病毒雞胚培養(yǎng)法

1、病毒雞胚培養(yǎng)法（一）實驗?zāi)康?.了解雞胚培養(yǎng)有哪幾種常用的接種方法。2.掌握雞胚尿囊腔接種培養(yǎng)雞新城疫病毒的操作技術(shù)。（二）實驗原理實驗室培養(yǎng)病毒常使用動物接種和雞胚培養(yǎng)兩種方法，而雞胚培養(yǎng)更為常見。一般而言，禽病毒病大部分可經(jīng)雞胚分離病毒，其他動物病如犬瘟熱也可經(jīng)雞胚分離病毒。 雞胚接種技術(shù)是養(yǎng)禽業(yè)中一種相對新的疫苗接種方法。這種方法就是對孵化后期的雞胚接種某些活的病毒疫苗。這些病毒疫苗不會對孵化率產(chǎn)生不利的影響，通過這種方式接種疫苗后孵出的雛雞具有免疫保護(hù)力。 （三）實驗器材：要選擇SPF雞胚或低母源抗體的雞胚。從實踐看，法氏囊炎病毒對抗體相當(dāng)敏感，所以要用無母源抗體的雞胚；而新城疫病毒、

2、禽流感病毒等可抵御母源抗體的作用而得以繁殖致死雞胚。孵化前的雞胚應(yīng)注意消毒，置37-38、相對濕度45-60%的孵卵器中孵育，每日翻蛋數(shù)次，孵蛋第4天開始照蛋，棄去無精蛋和死胚。多采用9-11日齡的活胚接種。（四）實驗方法1.接種前的準(zhǔn)備：a.雞胚的準(zhǔn)備：選擇9-11日齡的雞胚，在照蛋時以記號筆勾出氣室，于氣室稍下方胚胎活躍而血管明顯的區(qū)域中，在血管之間的間隙劃上記號，作為接種部位。用3%碘酊對接種部位進(jìn)行消毒，再用75%酒精棉球擦一遍，在接種定位處打孔，氣室向上豎放于蛋托上。雞胚的模式結(jié)構(gòu)b.病毒材料的準(zhǔn)備：要分離培養(yǎng)的病毒材料應(yīng)是無菌的，因此在處理材料的過程中，應(yīng)嚴(yán)格按照無菌操作進(jìn)行，將新

3、城疫弱毒活疫苗按照每1000羽份配成250ml,為達(dá)到無菌的目的，可在每毫升接種物中加入青霉素和鏈霉素各100-5000IU，置室溫中1h處理。法氏囊病毒的分離取疑似感染病毒的法氏囊，稱重，按1:5（w/v）加入生理鹽水，研磨，-20，反復(fù)凍融2次；每次冷凍時間以研磨物結(jié)冰為準(zhǔn)；將凍融物轉(zhuǎn)入離心管中，3000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，將上清取出，使用無菌濾器過濾雞胚接種的方法有幾種：絨毛尿囊腔內(nèi)接種 絨毛尿囊膜接種羊膜腔接種卵黃囊內(nèi)接種取10-12日齡的雞胚，照蛋選擇血管較少的部位做一記號，用磨蛋器磨一于縱軸平行的裂痕，小心挑開蛋殼，將白色的殼膜用針尖小心挑破，不要傷及血管豐富而透明的絨毛尿囊膜，在

4、氣室頂端鉆一小孔，用滴管貼近小孔，輕輕一吸，絨毛尿囊膜便下陷成一小凹。絨毛尿囊膜接種絨毛尿囊膜接種 取10-12日齡的雞胚，消毒氣室頂上的蛋殼，并將氣室頂端的蛋殼銼一三角形的裂痕，用滅菌鑷子揭去裂痕部位的蛋殼和殼膜，用滅菌平頭鑷子刺破尿囊膜，并輕輕夾去羊膜，用小號針頭刺進(jìn)羊膜腔內(nèi)，注入0.05-0.1ml的病毒接種液，以氧化鋅膠布封口，滴上溶化的固體石蠟。放回孵化器，使蛋直立孵化。羊膜腔接種羊膜腔接種 選擇6-8日齡的雞胚，照蛋檢查，劃出氣室和胎位，并以氣室向上豎立在蛋托上，氣室端的蛋殼經(jīng)消毒后以打孔器鉆一小孔，將注射針頭刺過小孔，沿著卵的縱軸刺入約3cm，然后注入0.2ml的病毒接種液，用氧化鋅膠布及石蠟封口后放回孵化器中培養(yǎng)。卵黃囊內(nèi)接種卵黃囊接種雞胚的各種接種途徑絨毛尿囊腔內(nèi)接種 絨毛尿囊膜接種羊膜腔接種卵黃囊內(nèi)接種3.收毒：病毒的收毒根據(jù)接種的途徑而定。尿 囊 液絨毛尿囊膜羊 水卵黃液和卵黃膜操作完畢，將所有的用具煮沸消毒，擦凈后再以消毒水浸洗，卵殼、殼膜和胚胎等殘物煮沸消毒后棄去。（五）實驗作業(yè)1.