生物課件(人教版選修)專題課題土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計(jì)數(shù)

1、專題(zhunt)2課題(kt)2課前預(yù)習(xí)巧設(shè)計(jì)名師課堂一點(diǎn)通重點(diǎn)突破創(chuàng)新演練大沖關(guān)知識(shí)清單案例師說課堂強(qiáng)化每課一練共三十頁共三十頁了解 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)中對照實(shí)驗(yàn)的設(shè)置方法理解 篩選(shixun)微生物的原理、選擇培養(yǎng)基的 配制及其對微生物的選擇作用1.對土樣的選取(xunq)和選擇培養(yǎng)基的配制2.對分解尿素的細(xì)菌的計(jì)數(shù)共三十頁共三十頁 一、菌株篩選 1自然界中目的菌株的篩選 (1)依據(jù)：根據(jù)(gnj)它對 的要求，到相應(yīng)環(huán)境中去尋找。 (2)實(shí)例：PCR技術(shù)中用到的耐高溫的Taq細(xì)菌就是從 中篩選出來的。生存環(huán)境熱泉(r qun)共三十頁 2實(shí)驗(yàn)室中目的菌株的篩選 人為提供有利于 生長的條件(包

2、括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同時(shí) 其他(qt)微生物的生長。 3選擇培養(yǎng)基 在微生物學(xué)中，將允許 生長，同時(shí) 其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。目的(md)菌株抑制或阻止特定種類微生物抑制或阻止共三十頁 二、實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及操作 1實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) (1)土壤取樣： 取樣條件：富含 的土壤表層，酸堿度接近 且潮濕(chosh)。 取樣部位：距地表約 cm的土壤層。 (2)樣品稀釋： 樣品的稀釋程度直接影響平板上生長的 ，選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，保證菌落數(shù)在 之間，便于計(jì)數(shù)。有機(jī)質(zhì)中性(zhngxng)38菌落數(shù)目30300共三十頁 (3)微生物的培養(yǎng)與觀察(以細(xì)菌為例)： 將培養(yǎng)基平板置于

3、溫室中培養(yǎng)12 d，每隔24 h統(tǒng)計(jì)一次 數(shù)目，最后選取數(shù)目 時(shí)的記錄作為結(jié)果。 (4)細(xì)菌的計(jì)數(shù)： 當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時(shí)，取同一 下的3個(gè)平板進(jìn)行計(jì)數(shù)，求出 ，并根據(jù)(gnj)所對應(yīng)的 計(jì)算出樣品中細(xì)菌的數(shù)目。3037穩(wěn)定(wndng)菌落稀釋度平均值稀釋倍數(shù)共三十頁 2操作提示 (1)無菌操作： 取土樣的用具(yngj)在使用前都需要 。 應(yīng)在 旁稱取土壤。并在火焰附近將土樣倒入燒瓶中，塞好棉塞。 在稀釋土壤溶液的過程中，每一步都要在 旁操作。 (2)培養(yǎng)過程中應(yīng)設(shè)置重復(fù)組：同一稀釋度下應(yīng)涂布 平板，才能增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力與準(zhǔn)確性。滅菌(mi jn)火焰火焰3個(gè)共三十頁 (3)實(shí)驗(yàn)中應(yīng)設(shè)置對照：

4、主要目的是排除任何其他可能原因?qū)?shí)驗(yàn)結(jié)果(ji gu)的影響，提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果(ji gu)的可信度。如空白對照組，觀察培養(yǎng)物中是否有 污染；設(shè)置牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，觀察選擇培養(yǎng)基是否具 作用等。雜菌篩選(shixun) 三、課題延伸 對于分離出的分解尿素的細(xì)菌還需借助生物化學(xué)方法作進(jìn)一步鑒定。共三十頁 1原理 細(xì)菌合成的 將尿素(nio s)分解成NH3，使培養(yǎng)基 增強(qiáng)，pH ，因此，可通過檢測 來判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。脲酶堿性(jin xn)pH的變化升高 2方法 在以 為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入 指示劑，培養(yǎng)某種細(xì)菌，若指示劑變紅，則pH升高，說明該種菌能 。尿素酚紅分解尿素共三十頁共三十頁

5、 1讀教材P21相關(guān)內(nèi)容，歸納并回答下列問題。 (1)從自然界中，篩選某種微生物時(shí)，確定取樣環(huán)境依據(jù)是什么？ 提示：依據(jù)目的菌株對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中取樣。 (2)分析教材P22左上方側(cè)欄的本課題使用的培養(yǎng)基配方，該培養(yǎng)基對微生物具有選擇作用嗎？若有，是如何進(jìn)行選擇的？ 提示：有選擇作用。該培養(yǎng)基配方中，尿素是唯一的氮源，只有能夠合成脲酶的微生物才能利用尿素，才能在該培養(yǎng)基上生長，其他微生物由于(yuy)不能利用尿素而無法生長繁殖。共三十頁 2讀教材P22的相關(guān)內(nèi)容，歸納并回答下列問題： (1)菌落計(jì)數(shù)的方法有哪些？ 提示：活菌計(jì)數(shù)法、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。 (2)分析通過計(jì)數(shù)平板上的菌

6、落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有的活菌數(shù)目的原因。 提示：當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時(shí)，培養(yǎng)基表面生長(shngzhng)的一個(gè)菌落，來源于樣品稀釋液中的一個(gè)活菌，因此通過計(jì)數(shù)平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有的活菌數(shù)目。共三十頁 (3)利用活菌計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比活菌的實(shí)際數(shù)目低，分析其原因。 提示：當(dāng)兩個(gè)或多個(gè)細(xì)胞連在一起時(shí)，平板上觀察到的是一個(gè)菌落。 (4)利用活菌計(jì)數(shù)法進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，常常將同一濃度(nngd)稀釋液需要接種三個(gè)平板，分析這樣做的道理。 提示：該做法是設(shè)置重復(fù)實(shí)驗(yàn)，目的是為了增強(qiáng)實(shí)驗(yàn)的說服力和準(zhǔn)確性。將同一稀釋度下的三個(gè)平板，經(jīng)涂布、培養(yǎng)，計(jì)算出菌落平均數(shù)，使結(jié)果更接

7、近真實(shí)值。共三十頁 3讀教材P2223“(三)設(shè)置對照”的相關(guān)內(nèi)容，分析教材實(shí)例討論并完成下列問題： (1)A同學(xué)與其他同學(xué)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果相差很大的可能(knng)原因有哪些？ 提示：所取土樣不同；培養(yǎng)基被污染或操作失誤造成。共三十頁(2)如何設(shè)置對照實(shí)驗(yàn)，說明你的上述(shngsh)分析的原因?？赡茉?qū)嶒?yàn)驗(yàn)證結(jié)論所取土樣不同其他同學(xué)用與A同學(xué)相同的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)若結(jié)果與A同學(xué)的一致，則說明土樣沒有問題；若結(jié)果與A同學(xué)的不一致，則說明A同學(xué)操作失誤或培養(yǎng)基配制有問題培養(yǎng)基污染或操作失誤將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作空白對照若有菌落出現(xiàn)，則說明培養(yǎng)基被污染，若無菌落出現(xiàn)，則說明未

8、被污染提示(tsh)：共三十頁 4讀教材P2325實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)內(nèi)容，根據(jù)你自己的實(shí)驗(yàn)操作，分析交流下列問題： (1)觀察教材P23圖27，思考在樣品稀釋時(shí)每一次用吸管吸取土壤懸液前，都要吹吸三次后再吸取，這樣做有什么道理？ 提示：每次吹吸三次，使土壤懸液中的菌種分布均勻(jnyn)，保證所吸取樣液中的菌種均衡性，減少實(shí)驗(yàn)誤差。共三十頁 (2)如何判斷選擇培養(yǎng)基是否篩選出菌落？ 提示：牛肉膏培養(yǎng)基的菌落數(shù)目大于選擇培養(yǎng)基上的菌落數(shù)目，說明選擇培養(yǎng)基已篩選出一些菌落。 (3)怎樣根據(jù)結(jié)果判斷樣品稀釋操作是否成功？ 提示：若得到了2個(gè)或2個(gè)以上菌落數(shù)目在30300的平板，則說明稀釋操作比較成功，并能夠進(jìn)

9、行(jnxng)菌落的計(jì)數(shù)。共三十頁 分離土壤(trng)中分解尿素的細(xì)菌，對培養(yǎng)基的要求是 () 加尿素不加尿素加瓊脂糖不加瓊脂糖加葡萄糖不加葡萄糖加硝酸鹽不加硝酸鹽 AB C D共三十頁 解析尿素和硝酸鹽都能作為氮源，而培養(yǎng)尿素分解菌的培養(yǎng)基應(yīng)含有尿素為唯一的氮源的固體(gt)平板培養(yǎng)基。因此培養(yǎng)基中應(yīng)不加硝酸鹽，加入尿素和瓊脂。葡萄糖作為碳源加入。 答案C共三十頁 兩位同學(xué)用稀釋涂布平板法測定同一土壤樣品中的細(xì)菌(xjn)數(shù)。在對應(yīng)稀釋倍數(shù)為10的培養(yǎng)基中，得到以下兩種統(tǒng)計(jì)結(jié)果：A同學(xué)涂布了一個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)為230；B同學(xué)涂布了三個(gè)平板，統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)分別為21、212和256，該同

10、學(xué)以這三個(gè)平板上菌落數(shù)的平均值163作為統(tǒng)計(jì)結(jié)果。試回答：共三十頁 (1)當(dāng)_時(shí)，培養(yǎng)基表面生長的一個(gè)菌落來源于樣品稀釋液中的_，此時(shí)統(tǒng)計(jì)平板(pngbn)上的菌落數(shù)，就能利用_公式推測出樣品中大約含有多少活菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)為_的平板進(jìn)行計(jì)數(shù)。 (2)A同學(xué)確信自己的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與別人不同是因?yàn)橥寥罉悠凡煌?，卻不能證明自己的培養(yǎng)基是否被污染，你能幫助A同學(xué)排除上述兩個(gè)可能影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果的因素嗎？ (3)B同學(xué)的結(jié)果正確嗎？為什么？共三十頁 解析A同學(xué)只涂布了一個(gè)平板，沒有設(shè)置重復(fù)組，因此結(jié)果不具有說服力?？梢杂善渌瑢W(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A同

11、學(xué)結(jié)果無誤，如果結(jié)果與A同學(xué)不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題；另一種方案是將A同學(xué)配制的培養(yǎng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)基是否被污染(wrn)。B同學(xué)的三個(gè)平板應(yīng)無明顯差異才能符合計(jì)數(shù)要求。共三十頁 答案(1)樣品的稀釋度足夠高一個(gè)活菌每克樣品中的菌株數(shù)(CV)M30300 (2)可以。由其他同學(xué)用與A同學(xué)一樣的土樣進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，如果結(jié)果與A同學(xué)一致，則證明A同學(xué)結(jié)果無誤；如果結(jié)果不同，則證明A同學(xué)存在操作失誤或培養(yǎng)基的配制有問題；另一種方案是將A同學(xué)配制的培養(yǎng)(piyng)基在不加土樣的情況下進(jìn)行培養(yǎng)(piyng)，作為空白對照，以證明培養(yǎng)(piyng)基是否被污染。 (3)不正確。其中一個(gè)平板與另兩個(gè)平板差異太大，應(yīng)分析原因。共三十頁共三十頁共三十頁點(diǎn)擊下圖進(jìn)入(jnr)“課堂強(qiáng)化”共三十頁點(diǎn)擊(din j)下圖進(jìn)入“每課一練”共三十頁內(nèi)容摘要專題2。對于分離出的分解尿素的細(xì)菌還需借助生物化學(xué)方法作進(jìn)一步鑒定。提示：依據(jù)目的菌株對生存環(huán)境的要求，到相應(yīng)的環(huán)境中取樣。提示：活菌計(jì)數(shù)法、顯微鏡直接計(jì)數(shù)法。(3)利用活菌計(jì)數(shù)法統(tǒng)計(jì)的菌落數(shù)往往比