乙肝表面抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗(yàn)證

1、.1學(xué) 號(hào)：畢業(yè)論文GRADUATETHESIS論文題目：乙肝外表抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗(yàn)證學(xué) 院：專(zhuān) 業(yè)：班 級(jí)：姓 名：指導(dǎo)教師：2021年10月31 日目 錄畢業(yè)論文 TOC o 1-3 h u HYPERLINK l _Toc31288 學(xué) 號(hào)： PAGEREF _Toc31288 1 HYPERLINK l _Toc10896 乙肝外表抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗(yàn)證 PAGEREF _Toc10896 3 HYPERLINK l _Toc1660 中 文 摘 要 PAGEREF _Toc1660 3 HYPERLINK l _Toc31030 前 言 PAGEREF

2、_Toc31030 5 HYPERLINK l _Toc29150 1. 材料與方法 PAGEREF _Toc29150 5 HYPERLINK l _Toc23117 1.1 試劑盒 PAGEREF _Toc23117 5 HYPERLINK l _Toc15252 1.2 儀器 PAGEREF _Toc15252 5 HYPERLINK l _Toc8614 1.3 方法 PAGEREF _Toc8614 5 HYPERLINK l _Toc2189 2. 結(jié)果 PAGEREF _Toc2189 7 HYPERLINK l _Toc17462 2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性圍 PAGEREF _T

3、oc17462 7 HYPERLINK l _Toc19728 2.2 準(zhǔn)確度回收率的驗(yàn)證 PAGEREF _Toc19728 8 HYPERLINK l _Toc6197 2.3精細(xì)度的驗(yàn)證 PAGEREF _Toc6197 9 HYPERLINK l _Toc25162 2.4 檢測(cè)限LOD計(jì)算 PAGEREF _Toc25162 12 HYPERLINK l _Toc4275 3. 討論 PAGEREF _Toc4275 13 HYPERLINK l _Toc12892 3.1 乙肝外表抗原定量分析的意義 PAGEREF _Toc12892 13 HYPERLINK l _Toc105

4、3.2 常用定量分析方法 PAGEREF _Toc105 13 HYPERLINK l _Toc4120 3.3 方法概述 PAGEREF _Toc4120 14 HYPERLINK l _Toc31411 3.4 方法學(xué)驗(yàn)證容 PAGEREF _Toc31411 14 HYPERLINK l _Toc6236 4. 結(jié)果分析及應(yīng)用評(píng)價(jià) PAGEREF _Toc6236 15 HYPERLINK l _Toc26534 參考文獻(xiàn) PAGEREF _Toc26534 16 HYPERLINK l _Toc32484 綜 述 PAGEREF _Toc32484 17 HYPERLINK l _To

5、c28680 致 PAGEREF _Toc28680 18.1乙肝外表抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗(yàn)證摘 要目的：隨著免疫學(xué)技術(shù)的不斷開(kāi)展,抗原抗體檢測(cè)靈敏度不斷提高,使得乙肝病毒低水平的檢測(cè)成為了可能，本實(shí)驗(yàn)就是對(duì)酶聯(lián)生物生產(chǎn)的乙肝外表抗原的ELISA法定量分析試劑盒進(jìn)展方法學(xué)驗(yàn)證，以判斷該試劑盒是否能用于臨床低濃度樣本的定量分析。方法：HBsAg的ELISA法定量分析，用濃度為8ng/ml標(biāo)準(zhǔn)品溶液做2倍稀釋的6個(gè)濃度梯度做標(biāo)準(zhǔn)曲線，以6，3，1.5ng/ml 3個(gè)濃度梯度5復(fù)孔做準(zhǔn)確度，精細(xì)度和檢測(cè)限等方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果：標(biāo)準(zhǔn)曲線R2=0.9979，顯示具有良好的相關(guān)性；檢測(cè)限為L(zhǎng)OD

6、為0.167ng/ml；準(zhǔn)確度99.03%，準(zhǔn)確度好；板精細(xì)度和板見(jiàn)精細(xì)度方面都表現(xiàn)在低濃度樣品1.5ng/ml的檢測(cè)低于高濃度樣品，重復(fù)性差。故不適合低濃度樣品的檢測(cè)。結(jié)論：由于該試劑盒在低濃度樣本測(cè)量上的精細(xì)度差，故該公司生產(chǎn)的HBsAg的ELISA法定量分析試劑盒不可以用于臨床生物低濃度樣品的分析。關(guān)鍵詞HBsAg ELISA 定量分析 方法學(xué)驗(yàn)證.1The reification of the HBsAg ELISA quantitative methodologyAbstractObject: With the continuous development of immunology

7、 and technology, increasing antigen antibody detection sensitivity, makes the detection of low hepatitis b virus，to verify the quantitative methodology of Shanghai enzyme linked Biological Technology to make sure whether it ca be used to the analysis of Clinical Sample. Methods: ELISA quantitative m

8、ethodology , make an Application of the standard HBsAg kit from the concentration of 8 ng/ml do 2 times diluted si* concentration gradient to constitute a standard curve, testing With 6, 3, 1.5 ng/ml 3 a concentration gradient 5 accurately precise and detection .Results: R2 = 0.9979, standard curve

9、showed good correlation; Detection limit for LOD is 0.167 ng/ml; 99.03% accuracy, good accuracy; Precision and precision of the plate in the plate has performance in low concentration sample ( 1.5 ng/ml) detection is lower than the high concentration samples, poor repeatability. So is not suitable f

10、or detection of low concentration samples. Conclusion: Because the kit on the low concentration sample measurement precision is poor，so the ELISA quantitative analysis kit of HBsAg cannot be used for the analysis of Clinical Sample.Key words:HBsAg; Quantitative analysis; Verification; Methodology.1乙

11、肝外表抗原的ELISA法定量分析方法學(xué)驗(yàn)證前 言根據(jù)流行病學(xué)調(diào)查,我國(guó)人群乙型肝炎病毒感染率為10%左右,乙型肝炎病毒(HBV)感染是最常見(jiàn)的傳染病之一。實(shí)驗(yàn)室診斷乙型肝炎對(duì)其治療和預(yù)防有重要的參考意義而HBsAg是乙肝病毒感染最早的血清標(biāo)志物,因此乙肝外表抗原檢測(cè)是一個(gè)重要的乙型肝炎病毒感染的診斷的依據(jù)。隨著免疫學(xué)技術(shù)的不斷開(kāi)展,抗原抗體檢測(cè)靈敏度不斷提高,使得乙肝病毒低水平的檢測(cè)成為了可能,對(duì)于臨床診斷和流行病學(xué)具有重要意義1。ELISA方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、重復(fù)性好和定性測(cè)定的優(yōu)點(diǎn),可以在酶免疫分析儀進(jìn)展批量檢測(cè)。目前臨床上多傾向于做定量分析，假設(shè)想得到準(zhǔn)確的檢驗(yàn)結(jié)果，必須要經(jīng)過(guò)實(shí)

12、驗(yàn)室的驗(yàn)證，本實(shí)驗(yàn)對(duì)酶聯(lián)生物生產(chǎn)的HBsAg的ELISA法定量分析試劑盒進(jìn)展準(zhǔn)確度，精細(xì)度和檢測(cè)限等方法學(xué)驗(yàn)證，現(xiàn)將實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告如下：材料與方法1.1 試劑盒乙肝外表抗原ELISA法定量分析試劑盒，酶聯(lián)生物出品。1.2 儀器 酶標(biāo)儀：EL*800光吸收酶標(biāo)儀；洗板機(jī)：DN*-9620A電腦洗板機(jī)；超純水系統(tǒng)：Millipore Eli* ；電熱恒溫培養(yǎng)箱(DNP-9052)精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備；振蕩器管械，KJ-201A；移液器；Tip頭；EP管。1.3 方法1.3.1溶液配置 磷酸緩沖液的配備:稱(chēng)取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml

13、蒸餾水中，用HCl調(diào)節(jié)溶液的pH值至7.4，最后加蒸餾水定容至1L即可。在15lbf/in2(1034105Pa)標(biāo)準(zhǔn)品的配備：原始標(biāo)準(zhǔn)品濃度為8 ng/ml。取6支2 mlEP管，分別標(biāo)記為A1-A6。50ul/well, 共1孔需50ul，每孔配置60ul留作備用，稀釋方案詳見(jiàn)表一。編號(hào)終濃度 ng/ml預(yù)加磷酸緩沖液標(biāo)記取ul剩余ulA180標(biāo)準(zhǔn)品12060A2460A16060A3260A26060A4160A36060A50.560A46060A60.2560A56060表一 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋方案質(zhì)控品的配置：50ul/well, 共5復(fù)孔需250ul，配置300ul留作備用，取3支2m

14、lEP管，分別標(biāo)記為C1，C2，C3，質(zhì)控品稀釋方案見(jiàn)表二。編號(hào)終濃度 ng/ml預(yù)加磷酸緩沖液標(biāo)記取ul剩余ulC16150標(biāo)準(zhǔn)品450300C23300C1300300C31.5300C2300300表二 質(zhì)控品的稀釋方案1.3.2鋪板方案 取出試劑盒中已包被酶標(biāo)板，取出板條，在相應(yīng)孔中依次參加系列標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品及空白對(duì)照，每孔50ul?？瞻讓?duì)照參加磷酸緩沖液緩沖液。鋪板方案見(jiàn)表三。序號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品質(zhì)控1質(zhì)控2質(zhì)控3空白組1A1C1C2C3磷酸緩沖液2A2C1C2C3磷酸緩沖液3A3C1C2C3磷酸緩沖液4A4C1C2C3磷酸緩沖液5A5C1C2C3磷酸緩沖液6A6表三 鋪板方案1.3.3加樣步

15、驟 參加酶標(biāo)抗體，50 ul/well，震蕩。37電熱恒溫培養(yǎng)箱溫育60min，取出后洗板4次， 參加A、B液, 50 ul/ well，37電熱恒溫培養(yǎng)箱溫育15 min。參加終止液，50 ul/ well。酶標(biāo)板放入酶標(biāo)儀，蓋上蓋子，在電腦上翻開(kāi)Microplate Manager 5.2軟件，選擇450nm波長(zhǎng)參照波長(zhǎng)630nm，設(shè)置layout和報(bào)告模式，測(cè)定各孔吸收值。結(jié)果2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線與線性圍序號(hào)123456HBsAg(ng/ml)84210.50.25吸光度值1.670.990.630.400.310.26表四 標(biāo)準(zhǔn)品理論濃度對(duì)應(yīng)的實(shí)測(cè)OD值以標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)際濃度為橫坐標(biāo)，所測(cè)吸光度

16、值值為縱坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線觀察線性關(guān)系，結(jié)果顯示R2=0.998，顯示具有良好的相關(guān)性。表五 標(biāo)準(zhǔn)曲線2.2 準(zhǔn)確度回收率的驗(yàn)證質(zhì)控品理論稀釋濃度對(duì)應(yīng)實(shí)測(cè)濃度值見(jiàn)表六。HBsAg(ng/ml)1234566.514.945.676.086.1233.573.073.293.082.951.51.271.361.541.211.59表六 實(shí)測(cè)濃度值質(zhì)控品做了3個(gè)濃度梯度，每個(gè)濃度做了5個(gè)復(fù)孔，見(jiàn)表七。HBsAg(ng/ml)測(cè)定值ng/ml回收率%平均回收率RR%3個(gè)濃度的平均回收率66.51108.597.7299.03%4.9482.35.6794.56.08101.36.12102.0

17、33.57119.0106.403.07102.33.29109.73.08102.72.9598.31.51.2784.792.961.3690.71.54102.71.2180.71.59106.0表七 回收率結(jié)果顯示HBsAg 6ng/m的平均回收率為97.72%，3ng/ml的平均回收率為106.40%和1.5ng/ml的平均回收率為92.96%，滿足限度要求在85%-115%的圍，3個(gè)濃度梯度的平均回收率為99.03%，顯示準(zhǔn)確性好。2.3精細(xì)度的驗(yàn)證2.3.1板內(nèi)精細(xì)度的驗(yàn)證HBsAg(ng/ml)12345RSD(%)66.514.945.676.086.125.860.6010

18、.2433.573.073.293.082.953.190.247.521.51.271.361.541.211.591.390.1712.23表八 板內(nèi)精細(xì)度測(cè)定值表八中RSD(%)這一參數(shù)表示相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差，也就是變異系數(shù)CV值，HBsAg 6ng/ml的5個(gè)復(fù)孔的變異系數(shù)CV值為10.24%，1.5ng/ml的5個(gè)復(fù)孔的變異系數(shù)CV值為12.23%，顯示孔間差異較大，精細(xì)度不高，但是符合ng/ml級(jí)RSD水平的一般應(yīng)15%的要求，其中有一孔濃度為4.94和1.21，與其它孔比較差異較大，可能是由于操作不當(dāng)引起。而3ng/ml的變異系數(shù)CV為7.52%，符合顯示孔間重復(fù)性好，符合ng/ml級(jí)

19、RSD水平的一般應(yīng)15%的要求，精細(xì)度高。2.3.2板間精細(xì)度的驗(yàn)證從同一實(shí)驗(yàn)室中獲取2組同樣的數(shù)據(jù)，做板間精細(xì)度驗(yàn)證。HBsAg(ng/ml)84210.50.25第二組OD 值1.981.420.860.580.400.31第三組OD 值1.310.770.360.170.090.03表九 實(shí)測(cè)OD值以標(biāo)準(zhǔn)品實(shí)際濃度為橫坐標(biāo)，所測(cè)吸光度值值為縱坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線觀察線性關(guān)系。表十 標(biāo)準(zhǔn)曲線以上標(biāo)準(zhǔn)曲線結(jié)果顯示第二組數(shù)據(jù)的R2=0.967，第三組數(shù)據(jù)R2=0.991。第三組有一些數(shù)據(jù)偏差較大，但考慮到隨機(jī)抽樣和人為操作的偏差在，還是可以應(yīng)用到統(tǒng)計(jì)分析中。下面對(duì)3組數(shù)據(jù)做板間分析。HBsA

20、g(ng/ml12345RSD(%)66.234.555.736.086.396.040.559.106.105.786.086.646.845.995.396.346.495.9633.363.283.553.283.473.060.3712.063.362.933.533.072.992.592.712.812.492.521.51.241.271.171.161.191.340.2316.781.461.501.731.711.761.191.241.251.211.11表十一 板間精細(xì)度測(cè)定值 從表十一中3組的數(shù)據(jù)比較可以知道，HBsAg 6ng/ml的5個(gè)復(fù)孔的變異系數(shù)CV值為9.1

21、0%，3ng/ml的5個(gè)復(fù)孔的變異系數(shù)CV值為12.06%，但是也符合ng/ml級(jí)RSD水平的一般應(yīng)15%的要求，表示精細(xì)度高。而HBsAg1.5ng/ml的5個(gè)復(fù)孔的變異系數(shù)CV值為16.78%，不符合ng/ml級(jí)RSD水平的一般應(yīng)LOD，此標(biāo)準(zhǔn)曲線上最低濃度點(diǎn)為0.25，大于LOD0.167，故此標(biāo)準(zhǔn)曲線線性好。3. 討論3.1 乙肝外表抗原定量分析的意義乙肝外表抗原HBsAg是乙肝病毒的外殼蛋白，本身不具有傳染性，但它的出現(xiàn)常伴隨乙肝病毒的存在，所以它是已感染乙肝病毒的標(biāo)志。它可存在于患者的血液、唾液、乳汁、汗液、淚水、鼻咽分泌物、精液及陰道分泌物中。在感染乙肝病毒后26個(gè)月，當(dāng)丙氨酸氨

22、基轉(zhuǎn)移酶升高前28周時(shí)，可在血清中測(cè)到陽(yáng)性結(jié)果。急性乙肝患者大局部可在病程早期轉(zhuǎn)陰，慢性乙肝患者該指標(biāo)可持續(xù)陽(yáng)性。乙肝兩對(duì)半定性檢測(cè)對(duì)乙肝疾病的篩檢試驗(yàn)、診斷、狀態(tài)監(jiān)測(cè)、臨床效果觀察起到了一定作用。但隨著臨床醫(yī)學(xué)的開(kāi)展,乙肝兩對(duì)半定性檢測(cè)已經(jīng)遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足臨床及患者的要求,特別是在療效觀察和乙肝疫苗的抗體產(chǎn)生上具有明顯的短缺。隨著檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)的開(kāi)展,乙肝兩對(duì)半定量測(cè)量變得可行,大大彌補(bǔ)了乙肝兩對(duì)半定性檢測(cè)的缺乏。乙肝兩對(duì)半檢測(cè)和HBV DNA熒 光測(cè)定相互補(bǔ)充綜合評(píng)價(jià)患者病情與藥物療效，為低含量的慢性乙肝、病毒攜帶者提供了正確判斷病情的依據(jù)【2】。這在目前的臨床治療中應(yīng)用十分廣泛。3.2 常用定量分

23、析方法 此次實(shí)驗(yàn)只是對(duì)一種試劑盒的可用性進(jìn)展方法學(xué)驗(yàn)證,而目前常用的定量方法已有很多，如酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法ELISA法和化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法CMIA法TRFIA法對(duì)受檢標(biāo)本進(jìn)展乙肝外表抗原HBsAg的檢測(cè)是近十年開(kāi)展起來(lái)的一種微量分析方法。全自動(dòng)酶免分析儀目前也廣泛應(yīng)有，自動(dòng)化、標(biāo)準(zhǔn)化的操作手段使實(shí)驗(yàn)到達(dá)了全過(guò)程控制和全過(guò)程標(biāo)準(zhǔn)化分析，大大提高了實(shí)驗(yàn)的精細(xì)度【3】，使檢測(cè)結(jié)果更趨穩(wěn)定，從而保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。3.3 方法概述酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA) 即將的抗原或抗體吸附在固相載體外表，使酶標(biāo)記的抗原抗體反響在固相外表進(jìn)展的技術(shù)。該技術(shù)可用于檢測(cè)大分子抗原和特異性抗體等，具有快速

24、、靈敏、簡(jiǎn)便、載體易于標(biāo)準(zhǔn)化等優(yōu)點(diǎn)。目前普遍使用的HBsAg試劑盡管在制備時(shí)采用了高親和力的單克隆抗體，并且使包被抗體、酶.標(biāo)抗體的結(jié)合位點(diǎn)盡可能的遠(yuǎn)。以防止競(jìng)爭(zhēng)抑制，最大程度地解決鉤狀效應(yīng)HOOK的問(wèn)題【4】。本次實(shí)驗(yàn)是對(duì)實(shí)驗(yàn)室的一種試劑盒，即酶聯(lián)生物生產(chǎn)的HBsAg的酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)定量分析試劑盒進(jìn)展的方法學(xué)驗(yàn)證，以判斷該試劑盒是否能用于臨床樣本分析。試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)往預(yù)先包被HBsAg捕獲抗體的包被微孔中，測(cè)定時(shí)，將待測(cè)樣品(含待測(cè)抗體或抗原)和酶標(biāo)抗原或抗體按一定程序與結(jié)合在固相載體上的抗原或抗體反響形成抗原抗體復(fù)合物;反響終止時(shí)，固相載體上酶標(biāo)

25、抗原或抗體被結(jié)合量(免疫復(fù)合物)與待測(cè)標(biāo)本中待檢抗體或抗原的量呈一定比例;經(jīng)洗滌去除反響液中其他物質(zhì)，參加底物進(jìn)展顯色，顏色的深淺和樣品中得HBsaAg呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度OD值，從而計(jì)算樣品濃度。 應(yīng)用試劑盒HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品從濃度為8，4，2，1, 0.5 ，0.25ng/ml 6個(gè)濃度梯度做標(biāo)準(zhǔn)曲線，以6，3，1.5ng/ml 3個(gè)濃度梯度5復(fù)孔做質(zhì)控，進(jìn)展準(zhǔn)確度，精細(xì)度和檢測(cè)限等方法學(xué)驗(yàn)證。選擇最低濃度為0.25ng/ml的原因是:因?yàn)榻^大多數(shù)患者外周血中可出現(xiàn)HBsAg，含量在5ng/ml 600ug/ml之間，高者可達(dá)2000ugml以上【5】，滿足了現(xiàn)階段

26、文獻(xiàn)報(bào)道的最低濃度值。3.4 方法學(xué)驗(yàn)證容 方法學(xué)驗(yàn)證一般包括標(biāo)準(zhǔn)曲線，準(zhǔn)確度，精細(xì)度和檢測(cè)限。標(biāo)準(zhǔn)曲線指樣品所測(cè)定的濃度值與吸光度的關(guān)系，以樣品濃度為*軸，以吸光度為Y軸，繪制回歸曲線，用回歸方程及R值來(lái)評(píng)件曲線的可信度，該實(shí)驗(yàn)所用了6個(gè)濃度點(diǎn)建立標(biāo)準(zhǔn)曲線。方法準(zhǔn)確度指待測(cè)濃度與真實(shí)濃度的符合程度，一般用相對(duì)回收率表示，要求在85%115%的圍。精細(xì)度則表示分析方法的可重復(fù)性，是對(duì)同一樣品每次測(cè)定結(jié)果的一致性，用標(biāo)準(zhǔn)偏差和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，可做板和板間的驗(yàn)證，對(duì)于ug/ml級(jí)水平的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差一般應(yīng)10%, ng/ml級(jí)水平的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差一般應(yīng)15%。檢測(cè)限則表示分析低濃度樣品的能力，又稱(chēng)靈

27、敏度，通常為取空白孔的OD值的均數(shù)加2倍標(biāo)準(zhǔn)差。4 結(jié)果分析及應(yīng)用評(píng)價(jià) 第一組數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線R2=0.9979，顯示具有良好的相關(guān)性，HBsAg 濃度為6ng/ml和3ng/ml 的回收率分別為為97.72%和106.40%，符合限度要求在85%115%的圍。但是HBsAg 濃度為1.5ng/ml的回收率為92.96%，顯示此試劑盒對(duì)于低濃度樣品的檢測(cè)準(zhǔn)確度不太好。在精細(xì)度方面，HBsAg 6ng/ml和1.5ng/ml的5個(gè)復(fù)孔的變異系數(shù)CV值為10.24%和12.23%，顯示孔間差異較大，精細(xì)度不高，但是也符合ng/ml級(jí)RSD水平的一般應(yīng)15%的要求，其中有一孔濃度為4.55和1.21，與

28、其它孔比較差異較大，可能是由于操作不當(dāng)引起。而3ng/ml的變異系數(shù)CV為7.52%，符合顯示孔間重復(fù)性還好，符合ng/ml級(jí)RSD水平的一般應(yīng)15%的要求，故可以認(rèn)為此試劑盒批精細(xì)度尚可。在做3組數(shù)據(jù)的板間精細(xì)度分析時(shí)，發(fā)現(xiàn)6，3，1.51.5ng/ml變異系數(shù)CV分別為9.10%，12.06%，16.78%，呈遞增趨勢(shì)，前兩個(gè)濃度滿足對(duì)ng/ml級(jí)RSD水平的一般應(yīng)15%的要求。1.5ng/ml的CV值為16.78%，不滿足ng/ml級(jí)RSD水平的一般應(yīng)15%的要求，顯示低密度的孔間重復(fù)性差，精細(xì)度不高。 綜上分析，該試劑盒對(duì)于高濃度生物樣品的檢測(cè)具有良好的準(zhǔn)確性和精細(xì)度，而對(duì)于低濃度樣品

29、的檢測(cè)在準(zhǔn)確性和精細(xì)度方面都低于高濃度樣品，且與實(shí)際值有一定差值，因此不適合低濃度樣品的檢測(cè)。而目前絕大多數(shù)乙肝感染者外周血HBsAg濃度都很低，因此該試劑盒不能全面檢測(cè)出此類(lèi)人群，故該試劑盒不能用于臨床標(biāo)本的定量檢測(cè)。參考文獻(xiàn)【1】來(lái)，其敏努力規(guī)肝臟疾病的免疫學(xué)診斷中華檢驗(yàn)雜志，2003，26：6971【2】曉梅，世蘭HBsAg陰性結(jié)果的慢性乙型肝炎患者病毒血癥水平與臨床的關(guān)系J】臨床檢驗(yàn)雜志，2004，22(5)：381-382【3】 Weber B, Dengler T, Berger A .Evaluation of two new autom ated assays for hepatitis B virus surface HBsAg detection IMMUIITE HBsAg_and IMMUlITE 2000 HBsAg J J .Clin Microbiol,2003 ,41,(