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1、蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿

2、螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃

3、薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇

4、蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)

5、蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿

6、蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃

7、蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆

8、薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁

9、螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆

10、蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀

11、蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄

12、蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁

13、薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁螃羃腿蒆蠆羂芁艿薅肂羈蒅蒁肁肅芇蝿肀膆蒃蚅聿莈芆蟻肈肈薁薇蚅膀莄蒃蚄節(jié)蕿螂蚃羂莂蚈螞肄薈薄螁膇莁蒀螀艿膃袈螀聿荿螄蝿膁節(jié)蝕螈芃蕆薆螇羃芀蒂螆肅蒅

14、螁裊膇羋蚇襖芀蒄薃襖罿芇葿袃膂蒂蒅袂芄蒞螄袁羄薀蝕袀肆莃薆衿膈蕿蒁羈芁莁螀羈羀膄蚆羇肅莀薂羆芅膃薈羅羄蒈蒄羄肇芁膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂

15、肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇

16、袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻

17、肀芇螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅

18、羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂

19、膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆

20、羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁

21、袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅

22、肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆

23、羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇膁薃蚄肅膁蚆袀罿膀蒞蚃裊腿蒈袈膄羋薀蟻?lái)逼P螞袆羆芆莂蠆羂芅薄羅袈芅蚇螈膆芄莆羃肂芃葿螆羈節(jié)薁羈襖莁蚃螄膃莀莃薇聿荿蒅螂肅荿蚇薅羈莈莇袁袇莇葿蚄

24、膅莆薂衿肁蒞蚄螞羇蒄莄袇袃蒃蒆蝕膂蒃薈袆膈蒂螁螈肄蒁蒀羄羀肇薃螇袆?wù)赝L羂膄肆蒞螅肀膅蕆羀羆膄蕿螃袂膃螂薆芁膂蒁袂膇 第一章 氨基酸和蛋白質(zhì)一、組成蛋白質(zhì)的20種氨基酸的分類(lèi)、非極性氨基酸包括:甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、極性氨基酸極性中性氨基酸:色氨酸、酪氨酸、絲氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、蘇氨酸酸性氨基酸:天冬氨酸、谷氨酸堿性氨基酸:賴(lài)氨酸、精氨酸、組氨酸其中:屬于芳香族氨基酸的是:色氨酸、酪氨酸、苯丙氨酸屬于亞氨基酸的是:脯氨酸含硫氨基酸包括:半胱氨酸、蛋氨酸注意:在識(shí)記時(shí)可以只記第一個(gè)字,如堿性氨基酸包括:賴(lài)精組二、氨基酸的理化性質(zhì)、兩性解

25、離及等電點(diǎn)氨基酸分子中有游離的氨基和游離的羧基,能與酸或堿類(lèi)物質(zhì)結(jié)合成鹽,故它是一種兩性電解質(zhì)。在某一的溶液中,氨基酸解離成陽(yáng)離子和陰離子的趨勢(shì)及程度相等,成為兼性離子,呈電中性,此時(shí)溶液的稱(chēng)為該氨基酸的等電點(diǎn)。、氨基酸的紫外吸收性質(zhì)芳香族氨基酸在280nm波長(zhǎng)附近有最大的紫外吸收峰,由于大多數(shù)蛋白質(zhì)含有這些氨基酸殘基,氨基酸殘基數(shù)與蛋白質(zhì)含量成正比,故通過(guò)對(duì)280nm波長(zhǎng)的紫外吸光度的測(cè)量可對(duì)蛋白質(zhì)溶液進(jìn)行定量分析。、茚三酮反應(yīng)氨基酸的氨基與茚三酮水合物反應(yīng)可生成藍(lán)紫色化合物,此化合物最大吸收峰在570nm波長(zhǎng)處。由于此吸收峰值的大小與氨基酸釋放出的氨量成正比,因此可作為氨基酸定量分析方法。

26、三、肽兩分子氨基酸可借一分子所含的氨基與另一分子所帶的羧基脫去分子水縮合成最簡(jiǎn)單的二肽。二肽中游離的氨基和羧基繼續(xù)借脫水作用縮合連成多肽。10個(gè)以?xún)?nèi)氨基酸連接而成多肽稱(chēng)為寡肽;39個(gè)氨基酸殘基組成的促腎上腺皮質(zhì)激素稱(chēng)為多肽;51個(gè)氨基酸殘基組成的胰島素歸為蛋白質(zhì)。多肽連中的自由氨基末端稱(chēng)為端,自由羧基末端稱(chēng)為端,命名從端指向端。人體內(nèi)存在許多具有生物活性的肽,重要的有:谷胱甘肽(GSH):是由谷、半胱和甘氨酸組成的三肽。半胱氨酸的巰基是該化合物的主要功能基團(tuán)。GSH的巰基具有還原性,可作為體內(nèi)重要的還原劑保護(hù)體內(nèi)蛋白質(zhì)或酶分子中巰基免被氧化,使蛋白質(zhì)或酶處于活性狀態(tài)。四、蛋白質(zhì)的分子結(jié)構(gòu)、蛋白

27、質(zhì)的一級(jí)結(jié)構(gòu):即蛋白質(zhì)分子中氨基酸的排列順序。主要化學(xué)鍵:肽鍵,有些蛋白質(zhì)還包含二硫鍵。、蛋白質(zhì)的高級(jí)結(jié)構(gòu):包括二級(jí)、三級(jí)、四級(jí)結(jié)構(gòu)。)蛋白質(zhì)的二級(jí)結(jié)構(gòu):指蛋白質(zhì)分子中某一段肽鏈的局部空間結(jié)構(gòu),也就是該段肽鏈骨架原子的相對(duì)空間位置,并不涉及氨基酸殘基側(cè)鏈的構(gòu)象。二級(jí)結(jié)構(gòu)以一級(jí)結(jié)構(gòu)為基礎(chǔ),多為短距離效應(yīng)??煞譃椋?螺旋:多肽鏈主鏈圍繞中心軸呈有規(guī)律地螺旋式上升,順時(shí)鐘走向,即右手螺旋,每隔3.6個(gè)氨基酸殘基上升一圈,螺距為0.540nm。-螺旋的每個(gè)肽鍵的-和第四個(gè)肽鍵的羧基氧形成氫鍵,氫鍵的方向與螺旋長(zhǎng)軸基本平形。-折疊:多肽鏈充分伸展,各肽鍵平面折疊成鋸齒狀結(jié)構(gòu),側(cè)鏈基團(tuán)交錯(cuò)位于鋸齒狀結(jié)構(gòu)上

28、下方;它們之間靠鏈間肽鍵羧基上的氧和亞氨基上的氫形成氫鍵維系構(gòu)象穩(wěn)定-轉(zhuǎn)角:常發(fā)生于肽鏈進(jìn)行180度回折時(shí)的轉(zhuǎn)角上,常有個(gè)氨基酸殘基組成,第二個(gè)殘基常為脯氨酸。無(wú)規(guī)卷曲:無(wú)確定規(guī)律性的那段肽鏈。主要化學(xué)鍵:氫鍵。)蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu):指整條肽鏈中全部氨基酸殘基的相對(duì)空間位置,顯示為長(zhǎng)距離效應(yīng)。主要化學(xué)鍵:疏水鍵(最主要)、鹽鍵、二硫鍵、氫鍵、范德華力。)蛋白質(zhì)的四級(jí)結(jié)構(gòu):對(duì)蛋白質(zhì)分子的二、三級(jí)結(jié)構(gòu)而言,只涉及一條多肽鏈卷曲而成的蛋白質(zhì)。在體內(nèi)有許多蛋白質(zhì)分子含有二條或多條肽鏈,每一條多肽鏈都有其完整的三級(jí)結(jié)構(gòu),稱(chēng)為蛋白質(zhì)的亞基,亞基與亞基之間呈特定的三維空間排布,并以非共價(jià)鍵相連接。這種蛋白質(zhì)分

29、子中各個(gè)亞基的空間排布及亞基接觸部位的布局和相互作用,為四級(jí)結(jié)構(gòu)。由一條肽鏈形成的蛋白質(zhì)沒(méi)有四級(jí)結(jié)構(gòu)。主要化學(xué)鍵:疏水鍵、氫鍵、離子鍵五、蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能關(guān)系、蛋白質(zhì)一級(jí)結(jié)構(gòu)是空間構(gòu)象和特定生物學(xué)功能的基礎(chǔ)。一級(jí)結(jié)構(gòu)相似的多肽或蛋白質(zhì),其空間構(gòu)象以及功能也相似。尿素或鹽酸胍可破壞次級(jí)鍵-巰基乙醇可破壞二硫鍵、蛋白質(zhì)空間結(jié)構(gòu)是蛋白質(zhì)特有性質(zhì)和功能的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)。肌紅蛋白:只有三級(jí)結(jié)構(gòu)的單鏈蛋白質(zhì),易與氧氣結(jié)合,氧解離曲線呈直角雙曲線。血紅蛋白:具有個(gè)亞基組成的四級(jí)結(jié)構(gòu),可結(jié)合分子氧。成人由兩條-肽鏈(141個(gè)氨基酸殘基)和兩條-肽鏈(146個(gè)氨基酸殘基)組成。在氧分壓較低時(shí),與氧氣結(jié)合較難,氧解離曲

30、線呈狀曲線。因?yàn)椋旱谝粋€(gè)亞基與氧氣結(jié)合以后,促進(jìn)第二及第三個(gè)亞基與氧氣的結(jié)合,當(dāng)前三個(gè)亞基與氧氣結(jié)合后,又大大促進(jìn)第四個(gè)亞基與氧氣結(jié)合,稱(chēng)正協(xié)同效應(yīng)。結(jié)合氧后由緊張態(tài)變?yōu)樗沙趹B(tài)。六、蛋白質(zhì)的理化性質(zhì)、蛋白質(zhì)的兩性電離:蛋白質(zhì)兩端的氨基和羧基及側(cè)鏈中的某些基團(tuán),在一定的溶液條件下可解離成帶負(fù)電荷或正電荷的基團(tuán)。、蛋白質(zhì)的沉淀:在適當(dāng)條件下,蛋白質(zhì)從溶液中析出的現(xiàn)象。包括:a.丙酮沉淀,破壞水化層。也可用乙醇。b.鹽析,將硫酸銨、硫酸鈉或氯化鈉等加入蛋白質(zhì)溶液,破壞在水溶液中的穩(wěn)定因素電荷而沉淀。、蛋白質(zhì)變性:在某些物理和化學(xué)因素作用下,其特定的空間構(gòu)象被破壞,從而導(dǎo)致其理化性質(zhì)的改變和生物活性的

31、喪失。主要為二硫鍵和非共價(jià)鍵的破壞,不涉及一級(jí)結(jié)構(gòu)的改變。變性后,其溶解度降低,粘度增加,結(jié)晶能力消失,生物活性喪失,易被蛋白酶水解。常見(jiàn)的導(dǎo)致變性的因素有:加熱、乙醇等有機(jī)溶劑、強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、重金屬離子及生物堿試劑、超聲波、紫外線、震蕩等。、蛋白質(zhì)的紫外吸收:由于蛋白質(zhì)分子中含有共軛雙鍵的酪氨酸和色氨酸,因此在280nm處有特征性吸收峰,可用蛋白質(zhì)定量測(cè)定。、蛋白質(zhì)的呈色反應(yīng)a.茚三酮反應(yīng):經(jīng)水解后產(chǎn)生的氨基酸可發(fā)生此反應(yīng),詳見(jiàn)二、b. 雙縮脲反應(yīng):蛋白質(zhì)和多肽分子中肽鍵在稀堿溶液中與硫酸酮共熱,呈現(xiàn)紫色或紅色。氨基酸不出現(xiàn)此反應(yīng)。蛋白質(zhì)水解加強(qiáng),氨基酸濃度升高,雙縮脲呈色深度下降,可檢測(cè)蛋白

32、質(zhì)水解程度。七、蛋白質(zhì)的分離和純化、沉淀,見(jiàn)六、電泳:蛋白質(zhì)在高于或低于其等電點(diǎn)的溶液中是帶電的,在電場(chǎng)中能向電場(chǎng)的正極或負(fù)極移動(dòng)。根據(jù)支撐物不同,有薄膜電泳、凝膠電泳等。、透析:利用透析袋把大分子蛋白質(zhì)與小分子化合物分開(kāi)的方法。、層析:a.離子交換層析,利用蛋白質(zhì)的兩性游離性質(zhì),在某一特定時(shí),各蛋白質(zhì)的電荷量及性質(zhì)不同,故可以通過(guò)離子交換層析得以分離。如陰離子交換層析,含負(fù)電量小的蛋白質(zhì)首先被洗脫下來(lái)。b.分子篩,又稱(chēng)凝膠過(guò)濾。小分子蛋白質(zhì)進(jìn)入孔內(nèi),滯留時(shí)間長(zhǎng),大分子蛋白質(zhì)不能時(shí)入孔內(nèi)而徑直流出。、超速離心:既可以用來(lái)分離純化蛋白質(zhì)也可以用作測(cè)定蛋白質(zhì)的分子量。不同蛋白質(zhì)其密度與形態(tài)各不相同

33、而分開(kāi)。八、多肽鏈中氨基酸序列分析a.分析純化蛋白質(zhì)的氨基酸殘基組成(蛋白質(zhì)水解為個(gè)別氨基酸,測(cè)各氨基酸的量及在蛋白質(zhì)中的百分組成)測(cè)定肽鏈頭、尾的氨基酸殘基 二硝基氟苯法(DNP法)頭端 尾端羧肽酶、法等 丹酰氯法 水解肽鏈,分別分析胰凝乳蛋白酶(糜蛋白酶)法:水解芳香族氨基酸的羧基側(cè)肽鍵胰蛋白酶法:水解賴(lài)氨酸、精氨酸的羧基側(cè)肽鍵溴化脯法:水解蛋氨酸羧基側(cè)的肽鍵Edman降解法測(cè)定各肽段的氨基酸順序(氨基末端氨基酸的游離-氨基與異硫氰酸苯酯反應(yīng)形成衍生物,用層析法鑒定氨基酸種類(lèi)) b.通過(guò)核酸推演氨基酸序列。第二章核酸的結(jié)構(gòu)與功能一、核酸的分子組成:基本組成單位是核苷酸,而核苷酸則由堿基、戊

34、糖和磷酸三種成分連接而成。兩類(lèi)核酸:脫氧核糖核酸(DNA),存在于細(xì)胞核和線粒體內(nèi)。核糖核酸(RNA),存在于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核內(nèi)。、堿基:NH2NH2OCH3OOOOONH2胞嘧啶胸腺嘧啶尿嘧啶鳥(niǎo)嘌呤腺嘌呤嘌呤和嘧啶環(huán)中均含有共軛雙鍵,因此對(duì)波長(zhǎng)260nm左右的紫外光有較強(qiáng)吸收,這一重要的理化性質(zhì)被用于對(duì)核酸、核苷酸、核苷及堿基進(jìn)行定性定量分析。、戊糖:DNA分子的核苷酸的糖是-D-2-脫氧核糖,RNA中為-D-核糖。、磷酸:生物體內(nèi)多數(shù)核苷酸的磷酸基團(tuán)位于核糖的第五位碳原子上。二、核酸的一級(jí)結(jié)構(gòu)核苷酸在多肽鏈上的排列順序?yàn)楹怂岬囊患?jí)結(jié)構(gòu),核苷酸之間通過(guò)3,5磷酸二酯鍵連接。三、DNA的空間結(jié)構(gòu)

35、與功能、DNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)是核酸的二級(jí)結(jié)構(gòu)。雙螺旋的骨架由糖和磷酸基構(gòu)成,兩股鏈之間的堿基互補(bǔ)配對(duì),是遺傳信息傳遞者,DNA半保留復(fù)制的基礎(chǔ),結(jié)構(gòu)要點(diǎn):a.DNA是一反向平行的互補(bǔ)雙鏈結(jié)構(gòu)親水的脫氧核糖基和磷酸基骨架位于雙鏈的外側(cè),而堿基位于內(nèi)側(cè),堿基之間以氫鍵相結(jié)合,其中,腺嘌呤始終與胸腺嘧啶配對(duì),形成兩個(gè)氫鍵,鳥(niǎo)嘌呤始終與胞嘧啶配對(duì),形成三個(gè)氫鍵。b.DNA是右手螺旋結(jié)構(gòu)螺旋直徑為2nm。每旋轉(zhuǎn)一周包含了10個(gè)堿基,每個(gè)堿基的旋轉(zhuǎn)角度為36度。螺距為3.4nm,每個(gè)堿基平面之間的距離為0.34nm。c.DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)穩(wěn)定的維系橫向靠互補(bǔ)堿基的氫鍵維系,縱向則靠堿基平面間的疏

36、水性堆積力維持,尤以后者為重要。、DNA的三級(jí)結(jié)構(gòu)三級(jí)結(jié)構(gòu)是在雙螺旋基礎(chǔ)上進(jìn)一步扭曲形成超螺旋,使體積壓縮。在真核生物細(xì)胞核內(nèi),DNA三級(jí)結(jié)構(gòu)與一組組蛋白共同組成核小體。在核小體的基礎(chǔ)上,DNA鏈經(jīng)反復(fù)折疊形成染色體。、功能DNA的基本功能就是作為生物遺傳信息復(fù)制的模板和基因轉(zhuǎn)錄的模板,它是生命遺傳繁殖的物質(zhì)基礎(chǔ),也是個(gè)體生命活動(dòng)的基礎(chǔ)。DNA中的核糖和磷酸構(gòu)成的分子骨架是沒(méi)有差別的,不同區(qū)段的DNA分子只是堿基的排列順序不同。四、RNA的空間結(jié)構(gòu)與功能DNA是遺傳信息的載體,而遺傳作用是由蛋白質(zhì)功能來(lái)體現(xiàn)的,在兩者之間RNA起著中介作用。其種類(lèi)繁多,分子較小,一般以單鏈存在,可有局部二級(jí)結(jié)構(gòu)

37、,各類(lèi)RNA在遺傳信息表達(dá)為氨基酸序列過(guò)程中發(fā)揮不同作用。如:名稱(chēng) 功能核蛋白體RNA(rRNA) 核蛋白體組成成分信使RNA(mRNA) 蛋白質(zhì)合成模板轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(tRNA) 轉(zhuǎn)運(yùn)氨基酸不均一核RNA(HnRNA) 成熟mRNA的前體小核RNA(SnRNA) 參與HnRNA的剪接、轉(zhuǎn)運(yùn)小核仁RNA(SnoRNA) rRNA的加工和修飾、信使RNA(半衰期最短)hnRNA為mRNA的初級(jí)產(chǎn)物,經(jīng)過(guò)剪接切除內(nèi)含子,拼接外顯子,成為成熟的mRNA并移位到細(xì)胞質(zhì))大多數(shù)的真核mRNA在轉(zhuǎn)錄后末端加上一個(gè)-甲基鳥(niǎo)嘌呤及三磷酸鳥(niǎo)苷帽子,帽子結(jié)構(gòu)在mRNA作為模板翻譯成蛋白質(zhì)的過(guò)程中具有促進(jìn)核蛋白體與mR

38、NA的結(jié)合,加速翻譯起始速度的作用,同時(shí)可以增強(qiáng)mRNA的穩(wěn)定性。末端多了一個(gè)多聚腺苷酸尾巴,可能與mRNA從核內(nèi)向胞質(zhì)的轉(zhuǎn)位及mRNA的穩(wěn)定性有關(guān)。)功能是把核內(nèi)DNA的堿基順序,按照堿基互補(bǔ)的原則,抄錄并轉(zhuǎn)送至胞質(zhì),以決定蛋白質(zhì)合成的氨基酸排列順序。mRNA分子上每3個(gè)核苷酸為一組,決定肽鏈上某一個(gè)氨基酸,為三聯(lián)體密碼。、轉(zhuǎn)運(yùn)RNA(分子量最小)tRNA分子中含有1020稀有堿基,包括雙氫尿嘧啶,假尿嘧啶和甲基化的嘌呤等。)二級(jí)結(jié)構(gòu)為三葉草形,位于左右兩側(cè)的環(huán)狀結(jié)構(gòu)分別稱(chēng)為DHU環(huán)和T環(huán),位于下方的環(huán)叫作反密碼環(huán)。反密碼環(huán)中間的3個(gè)堿基為反密碼子,與mRNA上相應(yīng)的三聯(lián)體密碼子形成堿基互補(bǔ)

39、。所有tRNA3末端均有相同的CCA-OH結(jié)構(gòu)。)三級(jí)結(jié)構(gòu)為倒L型。)功能是在細(xì)胞蛋白質(zhì)合成過(guò)程中作為各種氨基酸的戴本并將其轉(zhuǎn)呈給mRNA。、核蛋白體RNA(含量最多)原核生物的rRNA的小亞基為16S,大亞基為5S、23S;真核生物的rRNA的小亞基為18S,大亞基為5S、5.8S、28S。真核生物的18SrRNA的二級(jí)結(jié)構(gòu)呈花狀。)rRNA與核糖體蛋白共同構(gòu)成核糖體,它是蛋白質(zhì)合成機(jī)器核蛋白體的組成成分,參與蛋白質(zhì)的合成。、核酶:某些RNA 分子本身具有自我催化能,可以完成rRNA的剪接。這種具有催化作用的RNA稱(chēng)為核酶。五、核酸的理化性質(zhì)、DNA的變性在某些理化因素作用下,如加熱,DNA

40、分子互補(bǔ)堿基對(duì)之間的氫鍵斷裂,使DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)松散,變成單鏈,即為變性。監(jiān)測(cè)是否發(fā)生變性的一個(gè)最常用的指標(biāo)是DNA在紫外區(qū)260nm波長(zhǎng)處的吸光值變化。解鏈過(guò)程中,吸光值增加,并與解鏈程度有一定的比例關(guān)系,稱(chēng)為DNA的增色效應(yīng)。紫外光吸收值達(dá)到最大值的50時(shí)的溫度稱(chēng)為DNA的解鏈溫度(Tm),一種DNA分子的Tm值大小與其所含堿基中的GC比例相關(guān),GC比例越高,Tm值越高。、DNA的復(fù)性和雜交變性DNA在適當(dāng)條件下,兩條互補(bǔ)鏈可重新恢復(fù)天然的雙螺旋構(gòu)象,這一現(xiàn)象稱(chēng)為復(fù)性,其過(guò)程為退火,產(chǎn)生減色效應(yīng)。不同來(lái)源的核酸變性后,合并一起復(fù)性,只要這些核苷酸序列可以形成堿基互補(bǔ)配對(duì),就會(huì)形成雜化雙鏈,

41、這一過(guò)程為雜交。雜交可發(fā)生于DNADNA之間,RNARNA之間以及RNADNA之間。六、核酸酶(注意與核酶區(qū)別)指所有可以水解核酸的酶,在細(xì)胞內(nèi)催化核酸的降解??煞譃镈NA酶和RNA酶;外切酶和內(nèi)切酶;其中一部分具有嚴(yán)格的序列依賴(lài)性,稱(chēng)為限制性?xún)?nèi)切酶。第三章酶一、酶的組成單純酶:僅由氨基酸殘基構(gòu)成的酶。結(jié)合酶:酶蛋白:決定反應(yīng)的特異性;輔助因子:決定反應(yīng)的種類(lèi)與性質(zhì);可以為金屬離子或小分子有機(jī)化合物??煞譃檩o酶:與酶蛋白結(jié)合疏松,可以用透析或超濾方法除去。輔基:與酶蛋白結(jié)合緊密,不能用透析或超濾方法除去。酶蛋白與輔助因子結(jié)合形成的復(fù)合物稱(chēng)為全酶,只有全酶才有催化作用。參與組成輔酶的維生素轉(zhuǎn)移的

42、基團(tuán) 輔酶或輔基 所含維生素氫原子 NAD+NADP+ 尼克酰胺(維生素PP)FMNFAD 維生素B2醛基 TPP 維生素B1?;?輔酶A硫辛酸 泛酸、硫辛酸烷基 鈷胺類(lèi)輔酶類(lèi) 維生素B12二氧化碳 生物素 生物素氨基 磷酸吡哆醛 吡哆醛(維生素B6)甲基、等一碳單位 四氫葉酸 葉酸二、酶的活性中心酶的活性中心由酶作用的必需基團(tuán)組成,這些必需基團(tuán)在空間位置上接近組成特定的空間結(jié)構(gòu),能與底物特異地結(jié)合并將底物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物。對(duì)結(jié)合酶來(lái)說(shuō),輔助因子參與酶活性中心的組成。但有一些必需基團(tuán)并不參加活性中心的組成。三、酶反應(yīng)動(dòng)力學(xué)酶促反應(yīng)的速度取決于底物濃度、酶濃度、PH、溫度、激動(dòng)劑和抑制劑等。、底物濃度

43、)在底物濃度較低時(shí),反應(yīng)速度隨底物濃度的增加而上升,加大底物濃度,反應(yīng)速度趨緩,底物濃度進(jìn)一步增高,反應(yīng)速度不再隨底物濃度增大而加快,達(dá)最大反應(yīng)速度,此時(shí)酶的活性中心被底物飽合。)米氏方程式VVmaxSKmSa.米氏常數(shù)Km值等于酶促反應(yīng)速度為最大速度一半時(shí)的底物濃度。b.Km值愈小,酶與底物的親和力愈大。c.Km值是酶的特征性常數(shù)之一,只與酶的結(jié)構(gòu)、酶所催化的底物和反應(yīng)環(huán)境如溫度、PH、離子強(qiáng)度有關(guān),與酶的濃度無(wú)關(guān)。d.Vmax是酶完全被底物飽和時(shí)的反應(yīng)速度,與酶濃度呈正比。、酶濃度在酶促反應(yīng)系統(tǒng)中,當(dāng)?shù)孜餄舛却蟠蟪^(guò)酶濃度,使酶被底物飽和時(shí),反應(yīng)速度與酶的濃度成正比關(guān)系。、溫度溫度對(duì)酶促反

44、應(yīng)速度具有雙重影響。升高溫度一方面可加快酶促反應(yīng)速度,同時(shí)也增加酶的變性。酶促反應(yīng)最快時(shí)的環(huán)境溫度稱(chēng)為酶促反應(yīng)的最適溫度。酶的活性雖然隨溫度的下降而降低,但低溫一般不使酶破壞。酶的最適溫度不是酶的特征性常數(shù),它與反應(yīng)進(jìn)行的時(shí)間有關(guān)。、PH酶活性受其反應(yīng)環(huán)境的PH影響,且不同的酶對(duì)PH有不同要求,酶活性最大的某一PH值為酶的最適PH值,如胃蛋白酶的最適PH約為1.8,肝精氨酸酶最適PH為9.8,但多數(shù)酶的最適PH接近中性。最適PH不是酶的特征性常數(shù),它受底物濃度、緩沖液的種類(lèi)與濃度、以及酶的純度等因素影響。、激活劑使酶由無(wú)活性或使酶活性增加的物質(zhì)稱(chēng)為酶的激活劑,大多為金屬離子,也有許多有機(jī)化合物

45、激活劑。分為必需激活劑和非必需激活劑。、抑制劑凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白變性的物質(zhì)統(tǒng)稱(chēng)為酶的抑制劑。大多與酶的活性中心內(nèi)、外必需基團(tuán)相結(jié)合,從而抑制酶的催化活性??煞譃椋海┎豢赡嫘砸种苿阂怨矁r(jià)鍵與酶活性中心上的必需基團(tuán)相結(jié)合,使酶失活。此種抑制劑不能用透析、超濾等方法去除。又可分為:a.專(zhuān)一性抑制劑:如農(nóng)藥敵百蟲(chóng)、敵敵畏等有機(jī)磷化合物能特民地與膽堿酯酶活性中心絲氨酸殘基的羥基結(jié)合,使酶失活,解磷定可解除有機(jī)磷化合物對(duì)羥基酶的抑制作用。b.非專(zhuān)一性抑制劑:如低濃度的重金屬離子如汞離子、銀離子可與酶分子的巰基結(jié)合,使酶失活,二巰基丙醇可解毒?;瘜W(xué)毒氣路易士氣是一種含砷的化合物,能抑制體

46、內(nèi)的巰基酶而使人畜中毒。)可逆性抑制劑:通常以非共價(jià)鍵與酶和(或)酶底物復(fù)合物可逆性結(jié)合,使酶活性降低或消失。采用透析或超濾的方法可將抑制劑除去,使酶恢復(fù)活性。可分為:a.競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑:與底物競(jìng)爭(zhēng)酶的活性中心,從而阻礙酶與底物結(jié)合形成中間產(chǎn)物。如丙二酸對(duì)琥珀酸脫氫酶的抑制作用;磺胺類(lèi)藥物由于化學(xué)結(jié)構(gòu)與對(duì)氨基苯甲酸相似,是二氫葉酸合成酶的競(jìng)爭(zhēng)抑制劑,抑制二氫葉酸的合成;許多抗代謝的抗癌藥物,如氨甲蝶呤(MTX)、5-氟尿嘧啶(-FU )、6-巰基嘌呤(6-MP)等,幾乎都是酶的競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑,分別抑制四氫葉酸、脫氧胸苷酸及嘌呤核苷酸的合成。Vmax不變,Km值增大b.非競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑:與酶活性中心外

47、的必需基團(tuán)結(jié)合,不影響酶與底物的結(jié)合,酶和底物的結(jié)合也不影響與抑制劑的結(jié)合。Vmax降低,Km值不變c.反競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑:僅與酶和底物形成的中間產(chǎn)物結(jié)合,使中間產(chǎn)物的量下降。Vmax、 Km均降低四、酶活性的調(diào)節(jié)、酶原的激活有些酶在細(xì)胞內(nèi)合成或初分泌時(shí)只是酶的無(wú)活性前體,必須在一定條件下,這些酶的前體水解一個(gè)或幾個(gè)特定的肽鍵,致使構(gòu)象發(fā)生改變,表現(xiàn)出酶的活性。酶原的激活實(shí)際上是酶的活性中心形成或暴露的過(guò)程。生理意義是避免細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白酶對(duì)細(xì)胞進(jìn)行自身消化,并使酶在特定的部位環(huán)境中發(fā)揮作用,保證體內(nèi)代謝正常進(jìn)行。、變構(gòu)酶體內(nèi)一些代謝物可以與某些酶分子活性中心外的某一部位可逆地結(jié)合,使酶發(fā)生變構(gòu)并改

48、變其催化活性,有變構(gòu)激活與變構(gòu)抑制。、酶的共價(jià)修飾調(diào)節(jié)酶蛋白肽鏈上的一些基團(tuán)可與某種化學(xué)基團(tuán)發(fā)生可逆的共價(jià)結(jié)合,從而改變酶的活性,這一過(guò)程稱(chēng)為酶的共價(jià)修飾。在共價(jià)修飾過(guò)程中,酶發(fā)生無(wú)活性與有活性?xún)煞N形式的互變。酶的共價(jià)修飾包括磷酸化與脫磷酸化、乙?;c脫乙?;⒓谆c脫甲基化、腺苷化與脫腺苷化等,其中以磷酸化修飾最為常見(jiàn)。五、同工酶同工酶是指催化相同的化學(xué)反應(yīng),而酶蛋白的分子結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)乃至免疫學(xué)性質(zhì)不同的一組酶。同工酶是由不同基因或等位基因編碼的多肽鏈,或由同一基因轉(zhuǎn)錄生成的不同mRNA翻譯的不同多肽鏈組成的蛋白質(zhì)。翻譯后經(jīng)修飾生成的多分子形式不在同工酶之列。同工酶存在于同一種屬或同一個(gè)

49、體的不同組織或同一細(xì)胞的不同亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)中。如乳酸脫氫酶是四聚體酶。亞基有兩型:骨骼肌型(M型)和心肌型(H型)。兩型亞基以不同比例組成五種同工酶,如LDH1(HHHH)、LDH2(HHHM)等。它們具有不同的電泳速度,對(duì)同一底物表現(xiàn)不同的Km值。單個(gè)亞基無(wú)酶的催化活性。心肌、腎以LDH1為主,肝、骨骼肌以LDH5為主。肌酸激酶是二聚體,亞基有M型(肌型)和B型(腦型)兩種。腦中含CK1(BB型);骨骼肌中含CK3(MM型);CK2(MB型)僅見(jiàn)于心肌。第四章維生素一、脂溶性維生素、維生素A作用:與眼視覺(jué)有關(guān),合成視紫紅質(zhì)的原料;維持上皮組織結(jié)構(gòu)完整;促進(jìn)生長(zhǎng)發(fā)育。缺乏可引起夜盲癥、干眼病等。、

50、維生素D作用:調(diào)節(jié)鈣磷代謝,促進(jìn)鈣磷吸收。缺乏兒童引起佝僂病,成人引起軟骨病。、維生素E作用:體內(nèi)最重要的抗氧化劑,保護(hù)生物膜的結(jié)構(gòu)與功能;促進(jìn)血紅素代謝;動(dòng)物實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)與性器官的成熟與胚胎發(fā)育有關(guān)。、維生素K作用:與肝臟合成凝血因子、有關(guān)。缺乏時(shí)可引起凝血時(shí)間延長(zhǎng),血塊回縮不良。二、水溶性維生素、維生素B1 又名硫胺素,體內(nèi)的活性型為焦磷酸硫胺素(TPP)TPP是-酮酸氧化脫羧酶和轉(zhuǎn)酮醇酶的輔酶,并可抑制膽堿酯酶的活性,缺乏時(shí)可引起腳氣病和(或)末梢神經(jīng)炎。、維生素B2又名核黃素,體內(nèi)的活性型為黃素單核苷酸(FMN)和黃素腺嘌呤二核苷酸(FAD)FMN和FAD是體內(nèi)氧化還原酶的輔基,缺乏時(shí)可引

51、起口角炎、唇炎、陰囊炎、眼瞼炎等癥。、維生素PP包括尼克酸及尼克酰胺,肝內(nèi)能將色氨酸轉(zhuǎn)變成維生素PP,體內(nèi)的活性型包括尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)和尼克酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADP)。NAD和NADP在體內(nèi)是多種不需氧脫氫酶的輔酶,缺乏時(shí)稱(chēng)為癩皮癥,主要表現(xiàn)為皮炎、腹瀉及癡呆。、維生素B6包括吡哆醇、吡哆醛及吡哆胺,體內(nèi)活性型為磷酸吡哆醛和磷酸吡哆胺。磷酸吡哆醛是氨基酸代謝中的轉(zhuǎn)氨酶及脫羧酶的輔酶,也是-氨基-酮戊酸(ALA)合成酶的輔酶。、泛酸又稱(chēng)遍多酸,在體內(nèi)的活性型為輔酶A及酰基載體蛋白(ACP)。在體內(nèi)輔酶A及?;d體蛋白(ACP)構(gòu)成?;D(zhuǎn)移酶的輔酶。、生物素生物素是體內(nèi)多種

52、羧化酶的輔酶,如丙酮酸羧化酶,參與二氧化碳的羧化過(guò)程。、葉酸以四氫葉酸的形式參與一碳基團(tuán)的轉(zhuǎn)移,一碳單位在體內(nèi)參加多種物質(zhì)的合成,如嘌呤、胸腺嘧啶核苷酸等。葉酸缺乏時(shí),DNA合成受抑制,骨髓幼紅細(xì)胞DNA合成減少,造成巨幼紅細(xì)胞貧血。、維生素B12又名鈷胺素,唯一含金屬元素的維生素。參與同型半工半胱氨酸甲基化生成蛋氨酸的反應(yīng),催化這一反應(yīng)的蛋氨酸合成酶(又稱(chēng)甲基轉(zhuǎn)移酶)的輔基是維生素B12,它參與甲基的轉(zhuǎn)移。一方面不利于蛋氨酸的生成,同時(shí)也影響四氫葉酸的再生,最終影響嘌呤、嘧啶的合成,而導(dǎo)致核酸合成障礙,產(chǎn)生巨幼紅細(xì)胞性貧血。、維生素C促進(jìn)膠原蛋白的合成;是催化膽固醇轉(zhuǎn)變成7-羥膽固醇反應(yīng)的7

53、-羥化酶的輔酶;參與芳香族氨基酸的代謝;增加鐵的吸收;參與體內(nèi)氧化還原反應(yīng),保護(hù)巰基等作用。第二篇物質(zhì)代謝及其調(diào)節(jié)第一章糖代謝一、糖酵解、過(guò)程:見(jiàn)圖1-1糖酵解過(guò)程中包含兩個(gè)底物水平磷酸化:一為1,3-二磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變?yōu)?-磷酸甘油酸;二為磷酸烯醇式丙酮酸轉(zhuǎn)變?yōu)楸帷?、調(diào)節(jié))磷酸果糖激酶-1變構(gòu)抑制劑:ATP、檸檬酸變構(gòu)激活劑:AMP、ADP、1,6-雙磷酸果糖(產(chǎn)物反饋激,比較少見(jiàn))和2,6-雙磷酸果糖(最強(qiáng)的激活劑)。)丙酮酸激酶變構(gòu)抑制劑:ATP 、肝內(nèi)的丙氨酸變構(gòu)激活劑:1,6-雙磷酸果糖)葡萄糖激酶變構(gòu)抑制劑:長(zhǎng)鏈脂酰輔酶A注:此項(xiàng)無(wú)需死記硬背,理解基礎(chǔ)上記憶是很容易的,如知道糖酵

54、解是產(chǎn)生能量的,那么有ATP等能量形式存在,則可抑制該反應(yīng),以利節(jié)能,上述的檸檬酸經(jīng)三羧酸循環(huán)也是可以產(chǎn)生能量的,因此也起抑制作用;產(chǎn)物一般來(lái)說(shuō)是反饋抑制的;但也有特殊,如上述的1,6-雙磷酸果糖。特殊的需要記憶,只屬少數(shù)。以下類(lèi)同。關(guān)于共價(jià)修飾的調(diào)節(jié),只需記住幾個(gè)特殊的即可,下面章節(jié)提及。(1)糖原1-磷酸葡萄糖(2)葡萄糖己糖激酶 6-磷酸葡萄糖6-磷酸果糖6-磷酸果糖-1-激酶ATPADPATPADP磷酸二羥丙酮1,6-二磷酸果糖 3-磷酸甘油醛 1,3-二磷酸甘油酸NAD+NADHH+3-磷酸甘油酸 2-磷酸甘油酸 磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸激酶ADPATPADPATP丙酮酸 乳酸NADH

55、H+NAD+注:紅色表示該酶為該反應(yīng)的限速酶;藍(lán)色ATP表示消耗,紅色ATP和NADH等表示生成的能量或可以轉(zhuǎn)變?yōu)槟芰康奈镔|(zhì)。以下類(lèi)同。(圖1-1)、生理意義)迅速提供能量,尤其對(duì)肌肉收縮更為重要。若反應(yīng)按()進(jìn)行,可凈生成分子ATP,若反應(yīng)按()進(jìn)行,可凈生成分子ATP;另外,酵解過(guò)程中生成的個(gè)NADH在有氧條件下經(jīng)電子傳遞鏈,發(fā)生氧化磷酸化,可生成更多的ATP,但在缺氧條件下丙酮酸轉(zhuǎn)化為乳酸將消耗NADH,無(wú)NADH凈生成。)成熟紅細(xì)胞完全依賴(lài)糖酵解供能,神經(jīng)、白細(xì)胞、骨髓等代謝極為活躍,即使不缺氧也常由糖酵解提供部分能量。)紅細(xì)胞內(nèi)1,3-二磷酸甘油酸轉(zhuǎn)變成的2,-二磷酸甘油酸可與血紅蛋

56、白結(jié)合,使氧氣與血紅蛋白結(jié)合力下降,釋放氧氣。)肌肉中產(chǎn)生的乳酸、丙氨酸(由丙酮酸轉(zhuǎn)變)在肝臟中能作為糖異生的原料,生成葡萄糖。、乳酸循環(huán)葡萄糖 葡萄糖 葡萄糖糖糖異酵生解途途徑徑丙酮酸丙酮酸乳酸乳酸乳酸(肝) (血液) (肌肉)乳酸循環(huán)是由于肝內(nèi)糖異生活躍,又有葡萄糖-6-磷酸酶可水解6-磷酸葡萄糖,釋出葡萄糖。肌肉除糖異生活性低外,又沒(méi)有葡萄糖-6-磷酸酶。生理意義:避免損失乳酸以及防止因乳酸堆積引起酸中毒。二、糖有氧氧化、過(guò)程1)、經(jīng)糖酵解過(guò)程生成丙酮酸2)、丙酮酸丙酮酸脫氫酶復(fù)合體乙酰輔酶ANAD+ NADHH+ 限速酶的輔酶有:TPPFADNAD+CoA及硫辛酸3)、三羧酸循環(huán)草酰乙

57、酸乙酰輔酶A 檸檬酸合成酶檸檬酸異檸檬酸異檸檬酸脫氫酶NAD+ NADHH+-酮戊二酸-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體琥珀酸酰CoA 琥珀酸NAD+ NADHH+GDPGTP延胡索酸蘋(píng)果酸草酰乙酸FADFADH2NAD+ NADHH+三羧酸循環(huán)中限速酶-酮戊二酸脫氫酶復(fù)合體的輔酶與丙酮酸脫氫酶復(fù)合體的輔酶同。三羧酸循環(huán)中有一個(gè)底物水平磷酸化,即琥珀酰COA轉(zhuǎn)變成琥珀酸,生成GTP;加上糖酵解過(guò)程中的兩個(gè),本書(shū)中共三個(gè)底物水平磷酸化。、調(diào)節(jié))丙酮酸脫氫酶復(fù)合體抑制:乙酰輔酶A、NADH、ATP激活:AMP、鈣離子)異檸檬酸脫氫酶和-酮戊二酸脫氫酶NADH、ATP反饋抑制、生理意義)基本生理功能是氧化供能。

58、)三羧酸循環(huán)是體內(nèi)糖、脂肪和蛋白質(zhì)三大營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)代謝的最終共同途徑。)三羧酸循環(huán)也是三大代謝聯(lián)系的樞紐。、有氧氧化生成的ATP葡萄糖有氧氧化生成的ATP反應(yīng) 輔酶 ATP第一階段 葡萄糖6-磷酸葡萄糖 -16-磷酸果糖1,6雙磷酸果糖 -12*3-磷酸甘油醛2*1,3-二磷酸甘油酸 NAD+ 2*3或2*2(詳見(jiàn))2*1,3-二磷酸甘油酸2*3-磷酸甘油酸 2*12*磷酸烯醇式丙酮酸2*丙酮酸 2*1第二階段 2*丙酮酸2*乙酰CoA NAD+ 2*3第三階段 2*異檸檬酸2*-酮戊二酸 NAD+ 2*32*-酮戊二酸2*琥珀酰CoA NAD+ 2*32*琥珀酰CoA2*琥珀酸 2*12*琥珀酸

59、2*延胡索酸 FAD 2*22*蘋(píng)果酸2*草酰乙酸 NAD+ 2*3凈生成38或36個(gè)ATP、巴斯德效應(yīng)有氧氧化抑制糖酵解的現(xiàn)象。三、磷酸戊糖途徑、 過(guò)程6-磷酸葡萄糖NADP+6-磷酸葡萄糖脫氫酶NADPH6-磷酸葡萄糖酸內(nèi)酯6-磷酸葡萄糖酸NADP+NADPH5-磷酸核酮糖5-磷酸核糖5-磷酸木酮糖7-磷酸景天糖3-磷酸甘油醛5-磷酸木酮糖4-磷酸赤蘚糖6-磷酸果糖3-磷酸甘油醛6-磷酸果糖6-磷酸果糖、生理意義)為核酸的生物合成提供-磷酸核糖,肌組織內(nèi)缺乏-磷酸葡萄糖脫氫酶,磷酸核糖可經(jīng)酵解途徑的中間產(chǎn)物- 磷酸甘油醛和-磷酸果糖經(jīng)基團(tuán)轉(zhuǎn)移反應(yīng)生成。)提供NADPHa.NADPH是供氫體

60、,參加各種生物合成反應(yīng),如從乙酰輔酶A合成脂酸、膽固醇;-酮戊二酸與NADPH及氨生成谷氨酸,谷氨酸可與其他-酮酸進(jìn)行轉(zhuǎn)氨基反應(yīng)而生成相應(yīng)的氨基酸。b.NADPH是谷胱甘肽還原酶的輔酶,對(duì)維持細(xì)胞中還原型谷胱甘肽的正常含量進(jìn)而保護(hù)巰基酶的活性及維持紅細(xì)胞膜完整性很重要,并可保持血紅蛋白鐵于二價(jià)。c.NADPH參與體內(nèi)羥化反應(yīng),有些羥化反應(yīng)與生物合成有關(guān),如從膽固醇合成膽汁酸、類(lèi)固醇激素等;有些羥化反應(yīng)則與生物轉(zhuǎn)化有關(guān)。四、糖原合成與分解、合成過(guò)程:葡萄糖6-磷酸葡萄糖1-磷酸葡萄糖UDPG焦磷酸化酶尿苷二磷酸葡萄糖UTPPPi(UDPG)糖原合成酶(G)n+1UDP(G)n注:)UDPG可看作

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