典型多媒體課件食用菌生物學(xué)試驗(yàn)

1、食用菌生物學(xué)實(shí)驗(yàn)張志瑾實(shí)驗(yàn)一母種培養(yǎng)基配制及棉塞制作一.實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、 掌握食用菌固化培養(yǎng)基的配制。 2、學(xué)會棉塞 的制作方法。二、基本原理 食用菌母種分離、移接和斜面保存菌種都必須要制作相應(yīng)的培養(yǎng)基，以備食用菌的培養(yǎng)、分離和保存之用。 培養(yǎng)基是根據(jù)各種食用菌在生長繁殖過程中對營養(yǎng)物質(zhì)需求制成的，它可供給食用菌的C源、N源、水分、各種無機(jī)鹽及生長物質(zhì)等。 培養(yǎng)基的種類很多，本實(shí)驗(yàn)學(xué)習(xí)斜面培養(yǎng)基（PDA）制作。三.實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備1.器具：天平、稱量紙、牛角匙、精密pH試紙、量筒、刻度搪瓷杯、試管、三角瓶、漏斗、漏斗架、玻璃棒、燒杯、試管架、鐵絲筐、剪刀、棉花、線繩、牛皮紙、皮筋、紗布、電爐、菜刀、菜板、

2、小鋁鍋等。2材料：馬鈴薯、葡萄糖或蔗糖、瓊脂、水。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 過程：制馬鈴薯濾液融化瓊脂培養(yǎng)基的分裝 棉塞的制作 方法步驟：1配方（PDA）：馬鈴薯200g，葡萄糖20g，瓊脂1520g，自來水1000ml，pH自然。2制作方法（1）制濾液：馬鈴薯刮去粗皮，去芽眼，切成碎塊，稱量后放鍋中，加水12001300ml，將其煮沸20min。用雙層紗布過濾，取1000ml濾液。（2）化瓊脂：將濾液加熱至將沸騰時(shí)加入瓊脂，不斷攪拌，注意控制火力不要使培養(yǎng)基溢出或燒焦。待瓊脂完全融化后加入剩余原料，并使其溶解（用熱水補(bǔ)足水量）. （3分裝 :通過漏斗裝置，趁熱將培養(yǎng)基分裝于試管中，裝量約占試管高度的1/

3、4（分裝三角瓶，其 裝量以不超過其容積的一半為宜）。注意管口或瓶口不要沾染培養(yǎng)基。（4）制棉塞棉花以白色長絨脫脂棉為宜。根據(jù)試管口大小取棉，將其卷成棉塞，最好 外包一層紗布。將棉塞塞入試管口。棉塞塞入試管2/3。制做棉塞要求外表光滑，外包的紗不能折、松緊適宜等。A.正確; B.不正確（5）包扎：管口堵入棉塞后7或9支試管扎一捆，棉塞部分用牛皮紙包扎。在包裝紙上標(biāo)明培養(yǎng)基名稱，制備組別和姓名、日期等。（6）、滅菌（7）、擺斜面（8）、存放冰箱（4-6C）六、作業(yè)1、簡述高壓滅菌鍋的使用。2、何謂滅菌？簡述熱力滅菌的類型和原理。3.何時(shí)加入瓊脂？融化時(shí)注意什么問題？分裝的技術(shù)要求有哪些？4. 棉塞

4、的作用有哪些和技術(shù)要求？菌種培養(yǎng)時(shí)管口堵膠塞或軟木塞行嗎？為什么？ 實(shí)驗(yàn)二、食用菌接種環(huán)境的消毒、滅菌與斜面接種一.目的及要求： 1.掌握食用菌斜面接種方法及無菌操作技術(shù)。 2、能正確分析自己的接種效果。二、基本原理：食用菌斜面接種是食用菌栽培過程中最基本的方法之一，也是食用菌制種工作最重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。因?yàn)樵谑秤镁耘噙^程中，一旦斜面接種污染，后面的工作將無法進(jìn)行，故斜面菌種的接種、分離和移接非常重要，必須在嚴(yán)格無菌操作條件下進(jìn)行，才能獲得純菌絲體（純菌）。三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備1.材料：空白斜面培養(yǎng)基（無菌檢驗(yàn) ）、母種等 2.器具：酒精燈、接種環(huán)、火柴、尖頭鑷、酒精棉球、大鑷子、接種箱、超凈工作臺、

5、高錳酸鉀、37甲醛溶液、紫外燈、2%來蘇水、標(biāo)簽紙等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、接種環(huán)境的處理 2、母種的轉(zhuǎn)管技術(shù)五、方法步驟1.接種環(huán)境的處理（1）接種箱的熏蒸：先用2%來蘇清潔接種箱內(nèi)外，放入接種所需的物品，用甲醛熏蒸。每立方米空 間 一般用甲醛10ml，加半量高錳酸鉀（57g）使甲醛氧化揮發(fā)。先將高錳酸鉀放入接種箱內(nèi)的容器中，再注入甲醛，立即產(chǎn)生強(qiáng)烈刺激的甲醛氣體。熏蒸25-30min。（2）超凈工作臺的消毒：用消毒液擦拭臺面后放置接種所需物品，開啟超凈工作臺上的紫外燈，照射20-30分后使用。 2.母種的轉(zhuǎn)管技術(shù)（1）手及菌種管的消毒：用肥皂洗手，再用75酒精棉球擦手和菌種管表面，在酒精燈焰上略

6、燒試 管 外的棉塞后，立即將菌種管放入接種箱內(nèi)。（2）轉(zhuǎn)管：兩手從接種孔伸人接種箱內(nèi)，酒精棉球擦拭接種環(huán)。左手持菌種管和斜面管，兩支試管口對齊于火焰上方。右手持接種環(huán)或針和鏟等，并將其在燈焰上干熱滅菌，用小指及無名指拔掉棉塞，接種環(huán)冷卻后伸入菌種管內(nèi)取略豆粒大菌種塊，迅速移人斜面培養(yǎng)基的中部。然后將棉塞在火焰上燒一下，立即塞入試管口，旋緊棉塞。接種環(huán)不要觸碰管口及管壁。接種后的試管應(yīng)立即貼標(biāo)簽，注明菌種名稱及接種日期，再進(jìn)行適溫培養(yǎng)。母 種 轉(zhuǎn) 管 過 程六、作業(yè) 1、何謂無菌操作、消毒？消毒分哪幾種類型？ 2、同學(xué)相互評比接種結(jié)果分析自己接種成敗的原因。實(shí)驗(yàn)三、食用菌母種制作分離技術(shù)一、目的

7、要求 1、明確食用菌無菌操作技術(shù)要點(diǎn)。 2、掌握食用 菌母種分離技術(shù)。二、基本原理：食用菌母種分離方法較多，但主要采用組織和孢子分離，所不同的是前者取子實(shí)體某塊組織，后者取子實(shí)體的孢子經(jīng)過培養(yǎng)形成的純菌絲體（純種）。三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 1.材料：空白斜面培養(yǎng)基(空白培養(yǎng)無菌).食用菌子實(shí)體等 2.器具：酒精燈、接種環(huán)、火柴、尖頭鑷、酒精棉球、大鑷子、接種箱、超凈工作臺、高錳酸鉀 37甲醛溶液、紫外燈、2%來蘇水、標(biāo)簽紙等。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容1、組織分離 2、孢子分離五、方法步驟1.接種環(huán)境的處理（1）接種箱的熏蒸先用2%來蘇清潔接種箱內(nèi)外，放入接種所需的物品，用甲醛熏蒸。每立方米空間一般用甲醛10ml，加

8、入高錳酸鉀（57g）使甲醛氧化揮發(fā)。先將高錳酸鉀放入接種箱內(nèi)的容器中，再注入甲醛，立即產(chǎn)生強(qiáng)烈刺激的甲醛氣體。熏蒸20-30min。（2）超凈工作臺的消毒用消毒液擦拭臺面后放置接種所需物品，開啟超凈工作臺上的紫外燈，照射20-30min后使用。 接入的母種 2.組織分離法 此法是生產(chǎn)中最常用的方法，具有操作簡便，菌絲萌發(fā)快，分離所得的菌種在培養(yǎng)基條件適宜的情況下，能保持原菌種的優(yōu)良性狀。（1）種菇消毒在接種箱內(nèi)，用鑷子夾著燃燒的酒精棉球迅速擦拭菇體。（2）取接組織將菇體撕開，用無菌尖頭鑷在柄蓋交界處取綠豆粒大組織，放入斜面培養(yǎng)基中央,迅速塞上棉塞。3.多孢子分離（1）鉤懸法是一種特別適用于耳類

9、，也適用于傘菌類的多孢分離法。在接種箱內(nèi)將一小塊消毒的耳片或菇片懸掛于無菌三角瓶內(nèi)（裝約1cm厚的培養(yǎng)基），在25左右條件下，約24h現(xiàn)孢子粉時(shí)以無菌操作法取出分離材料。適溫培養(yǎng)后挑取健壯尖端菌絲轉(zhuǎn)管。（2）孢子印分離法取成熟子實(shí)體經(jīng)表面消毒后，切去菌柄，將菌褶向下放置于滅過菌的有色紙上，在2024靜置一天，大量孢子落下形成孢子印，接種環(huán)沾少量孢子在試管或平板培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)。 4.母種的培養(yǎng)將斜面朝下斜置疊放于瓷盤中，放于培養(yǎng)箱中適溫培養(yǎng)。23天后每天都要檢查菌絲生長情況。及時(shí)挑揀污染試管（出現(xiàn)粘膜或雜色）。5.注意事項(xiàng)：分離的母種一定純化后再做出菇試驗(yàn)。（1）純化菌絲長至斜面1/2時(shí)，挑尖

10、絲轉(zhuǎn)管，培養(yǎng)成再生母種。（2）出菇試驗(yàn)將再生母種擴(kuò)成原種、栽培種，使其出菇。看產(chǎn)量、質(zhì)量、形態(tài)、長勢、抗性如何，經(jīng) 鑒定為優(yōu)質(zhì)菌種后，才可供生產(chǎn)使用。（3）控制菌齡菌絲 即將長滿斜面（一般710天）終止培養(yǎng)。分別用于菌種保藏或繁衍原種。六、作業(yè)1、食用菌菌種分離技術(shù)有哪些方法？生產(chǎn)上最常用的是哪一種？2、.孢子分離的母種為何一定要做出菇試驗(yàn)？3.試設(shè)計(jì)一個(gè)分離野生平菇菌種的實(shí)驗(yàn)方案 實(shí)驗(yàn)四 . 食用菌原種栽培種培養(yǎng)基（料） 的 配 制 與 消 毒 滅 菌 一、目的要求 1、掌握原種、栽培種培養(yǎng)基（料）的類 型。 2、學(xué)會原種、栽培種培養(yǎng)基（料）的配制方法。 二、基本原理 食用菌原種及栽培種培養(yǎng)

11、基的種類很多，根據(jù)主料不同分為糧食顆粒、棉子殼、稻草、玉米芯、糞草、木削等多種。原種、栽培種培養(yǎng)基（料）的配制基本相同，所不同的是原種培養(yǎng)基更精細(xì)，營養(yǎng)更豐富、更全面，更易被菌絲吸收；栽培種培養(yǎng)基更粗放，更廣泛，更接近生產(chǎn)實(shí)際。 原種、栽培種兩菌種的生產(chǎn)過程基本相同，主要區(qū)別在于接種時(shí)取接的菌種不一樣。 三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 1. 材料：棉籽殼、麩皮、蔗糖、石灰粉、過磷酸鈣等。 2器具；棉塞、打孔棒、菌種袋或瓶、標(biāo)簽、高壓滅菌鍋、接種箱、消毒藥品、線繩等。 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1、培養(yǎng)料的配制 2、菌種瓶及菌種袋的 分裝 五、方法步驟 （一）培養(yǎng)基的配制 （1）配方與配制 P102 糧食顆粒培養(yǎng)基（麥粒、玉

12、米粒等） 配方：糧食粒98.5%，石膏粉1%，碳酸鈣0.5%。 配制：將洗凈的糧食粒洗凈，用1%石灰水泡脹，文火煮沸1520min(熟而不爛，勿 破皮)， 撈出晾至無明水后拌入余料。原種多使用顆粒培養(yǎng)基。 棉籽殼麥麩培養(yǎng)基 配方：棉籽殼87%，麥麩10%，白糖1%，石灰1%，過磷酸鈣1%。配制：將棉籽殼、麥麩、石灰混合為主料，余料溶解于少量水后澆入主料中。邊加清水邊翻拌至含水量達(dá)60%65%（緊握料的指縫中有水泌出而不下滴）。 （2）分裝：原種培養(yǎng)基裝入菌種瓶（或其他大口瓶），裝量約占瓶高的1/2（非顆粒培養(yǎng)基可裝至瓶肩，用錐形棒打一料孔），瓶口擦凈，堵棉塞后外包牛皮紙或雙層報(bào)紙。栽培種培養(yǎng)基

13、一般裝入聚丙烯菌種袋，上端套頸圈后如同瓶口包扎法。兩端開口的菌種袋可將兩端扎活結(jié)。裝料要求外緊內(nèi)松，培養(yǎng)料需緊貼瓶壁或袋壁。松散的培養(yǎng)料會導(dǎo)致菌絲斷裂及影響對養(yǎng)分、水分的吸收。（二）培養(yǎng)基的滅菌 原種與栽培種培養(yǎng)基的容器大、裝量多，應(yīng)增加滅菌壓力及滅菌時(shí)間。高壓蒸汽滅菌，一般在壓力（1.5kg/cm2）、溫度約128.1條件下，保持滅菌時(shí)間12h。若采用常壓滅菌，需保持最高溫度10h左右，再悶1天或1晚。 六、作業(yè)（料）的配置有何不同？糧食顆粒為何要進(jìn)行泡和煮？ 實(shí)驗(yàn)五、食用菌原種、栽培種接種環(huán)境消毒、滅菌與接種 一、目的要求 1、掌握接種前的準(zhǔn)備工作及原種、栽培種的接種。 2、能通過培養(yǎng)觀察

14、分析自己的接種結(jié)果和存在的問題。二、基本原理 食用菌菌種制作分為三個(gè)階段，即：母鐘、原種、栽培種；栽培種是對菌種的再次擴(kuò)大培養(yǎng)，為食用菌生產(chǎn)提供大量優(yōu)質(zhì)菌種，是生產(chǎn)的需求。同時(shí)，也使菌種適應(yīng)大生產(chǎn)用的栽培料和生態(tài)環(huán)境的需求，通過菌種的多次擴(kuò)繁提純以逐級檢查菌種的品質(zhì)，及時(shí)存優(yōu)去劣，以獲得高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)菌種。 三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 材料器具： 一、二級菌種、接種耙鏟、大鑷子、酒精燈、火柴、酒精棉球、標(biāo)簽、高壓滅菌鍋、接種箱、消毒藥品等。 四、方法步驟 食用菌一二級菌種的生產(chǎn)過程基本相同，主要區(qū)別在于接種時(shí)取接的菌種不一樣。 （一）接種轉(zhuǎn)管（瓶） 滅菌后的原種及栽培種培養(yǎng)基及時(shí)運(yùn)送至無菌環(huán)境中，待料溫降至約24

15、，進(jìn)行搶溫接種。（1）接原種用接種耙鏟取蠶豆大母種（連同培養(yǎng)基）放于瓶中培養(yǎng)料的孔口處用料蓋實(shí)（一般1支母種可接10支再生試管母鐘；一只再生試管母鐘約接58瓶原種） （2）接栽培種用大鑷子、接種鏟或接種匙取棗大原種，放于瓶或袋中料面上（若兩端扎活結(jié)的菌種袋，每端都要接入原種）。1瓶原種約接60瓶或25-30袋栽培種。去棄表面老化菌絲及老種塊。堵棉塞或用線繩扎袋口。貼標(biāo)簽，注明菌種名稱和接種日期。（二）培養(yǎng) 接種后將種瓶（袋）置于適溫下培養(yǎng)。菌種瓶初放時(shí)，應(yīng)直立于床架上，當(dāng)菌絲吃料后，再將其橫放；菌種袋根據(jù)氣溫可單層或多層疊放，隔45天轉(zhuǎn)動或調(diào)換位置，以利于受溫一致，并避免培養(yǎng)料水分的沉積；經(jīng)常

16、檢查及時(shí)去除出現(xiàn)雜色、粘液及菌種死亡的瓶或袋；逐漸降溫當(dāng)菌絲長至料深的1/2時(shí)，降溫23，以免料溫升高，菌絲生長細(xì)弱；注意菌齡原種約30天、栽培種約2030天菌絲長滿，再繼續(xù)培養(yǎng)710天是使用的最好菌齡。 五、作業(yè) 1、原種和栽培種培養(yǎng)基（料）的配置有何 不同？ 2、何謂接種？一只試管種可接多少瓶原種和栽培種？ 3、菌種的表面有一塊殘留的瓊脂塊，證明該菌種是哪級菌種？菌種表面有少許玉米粒或麥粒，證明該菌種是哪級菌種？菌種在適宜條件下培養(yǎng)了十多天，發(fā)現(xiàn)有些菌種塊絲毫未萌動，請分析原因？ 實(shí)驗(yàn)六、食用菌制種及栽培中主要病蟲害識別綜 合觀察分析（綜合） 一、目的要求 能正確識別主要病蟲害的形態(tài)特征及

17、侵染癥狀，分析產(chǎn)生的原因，能采取正確的防治方法。 二、基本原理 食用菌栽培中，優(yōu)良的菌種是最關(guān)鍵條件。因此，必須通過各類菌種培養(yǎng)觀察中篩選出菌體潔白，生長旺盛，無污染和蟲害的純菌絲體（純種）用于生產(chǎn)，否則會直接影響產(chǎn)量和質(zhì)量。 三、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備 1、材料：被侵染的培養(yǎng)料和子實(shí)體 2、器具：放大鏡、顯微鏡、解剖鏡、接種針、尖頭鑷、載玻片、蓋玻片、吸水紙、酒精燈、火柴、無菌水、染色劑等。 四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容 1、主要（競爭性）真菌侵染癥狀的識別 2、主要病蟲害的識別 五、方法步驟 1. 主要（競爭性）真菌侵染癥狀的識別。 （1）觀察：用肉眼和放大鏡觀察木霉、青霉、曲霉、毛霉、根霉、雜菌的危害癥狀。（2）鏡檢：載玻片中央滴半滴無菌水或染色劑，無菌尖頭鑷取少許污染材料置于水或染 液中，無菌接種針輕輕撥散，放蓋片。低倍鏡找理想目標(biāo)，高倍鏡下觀察各霉菌的形態(tài)特征。 木 霉 食用菌的勁敵，后期呈墨綠色后期初期顯微鏡下 曲 霉（黑曲霉及黃曲霉）黑曲霉孢子成熟后呈黑色，呈黃綠色的是黃曲霉。青 霉 孢子成熟后呈青綠色 根霉 后期呈黑色（有假根及匍匐菌絲 毛霉 后期呈黑色（