光學(xué)顯微鏡概述及使用課件

1、光學(xué)部分主要構(gòu)件光學(xué)部分包括照明系統(tǒng)和成像系統(tǒng)光學(xué)部分主要構(gòu)件物鏡 低倍鏡（1 6 ，常用的4 、10 ） 高倍鏡（25 63 ，常用的40 ） 油 鏡（90 、95 、100 ）目鏡（5、6 、8 、10 、12 、15 ）物鏡側(cè)面符號的含義10/0.30 表示放大10倍，數(shù)值口徑為0.3040/0.65 表示放大40倍，數(shù)值口徑為0.65100/1.25 oil 表示放大100倍，數(shù)值口徑為1.25，為油鏡160/0.17 表示鏡筒長度和所需蓋玻片的厚度（mm）WD 表示工作距離不同物鏡的數(shù)值孔徑與工作距離（10倍目鏡）物鏡放大倍數(shù)（）總放大倍數(shù)（）數(shù)值口徑工作距離（mm）4400.102

2、5101000.255.6404000.650.610010001.250.14光學(xué)顯微鏡成像原理 光學(xué)顯微鏡是利用目鏡和物鏡兩組透鏡系統(tǒng)來放大成像的。AB和眼睛的距離為顯微鏡的明視距離，標(biāo)本AB的向經(jīng)過物鏡（L1）后到AB處稱謂一個放大倒立的實像，F(xiàn)1為L1的后焦點，當(dāng)光線傳到目鏡（L2）時，在AB處AB被放大成一個直立的虛像，然后傳遞到視網(wǎng)膜上，標(biāo)本AB就被放大了。人眼看到的是AB被放大后的虛像，其與原樣品的方向相反。觀察的物體A B觀察點目鏡L2中間所成的實像AB物鏡 L1放大的虛像AB數(shù)值孔徑（NA，鏡口率）：光線投射到物鏡上的最大開口角度一半的正弦乘上標(biāo)本與物鏡間介質(zhì)的折射率的乘積。

3、 NA=nsin/2 n為介質(zhì)的折射率， 為鏡口角。分辨率：能分辨被檢物體細(xì)微結(jié)構(gòu)最小間隔的能力。 D=0.61/NA 為波長。數(shù)值孔徑越高，分辨率越高。放大率：最終成像大小與原物體大小的比值?？偡糯蟊稊?shù)物鏡的放大倍數(shù)目鏡的放大倍數(shù)物鏡的鏡口角=AOB光學(xué)顯微鏡成像原理其它光學(xué)顯微鏡倒置顯微鏡(invertcd m1Lfoscope) 是普通光學(xué)顯微鏡的一個類型，倒置顯微鏡有幾個特點不同于普通生物顯微鏡。 1） 透射光倒置顯微鏡的光源和聚光器位于載物臺的上方，照明光源自上方向下照射； 2） 物鏡安裝在載物臺的下方，向上對焦； 3） 物鏡、聚光鏡以及其他光學(xué)具組均適用于長焦距觀察； 4） 在醫(yī)學(xué)

4、、生物學(xué)領(lǐng)域中適合于觀察培養(yǎng)瓶中貼壁生長的細(xì)胞或浮游于培養(yǎng)液中的細(xì)胞。 XDS倒置生物顯微鏡其它光學(xué)顯微鏡 體視顯微鏡又稱實體顯微鏡。它在觀察物體時能產(chǎn)生正立的三維空間影像。立體感強(qiáng)，成像清晰和寬闊，又具有長工作距離，并可根據(jù)觀察物的特點選用不同的反射和透射光照明，是適用范圍非常廣泛的常規(guī)顯鏡。不僅可作生物解，作觀察分析，由于本顯微鏡具有較高的分辨率及大視場范圍的清晰，因此還可作電子工業(yè)和精密機(jī)械工業(yè)零件裝配和檢驗，農(nóng)業(yè)上的種子檢查等。MODELZ45E體視顯微鏡其它光學(xué)顯微鏡 熒光顯微鏡是熒光顯微術(shù)的基本裝置。熒光顯微術(shù)是利用一定波長的光（通常是波長短的紫外光和藍(lán)紫光）照射被檢樣品，激發(fā)熒光

5、物質(zhì)發(fā)出可見的熒光。通過物鏡和目鏡的成像、放大，以供檢視和拍攝。熒光顯微鏡具特殊光源，提供足夠強(qiáng)度和波長的激發(fā)光，誘發(fā)熒光物質(zhì)發(fā)出熒光。視場中所見的像，主要是樣品的熒光映像。 根據(jù)光線對標(biāo)本照射方式不同，熒光顯微鏡可分為透射式和落射式兩種。OLYMPUS1X51熒光顯微鏡暗視場顯微鏡 暗視場顯微鏡又叫暗視野顯微鏡。它與普通的顯微鏡的主要區(qū)別是照明方式不同。它用強(qiáng)而窄的斜射光束照射標(biāo)本，而又不讓光束進(jìn)入物鏡。在沒有光進(jìn)入物鏡時，視場是黑暗的，故叫暗視場顯微鏡。 暗視場顯微鏡能夠觀察到 0.004 m以上的微粒存在。普通顯微鏡看不見的微粒，它可以看見。但它只能看到物體的外表輪廓和運(yùn)動狀態(tài)，而不能辨

6、認(rèn)其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。相差顯微鏡 相差顯微鏡是一種將光線通過透明標(biāo)本細(xì)節(jié)時所產(chǎn)生的光程差（即相位差）轉(zhuǎn)化為光強(qiáng)差的特種顯微鏡。 相差顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡的基本結(jié)構(gòu)是相同的，所不同的是它具有四部分特殊結(jié)構(gòu)：即環(huán)狀光闌、相板、合軸調(diào)節(jié)望遠(yuǎn)鏡及綠色濾光片。光學(xué)顯微鏡的使用規(guī)程一、實驗時要把顯微鏡放在座前桌面上稍偏左的位置，鏡座應(yīng)距桌沿 5 cm左右。二、打開光源開關(guān)，調(diào)節(jié)光強(qiáng)到合適大小。三、轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使低倍鏡頭正對載物臺上的通光孔。先把鏡頭調(diào)節(jié)至距載物臺12 cm左右處，然后用左眼注視目鏡內(nèi)，接著調(diào)節(jié)聚光器的高度，把孔徑光闌調(diào)至最大，使光線通過聚光器入射到鏡筒內(nèi)，這時視野內(nèi)呈明亮的狀態(tài)。四、將所要觀

7、察的玻片放在載物臺上，使玻片中被觀察的部分位于通光孔的正中央，然后用標(biāo)本夾夾好載玻片。光學(xué)顯微鏡的使用規(guī)程五、先用低倍鏡觀察（物鏡4X、10X、目鏡10 x）。觀察之前，先轉(zhuǎn)動粗動調(diào)焦手輪，使載物臺上升，物鏡逐漸接近玻片。需要注意，不能使物鏡觸及玻片，以防鏡頭將玻片壓碎。然后，左眼注視目鏡內(nèi)，同時右眼不要閉合（要養(yǎng)成睜開雙眼用顯微鏡進(jìn)行觀察的習(xí)慣，以便在觀察的同時能用右眼看著繪圖），并轉(zhuǎn)動粗動調(diào)焦手輪，使載物臺慢慢下降，不久即可看到玻片中材料的放大物像。六、如果在視野內(nèi)看到的物像不符合實驗要求（物像偏離視野），可慢慢調(diào)節(jié)載物臺移動手柄。調(diào)節(jié)時應(yīng)注意玻片移動的方向與視野中看到的物像移動的方向正好

8、相反。如果物像不甚清晰，可以調(diào)節(jié)微動調(diào)焦手輪，直至物像清晰為止。光學(xué)顯微鏡的使用規(guī)程七、如果進(jìn)一步使用高倍物鏡觀察，應(yīng)在轉(zhuǎn)換高倍物鏡之前，把物像中需要放大觀察的部分移至視野中央（將低倍物鏡轉(zhuǎn)換成高倍物鏡觀察時，視野中的物像范圍縮小了很多）。八、在轉(zhuǎn)換高倍物鏡并且看清物像之后，可以根據(jù)需要調(diào)節(jié)孔徑光闌的大小或聚光器的高低，使光線符合要求（一般將低倍物鏡換成高倍物鏡觀察時，視野要稍變暗一些，所以需要調(diào)節(jié)光線強(qiáng)弱）。九、觀察完畢，應(yīng)先將物鏡鏡頭從通光孔處移開，然后將孔徑光闌調(diào)至最大，再將載物臺緩緩落下，并檢查零件有無損傷（特別要注意檢查物鏡是否沾水沾油，如沾了水或油要用鏡頭紙擦凈），檢查處理完畢后即

9、可裝箱。油鏡的使用 100物鏡是油浸物鏡。使用前必需在鏡頭與蓋玻片間加浸油。 油鏡的透鏡很小，光線通過玻片與油鏡頭之間的空氣時，因介質(zhì)密度不同，發(fā)生折射或全反射，使射入透鏡的光線減少，物象顯現(xiàn)不清。若在油鏡與載玻片之間加入和玻璃折射率（n=1.52）相近的香柏油（n=1.515），則可減少光線折射，使進(jìn)入透鏡的光線增多，視野亮度增強(qiáng)，提高分辨率，使物象明亮清晰。 在油鏡觀察結(jié)束后，切記將鏡頭和其他沾有油污的部件清擦凈。光學(xué)顯微鏡的維護(hù)一 、必須熟練掌握并嚴(yán)格執(zhí)行使用規(guī)程。二、取送顯微鏡時一定要一手握住彎臂，另一手托住底座。顯微鏡不能傾斜，以免目鏡從鏡筒上端滑出。取送顯微鏡時要輕拿輕放。三、觀察時，不能隨便移動顯微鏡的位置。四、凡是顯微鏡的光學(xué)部分，只能用特殊的擦鏡頭紙擦拭，不能亂用他物擦拭，更不能用手指觸摸透鏡，以免汗液玷污透鏡。五、保持顯微鏡的干燥、清潔，避免灰塵、水及化學(xué)試劑的玷污。六、轉(zhuǎn)換物鏡鏡頭時，不要搬動物鏡鏡頭，只能轉(zhuǎn)動轉(zhuǎn)換器。光學(xué)顯微鏡的維護(hù)七、切勿隨意轉(zhuǎn)動調(diào)焦手輪。使用微動調(diào)焦旋鈕時，用力要輕，轉(zhuǎn)動要慢，轉(zhuǎn)不