瓊脂糖凝膠電泳原理步驟詳細(xì)

1、/李莉瓊脂糖凝膠電泳 Agarose Gel Electrophoresis 共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院講課(jing k)內(nèi)容 概述 1 瓊脂糖凝膠的特點(diǎn) 2 瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用 3 影響遷移率的因素 4 瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白 5共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院概述(i sh)IntroductionGel Electrophoresis ：由瓊脂、瓊脂糖、淀粉膠及聚丙烯酰胺等物質(zhì)作支持體的電泳。特點(diǎn)（characteristic）：1.可以制成非常均勻的凝膠，帶電質(zhì)點(diǎn)在凝膠的孔中泳動(dòng)2. 電泳操作方法簡(jiǎn)便，電泳速度快3. 分辨率高，重復(fù)性好，電泳圖譜清晰4. 適用于生化，免疫等定性

2、定量(dngling)測(cè)定 共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院瓊脂糖凝膠（Agarose Gel ）天然瓊脂（agar）:又名瓊膠、菜燕、凍粉 從石花菜及其它紅藻類(lèi)植物提取(tq)出來(lái)的一種線狀高聚物。瓊脂糖（agarose）瓊脂(qingzh)果膠（agaropectin） Acid sulfateCarboxylic acid groups共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 D-半乳糖3，6-脫水(tu shu)-L-半乳糖瓊脂糖（Agarose） 半乳糖及其衍生物構(gòu)成(guchng)的中性物質(zhì)共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院講課(jing k)內(nèi)容 概述 1 瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)

3、 2 瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用 3 影響遷移率的因素 4 瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白 5共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 瓊脂糖凝膠的特點(diǎn)(tdin)（一）優(yōu)點(diǎn)（advantage)1.因不含硫酸根和羧基，幾乎消除了瓊脂的電滲2.對(duì)蛋白質(zhì)吸附極微，故無(wú)拖尾現(xiàn)象3.凝膠結(jié)構(gòu)均勻，孔徑較大，可用來(lái)分離酶的復(fù)合物、核酸、病毒 等大分子物質(zhì)4.透明度較好，可直接或干燥成薄膜后進(jìn)行染色5.不吸收紫外光，可直接利用紫外光吸收法作定量(dngling)測(cè)定6.有熱可逆性共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院（二）缺點(diǎn)(disadvantage)1.機(jī)械強(qiáng)度差，易破碎，濃度不能太低2.易被細(xì)菌污染，不易保存，臨用前配制3.瓊

4、脂糖支持層上的區(qū)帶易于擴(kuò)散，電泳后必須立即固定(gdng)染色4.與PAGE相比，分子篩(molecular sieve)作用小，區(qū)帶少共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院講課(jing k)內(nèi)容 概述 1 瓊脂糖凝膠的特點(diǎn) 2 瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用 3 影響遷移率的因素 4 瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白 5共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用(yngyng)Applications of Agarose Gel Electrophoresis 1. 適用于大分子的核酸、核蛋白等的分離、鑒定及純化2. 臨床生化檢驗(yàn)中常用于LDH、CK等同工酶的分離與檢測(cè)3. 為不同類(lèi)型的高脂蛋白血癥、冠心

5、病等提供(tgng)生化指標(biāo)共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院The gel with UV illumination, the ethidium bromide stained DNA glows orange 共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院Digital image of 3 plasmid restriction digests run on a 1% w/v agarose gel, 3 Volts/cm, stained with ethidium bromide. The DNA size marker is a commercial 1kbp ladder. The position o

6、f the wells and direction of DNA migration is noted. 共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院講課(jing k)內(nèi)容 概述 1 瓊脂糖凝膠的特點(diǎn) 2 瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用 3 影響遷移率的因素 4 瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白 5共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院影響(yngxing)遷移率的因素Factors affecting migration the size of the moleculeconformation of the molecule the agarose concentration of a gelVolt

7、age共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院Percent agarose and resolution limits 共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院講課(jing k)內(nèi)容 概述 1 瓊脂糖凝膠的特點(diǎn) 2 瓊脂糖凝膠電泳的應(yīng)用 3 影響遷移率的因素 4 瓊脂糖凝膠電泳分離血漿脂蛋白 5共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院瓊脂糖凝膠電泳分離(fnl)血漿脂蛋白原理（ Principle） 血清脂蛋白經(jīng)飽和蘇丹黑B預(yù)染后，以瓊脂糖凝膠為支持介質(zhì)，在pH8.6巴比妥緩沖液中電泳，根據(jù)各脂蛋白的組成、大小、形狀(xngzhun)分離成不同區(qū)帶。 共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院(一)血清脂蛋白(lipoprotein)的組

8、成(z chn) ApoA ApoBprotein：Apoprotein ApoC ApoD ApoE 甘油三酯 （TG）脂類(lèi) 磷脂 （PL） 游離膽固醇 （FC） 膽固醇酯 （CE）少量糖共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院（二）分類(lèi)1. 按電泳法分 乳糜(rm)微粒（chylomicron,CM） -脂蛋白 （ - lipoprotein） 前-脂蛋白（pre - lipoprotein ） -脂蛋白 （ - lipoprotein ） 共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院2. 按超速離心法分 乳糜微粒(wil)(chylomicron,CM) ( pI ，各種脂蛋白均帶負(fù)電(

9、fdin)，電泳時(shí)由負(fù)極到正極；VLDL為圓形，受阻力小，LDL形態(tài)不規(guī)則，受阻力大，所以VLDL跑在前共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 加樣槽 前 CM LDL VLDL HDL+共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院臨床(ln chun)應(yīng)用：高脂蛋白血癥的分型 CM 前 正常型a型b型型型型共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院操 作共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院玻璃片共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院預(yù)染色(rns)的標(biāo)本共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院上樣處玻片瓊脂糖凝膠共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院共四十三頁(yè)

10、上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院 CM共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院正常(zhngchng)參考值（百分比） -脂蛋白 30-40%前-脂蛋白 15%-脂蛋白 55%注意事項(xiàng)：血清樣品要新鮮為了免去離心步驟，吸取預(yù)染血清時(shí)，應(yīng)吸取上層，下層或管底可能(knng)有染料顆粒沉渣，否則應(yīng)再離心后吸預(yù)染血清共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院名詞解釋1.遷移率2.電滲3.電泳問(wèn)答題1.影響電泳遷移率的因素(yn s)有哪些？2.試述瓊脂糖凝膠電泳分離脂蛋白的原理。復(fù)習(xí)(fx)思考題共四十三頁(yè)上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院參 考 書(shū) 目臨床生物化學(xué)及生物化學(xué)檢驗(yàn) 第三版 人民衛(wèi)生出版社 周新 主編電泳科學(xué)出版社 何忠效 張樹(shù)政 主編蛋白質(zhì)電泳實(shí)驗(yàn)(shyn)技術(shù) 科學(xué)出版社 郭堯君蛋白質(zhì)技術(shù)手冊(cè) 科學(xué)出版社 汪家政 范敏 主編共四十三頁(yè)內(nèi)容摘要/。/。上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院。Gel Electrophoresis ：由瓊脂、瓊脂糖、淀粉膠及聚丙烯酰胺等物質(zhì)作支持(zhch)體的電泳。2. 電泳操作方法簡(jiǎn)便，電泳速度快。3. 分辨率高，重復(fù)性好，電泳圖譜清晰。瓊脂糖