凝膠柱使用手冊

1、凝膠柱使用手冊TSK-GELSW系列填充柱是用于水溶液的高性能凝膠柱。該色譜柱被研發(fā)用于分析和分離各種可溶于水的物質(zhì)包括蛋白質(zhì)，酶以及核酸預(yù)先測量在柱子安置好了之后，測量就開始了。應(yīng)當(dāng)避免以上提到的溶液的進(jìn)樣或者過快的壓力增長，這些情況可能會導(dǎo)致柱效下降。防止流速的波動這種類型的柱子很容易受到流速波動的影響，所以最好能使用沒有壓力波動的泵，如果必須使用有壓力波動的泵，那么必須在泵的出口處必須連接一個脈沖節(jié)氣門以防波動，并且節(jié)氣門應(yīng)非常耐受腐蝕。每日常規(guī)使用如果柱子每天都要被使用的話，不需要將柱子從設(shè)備中移出，緩沖液可以在柱子中過夜。短時間保存如果柱子在幾天只能會被使用，那么從設(shè)備中將柱子移出，

2、用螺帽將兩頭密封。長期保存當(dāng)柱子在一段時間內(nèi)不會被使用時，那么以上的保存方法就不會很理想，一旦微生物或者腐蝕性緩沖液侵蝕將會導(dǎo)致柱子損耗。對于長時間的保存，用水溶液或者是含有0.05%的疊氮化鈉的緩沖液按照0.5ml/min的流速作溶液置換。柱子的保存環(huán)境按以上的短期保存和長期保存方法來保存將色譜柱保存在4C到30C的環(huán)境中，不要放在低于四度的環(huán)境或者讓柱中溶劑結(jié)冰的環(huán)境。柱子應(yīng)避免陽光的照射。柱子英放在遠(yuǎn)離腐蝕性氣體的環(huán)境。溶劑溶劑的置換SW類型的柱子內(nèi)部充滿著含有0.05%疊氮化鈉和0.1mol/L的硫酸鈉的0.1mol/LPH6.7的磷酸鹽緩沖液。選擇一種適當(dāng)?shù)娜芤阂砸环N適當(dāng)?shù)牧魉?0.

3、5ml/min)置換出原有溶液。如果頻繁的跟換置換溶液會加速柱效的下降，盡量使用同種溶液置換。溶劑的選擇在溶劑的選擇時應(yīng)充分考慮到柱子的穩(wěn)定性，樣品的溶解性，樣品與凝膠之間的反應(yīng)，這些因素都很重要。溫度范圍當(dāng)硅酸鹽被用于基本材料時，SW類型的柱子在高PH的環(huán)境中會溶解。由于凝膠的穩(wěn)定性以及鋼柱的原因，所以低PH的溶液應(yīng)被限制使用。因此溶液的PH范圍應(yīng)當(dāng)維持在2.5到7.5之間。含鹽的水溶液和緩沖液溶液SW類型的柱子在含鹽的水溶液中和緩沖液溶液中很穩(wěn)定，對凝膠分離色譜柱來說，分離機(jī)制是基于分子量的大小，與樣品和凝膠的關(guān)系不大。由于大部分的樣品中都含有離子，所以當(dāng)使用含鹽的水溶液或者緩沖液作溶液時

4、可以在測量執(zhí)行的時屏蔽樣品和凝膠之間離子的影響。含鹽的水溶液中鹽的濃度應(yīng)控制在0.5mol/L以下，鹽濃度的增加會導(dǎo)致溶液黏度的增大，溫度的改變也會導(dǎo)致鹽的析出，還有鋼的柱子應(yīng)該盡可能的避免鹵化物，會降低柱子的壽命。有機(jī)溶劑SW類型的柱子不僅僅適用于水溶液中，也可以用于含有有機(jī)溶劑的水溶液，比如甲醇和乙腈以及它們的水溶液。然而，溶液的黏度時決定流速的很重要的因素。當(dāng)以有機(jī)溶劑作為流動相分離樣品時，首先應(yīng)該用蒸餾水置換，然后用含有機(jī)溶劑的水溶液置換。當(dāng)改變含有及溶劑的溶液時，應(yīng)當(dāng)降低流速，而且盡可能的變換梯度。有機(jī)溶劑的快速改變會導(dǎo)致柱效下降，盡量避免在有機(jī)溶劑中加入鹽的話，這樣的話會導(dǎo)致鹽的析

5、出。增溶劑和蛋白質(zhì)變性劑SW類型的柱子可以用于含有增溶劑或者蛋白質(zhì)變性劑的水溶液中，比如十二烷基磺酸鈉，氫氯化胍和尿素。上述物質(zhì)在測定蛋白質(zhì)在水溶液中溶解度很小的樣品很有效果。當(dāng)然這種流動相比標(biāo)準(zhǔn)的水溶液會更加縮短柱子的壽命。避免柱子剛在一個系統(tǒng)中被使用，很快又被另一個系統(tǒng)使用。測量不同蛋白質(zhì)時，應(yīng)謹(jǐn)慎選擇柱子的孔徑大小，因為分子的大小比實際的天然狀態(tài)要大。不溶解引起的問題由于溶液中某些不溶解性物質(zhì)導(dǎo)致的問題，比如壓力的上升（柱子的過濾器堵塞）或者峰形分裂（柱塞板縫隙被堵）。為避免這種問題的發(fā)生，我們的溶液應(yīng)該過濾。通過0.45um的除菌過濾器過濾溶液或者在進(jìn)泵的前端安裝一個在線過濾器。脫氣在

6、溶液進(jìn)行更換的時候會產(chǎn)生氣泡，特別是轉(zhuǎn)換到含有有機(jī)溶劑的溶液中。那么溶液應(yīng)該進(jìn)行脫氣處理避免氣泡產(chǎn)生影響。流速的選擇選擇流速的時候諸多因素比如分辨率，分析時間，柱子壽命等都應(yīng)該考慮進(jìn)去。高流速會導(dǎo)致壽命的縮短；低流速可以提高分離效果，特別是對含有大量蛋白質(zhì)一類的高分子物質(zhì)樣品。更多的是較低的流速會延長柱子的壽命和減少柱子出現(xiàn)裂縫。G2000SWxl型號的柱子應(yīng)該在0.51.0ml流速下工作，一定不能高于1.2ml。溶液的流速當(dāng)使用黏度很低的溶液時，流速可以提高，但如果溶液黏度過大，那么應(yīng)該使用較低的流速。當(dāng)使用含有酒精的溶液，胍或者尿素的說溶液時，流速應(yīng)該降低。工作溫度SW系列的色譜柱在分析或

7、者分離時工作溫度應(yīng)控制在10c30C,當(dāng)?shù)陀?0C時，使用一個較低的流速以保護(hù)柱子。儲藏溫度在室溫下保存即可，不能低于4C以防溶液結(jié)冰。樣品的準(zhǔn)備將樣品溶解在溶液中。樣品溶解之后用0.45um的濾膜進(jìn)行過濾，盡管我們?nèi)庋劭床坏饺芤褐械臇|西，但不溶解的東西還是可能存在的。調(diào)節(jié)樣品溶液的PH,含鹽的濃度以及有機(jī)溶劑的比例。當(dāng)進(jìn)樣的體積很大的時候，樣品溶液進(jìn)入色譜柱與流動相混合會析出引起問題。柱效通過分析的圖譜計算出柱子的理論塔板數(shù)以及不對稱因子來判斷柱子的柱效。死體積當(dāng)死體積和進(jìn)樣量增大的話，理論塔板數(shù)會減少。保護(hù)柱使用保護(hù)柱的話，由于材料的特殊性，會導(dǎo)致其對樣品的吸附從而降低柱效和理論塔板數(shù)。但

8、是保護(hù)柱對樣品進(jìn)入色譜柱之前有一個預(yù)平衡時間，對樣品溶液起到了一定的過濾作用。對于應(yīng)付以上問題，應(yīng)盡可能多的使用保護(hù)柱?？偠灾?，保護(hù)柱應(yīng)用于阻止各種問題發(fā)生。保護(hù)柱安置的效果阻止吸附性物質(zhì)進(jìn)入色譜柱，阻止不溶解的物質(zhì)進(jìn)入柱子，防止由于壓力波動導(dǎo)致柱子出現(xiàn)裂縫。保護(hù)柱的更換由于保護(hù)柱有吸附強(qiáng)吸附性物質(zhì)的作用，那么它會有一個使用壽命，要在保護(hù)柱壞點之前更換。更換的頻率不能規(guī)定出來，因為這取決于不同的原因（分離或分析的結(jié)果，樣品的性質(zhì)，樣品的量，溶液，流速等）。在使用期間，當(dāng)壓力上升時應(yīng)清洗保護(hù)柱末端或凝膠的內(nèi)容物，壓力上升時應(yīng)及時更換保護(hù)柱。一般來講，當(dāng)測量參數(shù)有變化時，應(yīng)立即更換保護(hù)柱。問題處

9、理當(dāng)我們使用凝膠柱時，按照以下操作很多問題都是可以解決的。但時某些問題比如柱子壽命縮短，強(qiáng)吸附性物質(zhì)，樣品的氣泡，干枯的凝膠，結(jié)冰的溶液等發(fā)生了就不能恢復(fù)。末端的清洗當(dāng)壓力上升時，或者流速降低時，改變流向沖洗。如果堵塞物不能被沖走，那么硬更換新的末端。更換末端將舊的末端移除裝上新的末端，要小心不能讓柱中的凝膠流出。當(dāng)凝膠不小心流出的話應(yīng)該安裝相同柱子的型號的凝膠然后排走氣泡。柱頭的裂縫裂縫可能由于壓力快速的上升，使用超過限度的流速，溶液的改變等，裂縫的出現(xiàn)會降低理論塔板數(shù)（會降低70%以上的理論塔板數(shù)，使峰形拖尾）。當(dāng)以上現(xiàn)象出現(xiàn)的話，把柱子的末端移除，如果發(fā)現(xiàn)柱頭有空洞的話，用TSK凝膠填充柱子。在這種情況下，特別對于玻璃柱子，末端必須在壓力2.9的壓力N下用扳手轉(zhuǎn)動。這些高級的問題應(yīng)該可以恢復(fù)的，如果是在未知的環(huán)境下通過以上程序不能恢復(fù)的話，就換一個新的柱子。清洗柱子經(jīng)過重復(fù)長時間的使用之后，清洗時間是經(jīng)常不時的改變的。在這種情況下，用不同的溶液清