普通生物學實驗講義(物理)

1、（生物科技行業(yè)）普通生物學實驗講義（物理）2020年4月多年的企業(yè)咨詢顧問經驗經過實戰(zhàn)險證可以落地施亍的卓越管理方案，值得您下載詡臺:普通生物學實驗講義（2011年版）紹興文理學院生命科學學院普通生物學課程組編移液器的使用方法按照下列步驟可以用移液器正確而準確地移取液體：選擇一支量程合適的移液器。大多數(shù)可調式移液器只能在特定量程范圍內準確移取液體，不能移取低于說明書上最低的液體。一定不要試圖移取超過最大量程的液體，否則會損壞移液器。常用移液器有三種量程：100l1ml，10l100l，0.5l10l。設置移液量。通過旋鈕設置刻度：刻度一般由三-四個數(shù)字組成，從上往下讀或從左往右讀，用黑色的調節(jié)

2、輪調節(jié)容積（圖2-4）。這三個數(shù)字是容積的前三位數(shù)，由移液器的最大容積（標在推動按鈕上面）決定。將新的一次性槍頭裝在吸液桿上。二者要相匹配，并且安裝正確。用力推動，并輕輕旋轉槍頭使之套緊，否則，移取的液體體積將少于設定的體積，溶液也會從槍頭上往下滴。槍頭通常裝在盒子里，使用方便。如果需要無菌條件，則整個過程都要按無菌操作進行。檢驗移液量。用移液器吸取一定體積的去離子水，放在天平上稱重，假設1mg水體積為1ul（1mm3），測量誤差應在1%的范圍內。對于微量液體，可多次移取，如移取20次50ul的去離子水，質量應為100mg。如果移液器不準，吸液量顯著多于或少于設定體積，可改用校準的移液器，或將

3、移液刻度相應地調大或調小，進行校準（實際移液量比移液器的顯示值更重要）。如果移液器不精確，每次移取的體積變化更大，就要進行維修，校準。吸取一定體積的液體。手握移液器，按下推動按鈕，直到遇到一個阻力（第一止點），觀察所吸液體頁面，將槍頭垂直浸入液體中（注意不能過深以致液體沾到移液器），緩慢平穩(wěn)地松開拇指，同時觀察吸入液體有無氣泡，停1S左右，待液體吸入后，取出移液器。槍頭外壁不應附有液滴。目測吸入槍頭的液體體積是否合理。如100ul體積約占P20型槍頭容積的一半。如果移液器保持竽握取，槍頭安裝正確，則不應有液滴滴下。釋放液體。將槍頭頭部靠在器壁上，約成10o200頃角。慢慢按下推動按鈕直到終點，

4、完全排出液體，保持推動按鈕至終點的狀態(tài)取出移液器。退下槍頭。按下卸槍頭按鈕（有的移液器不帶卸槍頭器），退下槍頭。如果槍頭被污染了，可直接退到盛有消毒液功廢液的容器里。如果不重復取液，更換新的槍頭，重復上面的第（5）（8）步。移液器必須卸掉槍頭后才能放在移液器架上。實驗一普通光學顯微鏡的構造、使用方法及觀察【實驗目的】.了解顯微鏡的構造和各部分的作用，掌握顯微鏡的使用技術和保養(yǎng)措施.學會簡易臨時玻片的制作方法和生物繪圖方法【實驗原理】（一）顯微鏡的主要構造普通光學顯微鏡的構造主要分為三部分：機械部分、照明部分和光學部分。機械部分1）鏡座：是顯微鏡的底座，用以支持整個鏡體。2）鏡柱：是鏡座上面直立

5、的部分，用以連接鏡座和鏡臂。3）鏡臂：一端連于鏡柱，一端連于鏡筒，是取放顯微鏡時手握部位。4）鏡筒：連在鏡臂的前上方，鏡筒上端裝有目鏡，下端裝有物鏡轉換器。5）物鏡轉換器（旋轉器）：接于棱鏡殼的下方，可自由轉動，盤上有34個圓孔，是安裝物鏡部位，轉動轉換器，可以調換不同倍數(shù)的物鏡，當聽到碰叩聲時，方可進行觀察，此時物鏡光軸恰好對準通光孔中心，光路接通。6）鏡臺（載物臺）：在鏡筒下方，形狀有方、圓兩種，用以放置玻片標本，中央有一通光孔，我們所用的顯微鏡其鏡臺上裝有玻片標本推進器（推片器），推進器左側有彈簧夾，用以夾持玻片標本，鏡臺下有推進器調節(jié)輪，可使玻片標本作左右、前后方向的移動。7）調節(jié)器：

6、是裝在鏡柱上的大小兩種螺旋，調節(jié)時使鏡臺作上下方向的移動。粗調節(jié)器（粗螺旋）：大螺旋稱粗調節(jié)器，移動時可使鏡臺作快速和較大輻度的升降，所以能迅速調節(jié)物鏡和標本之間的距離使物象呈現(xiàn)于視野中，通常在使用低倍鏡時，先用粗調節(jié)器迅速找到物象。細調節(jié)器（細螺旋）：小螺旋稱細調節(jié)器，移動時可使鏡臺緩慢地升降，多在運用高倍鏡時使用，從而得到更清晰的物象，并借以觀察標本的不同層次和不同深度的結構。2照明部分裝在鏡臺下方，包括反光鏡，集光器。1）反光鏡：裝在鏡座上面，可向任意方向轉動，它有平、凹兩面，其作用是將光源光線反射到聚光器上，再經通光孔照明標本，凹面鏡聚光作用強，適于光線較弱的時候使用，平面鏡聚光作用弱

7、，適于光線較強時使用。2）集光器（聚光器）位于鏡臺下方的集光器架上，由聚光鏡和光圈組成，其作用是把光線集中到所要觀察的標本上。聚光鏡：由一片或數(shù)片透鏡組成，起匯聚光線的作用，加強對標本的照明，并使光線射入物鏡內，鏡柱旁有一調節(jié)螺旋，轉動它可升降聚光器，以調節(jié)視野中光亮度的強弱。光圈（虹彩光圈）：在聚光鏡下方，由十幾張金屬薄片組成，其外側伸出一柄，推動它可調節(jié)其開孔的大小，以調節(jié)光量。.光學部分（1）目鏡：裝在鏡筒的上端，通常備有23個，上面刻有5X、10X或15X符號以表示其放大倍數(shù)，一般裝的是10X的目鏡。（2）物鏡：裝在鏡筒下端的旋轉器上，一般有34個物鏡，其中最短的刻有“10X”符號的為

8、低倍鏡，較長的刻有“40X”符號的為高倍鏡，最長的刻有“100X”符號的為油鏡，此外，在高倍鏡和油鏡上還常加有一圈不同顏色的線，以示區(qū)別。在物鏡上，還有鏡口率（N.A.）的標志，它反應該鏡頭分辨力的大小，其數(shù)字越大，表示分辨率越高，各物鏡的鏡口率如下表：物鏡鏡口率（N.A.）工作距離（mm）10義0.255.4040X0.60.39100X1.300.11表中的工作距離是指顯微鏡處于工作狀態(tài)（物象調節(jié)清楚）時物鏡的下表面與蓋玻片（蓋玻片的厚度一般為0.17mm）上表面之間的距離，物鏡的放大倍數(shù)愈大，它的工作距離愈小。顯微鏡的放大倍數(shù)是物鏡的放大倍數(shù)與目鏡的放大倍數(shù)的乘積，如物鏡為10X,目鏡為

9、10X,其放大倍數(shù)就為10X10=100。（二）顯微鏡的使用方法1低倍鏡的使用方法（1）取鏡和放置：顯微鏡平時存放在柜或箱中，用時從柜中取出，右手緊握鏡臂，左一手托住鏡座,將顯微鏡放在自己左肩前方的實驗臺上，鏡座后端距桌邊12寸為宜，便于坐著操作。2）對光：用拇指和中指移動旋轉器（切忌手持物鏡移動），使低倍鏡對準鏡臺的通光孔（當轉動聽到碰叩聲時，說明物鏡光軸已對準鏡筒中心）。打開光圈，上升集光器，并將反光鏡轉向光源，以左眼在目鏡上觀察（右眼睜開）,同時調節(jié)反光鏡方向，直到視野內的光線均勻明亮為止。（3）放置玻片標本：取一玻片標本放在鏡臺上，一定使有蓋玻片的一面朝上，切不可放反，用推片器彈簧夾夾

10、住，然后旋轉推片器螺旋，將所要觀察的部位調到通光孔的正中。（4）調節(jié)焦距：以左手按逆時針方向轉動粗調節(jié)器，使鏡臺緩慢地上升至物鏡距標本片約5毫米處，應注意在上升鏡臺時，切勿在目鏡上觀察。一定要從右側看著鏡臺上升，以免上升過多，造成鏡頭或標本片的損壞。然后，兩眼同時睜開，用左眼在目鏡上觀察，左手順時針方向緩慢轉動粗調節(jié)器，使鏡臺緩慢下降，直到視野中出現(xiàn)清晰的物象為止。如果物象不在視野中心，可調節(jié)推片器將其調到中心（注意移動玻片的方向與視野物象移動的方向是相反的）。如果視野內的亮度不合適，可通過升降集光器的位置或開閉光圈的大小來調節(jié)，如果在調節(jié)焦距時，鏡臺下降已超過工作距離（5.40mm）而未見到

11、物象，說明此次操作失敗，則應重新操作，切不可心急而盲目地上升鏡臺。2高倍鏡的使用方法1）選好目標：一定要先在低倍鏡下把需進一步觀察的部位調到中心，同時把物象調節(jié)到最清晰的程度，才能進行高倍鏡的觀察。2）轉動轉換器，調換上高倍鏡頭，轉換高倍鏡時轉動速度要慢，并從側面進行觀察（防止高倍鏡頭碰撞玻片），如高倍鏡頭碰到玻片，說明低倍鏡的焦距沒有調好，應重新操作。3）調節(jié)焦距：轉換好高倍鏡后，用左眼在目鏡上觀察，此時一般能見到一個不太清楚的物象，可將細調節(jié)器的螺旋逆時針移動約0.51圈，即可獲得清晰的物象（切勿用粗調節(jié)器!）如果視野的亮度不合適，可用集光器和光圈加以調節(jié)，如果需要更換玻片標本時，必須順時

12、針（切勿轉錯方向）轉動粗調節(jié)器使鏡臺下降，方可取下玻片標本。3油鏡的使用方法1）在使用油鏡之前，必須先經低、高倍鏡觀察，然后將需進一步放大的部分移到視野的中心。2）將集光器上升到最高位置，光圈開到最大。3）轉動轉換器，使高倍鏡頭離開通光孔，在需觀察部位的玻片上滴加一滴香柏油，然后慢慢轉動油鏡，在轉換油鏡時，從側面水平注視鏡頭與玻片的距離，使鏡頭浸入油中而又不以壓破載玻片為宜。4）用左眼觀察目鏡，并慢慢轉動細調節(jié)器至物象清晰為止。如果不出現(xiàn)物象或者目標不理想要重找，在加油區(qū)之外重找時應按：低倍-高倍-油鏡程序。在加油區(qū)內重找應按：低倍-油鏡程序，不得經高倍鏡，以免油沾污鏡頭。5）油鏡使用完畢，先

13、用擦鏡紙沾少許二甲苯將鏡頭上和標本上的香柏油擦去，然后再用干擦鏡紙擦干凈。（三）顯微鏡使用的注意事項1持鏡時必須是右手握臂、左手托座的姿勢，不可單手提取，以免零件脫落或碰撞到其它地方。2輕拿輕放，不可把顯微鏡放置在實驗臺的邊緣，以免碰翻落地。保持顯微鏡的清潔，光學和照明部分只能用擦鏡紙擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，機械部分用布擦拭。4水滴、酒精或其它藥品切勿接觸鏡頭和鏡臺，如果沾污應立即擦凈。放置玻片標本時要對準通光孔中央，且不能反放玻片，防止壓壞玻片或碰壞物鏡。6要養(yǎng)成兩眼同時睜開的習慣，以左眼觀察視野，右眼用以繪圖。不要隨意取下目鏡，以防止塵土落入物鏡，也不要任意拆卸各種零件，以防損壞。使用

14、完畢后，必須復原才能放回鏡箱內，其步驟是：取下標本片，轉動旋轉器使鏡頭離開通光孔，下降鏡臺，平放反光鏡，下降集光器（但不要接觸反光鏡）、關閉光圈，推片器回位，蓋上綢布和外罩，放回實驗臺柜內。最后填寫使用登記表。（注：反光鏡通常應垂直放，但有時因集光器沒提至應有高度，鏡臺下降時會碰壞光圈，所以這里改為平放）【儀器、材料與試劑】顯微鏡、擦鏡紙、鑷子、小剪、載玻片、蓋玻片、解剖針、表面皿、吸水紙、碘液、清水、香柏油、二甲苯；洋蔥鱗莖。【實驗方法】1取一片干凈的載玻片，用滴管在其中央滴一滴蒸餾水。2取洋蔥鱗莖，把它切成八瓣，剝下一片新鮮的肉質鱗葉，用刀片在其內表面劃一個邊長為5mm的正方形，然后用鑷子

15、撕下正方形塊內表皮，將其置于載玻片上的水滴中(注意表皮的外面應朝上)，如果內表皮發(fā)生卷曲，應細心用解剖針將其展平蓋上蓋玻片，注意加蓋玻片時，應該用鑷子夾住蓋玻片一側，使蓋玻片另一側邊緣與水滴邊緣相接觸，然后慢慢放下，直到放平為止，這樣可使蓋玻片下的空氣逐漸被水擠出，以免產生氣泡，影響觀察。如果水太多浸出蓋玻片外，可用吸水紙將多余的水吸去。把裝好的片子放在顯微鏡載物臺上，先用低倍接物鏡觀察，再換用高倍接物鏡觀察細胞的詳細結構，并用鉛筆繪制示意圖。【實驗結果】繪制洋蔥鱗葉內表皮細胞示意圖。說明：生物繪圖中繪出的圖要清楚，并正確的表示出形態(tài)構造的特點，繪圖注意事項如下：(1)繪圖要用黑色硬鉛筆，不要

16、用軟鉛筆或有色鉛筆，一般用2H鉛筆為宜。圖的大小及在紙上分布的位置要適當。一般畫在靠近中央稍偏左方，并向右方引出注明各部名稱的線條。各引出線條要整齊平列，各部名稱寫在線條右邊畫圖時先用輕淡小點或輕線條畫出輪廓，再依照輪廓一筆畫出與物象相符的線條。線條要清晰，比例要準確。較長的線條要向順手的方向運筆，或把紙轉動再畫。同一線條粗細相同，中間不要有斷線或開叉痕跡，線條也不要涂抹。(4)繪出的圖要正確，觀察時要把混雜物、破損、重疊等現(xiàn)象區(qū)別清楚，不要把這些現(xiàn)象繪上。(5)圖的明暗及濃淡，應用細點表示，不要采用涂抹方法。點細點時，要點成圓點，不要點成小撇。(6)整個圖要美觀、整潔，還要特別注意準確性。實

17、驗二線粒體超活染色與觀察【實驗目的】.觀察活細胞內線粒體的形態(tài)、發(fā)育和分布.了解細胞和細胞器的超活染色技術【實驗原理】詹納斯綠B可專一性地對對線粒體進行活染，這是由于線粒體內的細胞色素氧化酶系的作用，使染料始終保持氧化狀態(tài)（即有色狀態(tài)）,呈藍綠色?！緝x器、材料與試劑】1器材：顯微鏡、恒溫水浴鍋、剪刀、鑷子、解剖刀、載玻片、蓋玻片、吸管、牙簽、吸水紙2試劑：Ringer液、1/5000詹納斯綠B、1/3000中性紅3材料：人口腔上皮細胞【實驗步驟】.在載玻片上滴1/5000詹納斯綠B1-2滴.取口腔上皮細胞（牙簽刮?。?，與染液混合后于37c恒溫染色10-15min.顯微鏡下觀察，并繪制示意圖【實

18、驗結果】繪出人口腔上皮細胞示線粒體的形態(tài)與分布并簡要分析。實驗三細胞膜的滲透性【實驗目的】1了解溶血現(xiàn)象及其發(fā)生機制。2了解細胞膜的滲透性及各類物質進入細胞的速度。【實驗原理】細胞膜是細胞與環(huán)境進行物質交換的選擇通透性屏障，是一種半透膜，可選擇性控制物質進出細胞。將紅細胞放在低滲鹽溶液中，水分子大量滲到細胞內，可使細胞脹破，血紅蛋白釋放到介質中，由不透明的紅細胞懸液變?yōu)榧t色透明的血紅蛋白溶液，這種現(xiàn)象稱為溶血。將紅細胞放在某些等滲鹽溶液中，由于紅細胞膜對各種溶質的通透性不同，有的溶質可進入，有的溶質不能進入，進入紅細胞的溶質能提高紅細胞的滲透壓，使水進入紅細胞，引起溶血。由于溶質透入速度不同，

19、溶血時間也不同，因此，發(fā)生溶血現(xiàn)象所需時間長短可作為測量物質進入紅細胞速度的一種指標。本實驗選用紅細胞作為細胞膜透性的實驗材料，將其放入不同的介質溶液中，觀察紅細胞的變化【儀器、材料與試劑】器材：50ml燒杯、10ml移液管、滴管、試管12支、試管架試劑：0.9%生理鹽水；2種低滲溶液：0.017mol/L氯化鈉和0.032mol/L葡萄糖；10種等滲溶液：0.17mol/L氯化鈉、0.32mol/L葡萄糖、0.17mol/L氯化銨、0.17mol/L醋酸銨、0.17mol/L硝酸鈉、0.12mol/L草酸銨、0.12mol/L硫酸鈉、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、0.32m

20、ol/L丙酮3材料：鴨血【實驗步驟】低滲溶液處理：試管一支：鴨血紅細胞液1ml蒸餾水10ml等滲溶液處理0.17mol/L氯化鈉、0.17mol/L氯化銨、0.17mol/L醋酸銨、0.17mol/L硝酸銨、0.12mol/L草酸銨、0.12mol/L硫酸銨、0.32mol/L葡萄糖、0.32mol/L甘油、0.32mol/L乙醇、0.32mol/L丙酮等8種溶液進行同樣實驗，步驟同上。觀察實驗結果【實驗結果】記錄在各種不同溶液中的溶血情況實驗四堿裂解法抽提大腸桿菌質?！緦嶒災康摹繉W習利用堿裂解法獲得大腸桿菌質粒DNA的原理與技術?！緦嶒炘怼坑肧DS處理細菌，使細菌細胞壁的破裂，從而使質粒D

21、NA以及基因組DNA從細胞中同時釋放出來。釋放出來的DNA在強堿性（NaOH）條件下發(fā)生變性。再用酸性乙酸鉀來中和，使溶液處于中性，質粒DNA將迅速復性，而基因組DNA因分子較大，難以復性。離心后，質粒DNA將在上清中，而基因組DNA未能充分復性，而且分子體積較大，則與細胞碎片一起沉淀至離心管底部。通過這種方法即可將質粒DNA從細菌中提取出來。各試劑的作用：1溶液I：葡萄糖：增加溶液粘度，有助菌體懸浮，防止因機械剪切而DNA降解；EDTA:螯合Ca2+、Mg2+等金屬離子，降低離子濃度，可抑制DNase的作用。2溶液II：0.2MNaOH：pH值近12.6，使細胞破膜，蛋白質和DNA變性；1%

22、SDS:陰離子型表面活性劑，作用有：（1）解膜蛋白，破壞細胞膜；（2）聚DNA結合蛋白；3）與蛋白質形成復合物，使蛋白質變性沉淀。3溶液III：3MKAc與HAc：作用有：（1）pH4.8，中和溶液II，使質粒DNA復性；（2）3M高鹽溶液，中和核酸的電荷，利于變性基因組DNA、RNA聚合沉淀；（3）形成溶解度更小的鉀鹽形式的SDS-蛋白質復合物，有助于蛋白等大分子的沉淀。4酚/氯仿/異戊醇的作用：酚和氯仿：表面變性劑，非極性分子，而水是極性分子，當兩者與蛋白水溶液混合時，會擠去蛋白質分子間的水分子，使蛋白質失水變性；離心后因三者的比重大小不同，分為上層水相、中層蛋白相、下層酚和氯仿的有機溶劑

23、相。兩者在去除蛋白質時各有利弊：酚變性作用較強，但與水有一定程度的互溶，因此一般預先添加pH8.0的Tris.Cl水溶液使酚飽和，減少DNA的損失；堿性環(huán)境中DNA比RNA更容易游離至水相；氯仿變性作用沒有酚強，但與水不相溶，而與酚相溶。因此經酚抽提后，再用氯仿抽提，可在使蛋白質變性的同時一并去除剩余的酚。一般兩者以25：24的比例再加入1份異戊醇以降低分子表面張力，防止泡沫產生并有助于穩(wěn)定地分相。5乙醇：乙醇極性較低，可與水以任意比相互溶，而DNA不溶于乙醇，是實驗室最常用的DNA沉淀劑。無水乙醇：以22.5倍的體積與DNA溶液相混合，使乙醇的終濃度達到67%以上，使DNA失水而易于聚合；同

24、時結合Kac或NaAc等中和電荷作用，并低溫放置一段時間，使DNA沉淀下來。70乙醇：洗去DNA沉淀中的鹽類和有機溶劑等。6、無菌水與TE緩沖溶液：溶解DNA,其中TE緩沖液有助于維持DNA的穩(wěn)定性?！緝x器、材料與試劑】(一)儀器臺式離心機混勻器生化培養(yǎng)箱冷凍離心機移液器制冰機(二)試劑LB液體培養(yǎng)基；LB固體培養(yǎng)基；3氨芐青霉素(Ampicillin,Amp)；50mg/ml.溶液I:50mmol/L葡萄糖，25mmol/LTris.Cl(pH8.0)，10mmol/LEDTA(pH8.0)。成批配制,100ml每份,高壓滅菌15分鐘,儲存于4冰箱。.溶液H:0.2mol/LNaOH，1SD

25、S。.溶液出：5mol/LKAc60ml，冰醋酸11.5ml，H2O28.5ml，定容至100ml,溶液終濃度為:K+3mol/L,Ac-5mol/L，高壓滅菌。7飽和酚：經TrisCl(pH8.0)飽和。8酚/氯仿/異戊醇:按氯仿:異戊醇=24:1體積比加入異戊醇。使用時按體積/體積=1:1混合上述飽和酚與氯仿即得酚/氯仿/異戊醇(25:24:1)。TE緩沖液：10mmo/LTrisCl(pH8.0),1mmol/LEDTA(pH8.0)。高壓滅菌后儲存于4C冰箱中。(三)材料含質粒的大腸桿菌槍頭，離心管，牙簽【實驗方法】1取1.5ml培養(yǎng)液12000rpm離心1-2min，棄上清，收集菌體

26、。.加入100仙溶液I,振蕩或槍頭吹打混勻，使菌體充分懸浮。加入200仙溶液II,溫和上下顛倒2-3次，溶液轉變?yōu)槌吻逋该鳌＜尤?50仙溶液III,上下顛倒混勻數(shù)次，靜置2-3min。12000rpm離心5min。.用牙簽挑出沉淀，上清加400仙的酚/氯仿/異戊醇，振蕩混勻，12000rpm離心5min。吸取上層水相，加入1ml無水乙醇，混勻。(注意不要吸到酚和中間層固體物質)4，12000rpm離心10min。9棄上清，加入0.5ml70乙醇，4，12000rpm離心5min。.棄上清，沉淀自然干燥10min后，加20仙無菌水或TE緩沖液（pH8.0）溶解。4保存?zhèn)溆谩緦嶒灲Y果】1結合實驗原

27、理，注意觀察實驗過程中出現(xiàn)的現(xiàn)象實驗五質粒DNA的瓊脂糖凝膠電泳分析【實驗目的】學習瓊脂糖凝膠電泳,及利用瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒及分析質粒構型?！緦嶒炘怼凯傊悄z電泳法：是核酸檢測最常規(guī)的方法之一，其操作簡便快速，所需樣品量很少。原理是根據(jù)插入DNA分子中的熒光染料溴化乙錠(Ethidiumbromide,EB)在紫外光的激發(fā)下發(fā)射的熒光，其強度正比于DNA的含量，如將已知濃度的標準樣品作為電泳對照，即可估計出待測樣品的濃度。如電泳后成像觀察，僅需510ng的DNA;肉眼觀察，可檢察0.050.1國的DNA。不同大小的DNA片段遷移率不同，遷移率與其分子量的對數(shù)值成反比，分子量越大，在凝膠

28、中遷移越慢。利用這一特性不同濃度的瓊脂糖凝膠可以分離從200bp至近50kb的DNA片段在瓊脂糖凝膠電泳中，DNA分子的遷移率還與DNA分子構型有關。質粒DNA有三種構型：1,超螺旋的共價閉合環(huán)DNA(covalentlyclosedcircularDNA，cccDNA)；2,開環(huán)DNA(opencircularDNA,ocDNA)，雙鏈中有一條鏈發(fā)生一處或多處斷裂；3,線狀DNA(linearDNA)，兩條鏈在同一處斷裂；同一質粒的不同構型在電場中的遷移率不同，一般超螺旋型(ccc)最快，其次是線狀(L)，最慢的是開環(huán)型(OC)。同時，在抽提的質粒DNA中，若還有染色體DNA或RNA，或較多

29、的蛋白質，在瓊脂糖凝膠上也可分別觀察到電泳區(qū)帶，由此可分析樣品的純度?！緝x器、材料與試劑】（一）儀器冰箱，移液器，微波爐或電爐，水平電泳槽及電源，紫外分析成像系統(tǒng)（二）試劑50 xTAE：每1LTris242g冰醋酸57mL0.5molLEDTA200mLHCl調pH至8.02凝膠加樣緩沖液（6x）溴酚藍0.25蔗糖403.澳化乙錠（EB）溶液：配成10mg/ml,鋁箔或黑紙包裹容器，室溫貯存。4瓊脂糖（三）材料質粒，槍頭，離心管【實驗方法】用膠帶將洗凈、干燥的水平板的邊緣封住，形成一個膠模并水平放置，插入梳子。.用1XTAE配置1%的瓊脂糖凝膠，微波爐加熱至沸騰，瓊脂糖完全融解。.等凝膠溫度

30、降至大約5060C以下時，加入1mg/L澳化乙錠（EB）至終濃度為0.5ug/mL（或將電泳后的凝膠浸入溴化乙錠溶液中染色）；搖勻并平穩(wěn)倒入水平板中，防止產生氣泡。4凝固后，將梳子輕輕拔出。.去掉膠帶，將水平板放入加有1XTAE電泳緩沖液的電泳槽中，并且使電泳緩沖液高出凝膠約1mm。6按下列比例混合：X上樣緩沖液2ul質粒DNA10ul（實驗一抽提得到）混勻后加入上樣孔，記錄點樣次序。.蓋好電泳槽蓋子，選擇適當?shù)碾娪倦妷海?5V/cm）及電泳方向（DNA由陰極向陽極），通電，開始電泳。8約30分鐘后，停止電泳，樣品在紫外燈下觀察、成像?！緦嶒灲Y果】2.如實繪制觀察到的電泳圖，并分析各條帶所代表的物質【注意事項】在紫外燈下觀察，應戴上防護眼鏡，以防紫外線傷害眼睛。溴化乙錠為致癌物，須戴一次性手套操作，并注意防止環(huán)境污染。DNA片段大小范圍】實驗六大腸桿菌感受態(tài)細胞的制備與轉化【實驗目的】通過本實驗，學習大腸桿菌感受態(tài)細胞制備和轉化