCl產(chǎn)生熒光（激發(fā)波長(zhǎng)360nm，發(fā)射波長(zhǎng)485nm）。第二章 醇、醚、醛和酮類(lèi)藥物的分析 一、醇 1、 代表藥物及特點(diǎn)：CH3CH2OH 乙醇 甘油二巰丙醇三氯叔丁醇 三梨醇 結(jié)構(gòu)分析： 含-OH（醇羥基），可與酸成酯。 a-活潑H（乙醇、三氯叔丁醇）反應(yīng)（在堿性下與碘反應(yīng)生成碘仿）； 丙烯醛反應(yīng)（甘油、

12、二巰丙醇，堿性下加熱生成丙烯醛）； 三氯叔丁醇?jí)A性下加熱回流生成氯化鈉，可加入定過(guò)量硝酸銀，過(guò)量硝酸銀用硫氫酸銨滴定，以硫酸鐵銨為指示劑，可以定量測(cè)定； 本類(lèi)藥物具有還原性，可采用碘量法或高碘酸法測(cè)定。 2、 鑒別反應(yīng) (1) 碘仿反應(yīng)（a-活潑H）：乙醇在OH-下可被碘氧化生成甲酸鹽，并生成碘仿臭氣或黃色 CH3CH2OH+4I2+6NaOHCHI3+5NaI+ HCOONa+5H2O 三氯叔丁醇 同上，碘仿（a-活潑H） (2) 丙烯醛反應(yīng)： 甘油、二巰丙醇在堿性下加熱，即產(chǎn)生丙烯醛的刺激性臭氣。+2H2O (3) 沉淀反應(yīng)： +PbAC2+2HAC 3、 含量測(cè)定 (1) 碘量法：基于巰

13、基的強(qiáng)還原性 原理：+I2+2HI (2) 方法：同時(shí)做空白實(shí)驗(yàn)。 (2)高碘酸法： 凡含有鄰位二元或多元羥基的化合物均能被高碘酸氧化生成相應(yīng)的小分子酸和醛，反應(yīng)時(shí)n個(gè)相鄰羥基，消耗n-1個(gè)高碘酸。生成的HCOOH用NaOH標(biāo)準(zhǔn)液滴定;或生成的HIO3+KI I2用Na2S2O3滴定。C6H14O6+5HIO42HCHO+4HCOOH +5HIO3+H2O(3) GC法乙醇的測(cè)定，可采用GC法 （頂空GC法） 二、醚 1、 代表藥物： C2H5-O-C2H5麻醉乙醚 2、 雜質(zhì)檢查： （1）酸度（2）醛類(lèi)（3）過(guò)氧化物，（4）異臭 （5）不揮發(fā)物 三、醛 1、 代表藥物：HCHO CCl3CH

14、(OH)2 甲醛烏洛托品水合氯醛 2、 鑒別： (1) 醛基的還原反應(yīng)： 堿性酒石酸酮（Fehling） Cu2O紅色 氨制AgNO3液（Tollen) Ag 銀鏡 (2) 甲醛的反應(yīng)： 甲醛+H2SO4+變色酸 紫色（專(zhuān)屬反應(yīng)） (3) 水合氯醛的反應(yīng)： 水合氯醛+NaOH CHCl3+HCOONa+H2O （形成二液層） (4) 烏洛托品反應(yīng)： 烏洛托品加稀酸，加熱即分解生成甲醛和銨鹽。生成的甲醛具有特臭味，并和氨制硝酸銀反應(yīng)生成銀鏡。銨鹽加堿放出氨氣。NH4HSO4+2NaOHNH3+Na2SO4+2H2OHCHO+2Ag(NH3)OHHCOONH4 +2Ag+3NH3 +H2O6HCH

15、O +4NH4HSO4C6H12N4+4H2SO4+6H2O 3、 含量測(cè)定： (1) 碘量法： 醛+I2（定、過(guò)量）醛基在OH-下被I2氧化成相應(yīng)的酸，剩余碘在酸性下以Na2S2O3滴定。(2) 中和法（氧化后剩余滴定法）HCHO+NaOH+H2OHCOONa+H2O 2NaOH+H2SO4Na2SO4+2H2O(3) 剩余堿水解法水合氯醛+NaOHCHCl3+HCOONa2NaOH+H2SO4Na2SO4+2H2O水解生成CHCl3在堿性下會(huì)有少量分解消耗堿 CHCl3+4NaOHHCOONa+3NaCl+2H2O生成的NaCl可采用銀量法測(cè)定后折算成NaOH的體積,自酸堿滴定中扣除。(4

16、) 酸水解后剩余滴定法烏洛托品+H2SO4（NH4）2SO4+6HCHO H2SO4（過(guò)量）用堿測(cè)定。 三、酮 1、 代表藥物富馬酸酮替酚吡喹酮撲米酮 撲米酮酸性下分解，生成甲醛，可利用甲醛的專(zhuān)屬反應(yīng)鑒別。 撲米酮堿性下加熱灼燒分解生成氨氣，可利用紅色石蕊試紙鑒別。 富馬酸酮替酚環(huán)上氮顯堿性，可采用非水滴定法測(cè)定含量，富馬酸不干擾； 富馬酸酮替酚環(huán)上酮可與二硝基苯肼反應(yīng)，生成紅色絮狀沉淀。第五章芳胺及芳烴胺類(lèi)藥物的分析The Analysis of Aromatic amines and Aromatic alkylamines 芳胺類(lèi)藥物指氨基直接與苯環(huán)相連。 芳胺類(lèi)* : 酰胺類(lèi)、對(duì)氨基苯

17、甲酸酯類(lèi) 苯乙胺類(lèi) 氨基醚衍生物芳烴胺類(lèi)藥物指氨基在烴基側(cè)鏈上。1.結(jié)構(gòu)特點(diǎn)： 苯胺?；苌?，酰胺基鄰位或?qū)ξ挥腥〈５谝还?jié) 芳胺類(lèi)藥物的分析一、酰胺類(lèi)代表藥物有：對(duì)乙酰氨基酚鹽酸利多卡因2性質(zhì)：利多卡因，酰胺基鄰位上有兩個(gè)甲基，有很大空間位阻，水解較為困難。（利多卡因在80%的硫酸溶液中加熱才能水解） 水解后可發(fā)生重氮化反應(yīng)具有酰胺結(jié)構(gòu)共性。水解成芳伯氨基，發(fā)生重氮化偶合反應(yīng)。 堿性利多卡因側(cè)鏈中具有叔氨N原子，顯弱堿性，能與酸成鹽，且能與生物堿沉淀試劑或重金屬離子反應(yīng)。 與FeCl3反應(yīng)具有酚羥基或水解后能產(chǎn)生酚羥基（對(duì) 乙酰氨基酚），可與FeCl3作用呈色。 紫外吸收具有苯環(huán)結(jié)構(gòu)，有

18、紫外吸收。二、對(duì)氨基苯甲酸酯類(lèi)具有對(duì)氨基苯甲酸酯基本結(jié)構(gòu)。具有游離的芳伯氨基。1結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：代表藥物有： 鹽酸普魯卡因苯佐卡因鹽酸丁卡因2性質(zhì)： 具有芳伯氨基，發(fā)生重氮化或重氮化-偶合反應(yīng) 堿性具有脂烴胺側(cè)鏈堿性，能與生物堿沉淀試劑發(fā)生反應(yīng)。 具有酯的結(jié)構(gòu)，容易水解。 紫外吸收具有苯環(huán)結(jié)構(gòu)，有紫外吸收。三、鑒別反應(yīng)1、重氮化-偶合反應(yīng)具有芳伯氨基藥物，如鹽酸普魯卡因等，在酸性溶液中與NaNO2TS發(fā)生重氮化反應(yīng)，再與堿性-萘酚偶合產(chǎn)生紅色偶氮化合物。具有潛在芳伯氨基，如對(duì)乙酰氨基酚，水解后可得芳伯氨基，能發(fā)生類(lèi)似反應(yīng)。 鹽酸丁卡因（芳香第二胺結(jié)構(gòu)）與NaNO2作用生成乳白色N-亞硝基化合物沉淀。

19、2、三氯化鐵反應(yīng)具有酚羥基（如對(duì)乙酰氨基酚），可 與FeCl3TS作用顯藍(lán)紫色。3、與生物堿沉淀試劑反應(yīng)具有烴胺側(cè)鏈，與生物堿沉淀試劑反應(yīng).根據(jù)沉淀顏色或測(cè)定沉淀熔點(diǎn)進(jìn)行鑒別。常用生物堿沉淀試劑：氯化金試液, 碘試液,碘化汞鉀試液,苦味酸試液等。4、與重金屬離子反應(yīng)(1)與銅離子的反應(yīng)(2)與鈷鹽反應(yīng)5羥肟酸鐵的反應(yīng)具有酰胺結(jié)構(gòu)，被H2O2氧化成羥肟酸，羥肟 酸與FeCl3反應(yīng)生成紫紅色羥肟酸鐵，隨即 變?yōu)榘底厣磷睾谏?。如鹽酸普魯卡因胺。具有酰胺結(jié)構(gòu)的藥物羥肟酸羥肟酸鐵6、水解產(chǎn)物的反應(yīng)(1)苯佐卡因的鑒別試驗(yàn)(2).鹽酸普魯卡因的鑒別試驗(yàn) 三雜質(zhì)檢查1、對(duì)乙酰氨基酚雜質(zhì)檢查 對(duì)乙酰氨基酚中

20、除檢查酸度、氯化物、硫酸鹽、重金屬、水分、熾灼殘?jiān)纫话汶s質(zhì)外，還需要檢查：乙醇溶液的澄清度與顏色、有關(guān)物質(zhì)（對(duì)氯乙酰苯胺） 、對(duì)氨基酚等特殊雜質(zhì)。對(duì)乙酰氨基酚以對(duì)硝基氯苯為原料合成。(1)乙醇溶液的澄清度與顏色對(duì)乙酰氨基酚易溶于乙醇中，如乙醇液不澄清或有顏色，則說(shuō)明有雜質(zhì)存在。生產(chǎn)工藝用鐵粉作還原劑，如帶入成品，則導(dǎo)致對(duì)乙酰氨基酚乙醇溶液產(chǎn)生渾濁。中間體對(duì)氨基酚有色氧化物在乙醇中顯橙紅色或棕色。 （2）有關(guān)物質(zhì)（對(duì)氯乙酰苯胺） 副反應(yīng)副副反應(yīng)對(duì)硝基氯苯為原料合成對(duì)乙酰氨基酚時(shí)，如發(fā)生這樣的副反應(yīng)就能夠引入對(duì)氯乙酰苯胺。副反應(yīng)TLC法 樣品液 對(duì)照液對(duì)氯乙酰苯胺乙醚溶液（50g/ml） 分離系

21、統(tǒng)硅膠GF254氯仿-丙酮-甲苯（1352） 限量: 點(diǎn)樣量樣品液：200l 點(diǎn)于硅膠GF254薄層板上對(duì)照液：40l 判斷在254nm波長(zhǎng)紫外燈下觀察，供試品與對(duì)照品主斑點(diǎn)Rf值相同的斑點(diǎn)比較,不得超過(guò)其大小與顏色。(3)對(duì)氨基酚制備中乙?；煌耆蛸A存不當(dāng)發(fā)生水解都能引入對(duì)氨基酚檢查原理：對(duì)氨基酚在堿性條件下，與亞硝基鐵氰化鈉作用，生成藍(lán)色絡(luò)合物，與對(duì)照液比較判斷對(duì)氨基酚的限量。 檢查方法：限量：0.005%四、含量測(cè)定1亞硝酸鈉滴定法 原理具有芳伯氨基藥物，在酸性條件下與NaNO2反應(yīng)生成重氮鹽，根據(jù)消耗NaNO2量，計(jì)算出含量。潛在芳伯氨基藥物，如芳酰氨基、硝基等，可先水解或還原，得芳

22、伯氨基后，再進(jìn)行測(cè)定。 操作中的主要條件重氮化反應(yīng)屬于分子反應(yīng)滴定液NaNO2及反應(yīng)生成的重氮 鹽都不穩(wěn)定反應(yīng)速度受多種因素影響第一步反應(yīng)速度比較慢，而后兩步反應(yīng)速度則比較快。反應(yīng)速度與藥物結(jié)構(gòu)的關(guān)系重氮化反應(yīng)機(jī)制：a. 當(dāng)苯環(huán)上特別是氨基鄰位或?qū)ξ簧嫌形娀鶗r(shí),如吸電基通過(guò)誘導(dǎo)效應(yīng)使氨基 上電子云密度降低，從而堿 性降低，游離芳伯胺濃度增 大，所以反應(yīng)速度就快。等可使氨基的堿性降低，重氮化反應(yīng)速度加快。b.當(dāng)在苯環(huán)上有供電基時(shí)，則使反應(yīng)速度降低。如 等。供電基能使氨基堿性增強(qiáng)，這樣氨 基成鹽的機(jī)會(huì)就增大，游離芳伯胺 的濃度就減小，所以反應(yīng)速度就慢。反應(yīng)速度與酸及酸度的關(guān)系a. 酸的種類(lèi)重氮化

23、反應(yīng)在HBr、HCl、H2SO4中反應(yīng)速度是 HBrHClH2SO4 K1比K2大300倍 用HBr時(shí)，生成NOBr量大，反應(yīng)速度快。但HBr價(jià)格貴，用鹽酸代替，為加快反應(yīng)速度，需加入KBr（催化劑）。產(chǎn)生HBr與HNO2反應(yīng)，可生成大 量NOBr，加快反應(yīng)速度。b. 鹽酸的用量理論上: 芳胺鹽酸11mol 實(shí)際上: 芳胺鹽酸12.56mol原因：強(qiáng)酸性可加速反應(yīng)重氮鹽在酸性下穩(wěn)定酸性下避免副反應(yīng)發(fā)生。 如鹽酸量增加，則反應(yīng)向左進(jìn)行。如鹽酸濃度太大，反到會(huì)使游離芳伯氨的量減?。ǔ甥}），而影響重氮化反應(yīng)速度，使反應(yīng)速度減慢。如酸度不足則沒(méi)反應(yīng)的芳胺與生成的重氮鹽產(chǎn)生偶氮氨基化合物，而影響測(cè)定結(jié)果

24、。反應(yīng)速度與滴定時(shí)溫度的關(guān)系一般，溫度升高反應(yīng)速度加快。但重氮化反應(yīng)所生成的重氮鹽不穩(wěn)定，溫度升高重氮鹽分解速度也加快。另外，溫度高時(shí)，滴定液亞硝酸鈉也容易分解逸失，而影響測(cè)定結(jié)果。所以，重氮化反應(yīng)應(yīng)在低溫條件下進(jìn)行。中國(guó)藥典規(guī)定：在30C以下，把滴定管尖端插入液面下 處進(jìn)行滴定。在滴定時(shí)一邊攪拌一邊加入大部分標(biāo)準(zhǔn)溶液。到近終點(diǎn)時(shí)把滴定管提出液面，用水沖洗后再繼續(xù)滴定至終點(diǎn)。標(biāo)準(zhǔn)溶液在液面下加入，可避免NaNO2揮發(fā)。反應(yīng)速度與滴定速度的關(guān)系重氮化反應(yīng)屬分子反應(yīng)，反應(yīng)速度比較慢，滴定速度不能過(guò)快。尤其是近終點(diǎn)時(shí)，更要慢慢地滴定。近終點(diǎn)時(shí)，游離芳伯胺濃度非常低，反應(yīng)速度就更慢了。所以，每加一滴標(biāo)

25、準(zhǔn)液后，要攪拌15分鐘后再判斷終點(diǎn)。 指示終點(diǎn)的方法重氮化滴定法指示終點(diǎn)的方法有: 永停法 電位法 外指示劑法 內(nèi)指示劑法我國(guó)藥典主要采用永停滴定法指示終點(diǎn) 永停法原理：在被測(cè)溶液中插入兩個(gè)相同鉑電極，在兩個(gè)電極間加10200mV電壓，并且在回路中串聯(lián)一個(gè)靈敏的檢流計(jì)（10A9/格）。當(dāng)用NaNO2滴定時(shí)，在終點(diǎn)前回路中沒(méi)有電流，電流計(jì)指針指零。當(dāng)?shù)竭_(dá)滴定終點(diǎn)時(shí)，由于溶液中有微過(guò)量的NaNO2，使得在兩個(gè)電極上發(fā)生氧化還原反應(yīng) 陽(yáng) 極：導(dǎo)致在兩電極間有電子流動(dòng)，從而回 路中有電流產(chǎn)生，使得電流計(jì)指針發(fā) 生偏轉(zhuǎn)并且不再返回零點(diǎn)。陰 極：電位法在被測(cè)溶液中插入甘汞-鉑電極，到達(dá)滴定終點(diǎn)時(shí)，溶液中稍

26、過(guò)量的NaNO2使電位產(chǎn)生突躍，從而指示終點(diǎn)。USP采用這個(gè)方法指示終點(diǎn)。外指示劑法淀粉-KI糊劑或試紙?jiān)恚?當(dāng)達(dá)到滴定終點(diǎn)時(shí)，溶液中稍過(guò)量 的NaNO2在酸性條件下氧化KI析出I2， I2遇淀粉顯藍(lán)色。使用方法：滴定時(shí)，把淀粉-KI試液滴在白磁板上，用玻璃棒蘸取少量被滴定的溶液，在白磁板上劃，如果立即出現(xiàn)藍(lán)色即已到滴定終點(diǎn)。外指示劑法的缺點(diǎn)：由于滴定的溶液是強(qiáng)酸性，KI遇光能被空氣氧化析出碘，所以，在沒(méi)有達(dá)到終點(diǎn)時(shí)，就有可能呈現(xiàn)藍(lán)色，而造成誤判。由于經(jīng)常蘸取溶液進(jìn)行試驗(yàn)，可造成滴定液的損失而帶來(lái)誤差。方法難掌握。內(nèi)指示劑法內(nèi)指示劑法指示終點(diǎn)，操作簡(jiǎn)便，但生成重氮鹽一般都帶有顏色，干擾指示劑

27、顏色變化的觀察，尤其是顏色很深時(shí)，更是這樣。在重氮化滴定法中，內(nèi)指示劑法應(yīng)用不是很廣泛。第二節(jié) 苯乙胺類(lèi)藥物分析一結(jié)構(gòu)特點(diǎn)具有烴胺側(cè)鏈，屬于芳烴胺類(lèi)藥物。多數(shù)在苯環(huán)上有12個(gè)羥基取代基。如在苯環(huán)3、4位上有羥基取代，則為兒茶 酚胺類(lèi)藥物。代表藥物 腎上腺素去甲腎上腺素二性質(zhì)：1. 易被氧化鄰苯二酚或苯酚結(jié)構(gòu)，易被氧化呈色。3. 具有旋光性 具有手性碳原子，具有光學(xué)活性。2. 顯堿性 具有烴胺側(cè)鏈，顯弱堿性。能與酸成鹽。 三鑒別試驗(yàn) 1.氧化反應(yīng)區(qū)別腎上腺素和去甲腎上腺素。2. 三氯化鐵反應(yīng)： 在0.1mol/L鹽酸中與Fe3+顯翠綠色，加氨試液后，顯紫色或紫紅色四、腎上腺素中腎上腺酮的檢查（講

28、過(guò)）五、含量測(cè)定（一） 非水溶液滴定法（二） 溴量法第三節(jié) 氨基醚衍生物類(lèi)藥物的分析 鹽酸苯海拉明一. 代表藥物1.結(jié)構(gòu)2. 性質(zhì)白色結(jié)晶性粉末水中極易溶解,醇或氯仿中易溶,乙醚或苯中極微溶.見(jiàn)光分解酸性溶液中易分解.紫外吸收二、鑒別1、與硫酸反應(yīng)：顯色2、水解反應(yīng)：3、與硝酸銀反應(yīng)形成白色凝乳狀沉淀4、紫外、紅外特征吸收三、含量測(cè)定 （一） 非水溶液滴定法 （原料） （二） 酸性染料比色法 （片劑，見(jiàn)生物堿章） （三）陰離子表面活性劑滴定法 （其注射液） （四）HPLC （片劑）第六章雜環(huán)類(lèi)藥物的分析The Analysis of Hetero drugs第一節(jié)概述雜環(huán): 環(huán)狀有機(jī)化合物的碳

29、環(huán)中夾雜有其他非碳原子的環(huán)狀結(jié)構(gòu)叫做雜環(huán). 非碳原子,又稱(chēng)雜原子,如N,S,O.共性: (1)雜環(huán)類(lèi)藥物是合成藥物中所占比例最多 的 一大類(lèi)藥物. (2)多為五元環(huán)或六元環(huán),單環(huán)或并合環(huán). (3)雜環(huán)結(jié)構(gòu)較穩(wěn)定,不易開(kāi)環(huán),其性質(zhì)受雜 原子種類(lèi)、數(shù)目、位置影響. (4)雜環(huán)上取代基性質(zhì)較活潑,常用于分析. (5)含氮雜環(huán),其堿性的強(qiáng)弱往往用于分析.本章重點(diǎn)介紹吡啶類(lèi)吩噻嗪類(lèi)苯并二氮雜卓類(lèi). 第二節(jié) 吡啶類(lèi)藥物分析一、結(jié)構(gòu)分析1.結(jié)構(gòu)：本類(lèi)藥物均有吡啶環(huán)吡啶 異煙肼 尼可剎米 2.性質(zhì)：（1）母核能與金屬鹽反應(yīng)生成有色沉淀（2）堿性:吡啶環(huán)上氮原子具有叔胺性質(zhì)， pKb=8.8（水中），非水滴定；

30、（3）異煙肼:酰肼基有強(qiáng)還原性,且能與 羰基縮合,氧化還原滴定或比色測(cè)定；（4）尼可剎米:酰胺基堿性下可水解,放 出NH(C2H5)2,用于鑒別或凱氏定N 直接蒸餾測(cè)定。二、鑒別： 1.母核反應(yīng)： （1）與金屬離子反應(yīng)生成有色沉淀 a.異煙肼,尼可剎米+HgCl2 白色沉淀 b.異煙肼+CuSO4 紅棕色（Cu2O） 尼可剎米+CuSO4+硫氰酸鉀 淡綠色絮 狀沉淀（2）開(kāi)環(huán)反應(yīng)：適用于a,a未取代，b, 為烷基或羧基取代的。a.戊烯二醛反應(yīng)（knig反應(yīng)） b. 2，4-二硝基氯苯反應(yīng) （Vongerichten反應(yīng)） 2. 酰肼基團(tuán)的反應(yīng) 常用的氧化劑：I2、Br2、KBrO3、AgNO3

31、（1）還原反應(yīng)： （2）縮合反應(yīng)：與芳醛縮合形成腙， 如香草醛、水楊醛、二甲氨基苯甲醛黃色max=380nm3.與酸堿共熱，以降解產(chǎn)物鑒別用紅色石蕊試紙檢查 1.氧化還原滴定法：常用氧化劑有：碘、溴、溴酸鉀、高錳酸鉀、重鉻酸鉀、NaNO2、硫酸鈰等。其中碘量法，溴量法，溴酸鉀法最常用。（1）剩余碘量法：三、含量測(cè)定：以異煙肼為例。操作： 原理： CONHNH2N+ 2I2 +5NaHCO330min38-40度 COONaN+N2+4NaI+5CO2+4H2OI2（過(guò)） +2Na2S2O32NaI+Na2S4O6討論：a.本法簡(jiǎn)便,但因碘氧化力較弱,反應(yīng)不 易完全。常因反應(yīng)時(shí)間、溫度不同有 所

32、差異；b.用于制劑分析時(shí),含有還原性賦形劑時(shí) 有干擾；c.化學(xué)計(jì)量關(guān)系：(1:4) 0.1mol/L I23.429mg C6H7N3(2) 剩余溴量法： 原理： 0.1mol/LBr2 （溴酸鉀3g+溴化鉀15g水1000ml）在稀HCl反應(yīng)條件下：KBrO3+5KBr+6HCl Br2+6KCl+3H2O操作： Br2（過(guò)）+KI I2+2KBrI2+Na2S2O3 2NaI+Na2S4O6討論：ChP63版曾用本法測(cè)定異煙肼 a.酸度0.700.86mol/L，所測(cè)結(jié)果一致， 高、低都會(huì)使結(jié)果偏低； b.放置時(shí)間1530min； c.滴定溫度30； d.測(cè)定應(yīng)在25min內(nèi)完成(3)溴酸

33、鉀法： 操作： 原理： 等當(dāng)點(diǎn):稍過(guò)量的Br2討論： a.緩緩滴定并充分振搖,防止局部濃度過(guò)高終點(diǎn)提前； b.到終點(diǎn)后,補(bǔ)加一滴指示劑,如顏色褪去即可,否則未到終點(diǎn)；c.ChP77、85、90、95、2000均采用本法測(cè)定異煙肼（片）；d.化學(xué)計(jì)量關(guān)系：3/2T=0.016673/2137.14=3.4292.比色測(cè)定： 利用開(kāi)環(huán)反應(yīng)或酰肼基團(tuán)與試 劑呈色測(cè)定3.非水滴定法： 利用吡啶環(huán)的堿性，進(jìn)行非水 滴定第三節(jié) 吩噻嗪類(lèi)藥物分析一、結(jié)構(gòu)分析共同點(diǎn)：（1）硫氮雜蒽母核；（2）含兩個(gè)雜原子多環(huán)共軛體系，有UV吸收；（3）S被氧化生成砜或亞砜；（4）與金屬離子絡(luò)合，生成有色物，可比色測(cè)定不同點(diǎn)：

34、R，R取代基不同RR鹽類(lèi)藥名-(CH2)3N(CH3)2-HHCl鹽酸丙嗪-(CH2)3N(CH3)2-ClHCl鹽酸氯丙嗪-CH2CH(CH3)N(CH3)2-HHCl鹽酸異丙嗪二、鑒別 1、特征的紫外吸收： 具有三個(gè)峰值205nm、254nm和300nm附近，兩個(gè)谷220nm和280nm附近；若被氧化則有四個(gè)吸收峰，可用于判斷樣品中有無(wú)氧化物。2. 顯色反應(yīng)： (1)氧化劑：H2SO4、溴水、FeCl3、H2O2 (2)（可用于比色測(cè)定）三、含量測(cè)定 1、非水堿量法：吩噻嗪類(lèi)藥物母核上氮原子堿性極弱,不能進(jìn)行滴定,10位取代基上N原子為堿性,可在非水介質(zhì)中以高氯酸標(biāo)準(zhǔn)液，以CV為指示劑。

35、2、鈰量法： 原理:適當(dāng)pH下,用硫酸鈰氧化吩噻嗪進(jìn) 行測(cè)定開(kāi)始時(shí),吩噻嗪失去一個(gè)電子 游離基 （紅色）等電點(diǎn)吩噻嗪失去2個(gè)電子 無(wú)色， 終點(diǎn)：紅色無(wú)色條件：在硫酸性下 優(yōu)點(diǎn)：（1）賦形劑不干擾,復(fù)方制劑中咖啡因、苯丙胺、可待因、巴比妥類(lèi)藥物等不干擾；（2）反應(yīng)為一價(jià)還原（Ce4+Ce3+）,對(duì)環(huán)上取代基無(wú)作用；（3）用于原料藥，也可用于制劑分析。3、鈀離子比色法： 原理： 吩噻嗪類(lèi)藥物可與一些金屬離子（如Pd2+）在適當(dāng)pH值的溶液中形成有色的絡(luò)合物，借以進(jìn)行比色測(cè)定。討論：（1）鈀離子試劑： PdCl2和十二烷基硫酸酯鈀鹽. 用PdCl2時(shí)，形成的有色絡(luò)合物水中溶 解度小,樣品量大時(shí),產(chǎn)生

36、沉淀.十二烷基硫酸酯鈀鹽,其絡(luò)合物溶解度 大,吸收強(qiáng)度增大（約2倍）.（2）本法優(yōu)點(diǎn)：氧化產(chǎn)物不干擾。4、UV法：(1) 直接分光光度法：(2) 萃取后分光光度法：(3) 二階導(dǎo)數(shù)分光光度法：(4) 萃取-雙波長(zhǎng)分光光度法：直接分光光度法：操作： 取10片，除去糖衣后，精稱(chēng)，研細(xì)稱(chēng)取粉末適量加水、鹽酸溶解過(guò)濾，取濾液于249nm處測(cè)定。已知：鹽酸異丙嗪=910，即可計(jì)算優(yōu)點(diǎn)：不需標(biāo)準(zhǔn)品缺點(diǎn)：儀器精密度要求高測(cè)定中注意問(wèn)題：避光、防止氧化。萃取-雙波長(zhǎng)分光光度法： -用于校正樣品中氧化產(chǎn)物對(duì)測(cè)定影響氯丙嗪的最大吸收波長(zhǎng)為254nm,其氧化產(chǎn)物在此波長(zhǎng)也有吸收,同時(shí)在277nm處氧化產(chǎn)物也有吸收,

37、且其吸收度與在254nm處吸收度相等,而氯丙嗪在此波長(zhǎng)處無(wú)吸收. A=A254-A277第四章 苯駢二氮雜卓類(lèi)藥物的分析 一. 結(jié)構(gòu)分析 氯氮卓（1955年合成） 地西泮（1959年合成） 共同點(diǎn)：（1）二氮雜卓環(huán)為七元環(huán)，環(huán)上氮原子具有強(qiáng)堿性，苯基的取代使堿性降低，可進(jìn)行非水滴定法測(cè)定；（2）UV吸收，用于含量測(cè)定；（3）環(huán)比較穩(wěn)定，在強(qiáng)酸性下水解，形成相應(yīng)的二苯甲酮衍生物，可用于鑒別和比色測(cè)定。（氯氮卓水解生成芳伯胺基；地西泮水解生成芳仲胺基和甘氨酸）；（4）本品多為游離堿，不溶于水，而溶于甲醇、乙醇和氯仿中。二、鑒別 1、芳伯胺基反應(yīng)： 氯氮卓水解生成芳伯胺基(重氮化偶合反應(yīng)) 2、茚三

38、酮反應(yīng)： 地西泮水解生成甘氨酸（茚三酮反應(yīng)） 3 、硫酸熒光反應(yīng)： 本類(lèi)藥物加硫酸，在紫外燈下，呈熒光。 第七章生物堿類(lèi)藥物的分析The Analysis of Alkaloid第一節(jié)概述一、特點(diǎn)1含氮堿性化合物2沒(méi)有共同母核3多數(shù)具有含氮雜環(huán)結(jié)構(gòu)，少數(shù)氮在側(cè)鏈上（如麻黃堿）4. 絕大部分存在于植物體內(nèi)；少數(shù)存在于動(dòng)物體內(nèi)（如蟾蜍堿）二、堿性與結(jié)構(gòu)的關(guān)系堿性氮原子結(jié)合狀態(tài)和所處化學(xué)環(huán)境電子效應(yīng):誘導(dǎo)效應(yīng)和共軛效應(yīng)立體效應(yīng)與質(zhì)子結(jié)合能力大，堿性強(qiáng)與質(zhì)子結(jié)合能力小，堿性弱N連接供電基團(tuán)，如-OR、-R時(shí)，堿性就強(qiáng)。N連接吸電基團(tuán)，如-NO2、-COOH 等時(shí)，堿性就弱。電子效應(yīng):1季銨類(lèi)生物堿以季

39、銨形式存在，可以離子化，有類(lèi)似金屬的性質(zhì)，堿性最強(qiáng)。如：小蘗堿（pKa=11.53）2. 脂肪胺堿性： 仲胺伯胺叔胺 脂肪胺堿性比NH3強(qiáng)3芳胺類(lèi)N與芳環(huán)相連，N未共享電子對(duì)與苯環(huán)的電子形成p-共軛，使N原子上的電子云向苯環(huán)方向移動(dòng)，這樣就使N原子周?chē)碾娮釉泼芏冉档?，接受質(zhì)子的能力減小，所以堿性就弱。芳胺類(lèi)藥物堿性比NH3堿性弱。堿性強(qiáng)弱取決于芳環(huán)上取代基的性質(zhì)。 供電子取代基（如-CH3等）堿性強(qiáng) 吸電子取代基（如-NO2等）堿性弱芳胺類(lèi)堿性： 伯胺仲胺 叔胺4酰胺類(lèi)呈酰胺結(jié)構(gòu)，堿性非常弱如：咖啡因Kb=0.710-14（19C）立體效應(yīng)如：苦參堿 兩個(gè)N原子N16為酰胺結(jié)構(gòu)，幾乎沒(méi)有堿性

40、N1為叔胺結(jié)構(gòu)，它的立體結(jié)構(gòu)便于接 受質(zhì)子，消弱了立體效應(yīng)的影響，堿 性較強(qiáng)。再如：東莨菪堿和莨菪堿 三元氧環(huán)的存在，N上孤電子產(chǎn)生顯著立體效應(yīng)（增強(qiáng)了空間位阻），使N原子不易給出電子，堿性較弱（與莨菪堿比）。（東莨菪堿）（莨菪堿）生物堿堿性強(qiáng)弱一般規(guī)律是：季銨堿類(lèi)脂肪胺類(lèi)NH3芳胺、N-芳雜環(huán)酰胺類(lèi)例外：含-COOH、酚-OH的生物堿，屬于兩 性生物堿。如：?jiǎn)岱热?、生物堿類(lèi)藥物的溶解性一般情況下 游離生物堿不溶或難溶于水，易溶于 有機(jī)溶劑 生物堿鹽易溶于水，不溶于有機(jī)溶劑 游離生物堿，可在稀酸水溶液中成 鹽而溶解。例外：有的生物堿能溶于水，如麻黃堿、 煙堿等具有酸堿兩性的生物堿，可在堿的 水

41、溶液中成鹽而溶解，如嗎啡、茶 堿等堿性較弱的生物堿不能與酸形成穩(wěn) 定的鹽，如咖啡因、利血平等四、生物堿類(lèi)藥物的分類(lèi)： 1、苯烴胺類(lèi)： 氮原子不在環(huán)狀結(jié)構(gòu)內(nèi) 麻黃堿、偽麻黃堿、秋水仙堿2、托烷類(lèi)（莨菪烷類(lèi)） 莨菪烷衍生的氨基醇和不同有機(jī)酸縮合成酯類(lèi)的生物堿 硫酸阿托品、氫溴酸山莨菪堿3、喹啉類(lèi) 硫酸奎寧、硫酸奎尼丁4、異喹啉類(lèi) 鹽酸嗎啡、磷酸可待因5、吲哚類(lèi) 硝酸士的寧、利血平6、黃嘌呤類(lèi) 咖啡因、茶堿第二節(jié)鑒別反應(yīng)一 測(cè)定理化常數(shù) 1熔點(diǎn)和衍生物熔點(diǎn) 2比旋度二、光譜法1UV吸收光譜 a. 比較最大（小）吸收波長(zhǎng)和相應(yīng)的吸收度 b. 與對(duì)照品的吸收光譜比較一致性 c. 比較吸收系數(shù) 2IR吸收

42、光譜 IR光譜信息豐富三、化學(xué)反應(yīng)1沉淀反應(yīng)： 酸性水溶液中，與重金屬鹽類(lèi)和大分子酸類(lèi)等沉淀試劑發(fā)生沉淀反應(yīng)。常用試劑：I2KI 鞣酸 碘化鉍鉀 硅鎢酸 碘化汞鉀2顯色反應(yīng) 生物堿固體 + 顯色試劑顏色 常用：CH2SO4、CHNO3、鉬硫酸3官能團(tuán)反應(yīng)四、色譜方法 TLC法： 生物堿鹽：拖尾，吸附牢固 改進(jìn)方法： 1、在展開(kāi)劑中加入少量的堿性試劑 如：氨、二乙胺 2、硅膠板用堿處理 如：硅膠+NaOH（0.1mol/L） 630mg 60ml 第三節(jié) 含量測(cè)定 一、非水堿量法在水中堿性較弱，不能順利地進(jìn)行中和滴定（滴定突躍不明顯，難以判斷滴定終點(diǎn)）。在酸性非水介質(zhì)中（如gHAc中），則能顯示

43、出較強(qiáng)的堿性，滴定突躍增大，可以順利地進(jìn)行中和滴定。 1測(cè)定方法 供試品：以消耗標(biāo)準(zhǔn)液8ml計(jì)算。 溶劑：gHAc，一般用量1030ml， 滴定劑：0.1mol/L HClO4/無(wú)水gHAc 溶液 指示劑：結(jié)晶紫 做空白試驗(yàn)2討論 適用范圍Kb10-8的有機(jī)堿鹽。 Kb為10-810-10 選冰醋酸作溶劑Kb為10-1010-12 選冰醋酸和醋酐作溶劑Kb 10-12 選醋酐作溶劑 HA不同，對(duì)滴定反應(yīng)的影響也不同。 鹽的滴定置換滴定，即用強(qiáng)酸（HClO4）置換出與生物堿結(jié)合的較弱的酸（HA）.HClO4、HBr、HCl、H2SO4、HNO3 水中酸強(qiáng)度相等。 gHAc中酸強(qiáng)度不相同.HClO

44、4HBrHClH2SO4HNO3其它弱酸a.氫鹵酸鹽的測(cè)定氫鹵酸gHAc中酸性較強(qiáng)，對(duì)滴定有影響。排除方法：加入過(guò)量的HgAc2/gHAc溶液b.硫酸鹽的測(cè)定 （以硫酸奎寧的測(cè)定為例）直接滴定法 注意硫酸鹽的結(jié)構(gòu)，正確判斷反應(yīng)的摩爾比。兩個(gè)N原子喹啉N，屬于芳環(huán)族N，堿性較弱喹核N，屬于脂環(huán)族N，堿性較強(qiáng)在水中硫酸是二元酸，能夠解離出兩個(gè)氫離子，即 在冰醋酸中硫酸是一元酸，能夠解離出 一個(gè)氫離子，即奎寧與硫酸結(jié)合時(shí)，一分子的硫酸能與兩分子的奎寧結(jié)合，即：滴定反應(yīng)如下：+3HClO4+用HClO4直接滴定硫酸喹寧時(shí)，摩爾比是13用HClO4直接滴定硫酸阿托品硫酸阿托品（莨菪堿）的結(jié)構(gòu)如下：反應(yīng)的

45、摩爾比是11加入高氯酸鋇消除H2SO4的影響加入高氯酸鋇，摩爾比是12練習(xí)題：硫酸奎寧的測(cè)定稱(chēng)取樣品適量，加gHAc7ml，醋酐3ml與結(jié)晶紫指示液1滴，用0.1mol/L HClO4液滴定至終點(diǎn)，并將滴定結(jié)果用空白試驗(yàn)校正。已知：1ml 0.1mol/L HClO4液相當(dāng)于24.90mg的硫酸奎寧。求：硫酸奎寧的分子量。（747.00）c. 硝酸鹽的測(cè)定 HNO3在gHAc中為弱酸，不影響滴定突躍。 HNO3具有氧化性，應(yīng)采用電位法指示終點(diǎn)或?qū)NO3破壞分解后再進(jìn)行測(cè)定。d.磷酸鹽及有機(jī)酸鹽的測(cè)定磷酸、有機(jī)酸為弱酸，不干擾滴定。 終點(diǎn)指示方法最常用的指示劑是 結(jié)晶紫 Crystal Vio

46、let（CV）紫藍(lán)藍(lán)綠黃綠黃（堿性區(qū)）（酸性區(qū)）終點(diǎn)的顏色應(yīng)用電位法校準(zhǔn)。 注意事項(xiàng)a. 水分的影響及排除gHAc和HClO4中都含有一定量的水分排除法：配制時(shí)，根據(jù)gHAc和HClO4含水量，加入計(jì)算量的醋酐。費(fèi)休氏（Fischer）水分測(cè)定法準(zhǔn)確測(cè)出gHAc和HClO4中含水量，準(zhǔn)確加入醋酐。b.標(biāo)準(zhǔn)溶液的穩(wěn)定性 水的膨脹系數(shù)是0.2110-3/C gHAc膨脹系數(shù)是1.110-3/C，較大，體積隨溫度變化較大，且還具有揮發(fā)性。 測(cè)定樣品與標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液時(shí)溫度不同，應(yīng)對(duì)濃度進(jìn)行校正。其中： 0.0011：gHAc的膨脹系數(shù) t0和t1：標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液和測(cè)定樣品時(shí)的溫度 F0和F1：t0和t1所

47、對(duì)應(yīng)的標(biāo)準(zhǔn)溶液的F值說(shuō)明：t1-t010C或貯存時(shí)間超過(guò)30天則在臨用前必須重新標(biāo)定標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度。校正公式：二、提取中和法1基本原理利用生物堿鹽類(lèi)可溶于水,游離生物堿不溶于水而溶于有機(jī)溶劑的性質(zhì)進(jìn)行提取，然后進(jìn)行滴定的方法。即2討論(1)堿化試劑 常用的堿化試劑 NaOH、NH3、Na2CO3、NaHCO3、 Ca(OH)2、MgO等。 對(duì)堿化試劑的要求 堿化試劑堿性大于生物堿的堿性，即 堿化試劑的pKb生物堿的pKb 選用堿化試劑時(shí)應(yīng)考慮的因素生物堿的化學(xué)性質(zhì)易水解或具兩性，不能用強(qiáng)堿性堿化試劑。阿托品具有酯結(jié)構(gòu)，與強(qiáng)堿接觸時(shí)分解；嗎啡具有酚羥基，和NaOH形成酚鹽溶于水，難以用有機(jī)溶劑提

48、取。脂肪性物質(zhì)的共存有脂肪性物質(zhì)共存時(shí)，不能用強(qiáng)堿性的堿化試劑，以免形成乳化而難以用有機(jī)溶劑提取。 NH3優(yōu)點(diǎn)氨水是最常用的堿化試劑。 氨Kb值：1.7510-5 一般生物堿Kb：10-610-9 氨堿性適當(dāng)，能使大部分生物堿游離，又不能使具酯結(jié)構(gòu)或兩性生物堿水解或成鹽。(2) 提取溶劑 提取溶劑要求 不與水相混溶 沸點(diǎn)低，容易揮散除去 對(duì)所提取生物堿有極大的溶解度， 而對(duì)其它共存物質(zhì)不溶或極少溶解 與堿化試劑或生物堿不起任何化學(xué) 反應(yīng) 常用的提取溶劑氯仿、乙醚，有時(shí)也使用混合溶劑氯仿：比重大，易于分離對(duì)大部分生物堿都有較大的溶解度不燃燒，使用安全氯仿在堿性下受熱很容易分解，尤其是堿性較強(qiáng)時(shí)更

49、容易分解。乙醚：沸點(diǎn)太低，極易揮發(fā)容易被氧化，著火在水中的溶解度較大在乙醚中溶解的生物堿不多乙醚的應(yīng)用不如氯仿廣泛。三、酸性染料比色法1原理:在適當(dāng)pH溶液中,有機(jī)堿（B）可以與氫離子成鹽,酸性染料（HIn）可解離成陰離子,陰離子可與有機(jī)堿鹽陽(yáng)離子定量地結(jié)合成有色離子對(duì)，而進(jìn)入到有機(jī)相。通過(guò)測(cè)定有機(jī)溶劑提取液的吸收度;或?qū)⒂袡C(jī)溶劑提取液酸化或堿化，使與有機(jī)堿結(jié)合的酸性染料釋放出來(lái)，測(cè)定染料的吸收度來(lái)測(cè)得有機(jī)堿的含量。溴麝香草酚藍(lán)(BTB)brom thymol bluepH 6.07.6（黃藍(lán)）2常用酸性染料磺酞類(lèi)指示劑溴甲酚綠(BCG)brom cresol greenpH 3.65.2（黃

50、藍(lán)）溴酚藍(lán)(BPB)bromophenol bluepH 3.84.6（黃紫）3主要條件最主要條件是水相的pH。 要求： 能使有機(jī)堿全部以鹽的形式存在，酸性染料能夠解離成離子，以便它們定量地結(jié)合成離子對(duì)而轉(zhuǎn)溶于有機(jī)相，且又能將剩余的染料完全保留在水相。 pH（酸性）BH+，InBH+In-，有機(jī)溶劑提取的是HIn pH（堿性） In-，BH+BH+In-，有機(jī)溶劑提取的是B 水相pH的選擇方法：理論計(jì)算。實(shí)驗(yàn)求得。用待測(cè)的有機(jī)堿加入一定的酸性染料，配制成一系列不同pH值的溶液，分別用有機(jī)溶劑提取后測(cè)定有機(jī)溶劑提取液的吸收度，吸收度值最大的溶液所對(duì)應(yīng)的pH值就是水相的最佳pH值。四、凱氏定氮法凱

51、氏定氮法藥物分析杜馬氏法元素定量分析范斯萊克法生化分析（氨基氮測(cè)定）1、原理 含氮供試品與濃硫酸共熱，供試品中所含氮轉(zhuǎn)變成氨，并與硫酸結(jié)合為硫酸氫銨和硫酸銨，用氫氧化鈉堿化后，釋出氨，隨水蒸氣餾出，用硼酸溶液或定量的酸吸收后，用標(biāo)準(zhǔn)酸液或標(biāo)準(zhǔn)堿液滴定，用空白試驗(yàn)校正。凱氏定氮法分為3個(gè)步驟。(1)消解在凱氏燒瓶中進(jìn)行。將樣品、Con.H2SO4、K2SO4、CuSO4放入凱氏燒瓶中一起加熱，有機(jī)含N化合物中的N全部轉(zhuǎn)變成NH3并以銨鹽的形式固定(NH4)2SO4、NH4HSO4。H2SO4：氧化劑和炭化劑。 SO2和SO3 消解一般在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。K2SO4：提高H2SO4的沸點(diǎn)，使消解時(shí)間

52、縮短。CuSO4：催化劑，使消解速度加快。消解產(chǎn)物：(NH4)2SO4、NH4HSO4(2)蒸餾與吸收用40%的NaOH溶液水蒸氣蒸餾(NH4)2SO4+2NaOHNa2SO4+2NH3+2H2ONH4HSO4+NaOHNaHSO4+NH3+H2O(3)測(cè)定 直接滴定法吸收液：用2%硼酸溶液滴定液：0.005mol/L H2SO4液每1ml的0.005mol/L H2SO4液0.1401mg的N指示劑：甲基紅-溴甲酚綠混合指示劑終點(diǎn)顏色：灰紫色NH3+H3BO3NH3.H3BO32NH3.H3BO3+H2SO4(NH4)2SO4+2H3BO3 剩余滴定法用標(biāo)準(zhǔn)鹽酸或硫酸作吸收液。將蒸餾出來(lái)的N

53、H3吸收于定過(guò)量的標(biāo)準(zhǔn)酸溶液中，過(guò)量的酸用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液滴定。五高效液相色譜法： 1特點(diǎn)： 8090%反相色譜分離，最常用十八烷基硅烷鍵合硅膠（ODS）。 硅膠表面僅有2550%硅醇基可與硅烷化試劑作用，在分離極性化合物特別是堿性藥物和生物堿時(shí)，裸露的硅醇基和堿性藥物發(fā)生吸附或離子交換作用，而使色譜峰拖尾，保留時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，甚至長(zhǎng)期保留在色譜柱上。 2三種主要方法：（1）加掃尾劑法：以十八烷基硅烷（ODS）鍵合的硅膠為固定相，在流動(dòng)相中加入掃尾劑，以抑制或掩蔽固定相表面的游離硅醇基的活性。最常用的掃尾劑是三乙胺（TEA）。（2）用硅膠作固定相法：在不改性的普通硅膠柱上，利用堿性成分與硅醇基相互作用，以

54、高濃度極性有機(jī)溶劑，堿性水相緩沖液為流動(dòng)相分離堿性藥物。（3）用金剛烷基硅烷化硅膠作固定相法：這種固定相表面被一根根短的烴鏈（乙基）連著的烴球（金剛烷）將硅膠表面上未反應(yīng)的硅醇基全部覆蓋，使其不能與極性物質(zhì)作用。六陰離子表面活性劑滴定法 原理：陰離子表面活性劑: 十二烷基磺酸鈉、磺基丁二酸鈉二辛酯在水和有機(jī)溶劑所組成的二相中用十二烷基磺酸鈉（或磺基丁二酸鈉二辛酯）的標(biāo)準(zhǔn)溶液為滴定劑，滴定堿性藥物的鹽類(lèi)。當(dāng)?shù)味ㄖ恋犬?dāng)點(diǎn)時(shí)，滴定劑與堿性藥物完全反應(yīng)，生成可溶于有機(jī)溶劑的有色配位化合物，溶解進(jìn)入有機(jī)相，使有機(jī)相突然變色而指示終點(diǎn)。本法簡(jiǎn)便易行，而且藥物制劑中的附加劑對(duì)測(cè)定無(wú)干擾。七、四苯硼鈉雙相滴定

55、法 滴定前： R4N+ + In- R4N+ In (藍(lán)色) 滴定中： R4N+ + TPB- R4N+ TPB-（無(wú)色） 等當(dāng)點(diǎn)(淺紫色) TPB- + R4N+ In- R4N+ TPB- （無(wú)色）原理：水相有機(jī)相In-酸性染料如溴酚藍(lán)或溴麝香草酚藍(lán)TPB-四苯硼鈉的陰離子本法適用于季銨類(lèi)生物堿第八章維生素類(lèi)藥物的分析The Analysis of Vitamines概 述維生素是維持人體正常生理機(jī)能所必需的生物活性物質(zhì)。如果人體缺少某種維生素，就會(huì)引起維生素缺乏癥，而影響人體的正常生理機(jī)能。 例如: VA 缺乏夜盲癥 VB1缺乏腳氣病 脂溶性： 水溶性：按溶解性分類(lèi)VA、VD、VE、VK

56、等B族（VB1、VB2等）、VC 、煙酸、葉酸、泛酸等第一節(jié) 維生素A的分析一結(jié)構(gòu)與性質(zhì)1 化學(xué)結(jié)構(gòu)R=H VA醇 VA1R= COCH3 VA醋酸酯R= COC15H31 VA棕櫚酸酯結(jié)構(gòu)特點(diǎn)：（1）環(huán)己烯+共軛多烯側(cè)鏈；（2）天然VA側(cè)鏈為全反式；（3）天然來(lái)源主要是魚(yú)肝油，為醋酸酯，棕櫚酸酯等,目前多由人工合成。 2 .性質(zhì)a.紫外吸收具有共軛多烯側(cè)鏈紫外吸收。最大吸收波長(zhǎng)在325328nm，隨VA存在狀態(tài)以及所用的溶劑，最大吸收波長(zhǎng)的位置有所不同b.溶解性： 不溶于水 溶于乙醚，氯仿，異丙醇，環(huán)己烷，脂肪和油。共軛多烯側(cè)鏈性質(zhì)非?；顫?c.不穩(wěn)定性維生素A的氧化產(chǎn)物：環(huán)氧化物 維生素A

57、醛 維生素A酸ord.與SbCl3作用 Carr-Price反應(yīng) 鑒別 含量測(cè)定二. 鑒別試驗(yàn)1.三氯化銻反應(yīng) 無(wú)水2. 紫外吸收光譜VA的無(wú)水乙醇溶液在326nm有最大吸收。3、TLC：確認(rèn)醇或酯，是醋酸酯或其他酸酯，例：VA和其標(biāo)準(zhǔn)品用環(huán)己烷溶解 展開(kāi)劑：環(huán)己烷乙醚（80：20） 板：硅膠G 顯色：SbCl3T.S. Rf： VA 醇 0.08 VA 醋酸酯 0.41 VA棕櫚酸酯 0.75三含量測(cè)定紫外分光光度法三點(diǎn)校正法 1.概述共軛多烯的結(jié)構(gòu)具有特征的紫外吸收。相關(guān)物質(zhì)結(jié)構(gòu)相似,維生素A最大吸收 波長(zhǎng)附近也有吸收，對(duì)測(cè)定有影響。 Morton和Stubbs等人提出了三點(diǎn)校正法。2.原

58、理（根據(jù)、假定）物質(zhì)對(duì)光的吸收具有加和性，即維生素A中的不相關(guān)吸收在310340nm范圍內(nèi)近似一條直線(xiàn)。效價(jià)為維生素A1的40%，max345350nm3. 相關(guān)物質(zhì)的吸收a.維生素A的衍生物維生素A2去氫維生素A效價(jià)低于維生素A1，max385390nm b.維生素A的氧化產(chǎn)物已介紹。維生素A3去水維生素A c.合成時(shí)的中間體側(cè)連有4個(gè)雙鍵應(yīng)有 種異構(gòu)體。 目前，包括維生素A在內(nèi)，共發(fā)現(xiàn)有 6種異構(gòu)體。它們是： e.維生素A異構(gòu)體 d.鯨醇 維生素A醇的二聚體，沒(méi)有生物活性名 稱(chēng)順?lè)串悩?gòu)max(nm)相對(duì)效價(jià)新維生素Aa2-順式32875%新維生素Ab4-順31924%新維生素Ac2,4-二

59、順31115%異維生素Aa6-順32321%異維生素Ab2,6-二順32424%維生素A全反式325328100%新維生素Aa新維生素Ab新維生素Ac異維生素Aa異維生素Ab維生素A4. 三個(gè)波長(zhǎng)的選擇方法 1：維生素A的max 2、3：分別在1兩側(cè) 等波長(zhǎng)差法：這兩個(gè)波長(zhǎng)分別在1兩側(cè)12nm處，即1=328nm; 2 =314nm; 3=340nm等吸光度法：VA在這兩個(gè)波長(zhǎng)下的吸光度應(yīng)該等于1下的吸光度的 ，即 1=325nm; 2 =310nm; 3=334nm5. 方法Chp收載有2種方法。第一法（適用于酯式維生素A的測(cè)定）a.操作方法最大吸收波長(zhǎng)確認(rèn) max 在326329nm，第一

60、法測(cè)定。 max不在326329nm，第二法測(cè)定。b.計(jì)算方法測(cè)定波長(zhǎng)吸光度吸光度比值吸光度比值差計(jì)算值規(guī)定值3000.5553160.907(326)3281.000(329)3400.8113600.299計(jì)算吸收度比及比值差首先要計(jì)算吸收度比值 。然后計(jì)算吸收度的比值差。測(cè)定波長(zhǎng)吸光度吸光度比值吸光度比值差計(jì)算值規(guī)定值3000.5553160.907(326)3281.000(329)3400.8113600.299計(jì)算校正吸收度吸收度校正公式： 換算因數(shù)定義：每一個(gè) 數(shù)值所相當(dāng)?shù)男r(jià)。1IU=0.344g全反式維生素A醋酸酯，1g的維生素A醋酸酯就相當(dāng)于 維生素A醋酸酯練習(xí)題：維生素A