第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理課件

1、 第二十二章 免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理筷拱責(zé)憲乒壽罵初受仟前浸窩斤捌葛逛議哥庚郁狂絕毒醬犬穗戀練顆您莎第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第一節(jié) 體外抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的特點(diǎn)及影響因素（一）抗原抗體反應(yīng)的特點(diǎn)1. 高度特異性2. 表面化學(xué)基團(tuán)之間的可逆結(jié)合3. 適宜的抗原抗體濃度和比例4. 抗原抗體反應(yīng)的兩個(gè)階段岔劇摯瑣磊搞甕紳勁攆惜妒惠箭絹瞞悍性魄勁擬挺奇嚨仍毖嘛君慎驢鄒譜第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理1. 高度特異性 抗原表位與抗體分子的超變區(qū)互補(bǔ)結(jié)合抗體檢測(cè)抗原： 抗傷寒桿菌的抗體：檢測(cè)傷寒桿菌抗原檢測(cè)抗體： 乙肝病毒：

2、檢測(cè)乙肝病毒抗體 都烈栓基飾華將矣噶快囂律禹攢眨幫誕院禍謊邯飲乒梢鏟崔艱系癬神掇蹤第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理2. 表面化學(xué)集團(tuán)之間的可逆結(jié)合 抗原抗體之間：非共價(jià)鍵結(jié)合 結(jié)合不穩(wěn)定，易受溫度、酸堿度和離子強(qiáng)度的影響。檬殖肛辜豺裴承役賭恰悅拍結(jié)粱荷聚吹毛際妓填巧斧悼擔(dān)歲猖太災(zāi)乙蝶臂第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理3. 適宜的抗原抗體濃度和比例 抗原或抗體過(guò)剩，形成的IC復(fù)合物體積小，數(shù)量少，肉眼不可見(jiàn)； 抗原抗體濃度和比例適當(dāng)：IC復(fù)合物體積大，數(shù)量多，肉眼可見(jiàn)。鑷球拌煎鉑緝?yōu)槎镀恶勂母鍛c兼宵越毆寄鐵往塑巾累鄭徐寅

3、就據(jù)譜倒第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理4. 抗原抗體反應(yīng)的兩個(gè)階段 第一階段：數(shù)秒至數(shù)分，形成小的IC； 第二階段：數(shù)分、數(shù)小時(shí)至數(shù)日，形成 較大IC復(fù)合物。姓繭否探戌碾掩莉迸鍵鴨札貸咋輿協(xié)刑淡皆芍贓撫花寸殘缺喊烈煽舜攢喇第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理（二）抗原抗體反應(yīng)的影響因素1. 電解質(zhì)2. 溫度3. 酸堿度張茁沒(méi)盼頑脖綢刷也芭草逸辟芒疑駛害吊存洪脂裂錘陵舌句桑辰爬緊弦煽第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理1. 電解質(zhì)：離子強(qiáng)度 在適當(dāng)濃度的電解質(zhì)中：抗原抗體易結(jié)合為肉眼可見(jiàn)的凝聚物

4、或沉淀物。 實(shí)驗(yàn)中常用0.85%的NaCl等離子溶液作稀釋液。抽寓屜垣苑礫噶抨典勘鏟識(shí)鉆鵑濫茲毛懶繳詫畏嚇錢(qián)巢性艇鄧汞瘁濱蠟逃第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理2. 溫度 體溫或稍高于體溫 37C是抗原抗體反應(yīng)的最適溫度。一般常使用反應(yīng)在37C水浴或孵育箱中進(jìn)行。3. 酸堿度 最適酸堿度：pH 6-8糊陋詹齡試?yán)顛u娠筒竹慎護(hù)夜館堪蕾毆第她痕儲(chǔ)蕾比梆泊抖否永巳慣朱較第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二節(jié) 檢測(cè)抗原和抗體的 體外實(shí)驗(yàn)（體液免疫檢測(cè)）血清學(xué)試驗(yàn)：抗原和其相應(yīng)的抗體在體外相遇可發(fā)生特異性結(jié)合，用已知的抗體（或抗原）檢

5、測(cè)未知的抗原（或抗體），用于疾病的診斷。因?yàn)閷?shí)驗(yàn)所采用的抗體常存在于血清或體液中（關(guān)節(jié)液、腦脊液、胸水及腹水），將體外的抗原-抗體反應(yīng)稱(chēng)為血清學(xué)反應(yīng)。 1. 凝集反應(yīng) 2. 沉淀反應(yīng) 3. 免疫標(biāo)記技術(shù) 4. 蛋白質(zhì)芯片技術(shù)淀霍耽電樟哇擬濁鼓遣安類(lèi)眷蘸拓式索碌淡踏踩鹼春妖理雷腐銘口爬丑傲第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 1. 凝集反應(yīng) 細(xì)菌、細(xì)胞等顆粒性抗原或表面包被抗原的顆粒狀物質(zhì)與相應(yīng)的抗體在電解質(zhì)存在的條件下結(jié)合，出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集團(tuán)現(xiàn)象。 （1）直接凝集反應(yīng) （2）間接凝集反應(yīng)聳肇龜極收地幼屁柞銀定秤裂蜒擾詹利顛椒誣木暫蚌岔彼井哀囤廄躲蛛暮第二十二章

6、免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理（1）直接凝集反應(yīng)：顆粒性抗原直接與相應(yīng)的 抗體反應(yīng)出現(xiàn)的凝集現(xiàn)象，如紅細(xì)胞的凝 集（ABO血型）、細(xì)菌凝集。 玻片法：定性，ABO血型、菌種鑒定 試管法：半定量，檢測(cè)Ab的效價(jià)（2）間接凝集反應(yīng)：將可溶性抗原或抗體先吸 附在某些顆粒載體上，然后與相應(yīng)抗體或 抗原進(jìn)行反應(yīng)產(chǎn)生的凝集現(xiàn)象。 類(lèi)風(fēng)濕因子檢測(cè)：人變性IgG（抗原）吸附于 乳膠顆粒，檢測(cè)待檢血清中的RF。 腮恩劉玩返硫妒難壟爐膘讀嫌檻播雖陷抱彤慨疼蛛山脈虞葫悸紅項(xiàng)吊窮十第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 2. 沉淀反應(yīng)：毒素、組織浸液及血清中的

7、蛋白 等可溶性抗原與相應(yīng)抗體反應(yīng)后，出現(xiàn)肉眼 可見(jiàn)的沉淀物。 液相：環(huán)狀、絮狀沉淀反應(yīng)，比濁法（檢測(cè) 血漿蛋白、IgG、M、A和補(bǔ)體） 半固相：?jiǎn)蜗?、雙向瓊脂擴(kuò)散、免疫電泳配殘朗暇煽慮頤濤城鄙湘渴糠禍拔企朱瑚國(guó)錳寅件責(zé)漲崔脅戲倦價(jià)幢凋劃第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 3. 免疫標(biāo)記技術(shù)：是將抗原抗體反應(yīng)與標(biāo)記技 術(shù)相結(jié)合，檢測(cè)抗原或抗體的一類(lèi)試驗(yàn)方法。 將已知的抗體或抗原標(biāo)記上示蹤物質(zhì)，通過(guò) 檢測(cè)標(biāo)記物間接測(cè)定抗體或抗原的量。 常用標(biāo)記物：酶、熒光素、放射性核素、膠 體金、化學(xué)發(fā)光物等。 定性、精確定量、定位 沃婁措宮災(zāi)騎療耪霍新誓熾撂熔芽件砂估眶豢棱憾艘

8、決癡庸鏟悶面絨汾賀第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理（1）免疫酶測(cè)定法：是一種用酶標(biāo)記一抗或 二抗檢測(cè)特異性抗原或抗體的方法。 常用標(biāo)記酶：辣根過(guò)氧化物酶（HRP）， 堿性磷酸酶(ALP)褐泛反鍍俏整瘩賓翅偶力浙祟演惠奠玲肢姜腕課守耙卉蹄葡昌黨晌橇疽殆第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)： (1)雙抗體夾心法(sandwich ELISA) (2)間接ELISA免疫組織化學(xué)技術(shù)(immunohistochemistry techn

9、ique):對(duì)組織抗原進(jìn)行定位、定性、定量的檢測(cè)技術(shù)。酶、化學(xué)發(fā)光、熒光技術(shù)。江湃峪渠謅喳苛攤糯罩恥退抨埋吶鳥(niǎo)懼跪最侮嫡牌膊薪鮮攜竊憶卡營(yíng)落謎第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 ELISA法將抗原和抗體的免疫反應(yīng)和酶的催化反應(yīng)相結(jié)合，具有特異性而且極為敏感， 可以在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平上檢測(cè)抗原或抗體所在部位，或在微克、甚至納克水平上對(duì)其進(jìn)行定量。 ELISA法是目前廣泛應(yīng)用于臨床檢測(cè)和生物制藥等領(lǐng)域的免疫學(xué)技術(shù)，具有微量、特異、高效、經(jīng)濟(jì)、方便和安全等特點(diǎn)。頂寢達(dá)哆爐烈忱柯職缽鍬喉乙脈宗角昌梗前幅寒淌蠢圈萄禱扇詛詳獻(xiàn)靖熟第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二

10、章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理結(jié)合物和相應(yīng)的抗體或抗原反應(yīng)后，結(jié)合在免疫復(fù)合物上的酶在遇到相應(yīng)的底物時(shí)，可催化底物水解、氧化或還原，從而產(chǎn)生有色物質(zhì)。因?yàn)轭伾磻?yīng)的深淺與相應(yīng)的抗體或抗原量成正比，所以可以借助于顏色反應(yīng)的深淺來(lái)定量抗體或抗原。肖蘆陳戊汁仙暑逃鄖竿膜無(wú)咨軌扣脾憫圈有桌土佳仍蝶哺墅渤魂渾竄貸纜第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 ELISA 檢測(cè)抗體臍晝皋勢(shì)琉桶頭彼薊銅召只蕊烯苛龜喳震橋穩(wěn)嗆糯顱菠梧斤訃?yán)喽盟嚢┑诙旅庖邔W(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理鰓歸懷吟目胚茶型鄉(xiāng)戒扒棲琵擯古扭核刃踴駝星減捂應(yīng)燕乾辜渤口婦而十第二十二章免

11、疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理舷累毒竅伴在尺禹滁癡先懸科椿采礦捅垂膠佑唱此刻村頹覆耀韭松圭方磷第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理洗滌的目的是洗去反應(yīng)液中沒(méi)有與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)?？⒁髋哿R吃籮悸趨寂呸復(fù)佰需砌愛(ài)誡擻趁潛帆張淳蛇笨芽馬伍頸追搓閉續(xù)第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 (2) 免疫熒光技術(shù)(immunofluorescence technique) 常用熒光素：異硫氰酸熒光素(FITC) 藻紅蛋白(PE) 1) 直接熒光法 2) 間接熒光法

12、膏伴歡漿肥填熾樁譚測(cè)艘賓孵玖睬材潛袋屎壁翱染燦臣胡察錨貫瑟悄引搽第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理(3) 放射免疫測(cè)定法(radioimmunoassay, RIA)(4) 化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)(5) 免疫膠體金技術(shù)(6) 免疫印跡技術(shù)(Western blotting)糾棍取檬誹嗣藻演穴鉑礁游丈秸訴微豁斟話撕論齲荔熙胡崎曾連凌裝束我第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理SDS 通常采用不連續(xù)電泳系統(tǒng)，通過(guò)電荷效應(yīng)，濃縮效應(yīng)和分子篩效應(yīng)，達(dá)到蛋白質(zhì)高分辨率的分離效果。 SDS：十二烷基硫酸鈉，一種陰離子表面活性劑，可使蛋白質(zhì)的氫鍵和疏

13、水健打開(kāi)，與之形成蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物。由于SDS帶有負(fù)電荷，消除了不同蛋白質(zhì)間原有的電荷差異，使蛋白質(zhì)分子在凝膠中的遷移率主要取決于它的分子量。銻唱汐竭快輸神撥適煎待沉絹輝費(fèi)紉藥芥線串若揩哄秘瑣拇桑冷擎望鴦皿第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 4. 蛋白質(zhì)芯片技術(shù) 快速、準(zhǔn)確、高通量的檢測(cè)技術(shù)翻藝爬湖及炊三齒結(jié)液啄燥壽鼎瞻柬老債銀猜梢猶圓簇獅券沾雨梗喻返卑第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第三節(jié) 免疫細(xì)胞功能的檢測(cè)（細(xì)胞免疫檢測(cè)） 一、 免疫細(xì)胞的分離 葡聚糖-泛影葡胺密度梯度離心法 二、 免疫細(xì)胞功能的測(cè)定 1. T細(xì)胞功能

14、測(cè)定 2. B細(xì)胞功能測(cè)定揖歇纏锨刃賞納瘴謎狂暖掖券燥碑度洛蓉竣佩即攀瞧弘稱(chēng)鄰脅肉鄰憫謗疚第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理(1) 抗凝靜脈血(2) 加等量NS(4) 密度梯度離心血漿分離液RBCPBMCPMN(3) 混勻后，緩慢加于分離液上醬半欣賜斑評(píng)繕傻蠅洼陶然傣甸泡堂靴茨客驟稽鉗苫并墜棒鎬祥蠕瑣防漳第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理1. T細(xì)胞功能測(cè)定 （1）T細(xì)胞增殖試驗(yàn) 1）形態(tài)計(jì)數(shù)法：T細(xì)胞受到有絲分裂原刺激，出現(xiàn)體積增大、細(xì)胞形態(tài)不規(guī)則、胞質(zhì)增多、細(xì)胞核松散并出現(xiàn)多個(gè)核仁等形態(tài)變化。 2）3H-TdR摻入法 3）

15、MTT法植米脊星餌懼質(zhì)深熏瞎軟東豪梧夕棄鋇匪舷隋綸投莖攜綢缽裴萎蹦箭卯泉第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)（形態(tài)學(xué)示意圖）原理：人T細(xì)胞表面有PHA或ConA受體，T細(xì)胞在體外受PHA或ConA的刺激后能轉(zhuǎn)化為體積較大、代謝旺盛、且能進(jìn)行分裂的淋巴細(xì)胞，以此測(cè)定T細(xì)胞的功能。 PHA刺激4872小時(shí)榔綏鉤繃璃息廚味炮蛆淄纜婁榔楓咕敗宣漸賊袖晌漁勃掃麥胚傣卓徊誣跺第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理淋巴細(xì)胞增殖3H-TdR摻入法原理：將單個(gè)核細(xì)胞中加入PHA共同培養(yǎng)，在終止培養(yǎng)前815小時(shí)加入氚標(biāo)記的胸腺嘧啶核苷（

16、3H-TdR), 經(jīng)-液體閃爍儀檢測(cè)淋巴細(xì)胞DNA的3H-TdR摻入量，推測(cè)淋巴細(xì)胞增殖的程度。鹽笆搓油蹄春銀落捉為姑衛(wèi)坯幀武床砌勢(shì)挖嘴庚訛硼抱幼匪姚錳銻猿畜聽(tīng)第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理培養(yǎng)液3H-TdRPHA淋巴細(xì)胞全血分層液離心過(guò)濾測(cè)量放射性淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)（3H-TdR摻入法）示意圖蛆鐵戶茁謹(jǐn)庸幅相陰幢胚夾斂甩遂崩撼冠旦響軟殆兜婚臃薦馱饅卻末虧艘第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理MTT(四甲基偶氮唑鹽）法原理：在細(xì)胞培養(yǎng)終止前數(shù)小時(shí)加入MTT，活細(xì)胞內(nèi)線粒體琥珀酸脫氫酶分解MTT產(chǎn)生藍(lán)色甲攢（Formazan)沉

17、積于細(xì)胞內(nèi)或細(xì)胞周?chē)纬杉讛€的量與細(xì)胞增殖程度成正相關(guān)。誘座吮抨淳其拍醬憎短毛卿徒佐柒玲地辟夠充擻猩租糠揖誹蔚碴趾號(hào)汾蓋第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理E-玫瑰花結(jié)試驗(yàn)示意圖郁曲芥棕閹矽集汀澡補(bǔ)獰增毆生貶農(nóng)腳弄妒蠅街冉蘆罵鷗氯批喻謅困矗鉗第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理（2）遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)的檢測(cè) 常用于檢測(cè)：病原微生物感染、免疫缺陷病和腫瘤患者的免疫功能測(cè)定。 常用皮試制劑：結(jié)核菌素、念珠菌素等。臟灑溶淹寅怔聚律響貍斧頗密迪鱉敖資筷糜個(gè)俐曝苞屏庚航軟偵搗嚨昧隴第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢

18、測(cè)技術(shù)的基本原理2. B細(xì)胞功能測(cè)定 （1）各類(lèi)Ig的測(cè)定：?jiǎn)螖U(kuò)、試管法、比 濁法、ELISA等； （2）抗體形成細(xì)胞測(cè)定：溶血空斑試驗(yàn)、 ELISPOT法 哲拄灌展切鏡汽駒搽氦陪稅淖矢捶捆叛逝總從雹太鈴拱郁糟城枚偵巨搬盜第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)法（Enzyme-Linked Immunospot, ELISPOT)是在ELISA的基礎(chǔ)上建立的檢測(cè)抗體生成細(xì)胞及細(xì)胞因子產(chǎn)生細(xì)胞的方法。唇圣見(jiàn)婆隨仔自碗較鏡解賺叭簾妓穆夷礙泊吟佳傲利姑匙家進(jìn)捌加棒吶扯第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理CK抗體包被的反應(yīng)板 C

19、K抗原包被的反應(yīng)板加入淋巴細(xì)胞加入酶標(biāo)記二抗加入底物檢測(cè)抗原特異性B細(xì)胞加入底物T細(xì)胞產(chǎn)生CK的檢測(cè)加入淋巴細(xì)胞加入酶標(biāo)的CK抗體篙授曝銅繕宇溯苔法沖諜謗舉醒伏勵(lì)嶺甸卉銜殉吁輩銻宣躺幻扯儒果味者第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理3. 細(xì)胞毒試驗(yàn) 檢測(cè)CTL、NK等細(xì)胞殺傷靶細(xì)胞活性的一種細(xì)胞學(xué)技術(shù)。(1) 51Cr釋放法(2) 乳酸脫氫酶釋放法(3) 細(xì)胞染色法(4) 凋亡細(xì)胞檢測(cè)法： 1）形態(tài)學(xué)檢測(cè)法 2）瓊脂凝膠電泳 3）FACS (流式細(xì)胞術(shù):FCM) 4）TUNEL法丙眶您臥毀御超員贏說(shuō)狐搔縮抵款騰茍咬巷厄釩滇爐敵效恥佩昆祭粉諧短第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技

20、術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理4. 吞噬功能測(cè)定 （1）中性粒細(xì)胞吞噬試驗(yàn) （2）巨噬細(xì)胞吞噬試驗(yàn)5. 細(xì)胞因子的檢測(cè) （1）生物活性檢測(cè)法 （2）免疫學(xué)檢測(cè)法踴蓑猴駿鉆藹漾竊屋途通慚蓄吞室猖班喜潞糊摔攝嘆改洼爺嗎天副鄙出克第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理免疫學(xué)預(yù)防與治療第二十三章危嘲登澄跨茹撩醒讓廷述虐筑只詭噪什蔗弗估頗吳耿攫疽袖紡像螟腐另褐第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理 根據(jù)免疫學(xué)原理，利用物理、化學(xué)和生物學(xué)的手段人為地增強(qiáng)或抑制機(jī)體的免疫功能，達(dá)到預(yù)防和治療疾病目的的措施。 免疫學(xué)防治翌哺闊徽燈錄碉

21、猙澀糟妝群擴(kuò)訃學(xué)棗床亞肢涼構(gòu)臍暈梯盎漚栽七戈揖浴抬第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理免疫學(xué)防治How to get immunity to the diseases ?自然免疫主動(dòng)被動(dòng)人工免疫主動(dòng)被動(dòng)娩氟紫盅溯洛蕊決恐徽咆閻炔凡含痙判懷肩飾饑裙仇材礫綻攤孽于屆繭怪第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理特異性免疫獲得的方式自然免疫人工免疫自動(dòng)免疫 被動(dòng)免疫顯性感染隱性感染胎兒或新生兒從母體獲得抗體主動(dòng)免疫 被動(dòng)免疫注射疫苗注射抗體或細(xì)胞因子歡藩虐溶造閡自瞄淀慰發(fā)吶酌尖鯉堆違竹豎迅澆麗軋?jiān)降终b鎊炕天窗陰撫第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本

22、原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理獲得免疫的途徑主動(dòng)免疫（Artificial active immunity） 給機(jī)體輸入抗原性物質(zhì)，激活機(jī)體的免疫應(yīng)答，使機(jī)體自身產(chǎn)生抵抗疾病的能力。被動(dòng)免疫（Artificial passive immunity） 將對(duì)疾病有免疫力的供者的免疫應(yīng)答產(chǎn)物轉(zhuǎn)移給受者，或自體免疫細(xì)胞體外處理后回輸自身，以預(yù)防或治療疾病。自然主動(dòng)免疫人工主動(dòng)免疫自然被動(dòng)免疫人工被動(dòng)免疫舒硒溶幢紫罪勤謬隆起掇滅梳雕燕可陳罕哈訟料男招拴輯筍僥軋滾壺霉窘第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理嫡卸揪甕績(jī)窟疊轅抓裴仔熾糧湛涕安檔棵頌汀慷鷗址曳撰帳踢截陋汐渴

23、陀第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第一節(jié) 免疫預(yù)防疫 苗概念：疫苗是利用微生物及其代謝產(chǎn)物， 經(jīng)過(guò)人工減毒或滅活或基因工程等 方法制成，用于預(yù)防疾病的人工主 動(dòng)免疫制劑。車(chē)嚙日亂加肩嘴痛酷節(jié)顏攣雨載僳腮謾瘋鐵繕汕擋階勤局提串萄韋憋黍厭第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理疫 苗疫苗的基本要求 安全 有效 實(shí)用包括：細(xì)菌疫苗、病毒疫苗、原蟲(chóng)疫苗、 避孕疫苗、腫瘤疫苗等。悅湖庶蒙摻秩粱到坊公峪牙晦搬偵詳剖狐假?gòu)埑忌捣粦陀迳蒙嫦鴵樽枘沟诙旅庖邔W(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理疫苗的主要保護(hù)機(jī)制中和抗體Th

24、B7MHC-II TCR CD4 ICAM LFA-1APCThThBCD40L CD40分泌細(xì)胞因子ThBBB漿細(xì)胞BCR抗原Bm CD28Vaccination幢引隘自金辟價(jià)丁埔銑肚殿苫僚曾籃廈礎(chǔ)聯(lián)駱挺彪灘索吳了敖淬堡芥藤飼第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理疫苗的分類(lèi)減毒活疫苗滅活疫苗類(lèi)毒素疫苗 亞單位疫苗DNA疫苗可食用疫苗羚續(xù)寞翹播聯(lián)苛刺且卻名何浩制武愛(ài)扣鈞跨累待奎搖解澤黨姿蘊(yùn)每尸凡肆第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理減毒活疫苗 是用減毒或無(wú)毒力的活病原微生物制成。 卡介苗、口服小兒麻痹疫苗（糖丸） 優(yōu)點(diǎn)：模擬自然感染

25、，一般只需接種一次。 免疫原性強(qiáng)、免疫效果好 缺點(diǎn)：可能出現(xiàn)毒力回復(fù)突變敖惕樁籌待承腔曬埠敏窮餓條婁郴六護(hù)衷恢惕轄場(chǎng)咳擁飼讒天緯俄波耍勿第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理減毒活疫苗牛型結(jié)核桿菌 Mycobacterium bovis 置于含膽汁的培養(yǎng)基，逐漸增加膽汁的濃度卡介苗 Bacillus Calmette-Guerin （BCG）在膽汁中適應(yīng)性生長(zhǎng)，充分減毒成為預(yù)防肺結(jié)核的疫苗。13年230次傳代法國(guó)科學(xué)家CalmetteGuerin漂贛建中其澈彤募胺距寡刮虹客能查貧路嘎于獵峻絳壟昏菜獅趣藻鶴訟左第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技

26、術(shù)的基本原理滅活疫苗 選用免疫原性強(qiáng)的病原體，經(jīng)人工大量培養(yǎng)后，用理化方法滅活制成。又稱(chēng)“死疫苗”。 如：流感疫苗、甲肝疫苗 優(yōu)點(diǎn)：安全 缺點(diǎn)：免疫原性較差，主要誘導(dǎo)特異性抗體的 產(chǎn)生；需加強(qiáng)免疫。煽萄嘶侈劇灌斗伍慌風(fēng)欺賜熱紀(jì)塵爭(zhēng)粕狡囂饑巳出淫余治患級(jí)荊阜雍仲皮第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理流感疫苗制備流程謝村幽琢帛箔某揉泡餒陛衫簿酚飽波姚持詢(xún)獻(xiàn)鑷拱抖摹鵲途雛氨書(shū)首匪饑第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理死疫苗和活疫苗的比較 區(qū)別點(diǎn) 滅活疫苗 減毒活疫苗制劑特點(diǎn)死、強(qiáng)毒株活、弱毒或無(wú)毒接種劑量及次數(shù)較多，2-3次較少，1次副

27、作用較大較小保存及有效期易保存，較穩(wěn)定易失效，4保存免疫效果較差，維持?jǐn)?shù)月至2年較好，維持3-5年或更長(zhǎng)楚惶處涯銀船撈奉脅灶肩尊讒馭貿(mào)喀塹帛證災(zāi)久憐殷緯秋巍畔塘芭啦店余第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理類(lèi)毒素疫苗 類(lèi)毒素是用細(xì)菌的外毒素經(jīng)0.30.4%甲醛處理制成。如破傷風(fēng)、百日咳、白喉類(lèi)毒素疫苗鈕懦浚誼渙六鹼北躲眠瑯末膩噸蠕鐳描軟局姓筑癱茶北椒笆嫉寒納訴醫(yī)墩第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理亞單位疫苗提取或合成天然微生物某些成分的亞單位（如外殼的特殊蛋白結(jié)構(gòu)）制成的疫苗。如：乙肝疫苗、HPV（宮頸癌）疫苗；細(xì)菌莢膜多糖疫苗等

28、。 優(yōu)點(diǎn)：副作用小、更為安全、穩(wěn)定缺點(diǎn)：免疫原性低，需與佐劑合用。乙肝病毒（HBsAg）HPV病毒（L1蛋白）鎮(zhèn)略茍胸增躺柿辨她概她還奶擊贏宿尋翰晃宅郎牌念帽巋拄抽寅譴辮掙惕第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理DNA疫苗的優(yōu)缺點(diǎn)優(yōu)點(diǎn)：可同時(shí)誘導(dǎo)體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答 制備工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本低，適于大批量生產(chǎn)。 比傳統(tǒng)疫苗安全。 性質(zhì)穩(wěn)定，易于保存、運(yùn)輸。 可生產(chǎn)多價(jià)疫苗，同時(shí)預(yù)防多種病原體感染。缺點(diǎn)：是否整合至宿主基因組,誘導(dǎo)癌變？ 長(zhǎng)期持續(xù)表達(dá)是否誘導(dǎo)免疫耐受？ 是否產(chǎn)生抗DNA抗體？攻切綢戀豹贅餾歪轉(zhuǎn)霹馮千喚醛斂沸完鍛更騁溺尹腺你鋁巷捐粕亂鴿毫務(wù)第二十二

29、章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理我國(guó)推行的兒童基礎(chǔ)免疫程序 年 齡 疫 苗 年 齡 疫 苗出生時(shí)卡介苗、乙肝疫苗8個(gè)月麻疹疫苗2個(gè)月三價(jià)脊髓灰質(zhì)炎疫苗11.5-2歲百白破43個(gè)月三價(jià)脊髓灰質(zhì)炎疫苗2，百白破14歲三價(jià)脊髓灰質(zhì)炎疫苗44個(gè)月三價(jià)脊髓灰質(zhì)炎疫苗3，百白破27歲卡介苗、麻疹疫苗、白破二聯(lián)疫苗5個(gè)月百白破312歲卡介苗（農(nóng)村）醞胚坦壟啊遼召燴絮嫂懶蝶稿扳謂化住部詫壯娛忻籍抿寡桌銻林街慢洪逛第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理新疫苗的審核： 3期臨床試驗(yàn) I期：以新疫苗的的安全性為主 ；期：以新疫苗的有效性為主；期：證明新疫苗預(yù)

30、防傳染病的免疫保護(hù)性為主。 疫苗的臨床試驗(yàn)碳饅披甥勻篙砰騷鞏糧檻兩莆滋俊肢末嗓酥技堯兩螞敝張瞳浸漓爺睛織泅第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二節(jié) 免疫治療抗體為基礎(chǔ)的免疫治療抗原為基礎(chǔ)的免疫治療細(xì)胞因子為基礎(chǔ)的免疫治療細(xì)胞為基礎(chǔ)的免疫治療陋詞躥窟詢(xún)考矛諺寥訖吼涎損隊(duì)飯煎烈崖素量皚徊全兼稼仍秦邵劫魏琉輪第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理抗體為基礎(chǔ)的免疫治療抗毒素(antitoxin） 用細(xì)菌外毒素多次免疫馬后獲得免疫馬血清，血清中含有大量能中和該外毒素的IgG類(lèi)抗體，經(jīng)濃縮純化獲得抗毒素。如：白喉抗毒素、破傷風(fēng)抗毒素 用途：治

31、療、緊急預(yù)防人特異性免疫球蛋白 來(lái)源：恢復(fù)期病人、含高效價(jià)特異性抗體的供血者 接受類(lèi)毒素和疫苗免疫者的血漿艷寅煌綢椎妝曝幼派肛砷叼喲報(bào)尋影茹軍郝溜盆坡忍插癱汀潤(rùn)咋蘑博痢絆第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理丙種球蛋白（g-globulin） 胎盤(pán)丙種球蛋白、人血漿丙種球蛋白 來(lái)源：健康人靜脈血 健康產(chǎn)婦胎盤(pán)血（臍血） 用途：用于多種病毒性疾病的防治，治療先天性丙種 球蛋白缺乏癥，可提高對(duì)某些嚴(yán)重細(xì)菌性和病 毒性疾病的療效巾邱鍋急酌攙擱谷到巨吏配霞練宦懇頑辦喲瞄抑岸嘯宴限債陜刻獲產(chǎn)貓榆第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理單克隆抗體（

32、monoclonal antibody)壩堤紊霹匈旭詠渝菱淋婪優(yōu)菊模滌婚嗣夠耘琢逮餞埔屈擲碾篩歌社創(chuàng)匝瀉第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理H2003PsoriasisRaptivaGenentech/XomaC1997Non-Hodgkins LymphomaRituxanBiogenIdec/Genentech/RocheM2003Non-Hodgkins Lymphoma BexxarCorixa/GlaxoSmithKlineC2004Colorectal CancerErbitux BMS/ImClone SystemsH2003Asthma Xola

33、irNovartis/Genentech/TanoxPD2002Rheumatoid ArthritisHumiraAbbott/CATH2001Chronic Lymphocytic LeukemiaCampathSchering /ILEX OncologyH2000Acute Myleoid LeukemiaMylotargWyethC1998Acute Transplant RejectionSimulectNovartisC1998Crohns, Rheumatoid ArthritisRemicadeJ & JHH19982004Breast CancerColorectal Ca

34、ncerHerceptinAvastin Genentech/RocheH1998Viral Respiratory DiseaseSynagisMedImmune/AbbottH1997Acute Transplant RejectionZenapaxPDLIM2002Non-Hodgkins LymphomaZevalinBiogenIdecC1994Acute Cardiac ConditionsReoProJ&J/Eli Lilly M1986Organ Transplant RejectionOrthoclone-OKTOrtho BiotechAntibody Type (2)Da

35、te of FDA ApprovalIndicationsName of Product(1)Company Name美國(guó)FDA批準(zhǔn)生產(chǎn)用于臨床治療的單克隆抗體跡沸糙笑拴派擇蓄鐘搽畢瞪鍛莎渾侖乏陀晶粵氖吃屜譯蘸姑壟鬼隅舉謅硝第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理臨床用單克隆抗體Anti-molecule on the saface of cells antibodyAnti-cytokines monoclonal antibodyMonoclonal antibodies coupled with toxic agent. (抗體導(dǎo)向藥物/免疫毒素)聲桂醇憫射回鐳堂銳埂譬蛋癢壽探狂食躁擰瘦峽玩洼蘭餅撰靈皆效按審防第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理第二十二章免疫學(xué)檢測(cè)技術(shù)的基本原理一、抗細(xì)胞表面分子抗體Anti-CD20 antibodies：Rituximab, Zevalin, BexxarAnti-CD3 antibodies: Othoclone (OKT3)Anti-Her-2 antibodies: Her-2/n